文摘
慢性粘液分泌过多(不啻)是一个共同的特点在慢性阻塞性肺疾病(COPD)和与糟糕的预后和生活质量。本研究旨在确定底层而言不啻微rna (microRNA) mrna的监管网络。
microrna的表达谱和信使rna从63年慢性阻塞性肺病患者在支气管活检与而言不啻使用线性回归。潜在的mRNA目标每个CMH-associated microrna的被确定使用皮尔逊相关性。基因集富集分析(GSEA)和字符串(检索搜索工具的相互作用基因/蛋白质)分析被用来识别关键基因和通路。
20个microrna与而言不啻539 mrna差异表达在慢性阻塞性肺病。10 microrna的表达明显与一个或多个mrna的表达。其中,mir - 134 - 5 - p, mir - 146 - 5 - p和let-7家族的代表最高CMH-associated mrna在他们负相关预测目标。喀斯特和EDN1被确定为关键的监管者而言不啻和负相关预测目标的mir - 134 - 5 - p和let-7a-5p, let-7d-5p和let-7f-5p分别。GSEA建议的参与MUC5AC有关的基因和其他几个相关基因集而言不啻。较低的表达mir - 134 - 5 - p被确认与而言不啻主气道慢性阻塞性肺病患者成纤维细胞。
我们确定了mir - 134 - 5 - p, mir - 146 - 5 - p和let-7家庭,以及它们的潜在目标基因包括喀斯特和EDN1作为潜在关键miRNA-mRNA网络监管而言不啻在慢性阻塞性肺病。
文摘
mir - 134, mir - 146 a和let-7家族在慢性阻塞性肺病慢性粘液分泌过多的监管机构http://ow.ly/1RWl30kWcWF
介绍
慢性阻塞性肺疾病(COPD)是一个经常发生肺部疾病,与异常相关的炎症反应,吸入有害粒子和气体,包括吸烟。大部分患者体验慢性咳嗽痰生产(1,2)称为慢性支气管炎或慢性粘液分泌过多(不啻)[3]。在慢性阻塞性肺病而言不啻是降低生活质量,加速肺功能下降,加重和高死亡率的风险增加(1,2,4]。因此,迫切需要提高治疗慢性阻塞性肺病患者而言不啻。不幸的是,我们目前的理解监管机制而言不啻仍然是有限的。
气道上皮内杯状细胞层和粘液腺的气道黏膜下层负责分泌黏蛋白,粘液的主要组件(3]。最丰富的gel-forming黏蛋白中发现人类航空MUC5AC和MUC5B5),都是在慢性阻塞性肺病(增加6]。有趣的是,最近在体外研究表明,纤维母细胞中发挥作用的规定气道上皮黏膜纤毛的分化和粘液生产(7,8]。
小分子核糖核酸(microrna)是小非编码RNA分子目标信使核糖核酸(mRNA),导致信使RNA降解或抑制蛋白质的翻译(9]。到目前为止,没有研究报道在不啻微分microrna的表达,虽然许多microrna与吸烟和慢性阻塞性肺病的响应(10),包括mir - 146 - 5 - p (11]。本研究的目的是确定关键基础而言不啻miRNA-mRNA交互定义良好的COPD组支气管活检。
方法
病人的特点
基线microrna和mRNA表达研究支气管活检的63名慢性阻塞性肺病患者参加了格罗宁根,莱顿大学在阻塞性肺疾病糖皮质激素(GLUCOLD)研究(注册ClinicalTrials.gov标识号NCT00158847)。细节描述的研究包括病人特点以前[12,13]。简而言之,所有患者不可逆气流限制(post-bronchodilator用力呼气量在1 s (FEV1),FEV1/吸气肺活量(IVC)不到90%可信区间的预测价值)和慢性呼吸道症状。所有患者稳定,是当前或过度吸烟者和非类固醇治疗。当地的医学伦理委员会批准了这项研究,所有患者把他们的书面知情同意。
慢性粘液分泌过多的定义
在我们的数据集,临床问卷使用提供信息与最常用的定义而言不啻:咳嗽和痰的症状大多数日子里在至少3个月以上连续两年(4]。因此,不啻是定义基于病人回答这个问题“你多久咯痰在过去3个月吗?”(问题)。因为一个病人的反应可能会有所不同,我们决定包括另一个问题“你多久咯痰在上周?”(B)问题,涵盖更长的时间内(3个月)和短,最近时间(1周)。从今以后,这些被称为定义A和B,分别。完整的描述提出了对这些问题的回答选项补充材料。对于每个问题,患者分为三组:没有而言不啻,轻度而言不啻,中度/重度而言不啻。
小分子核糖核酸和mRNA表达分析
信使rna和microrna的提取方法从支气管活检,对于基因表达分析使用Affymetrix数组(ThermoFisher科学、圣克拉拉、钙、美国)和RNA-sequencing中描述补充材料。
统计分析
信使rna和microrna分析支气管活检是使用R软件版本3.2.5(统计计算的R项目;www.r-project.org/)。线性回归模型用于识别microrna和mrna差异表达轻度或中度/重度患者而言不啻相比没有而言不啻。模型修正了年龄、性别、吸烟史和RNA完整数量(RIN)。使用Benjamini和业务执行多个测试校正的方法。定义一个用于获取候选人microrna的主要列表和mrna与而言不啻使用错误发现率(罗斯福)调整切断假定值小于0.25。随后定义B被应用于进一步加强主发现使用名义切断假定值小于0.05。随后,最后列出了由候选人microrna和mrna与而言不啻根据定义。其他统计测试是使用GraphPad棱镜执行版本6(美国圣地亚哥GraphPad软件)。使用方差分析病人的差异特征进行比较。两个而言不啻定义的相关评估使用斯皮尔曼等级相关系数。 The Mann–Whitney U-test was performed to determine significant differences in immunohistochemistry markers between CMH status and miRNA expression在体外。方法miRNA-mRNA co-expression网络分析、基因集富集分析(GSEA)和交互网络分析使用字符串,所描述的补充材料。
结果
不啻microrna相关
我们比较确定microrna与他而言不啻230 microrna的表达谱1)轻微的患者和没有而言不啻,2)中度/重度而言不啻。根据定义,三个microrna (miR-34b-3p, mir - 92 b - 3 - p和mir - 449 b - 5 - p)高表达与轻度而言不啻,虽然mir - 664 - 5 - p是低表达。与中度/重度而言不啻,我们发现39 microrna的异常表达,包括相关的四个温和而言不啻(罗斯福< 0.25;图2一个和2 b)。根据定义B, 20的39个microrna也与中度/重度而言不啻和方向相同(p < 0.05)。其中,mir - 708 - 5 - p增加最高(2.06)和mir - 134 - 5 - p有最强的减少(−2.15)(补充表S3)。没有microrna的轻度而言不啻根据定义中差异表达B。
不啻mrna相关
识别mrna表达谱相比,我们与他而言不啻19 793患者mrna 1)温和的和没有而言不啻,2)中度/重度而言不啻。根据不啻定义,没有发现有轻微而言不啻mRNA表达的差异。942 mrna的表达不同与中度/重度而言不啻(罗斯福< 0.25;图2 c和2 d)。此外,根据定义B, 539 942 mrna也与而言不啻方向相同(p < 0.05)。其中,264年mrna高和275 mrna表达低表达与中度/重度而言不啻(补充表S4)。前20名重要的mrna所示表2。
从微阵列数据集验证发现,RNA-sequencing进行支气管活检的病人的一个子集GLUCOLD队列与中度/重度而言不啻(n = 21),没有而言不啻(n = 5)。GSEA进行评估,如果我们CMH-associated基因微阵列数据集丰富我们RNA-sequencing CMH-associated基因数据集。事实上,我们发现一个重要的浓缩(补充图S2和S7补充表)。
确保观察microrna和mRNA表达的差异不是由于细胞成分的变化,我们可用免疫组织化学分析数据的中性粒细胞数量,巨噬细胞,嗜酸性粒细胞,CD3 + CD4 + / CD8 +淋巴细胞,肥大细胞和上皮细胞在支气管活检之前描述(13]。我们观察到,只有与而言不啻CD8 +淋巴细胞不同。当占CD8 +细胞数量在我们的线性回归模型,所有20 CMH-associated microrna和539年CMH-associated mrna仍然显著。
CMH-associated信使rna的基因集富集分析
GSEA进行识别途径,生物过程和分子功能的CMH-associated mrna可能涉及。前20名中重要的基因集富集mrna差异表达与而言不啻根据定义所示表3。其中有纤毛相关基因集开发和功能、神经激素的信号,离子通道的活动和细胞外基质(ECM)的结构。重要的基因集的完整列表(罗斯福< 0.01)报告补充表S5。此外,我们调查是否CMH-associated mrna参与相关的机制MUC5AC表达式。自MUC5AC不是在我们的微阵列表达高于背景水平,我们建立了进一步的发现W盎等。(16曾发现了73年MUC5AC相关核心基因高表达的小气道上皮细胞从患者高MUC5AC基因表达与那些较低MUC5AC基因的表达。使用这个列表,我们发现了一个强烈的浓缩MUC5AC相关基因在基因高表达与而言不啻根据定义(浓缩得分(ES) = 0.40, p < 0.001)和定义B (ES = 0.44, p < 0.001) (补充图S3)。
识别miRNA-mRNA co-expression网络导致慢性阻塞性肺病而言不啻
识别受CMH-associated microrna的mRNA,我们评估了正面和负面的每个microrna的表达之间的相关性和匹配的mRNA表达谱切片相同(病人)。10的20种microrna的表达水平(即。let-7a-5p、let-7d-5p let-7f-5p miR-31-5p, mir - 708 - 5 - p, mir - 134 - 5 - p, mir - 146 a - 5 - p, mir - 193 - 5 - p, mir - 500 - a - 3 - p和mir - 1207 - 5 - p)至少一个信使rna有显著相关性(罗斯福< 0.25;补充表S6)。
识别潜在的直接目标,microrna的mrna负相关列表的列表比较microrna的预测目标。重叠的mrna列表都是用于生成miRNA-mRNA co-expression网络(图3一)。因此,let-7a-5p let-7d-5p、let-7f-5p miR-31-5p和mir - 708 - 5 - p,高表达而言不啻,共享几个潜在的目标,正如所料,let-7的家人聚在一起共享目标基因。同样,mir - 134 - 5 - p, mir - 146 a - 5 - p, mir - 500 - a - 3 - p和mir - 1207 - 5 - p,降低与而言不啻表示,共享一些潜在目标(图3一)。在这些网络之间的交互microrna相关和负相关目标预测,也不啻(表示图3一)的特殊利益而言不啻的这些潜在的关键因素。在microrna表达越高,let-7集群代表一个关键集群与负相关16 CMH-associated潜在的目标。microrna表达的降低,mir - 134 - 5 - p和mir - 146 - 5 - p是关键microrna负面关联与8和10 CMH-associated潜在目标,分别。的百分比CMH-associated潜在目标之间的负相关预测目标最高mir - 134 - 5 - p (图3一)。
识别潜在的相互作用CMH-associated mrna、交互网络分析是使用字符串(执行图3 b)。网络点对喀斯特,EDN1,PRKAR2A,GSK3B和POLR2H作为中心的基因和潜在的监管者而言不啻的活组织检查,因为他们拥有最互动与其他基因。有趣的是,喀斯特和EDN1的潜在目标mir - 134 - 5 - p和let-7a-5p / let-7d-5p / let-7f-5p,分别。也有明确的几个胶原蛋白和其他ECM-related基因的聚类。
浓缩而言不啻,MUC5AC-associated miRNA-correlated基因之间的基因
GSEA显示基因高表达与而言不啻是丰富与microrna呈正相关的基因高表达而言不啻之间负相关的基因和microrna与而言不啻低表达,反之亦然与而言不啻是低表达的基因(数字44 b和补充图S4)。
我们发现MUC5AC-associated基因集(16)中明显富集与microrna呈正相关的基因高表达与而言不啻和低表达的基因与microrna负相关,不啻除了mir - 193 a - 5 - p (图4 c和补充图S5)。
候选人microrna的表达和mrna在人类主要气道上皮细胞和成纤维细胞
因为支气管活检标本包含各种细胞类型,包括粘液上皮细胞,我们调查是否CMH-associated microrna在活检在PAECs表示在体外。ALI-differentiated PAECs表示let-7a-5p (let-7家族的代表),miR-31-5p, mir - 708 - 5 - p, mir - 146 - 5 - p和mir - 193 - 5 - p (图5一个),但不是mir - 134 - 5 - p, mir - 500 - a - 3 - p和mir - 1207 - 5 - p(循环阈值(Ct) > 35)。我们没有找到任何microrna的表达差异慢性阻塞性肺病和健康control-derived PAECs (图5一个),我们观察一个也没有显著差异MUC5AC这两个团体之间的表达式(补充图S6)。
正如我们以前的报告表明成纤维细胞参与粘液生产通过相声和上皮细胞(8),我们另外调查候选人在拥堵的microrna的表达来自慢性阻塞性肺病患者或无临床而言不啻症状。所有let-7a-5p拥堵的表达、miR-31-5p mir - 708 - 5 - p, mir - 134 - 5 - p, mir - 146 - 5 - p和mir - 193 a - 5 - p (图5 b),但不是mir - 500 - a - 3 - p和mir - 1207 - 5 - p。表达的兴趣,mir - 134 - 5 - p (图5 c),但不是其他microrna在拥堵的显著降低来源于患者而言不啻,符合我们活组织检查的结果。
我们使用公开的基因表达谱(17)来评估是否前20名CMH-associated基因表达ALI-differentiated PAECs,发现大多数人(补充图S7)。然而,值得注意的是,LOC100133388,RPL23AP64和C15orf60没有可用的数据集。此外,使用公开可用的原代人肺成纤维细胞的基因表达谱(18),我们发现,大多数的这些基因在成纤维细胞也表达了,除了NKD1和PDGFB(补充图S8)。再一次,LOC100133388没有可用的数据集。
讨论
我们发现20 microrna和539 mrna而言不啻支气管活检在慢性阻塞性肺病患者。我们的数据表明,mir - 134 - 5 - p, mir - 146 - 5 - p和let-7家族可能调节而言不啻通过他们的潜在CMH-associated目标(例如喀斯特和EDN1)。的相关性而言不啻签名支持的浓缩MUC5AC相关基因(16]在我们CMH-associated mrna和mrna与CMH-associated microrna。此外,我们在体外研究表明,mir - 134 - 5 - p是低表达在拥堵的COPD患者而言不啻与那些没有而言不啻相比,这是符合发现支气管活检和支持的关键角色mir - 134 - 5 - p在调节而言不啻在慢性阻塞性肺病。
因为我们都microrna的mRNA数据可以从相同的支气管活检,我们能够创建miRNA-mRNA co-expression网络。分析确定了let-7家庭,mir - 134 - 5 - p和mir - 146 - 5 - p与CMH-associated目标而言不啻的主要监管机构。值得注意的是,mir - 134 - 5 - p的百分比最高CMH-associated基因在其潜在目标,其中喀斯特被认定为中心而言不啻和潜在的调节基因。喀斯特以前找到的吗MUC5AC相关核心基因(16]。有趣的是,mir - 134 - 5 - p的表达较低的成纤维细胞慢性阻塞性肺病患者比那些没有而言不啻,符合活检中发现。这不是表达上皮细胞,这表明而言不啻的间接调控通过成纤维细胞。有各种各样的解释为什么的微分表达式mir - 134 - 5 - p在成纤维细胞可以影响MUC5AC相关基因在气道上皮细胞。首先,microrna可以分泌到液(19),因此运输从一个细胞类型(如。成纤维细胞)到另一个(如。上皮细胞)。其次,MUC5AC相关基因表达的不仅是上皮细胞,但也由成纤维细胞。我们发现大约70%的MUC5AC相关基因在气道上皮细胞(16)也表达了在肺成纤维细胞(18]。最后,MUC5AC相关基因可能是次要的目标mir - 134 - 5 - p。我们最近的研究表明,CXCL8由肺成纤维细胞促进上皮粘液生产(8]和CXCL8释放增加培养的成纤维细胞和上皮细胞20.]。的报告中,我们观察到在这个研究CXCL8表达式是负相关,mir - 134 - 5 - p (补充表S6)。
我们miRNA-mRNA网络中发现另一个关键microrna是mir - 146 a - 5 - p,降低与而言不啻表示。值得注意的是,mir - 146 - 5 - p以前报道参与气道炎症与吸烟和慢性阻塞性肺病(10)和抑制MUC5AC生产在体外(21]。我们最近发现mir - 146 - 5 - p在non-COPD肺成纤维细胞高表达与支气管上皮细胞共培养后,虽然是在慢性阻塞性肺病的增加显著减少成纤维细胞,显示角色mir - 146 - 5 - p在干扰epithelial-fibroblast相声在慢性阻塞性肺病22]。我们目前的研究结果表明,mir - 146 - 5 - p也可能参与粘液分泌过多通过epithelial-fibroblast相声;然而,目前尚不清楚通过目标基因和细胞类型而言不啻其主要影响。进一步的机械的研究使用共培养或肺瀑样模型有助于阐明CMH-related mir - 146 - 5 - p的函数。
最后一个关键miRNA-mRNA集群识别是let-7家庭,这是高表达与而言不啻协会。let-7家族的成员共享几个与而言不啻相关的潜在目标,其中EDN1,NKD1,PDGFB,COL4A1和COL4A2特别感兴趣的。EDN1在黏膜下腺体和局部刺激粘液浆液性分泌物和粘液细胞粘膜外植体培养(23]。NKD1是一个对手的WNT信号通路/β-catenin24),在呼吸道上皮分化起着重要的作用[25),其中特定的组件(如。LEF1)已报告规范MUC5AC生产(8,26]。PDGFB参与气道重构(27和epithelial-fibroblast相声28]。此外,COL4A1和COL4A2也发现在一个较大的集群而言不啻胶原蛋白基因的相互作用网络和基底膜是必不可少的组成部分29日]。基底膜厚度与增加黏膜下腺体和中央在哮喘气道重构的30.),但它在连接与而言不啻在COPD气道重构的作用仍有待研究。值得注意的是,各种let-7a-5p CMH-associated目标/ let-7d-5p / let-7f-5p (EDA,LIX1L,MAPK11和NME4)与下一代测序验证31日),支持我们的研究结果。
此外,我们发现CMH-associated基因可能参与其他几个生物过程,包括纤毛发育和功能,神经激素的活动、环核苷酸代谢和信号,离子运输。纤毛粘液清除(功能和运动是重要的32)和纤毛功能受损一直在观察COPD气道(33,34]。纤毛的运动是相关的,至少部分,特别是环核苷酸和在营地35]。此外,活性离子运输,如Ca2 +,Na+和Cl−,起着重要的作用在调节粘液粘度和黏膜纤毛的清除36,37),Ca2 +和钠+可以通过循环nucleotide-gated运输通道(38]。值得注意的是,先前的研究表明,神经激素的信号调节环鸟苷酸(cGMP)诱导粘蛋白分泌39)的表达GDNF,神经营养因子的基因编码参与肺发展,与而言不啻在慢性阻塞性肺病40]。我们还生成基因交互作用网络而言不啻和确认喀斯特,EDN1,PRKAR2A,GSK3B和POLR2H基因和潜在的监管者而言不啻为中心。旁边喀斯特和EDN1,GSK3B也感兴趣的,因为它是一种多效性的信号分子,调节WNT /β-catenin信号(已被证明的途径诱导粘液细胞在小鼠模型上皮化生)(25]。
本研究的局限性之一是相对较小的数据集,我们用来探索microrna的信使rna变化而言不啻与随之而来的使用宽松罗斯福截止。支持我们的初步调查结果,有几种方法。首先,我们使用GSEA演示的浓缩MUC5AC相关基因(16)在与而言不啻基因高表达。这证实了我们而言不啻定义和之间的关系MUC5AC表达式。此外,我们证明了重要的浓缩CMH-associated中确定基因微阵列数据集RNA-sequencing CMH-associated基因识别的数据集。复制我们的发现在一个不同的病人队列将信息;然而,我们所知,没有其他数据集的microrna / mRNA概要文件和不啻定义,反映迫切需要更多的研究在这个话题。
为在体外研究,我们决定来确定我们的候选人microrna的表达在PAECs和拥堵,因为它们出现在气道壁活检和重要的细胞在COPD的发病机制。我们的发现源自活检,microrna的变化在其他细胞类型(如。炎症细胞或平滑肌细胞)可能会导致我们的发现。实际上,这可以解释缺乏表达mir - 500 - a - 3 - p和mir - 1207 - 5 - p在PAECs和拥堵,在其他细胞和培养研究和验证是保证在未来的工作。此外,它将成为未来感兴趣的调查比较PAECs而言不啻患者和那些没有而言不啻在当前的研究中这是不可能的。此外,我们集中在10个microrna mRNA表达有显著相关性在同一主题在这个研究。这并不意味着其他10个microrna而言不啻无关,因为microrna不仅调节基因的翻译的退化,还通过抑制翻译(9]。
集体,我们确定了三个关键miRNA-mRNA而言不啻集群:mir - 134 - 5 - p, mir - 146 - 5 - p和let-7家族,以及它们相关的潜在的靶基因。let-7和mir - 134 - 5 - p集群连接到而言不啻基因表达网络通过潜在的关键调控基因喀斯特和EDN1。此外,我们发现途径和生物过程,包括MUC5AC相关的基因,这些关键miRNA-mRNA集群可能参与其中。未来的研究涉及培养的上皮细胞与成纤维细胞和其他细胞类型需要进一步解开这些关键基因和microrna的功能作用,并建立而言不啻是否代表了潜在的治疗靶点。
补充材料
补充材料
请注意:补充材料并不是由编辑部,编辑和上传已由作者提供。
补充材料erj - 01556 - 2017 - _supp
表S4erj - 01556 - 2017 - _tables4
表S5erj - 01556 - 2017 - _tables5
确认
作者要感谢安妮塔Spanjer(格罗宁根的格罗宁根大学、荷兰)提供人类主要气道成纤维细胞RNA样本,Jeunard Glenn Boekhoudt(格罗宁根的格罗宁根大学、荷兰)核糖核酸测序数据的分析和玛格丽特的邻居(美国基因泰克,旧金山,CA)为确保资金从基因泰克的RNA序列分析。
脚注
可以从本文的补充材料www.qdcxjkg.com
作者的贡献:h . Tasena a . Faiz w·华M.N. Hylkema, r . Gosens科学博士Postma, m . van den Berge I.H. Heijink和c - a。Brandsma导致研究的概念和设计。注:Hiemstra, m . van den Berge和w·华协调病人GLUCOLD包容和数据收集。m . van den河岸,a . Spira组织和执行微阵列。G.W.东奔西走,硕士Grimbaldeston组织和执行RNA序列。h . Tasena和j·Noordhoek进行在体外实验室工作的监督下I.H. Heijink和c - a。Brandsma。h . Tasema和a·费兹微阵列数据分析的监督下执行m . van den Berge和c - a。Brandsma。h . Tasena a·费兹·m·范Berge I.H. Heijink和c - a。Brandsma分析和解释数据,起草了手稿。h . Tasena a . Faiz w·华j . Noordhoek M.N. Hylkema, r . Gosens Hiemstra, a·斯派拉科学博士Postma, G.W.东奔西走,硕士Grimbaldeston, m . van den Berge I.H. Heijink和c - a。Brandsma批判性阅读和修改了手稿。所有作者阅读、审查和批准最终的手稿。
利益冲突:w·华报告接收一种无限制的补助金从默克公司在进行他的机构的研究;咨询费用从辉瑞他的机构,机构从葛兰素史克演讲费,基耶西和勃林格殷格翰的发言,讲座和咨询费用和旅行费用从罗氏诊断他的机构/ Ventana,荷兰哮喘的资助基金,旅行费用从生物监测他的机构,咨询公司和课程费用从默克Dohme锋利,他的机构/课程讲座和咨询费用从诺华他的机构,个人费用从莉莉肿瘤学,外提交的工作。
利益冲突:r . Gosens报告接收从勃林格殷格翰集团资助,基耶西Farmaceutici Aquilo, Aquilo的创始人之一,和报告接受赠款和Holaira供职于一个顾问委员会,在提交工作。
利益冲突:p . Hiemstra报告收到拨款从加拉帕戈斯群岛喷嘴速度和勃林格殷格翰的发言,在提交工作。
利益冲突:a . Spira充当顾问Veracyte公司持有股票期权,并充当顾问詹森制药,在提交工作。
利益冲突:科学博士Postma格罗宁根大学的报告,已收到钱对阿斯利康的格兰特研究,基耶西,基因泰克公司、葛兰素史克和罗氏。费用咨询公司给格罗宁根大学的阿斯利康,勃林格殷格翰的发言,基耶西,葛兰素史克,武田和梯瓦。
利益冲突:G.W.东奔西走Genentech公司的一名员工。
利益冲突:硕士Grimbaldeston Genentech公司的一名员工。
利益冲突:m . van den Berge报告格罗宁根大学的拨款支付从阿斯利康TEVA,葛兰素史克和基耶西,在提交工作。
支持声明:本研究是由一个非限制性格兰特从左Astma Bestrijding,荷兰哮喘的基础。资金信息,本文已沉积的Crossref资助者注册表。
- 收到了2017年7月31日。
- 接受2018年7月7日。
- 版权©2018人队