文摘
血浆血管性血友病因子(VWF),从血管内皮细胞产生和释放的各种刺激包括缺氧、诱发血小板聚集在高剪切应力下,扮演双重关键角色在止血和小动脉内血栓形成,这是由大小的VWF多聚体(VWFMs)。
阻塞性睡眠呼吸暂停(OSA)患者血栓性心血管事件的风险增加,但发病机理尚不清楚。我们检查了VWF和阻塞性睡眠呼吸暂停综合症之间的关系通过测量VWF抗原(VWF: Ag), VWFMs, VWF胶原蛋白绑定活动(VWF: CB)和一个disintegrin-like,金属蛋白酶,thrombospiondin 1型图案13。共58阻塞性睡眠呼吸暂停综合症患者登记。收集血液样本之前睡觉,睡眠后,经过一个晚上的鼻持续气道正压治疗。
基于VWFM分析阻塞性睡眠呼吸暂停综合症患者分为三组;持续正常VWFMs(组1,n = 29),增加高分子量(高分子量)-VWFMs 06:00时h(2组,n = 18),和减少或缺席HMW-VWFMs 06:00时h(3组,n = 11)。病人在3组有明显恶化呼吸暂停/ hypopnoea指数;VWF: CB遵循了类似的模式。我们观察到晚上九点在血小板计数明显降低h和h 06:00时在阻塞性睡眠呼吸暂停综合症的病人,可能与降低大VWFMs一起减少VWF: Ag)的水平。严重的阻塞性睡眠呼吸暂停综合症可能导致动脉pro-thrombotic状态。
阻塞性睡眠呼吸暂停(OSA)的特点是上呼吸道的崩溃和相关间歇性缺氧在睡眠中(1]。阻塞性睡眠呼吸暂停综合症是与日间极度嗜睡和心血管疾病有关。阻塞性睡眠呼吸暂停综合症患者经常患有肥胖症,高血压,hyperlipidaemia,和葡萄糖耐量,阻塞性睡眠呼吸暂停综合症是心血管疾病的一个独立危险因素2- - - - - -4]。与此一致的是,阻塞性睡眠呼吸暂停患者的心血管风险回到基线处理鼻持续气道正压(CPAP),而那些有严重的治疗阻塞性睡眠呼吸暂停综合症仍然获得了很高的风险5]。最近,一些阻塞性睡眠呼吸暂停综合症协会与静脉血栓,肺栓塞牵连(6,7]。然而,OSA-associated血栓形成的机理可能是多因素疾病,事实上还没有评估动脉血栓形成的基础上,在微脉管系统在高剪切应力下产生,在血管性血友病因子(VWF)作为分子胶中起着至关重要的作用,促进血小板聚集和血栓。
VWF是一种大分子血浆蛋白,这是专门从血管内皮细胞产生和释放,止血和血栓形成和产生关键的影响。VWF组装成不同寻常的大VWF多聚体(UL-VWFMs)组成的相同的250 kDa的子单元,之前释放进入血液循环。在正常情况下,UL-VWFMs迅速由一个特定的等离子体蛋白酶裂解,ADAMTS13 (disintegrin-like、金属蛋白酶和thrombospiondin 1型图案13),在高剪切应力产生微脉管系统;因此,VWF循环在等离子体异构的多聚体规模从500年到15000年kDa不等。UL-VWFMs发挥重要作用主要由绑定血小板止血剥蚀血管内皮组织。然而,在缺乏ADAMTS13活动(ADAMTS13: AC)由于基因突变或获得自身抗体,UL-VWFMs保持uncleaved并生成血小板超聚合。Uncleaved UL-VWFMs导致巨大血小板血栓的形成,称为血栓性血小板减少性紫癜,危及生命的普遍疾病(8- - - - - -11]。
现在好了,高血浆水平的VWF抗原(VWF: Ag)与缺血性心脏病和缺血性中风的风险增加(12- - - - - -14]。此外,中风和急性心肌梗死的相对风险较低的高个人ADAMTS13: AC (14,15]。此外,缺氧导致增加VWF释放培养血管内皮细胞,都直接调节VWF的表情,和间接通过自分泌和旁分泌信号下游低氧诱导炎性细胞因子包括白介素6 (IL),引发,肿瘤坏死factor-α[16,17]。尽管有这些低氧诱导VWF分泌的重要报告,没有后续研究解决VWF和阻塞性睡眠呼吸暂停综合症的严重程度之间的关系18,19]。特别是,没有进行等离子体研究样本获得的按时间顺序相关的睡眠周期。
顺序在这项研究中,我们分析了等离子体VWF: Ag)水平,VWFM模式,和ADAMTS13:阻塞性睡眠呼吸暂停患者的交流不仅之前和之后的睡眠,而且之前和之后CPAP治疗。我们发现,减少大VWFMs一起减少VWF: Ag)水平在阻塞性睡眠呼吸暂停综合症患者的血浆在黎明与临床apnoeic事件的严重性。
病人,材料和方法
病人
2004年2月到2011年4月,284名患者接受完整的标准诊断多导睡眠图(PSG)奈良医科大学医院(奈良、日本)。其中,86名患者被诊断为正常或轻度阻塞性睡眠呼吸暂停综合症(呼吸暂停/ hypopnoea指数(AHI) < 15), 198名患者被诊断为中度或重度阻塞性睡眠呼吸暂停综合症(你好≥15)和接收鼻CPAP疗法。在后者中,140以下基础疾病的患者被排除在外:中风、冠状动脉疾病、哮喘、慢性阻塞性肺疾病、关节炎、自身免疫性疾病、鼻炎、恶性疾病。剩下的58阻塞性睡眠呼吸暂停综合症患者加入这项研究;详细的临床信息对这些患者58所示表S1。书面知情同意是来自所有患者,这项研究是人体试验伦理委员会批准奈良医科大学(04 - 012)。25名健康志愿者(88%的男性),如图所示表1,经历了巴黎圣日尔曼的研究没有阻塞性睡眠呼吸暂停综合症也登记和用作睡眠控制。
血液采样
阻塞性睡眠呼吸暂停患者血浆样本收集到一天中在三个时间点;21:00 PSG前h, h PSG后没有CPAP 06:00时,在06:00时h CPAP治疗后。睡眠对照组,血浆样品收集在收集血液06:00时h。塑料管(Becton, Dickinson和有限公司,富兰克林湖,新泽西,美国)包含十分之一体积的3.8%柠檬酸三钠的一种抗凝剂,和platelet-poor等离子体是由离心3000 g×15分钟在4°C。能整除的存储使用之前在-80°C。获得血小板计数、血液被收集成塑料全血管spray-coated EDTA (Becton, Dickinson和Co .)试管中EDTA作为抗凝剂,分析了库尔特计数器(贝克曼库尔特,东京,日本)。
睡眠研究
PSG使用计算机进行多导睡眠图系统(爱丽丝4;Respironics,匹兹堡,美国)。数据采集21:00 h开始,一直持续到次日06:00时h。呼吸暂停是定义为一个停止气流≥10年代,和hypopnoea被定义为气流下降至少50%至少10年代或明显减少气流(≥20%),其次是氧饱和度下降≥3%或生理唤起的迹象。你好是随着呼吸暂停/ hypopnoea事件数量的计算每小时的睡眠时间。我们也计算了血氧饱和度下降指数≥3% (ODI3%),定义为≥3%蘸血氧饱和度每小时的睡眠。
在夜间,诊断PSG,鼻腔CPAP治疗的患者(REMstar汽车;Respironics), PSG监测。Apnoeic发作期间大幅减少或消除鼻CPAP治疗。
分析VWF: Ag)、VWF、VWF: CB
等离子体VWF:夹心ELISA Ag含量用一只兔子反VWF的多克隆抗血清(DAKO、斯特鲁普、丹麦)20.]。VWF: Ag)水平1毫升的混合的正常人血浆中包含被定义为100%;VWF: Ag)水平在20名健康对照组(平均±102±33%sd)[21]。
VWFMs分析钠十二烷基硫酸盐- 1.2%琼脂糖凝胶电泳后通过与luminographic免疫印迹检测(22,23]。这些墨迹进行扫描并使用ImageJ进行光密度分析(贝塞斯达国立卫生研究院(NIH),医学博士,美国)。多聚体被分类为低分子量(LMW-VWFMs;对应于乐队1−5 VWFM分析),中间分子量(IMW-VWFMs;乐队6−10)和高分子量(HMW-VWFMs;乐队≥11)(24]。高分子量乐队没有发现在正常血浆(NP)被定义为UL-VWFMs。流明瓦的水平,世界地图,HMW-VWFMs用NIH ImageJ计算。为定量分析,我们计算的比率VWFMs的密度,流明瓦,世界地图,高分子量相对于总VWFM密度。此外,multimeric VWF: Ag含量计算乘法VWF:流明瓦Ag)水平,世界地图,高分子量比率。
等离子体VWF胶原蛋白绑定活动(VWF: CB)使用酶免疫分析法测定使用商用设备(VWF-CBA ELISA, PROGEN Biotechnik GmbH,海德堡,德国)根据制造商的指示。
测定ADAMTS13: AC
ADAMTS13: AC决心使用商用生色ELISA /行为(日本东京海野有限公司)。这个试验的检测极限是0.5%;获得的值来自55个健康对照组(平均±99.1±21.5%sd)[25]。
统计分析
实验室数据表示为均值±sd。比较阻塞性睡眠呼吸暂停综合症的病人和控制进行了分析使用曼−Whitney u测验或卡方检验。比较三组中都进行统计显著性检测利用克鲁斯卡尔−沃利斯H-test或卡方检验,耶茨的修正为2×3表;整体三组之间的显著差异(p < 0.05)进一步分析使用曼−Whitney u测验或卡方检验。所有分析都使用StatView (SAS研究所Inc .卡里,数控,美国)。一个假定值< 0.05被认为是显著的。
结果
阻塞性睡眠呼吸暂停综合症患者的特点和控制
阻塞性睡眠呼吸暂停综合症患者的人口统计学和睡眠特点和控制所示表1。阻塞性睡眠呼吸暂停综合症患者稍微比控制人口,但否则类似的人口。18 7和4例阻塞性睡眠呼吸暂停综合症组治疗高血压,hyperlipidaemia和糖尿病,分别,但没有接受胰岛素治疗的糖尿病患者。基于PSG结果,两个种群不同明显对你好,ODI3%,最低年代p O2%。
等离子体VWF: Ag)水平在h 06:00时显著降低阻塞性睡眠呼吸暂停患者与对照组相比,但等离子体ADAMTS13: AC在h 06:00时这些团体之间没有差别。有趣的是,等离子体ADAMTS13: AC 06:00时h在阻塞性睡眠呼吸暂停综合症患者和睡眠控制低于上述健康对照组(p < 0.01)。
时间变化的等离子体VWFM模式归类阻塞性睡眠呼吸暂停综合症患者分为三组
我们分析VWFM模式在等离子体从阻塞性睡眠呼吸暂停综合症的病人,获得21:00 h和06:00时h后睡眠有或没有CPAP。基于这些结果,我们归类为阻塞性睡眠呼吸暂停综合症患者分为三组(图1)。患者在1组(n = 29)始终VWFM正常模式,几乎与睡眠的控制(n = 6)。病人在2组(n = 18)表现出减少HMW-VWFMs 21:00 h和持久UL-VWFMs h 06:00时,有或没有CPAP。病人在3组(n = 11) 21:00 h VWFM正常模式,减少主要HMW-VWFMs h 06:00时没有CPAP,回到一个正常的VWFM模式CPAP治疗后。
减少HMW-VWFMs及随之而来的LMW-VWFMs可以反映增强蛋白质水解ADAMTS13或广泛的消费继发性血小板聚集。因此,我们首先计算LMW-VWFMs总比VWFMs(流明瓦比)h 06:00时没有CPAP (图2),随后决定流明瓦之间的关系比和你好。所示图2),这两个参数显著相关(p < 0.05),表明缺氧的程度在apnoeic vFWMs处理相关事件和/或消费。
时间变化的等离子体水平的VWF: Ag, VWFM比率,和ADAMTS13: AC在三个病人组与阻塞性睡眠呼吸暂停综合症
等离子体水平的VWF: Ag) 21:00 h, h 06:00时没有CPAP, h和CPAP 06:00时被确定在所有三组的阻塞性睡眠呼吸暂停综合症的病人。所示图3等离子VWF: Ag组1例含量几乎不变,但21:00之间显著增加h和06:00时h组2例。值得注意的是,VWF: Ag)水平显著降低21:00 h和h组3 06:00时之间。
然后我们决定水平的高分子量、世界地图和流明瓦在所有三组。在组1,HMW-VWFM显示h和CPAP 06:00时略有增加,相对于没有CPAP 06:00时h。组2,HMW-VWFMs显著增加在h 21:00相比h 06:00时确认VWFM分析的结果用于定义组1 - 3。与此一致的是,在3组,在IMW-VWFMs h 06:00时明显低于21:00 h;CPAP治疗可逆地增加了HMW-VWFM 06:00时h,按照增加等离子体VWF: Ag)水平。
相比之下,没有改变等离子体ADAMTS13:交流是21:00 h, h, 06:00时或者06:00时h和CPAP的三组。这些数据认为,消费HMW-VWFMs发生在一夜之间的阻塞性睡眠呼吸暂停综合症的病人。
等离子体水平的VWF: CB活动
我们观察到的动态时间改变等离子体VWF: Ag)水平和VWFM模式在我们的主题,尤其是在3组。VWF: CB代表VWF的生物功能,在HMW-VWFM坚持胶原蛋白与亲和力高于世界地图或LMW-VWFM。在这项研究中,我们可以检查等离子VWF: CB含量53 58阻塞性睡眠呼吸暂停综合症的病人。正如所料,等离子体水平的VWF: CB在h 06:00时没有CPAP与流明瓦比呈负相关(p < 0.01),如图所示图4。此外,所示图4等离子体水平的VWF: CB在h组显著低于3 06:00时(85±50%)比在两组1(120±36%)或一组2 (138±41%)。这些研究结果认为,结构上和功能上受损VWFMs出席06:00时h组3例。
减少血小板计数在黎明时分在未经治疗的阻塞性睡眠呼吸暂停综合症患者
一双血小板计数在21:00 h和h 06:00时没有CPAP的决心在31个58六25睡眠阻塞性睡眠呼吸暂停综合症患者和控制,所有人都参与了这项研究的后阶段。纠正可能水化效应在睡眠中,我们计算血小板数到血细胞压积的比值。睡眠的比率控制21:00之间并没有表现出显著变化h和h(06:00时图5),而他们在06:00时降低h在未经治疗的阻塞性睡眠呼吸暂停综合症患者(p < 0.01) (图5)。然而,没有一个病人CPAP治疗血栓性并发症的表现出明显的临床症状。这些结果表明,血小板消耗,在较小程度上,可能发生在睡眠中没有明显的血栓性症状治疗阻塞性睡眠呼吸暂停综合症的病人。
病人群体的特点1、2和3
表2总结阻塞性睡眠呼吸暂停综合症患者的人口统计学和测量参数分为1 - 3组。这些人口三组没有区别,但在3组AHI显著高于组1和2。ODI3% 3组也显著高于组1。这些结果明确地表明,患者在3组,谁表现出低水平的大VWFM 06:00时h代表最高的三组中阻塞性睡眠呼吸暂停综合症的严重程度。
与这些结果一致,降低等离子体水平的VWF: Ag)在两个不同的时间间隔(h和21:00 06:00时h)是显著的3组相比,那些在组1和2。有趣的是,在两次流明瓦率的差异(h和21:00 06:00时h)明显高于组3组比1或2。这些结果表明,减少VWF: Ag)在h 06:00时减少的主要原因是大VWFMs。或者,ADAMTS13无显著变化:两次之间的交流(h和21:00 06:00时h)观察3组,而这种变化是观察组1和2,离开生理相关性没有解决。
你好关系和组1 - 3 VWFM模式在阻塞性睡眠呼吸暂停综合症的病人
你好是一个很好的显示阻塞性睡眠呼吸暂停综合症严重的方式,这里我们使用它来归类三组:温和(≤15日AHI < 30)、严重(30≤AHI < 60),极其严重的(我≥60啊)。所示表3阻塞性睡眠呼吸暂停综合症患者组1和2的那些变量AHI水平。值得注意的是,所有的阻塞性睡眠呼吸暂停综合症患者组内3有AHI 15∼< 30,他们一致与AHI你好≥30,更主要是≥60岁。第1组患者较低的事件AHI≤30组AHI < 60和AHI比15≤≥60 AHI < 30 (p < 0.05)。相比之下,3组的事件是高AHI比15≤≥60 AHI < 30 (p < 0.05)。AHI得分无显著关系,每个参数如VWF、ADAMTS13或血小板被发现。
讨论
等离子体VWF: Ag)水平提高后,年龄40岁在正常个体;60岁年龄的他们可以达到∼120 - 140%的健康正常基线(26]。阻塞性睡眠呼吸暂停综合症患者的平均年龄参加这项研究是44.7岁,而对照组为38.3岁。然而,等离子VWF:收集Ag)水平对阻塞性睡眠呼吸暂停综合症患者h 06:00时明显低于对照组(表1)。相比之下,等离子体ADAMTS13活动减少年龄40岁后在正常个体(27]。我们研究患者和控制,等离子体ADAMTS13: AC低于健康对照组年龄介于20−40岁(p < 0.01),表明两组没有显著差异(表1)。
鉴于VWF观察差异:Ag)阻塞性睡眠呼吸暂停综合症患者和对照组之间的水平,我们分析了VWFM模式在三个时间点:按时间顺序在21:00 h, h 06:00时要么有或没有夜间CPAP治疗。正如预期的那样,大多数的阻塞性睡眠呼吸暂停综合症患者(29(50%)的58)一直正常VWFM模式,归类为组1。两个小群体的患者增加了UL, HMW-VWFM(18(31%) 58)或减少UL, HMW-VWFM(11(19%)的58)h 06:00时;这些被归类为组2和组3,分别。总VWFM LMW-VWFM比,称为流明瓦比,是退化VWFM的相对量的测定;在我们的研究人群中,流明瓦比与AHI显著相关。
流明瓦比率的增加在阻塞性睡眠呼吸暂停综合症的病人可能出现减产的VWF由血管内皮细胞,增加间隙HMW-VWFM的循环,在血栓形成或消费。然而,在体外研究已经证明,VWF表达的培养血管内皮细胞缺氧条件下增加;阻塞性睡眠呼吸暂停综合症的病人,不太可能间歇性缺氧的条件下,会表现出减少的表达VWF一夜之间(17]。此外,等离子体中没有差异被认为ADAMTS13:交流在任何组织在任何时间点,这表明增强蛋白质水解的HMW-VWFM没有出现。因此,我们提出高架流明瓦比看到在我们的阻塞性睡眠呼吸暂停综合症患者可能是由于一个增强HMW-VWFM退化或消费。
阻塞性睡眠呼吸暂停患者的血栓性并发症的原因可能是多方面的,但在这个研究中我们已经清楚地表明,VWF出现血栓形成中起着关键作用在一定人口归类为3组。虽然机制尚未完全阐明,但高VWFMs释放从血管内皮细胞在缺氧是一个最合理的因素。因此,严重的阻塞性睡眠呼吸暂停综合症可能是一个风险因素对动脉和静脉血栓形成所述的介绍。
为了更好地理解某种程度的血栓是否发生在未经治疗的阻塞性睡眠呼吸暂停综合症的病人,我们确定31的58岁患者的血小板计数;我们观察到晚上九点在血小板计数明显降低h和06:00时h。这既降低与减少血浆VWF: Ag)水平和HMW-VWFM组3。定量分析VWFMs 3组表明,水平HMW-VWFMs CPAP治疗后显著增加,而测量在没有CPAP 06:00时h。这是符合UL的低级消费——和HMW-VWFMs微血管血栓形成和/或血小板聚集在阻塞性睡眠呼吸暂停患者在睡眠中;CPAP疗法可能会减少这样的消费。然而,患者未出现明显的临床症状的血栓栓塞并发症;因此,我们更愿意用“临床前血小板消费”一词来描述这一现象。这可能代表一个基线pro-thrombotic阻塞性睡眠呼吸暂停患者的状态,可以纠正CPAP疗法。
在这项研究中,时间分析一致表明,减少大型VWFMs等离子体在黎明时分反映阻塞性睡眠呼吸暂停患者的呼吸暂停的临床严重程度。通过VWFM分析获得的结果是固体,但过程是费时,需要高技能来执行。一个可靠的高通量方法对常规临床使用是必要的。在这方面,VWF的测定:CB等方法是一种很有前途的候选人,因为HMW-VWFM坚持胶原蛋白亲和力高于世界地图或LMW-VWFM。我们的研究结果表明,VWF: CB 06:00时h相关VWFM模式,和早些时候符合对象分配给组1 - 3。因此,通过本研究首次提供了令人信服的证据表明,在黎明时分VWF 3组不仅在结构上,而且在功能上受损,可能由于低氧诱导释放和VWF的消费。这个过程可能还包括血小板聚集和消费,即使患者无症状。因此,大规模的研究,结合实际测量的血小板计数和VWF: CB,将重点在以下研究。
确认
我们要感谢k . Makinodan福冈和m .山(第二部门内科,奈良医科大学、奈良、日本)收集血液样本和a . Isonishi(输血医学部门,奈良医科大学)为她优秀的技术援助。我们还要感谢m . Uemura(奈良医科大学内科医学第三部门)对他的批判阅读手稿。
脚注
支持声明
本研究在一定程度上支持的研究资助的呼吸衰竭研究小组和凝固异常研究小组来自卫生部、劳动和福利和教育部的,日本的文化、体育、科学和技术。
感兴趣的语句
没有宣布。
- 收到了2010年12月3日。
- 接受2012年1月8日。
- ©2012人队