文摘
一个独特的族群的外周血单核细胞表现出一个平行的表达造血间充质标记被描述为“循环纤维细胞”。这些细胞被证明获得组织或细胞培养的成纤维细胞的表型和导致肺纤维化疾病和组织改造过程。
我们研究的目的是描述循环纤维细胞的招募在活的有机体内慢性缺氧性肺动脉高压模型的小鼠和分析稳定环前列腺素的治疗效果模拟trepostinil对该细胞群。
跟踪循环纤维细胞在活的有机体内,我们处处野生型小鼠的骨髓移植小鼠eGFP表达并对其进行了慢性缺氧。我们观察到显著增加招聘改建循环纤维细胞的肺阻力动脉对缺氧的反应。treprostinil治疗显著降低这些细胞的招募与常氧小鼠相比。Treprostinil也略有减少右心室收缩压和减少血管重塑,但未能逆转右心室肥大。
总之,我们表明,循环纤维细胞有助于缺氧性肺血管重塑和可能是专门针对环前列腺素类似物。细胞的进一步调查和旁分泌机制保证破译他们在肺动脉高压中的作用。
肺动脉高压是一种慢性和潜在的致命的疾病产生的各种原因1。肺部疾病如慢性阻塞性或间质性肺疾病可能导致慢性肺内的缺氧和随后的肺动脉高压。它的特点是肺血管阻力增加,海拔肺动脉压力,随后的右心室功能障碍和心室肥大。突出的组织学特性肥大和增生的血管层动脉和小动脉导致血管闭塞2,3。在肺动脉高压血管重塑被认为是由各种类型的细胞之间的相互作用(外膜成纤维细胞、平滑肌细胞、内皮细胞或祖细胞)的居民起源或额外的肺动脉起源,及其归航,分化和发布各种介质4,5。环前列腺素及其类似物iloprost稳定,treprostinil批准治疗肺动脉高压(PAH)患者1,6。他们的行为像血管舒张药主要显示抗增殖、抗炎和anti-aggregatory效果7,8。
骨骨髓来源的细胞已被证明参与血管生成,血管修复和组织各种器官的改造9- - - - - -11。循环祖细胞被证明假设间叶细胞或成纤维细胞的表型在现场组织损伤的动物模型病理条件。在这方面,最近的报告表明,白细胞会导致各种fibroproliferative病态的族群,如肺纤维化,在哮喘气道重构的发生和器官纤维化硬皮病12- - - - - -17。这些从外周血循环祖细胞(< 1%),指定由布克拉“循环纤维细胞”et al。18,表现出一种平行的表达造血间叶细胞抗原(CD45 +、CD34 +胶原蛋白我和三世和波形蛋白)。桥本的研究et al。19,使用与GFP表达骨髓细胞嵌合小鼠模型,表明骨髓衍生GFP的重大贡献+/ collagenI+成纤维细胞对博来霉素诱导的肺纤维化。的贡献循环纤维细胞器官纤维化和细胞外基质沉积在实验性肺纤维化是由CD45的相关性+/ collagenI+/ CXCR4+循环纤维细胞与胶原沉积增加招聘14。大量细胞招聘,特别是肺动脉的外膜层,是所示设置缺氧诱导肺动脉高压的老鼠和小牛肺动脉高压模型,并与动脉外膜成纤维细胞的数量增加20.。骨骨髓来源平滑肌细胞招聘慢性缺氧小鼠肺组织一直在报道21。
尽管越来越多的了解肺动脉高压的病理学,这仍然是一个悬而未决的问题,如果除了当地驻留细胞,细胞肺外起源产生潜在影响血管重塑的过程中,这是这些细胞的机制,导致招聘网站的伤害和招募了细胞的分化是如何规范和调节血管重塑在疾病的进展。此外,目前批准治疗的影响多环芳烃,如环前列腺素及其类似物,并没有被研究过关于这些肺外原始细胞。因此,我们的目的是调查是否这些循环祖细胞有助于在小鼠模型的肺动脉高压肺血管重塑和环前列腺素类似物调节循环纤维细胞粘附、分化、在活的有机体内招聘和血管重塑。
为了解决这个问题,我们首先发现和识别出循环纤维细胞分离外周血细胞培养以及在活的有机体内使用一组间充质和造血的标记。我们进一步研究了循环纤维细胞的招聘在应对慢性缺氧肺动脉阻力动脉GFP-bone骨髓嵌合小鼠和评估持续静脉注射的影响前列腺素类的模拟treprostinil。
材料和方法
在石蜡包埋PAH患者的肺组织免疫组织化学
使用病人材料经当地国际审查委员会批准(德国吉森大学吉森)和病人的组织或献血之前获得知情同意。一夜之间,肺被固定在4%多聚甲醛(PFA)在4°C,在一系列分级的酒精脱水,石蜡包埋。部分的4到10μm削减在切片机(徕卡,Wetzler,德国)。抗原检索是由孵化与胰蛋白酶的解决方案(消化所有2;病菌,柏林,德国)10分钟37°C或微波加热使用1毫米EDTA 8分钟。抗体染色标准程序后执行。孵化项目和洗进行缓冲区包含3%牛血清白蛋白(BSA)和0.2% Triton x - 100 1 x PBS, pH值7.4。不具体的绑定网站被封锁的45 - 60分钟山羊血清和缓冲区(1:1体积/体积比)。主要和次要的部分被孵化抗体60分钟紧随其后的是核染色为5 - 10分钟®-PRO-3碘离子(分子探针,德国)。用徕卡TCS共焦显微镜检查的部分(莱卡)。
动物
n C57BL / 6小鼠获得查尔斯河实验室(加拿大蒙特利尔,QC)和C57BL / 6 tgn (eGFP)转基因小鼠获得杰克逊实验室(美国巴尔港,我)22。动物被安置在控制温度和照明(12/12-h光/暗周期)和美联储与商业饲料和水随意。所有的实验里,根据机构的指导方针符合国家和国际法规。
增强绿色荧光蛋白嵌合体小鼠
如前所述创建的eGFP嵌合小鼠23。短暂、C57BL / 6 n野生型小鼠年龄8 - 10周,致命辐照有11个Gy从铯源和收到2−5×106骨髓细胞从eGFP积极小鼠尾静脉注射。收获了骨髓冲洗胫骨和股骨的转基因小鼠表达报告基因增强型绿色荧光蛋白(eGFP)的控制下鸡β-actin启动子和巨细胞病毒增强剂。这些转基因小鼠无所不在地表达绿色荧光,在相同饲养C57BL / 6 n背景细胞接受者。骨髓移植的成功被流式细胞术检测外周血(FACSan流式细胞分析仪;正欲,德国)。移植后4周> 80%的血液细胞表达eGFP。
小鼠模型的缺氧诱导肺动脉高压
骨髓移植(BMT)小鼠被分为五个不同的组,每组由6到10只老鼠。一群老鼠被暴露在缺氧(启发氧气分数10%)normobaric室如前所述24,25而第二组(控制BMT)的动物被放置在一个常氧室正常氧环境(21%灵感O2分数)28天。假针灸组小鼠生理盐水治疗,而其他两组的老鼠收到treprostinil注入不同剂量水平(ng·14公斤−1·敏−1和70 ng·公斤−1·敏−14周)和暴露在缺氧。相比之下,人类注入率PAH疗法从10到60 ng·公斤不等−1·敏−126- - - - - -29日。
渗透微型泵植入手术的老鼠
渗透微型真空泵(型号2004;注入率0.25μL·分钟−1;Alzet、钙、美国)满心treprostinil (Remodulin®;联合疗法Corp .)研究三角形,数控、美国)或无菌0.9%注射生理盐水(布劳恩,Melsungen,德国)和平衡在37°C PBS植入前48 h。老鼠和30 - 60 mg·公斤犀牛−1氯胺酮(辉瑞,柏林,德国)和5 - 10毫克公斤−1甲苯噻嗪(拜耳、勒沃库森、德国),和一个2厘米2面积远端头部左侧腹侧和背侧刮。微型泵植入皮下的背,套管连接到泵插入皮下隧道在颈外静脉和保存在丝绸缝的位置。与手术切口关闭绑扎和动物获得食物和水随意。动物收到术后镇痛与buprenorphin连续3天每天两次注射。
血液动力学的测量和心室质量
动物犀牛的腹腔内注射氯胺酮和甲苯噻嗪如上所述,放在加热垫保持体温的生理范围。气管插管,连着一只老鼠呼吸器(SAR830A / P;IITC生命科学,森林山、钙、美国)10毫升·公斤−1体重和潮汐卷100呼吸·分钟−1。吸入氧气分数(F阿,我2)被设置为0.5,1.0而言不啻的呼气末正压通气2O运用。系统性血压记录从左侧颈动脉插管附加到一个充满液体的压力传感器(德国布劳恩)。右颈静脉被用来测量右心室压力,插入一个定制的硅通过颈静脉导管进入右心室。所有仪器校准测量。
系统性和右心室压力测量后,肺和心脏与生理盐水冲洗后通过肺动脉灌注和气管滴注法1%缓冲PFA (Sigma-Aldrich、德国)20而言不啻与压力2O和10而言不啻2分别啊。因此,肺和心脏是孤立的,右心室(RV)从左心室解剖加上隔(LV + S),这些样本干解剖和重获得正确的左心室+隔比率(RV / LV + S)。
石蜡包埋小鼠肺组织的免疫组织化学
小鼠肺收获如前所述。抗体染色标准程序后执行。一夜之间,肺被你找找在1% PFA在4°C,在一系列分级的酒精脱水,石蜡包埋。部分的4到10μm削减在切片机(莱卡)。抗原检索是由孵化与胰蛋白酶的解决方案(消化所有2;酶)10分钟37°C或微波加热使用1毫米EDTA 8分钟。所有的孵化项目和洗进行histobuffer包含3% BSA和0.2% Triton x - 100 1×PBS, pH值7.4。未指明的结合位点被封锁在45 - 60分钟山羊血清和histobuffer (1:1 v / v比)。主要和次要的部分被孵化抗体60分钟紧随其后的是核染色。用徕卡TCS共焦显微镜检查的部分(莱卡)。
形态测量学的肺动脉重塑
muscularisation由于缺氧诱导的肺动脉高压程度BMT老鼠被双重染色3-μm肺部分评估α-smooth肌肉肌动蛋白(克隆1 a4;1:400;Sigma-Aldrich)和血管性血友病因子抗体(稀释1:900;Dako,汉堡,德国),如前所述25。原子核是由甲基绿想起柜台染色,光学显微镜评估的部分。muscularisation的程度是衡量图像测量软件如前所述25。在40×放大,80 - 100年的小血管,周围肺泡管或肺泡,统计。血管被归类为的程度muscularisation non-muscularised,部分肌和完全肌。血管的百分比在每个类别确定船只在这一类的数量除以总数血管数在同一实验组。
血管壁厚度测量
测量血管壁厚度、外(Ro)和内部(Ri)半径计算使用血管内腔的体积密度和血管壁使用stereological点计算网格基于newCAST Cavalieri原则的软件(Visiopharm、Hoersholm、丹麦)。计算网格点用于体积密度分析。相对壁厚的动脉(VWT)由公式计算:VWT = (Ro−Ri) / Ro30.。三个部分每个老鼠的肺五到六动物每组进行分析。
定量PCR从福尔马林固定石蜡包埋小鼠肺组织趋化因子表达
总RNA隔离,四10-μm厚部分被削减从福尔马林固定石蜡包埋组织块(FFPE)。的RecoverAll™总核酸分离优化FFPE样品(美国Ambion Inc .、奥斯汀、TX)用于RNA隔离。RNA被隔离按照制造商的指示。短暂的,协议遵循以下步骤:deparaffinisation二甲苯100%与100%乙醇洗涤紧随其后。这之后,组织与蛋白酶K消化和RNA是孤立的。孤立的RNA与DNase最后纯化孵化。逆转录(RT)分析,提取RNA (500 ng)转换为互补使用以下组件:2μL 10×RT缓冲II, 4μL MgCl2(25毫米),2μL deoxynucleotide混合物(5毫米),0.5μL核糖核酸酶抑制剂,1μL随机六聚体和1μL马宏升小鼠白血病病毒(所有组件都来自应用生物系统公司,促进城市、钙、美国)。混合物的体积由20μL。的混合然后在43°C的环境75分钟紧随其后的逆转录酶失活95°C。
定量PCR是由CFX96™C1000Thermal周期计(BioRad、大力神、钙、美国)。18 s核糖体RNA,无所不在地以及持续表达基因,作为参考。反应(最后的体积:25μL)设置与SYBR™绿色PCR核心试剂(应用生物系统公司)根据制造商的协议使用2μL互补。循环条件95°C 6分钟,其次是45周期95°C的20年代,59°C 30年代和73°C 30年代。由于无选择性dsDNA绑定的SYBR™绿色染料,融化曲线分析和凝胶电泳进行确认的独家放大预期的PCR产物。列出了用于实时PCR引物表1。
统计分析
结果表示为±扫描电镜,除非另有说明。通过方差分析对数据进行分析Bonferroni的多重比较事后测试使用GraphPad棱镜统计软件(美国GraphPad软件,拉霍亚,CA)。一个假定值< 0.05被认为是重要的。误差线描绘扫描电镜。
结果
低氧诱导的肺动脉高压eGFP骨髓嵌合小鼠和treprostinil注入血液动力学的改善
成功的骨髓移植后外周血细胞的流式细胞术评估4周的调整。在那个时候,已经有80 - 90%的外周血细胞表达绿色荧光蛋白。
GFP嵌合小鼠在缺氧,缺氧与连续注入生理盐水或treprostinil或normoxia为血流动力学参数进行分析在材料和方法部分描述24,25。缺氧小鼠显示显著增加右心室收缩压(36.57±0.705毫米汞柱)相比,老鼠在常氧室(25.2±0.43毫米汞柱),如图所示图1一个和表2。
接收到的虚假的老鼠连续盐水通过皮下植入微型泵通过一样的颈静脉treprostinil注入动物和保持在缺氧。虚假的老鼠显示增加右心室收缩压(30.3±0.8毫米汞柱)与常氧对照组相比没有植入泵。水平(14和70 ng·公斤−1·敏−1)treprostinil注入动物相比显示,右心室收缩压明显降低缺氧和虚假的动物(图1一个和表2)。
右心室肥大与treprostinil无法逆转治疗低氧诱导肺动脉高压的动物
右心室肥大的干重比评估房车LV + S。RV / (LV + S)的比例表现出显著的右心室肥大缺氧嵌合小鼠相比常氧嵌合小鼠(图1 b和表2)。虚假的组动物表现出显著增加右心室肥大与常氧动物相比。然而,treprostinil治疗未能扭转比率显著,如所示图1 b和表2。血细胞压积值从小鼠在缺氧和血液动力学的测量,normoxia条件和归纳了那些接受治疗表2。
Treprostinil注入稍微降低了血管重塑,以应对慢性缺氧暴露
慢性低氧诱导改造的肺阻力动脉在immunohistological分析部分通过双染色α-smooth肌肉肌动蛋白和血管性血友病因子。muscularisation程度的定量评估是在材料和方法部分描述24,25。常氧控制老鼠主要展出non-muscularised和部分肌血管20 - 70μM完全肌血管直径和< 10%。
慢性缺氧诱导大幅增加在muscularisation GFP-BMT小鼠伴随减少non-muscularised血管和增加部分和全部肌血管所示图2。低氧诱导肺动脉高压的病理生理和组织学特性GFP-BMT老鼠类似于non-irradiated, non-BMT野生型老鼠受到类似的条件下,先前报道24,25。
血管重塑略预防treprostinil在两个不同的灌注率在活的有机体内如图所示,通过减少muscularisation non-muscularised增加血管相比虚假注入组,但不显著降低缺氧动物相比没有微型泵植入术(图2)。
血管壁厚度明显增加了缺氧。treprostinil治疗稍微降低了血管壁厚度骗局和缺氧动物相比,但它不是统计学意义(图3)。
在活的有机体内循环纤维细胞的描述和识别
肺组织部分准备从10特发性肺动脉高压病人的肺。Immunohistological分析胶原蛋白1和CD45 double-positive细胞显示正常,但罕见的肺阻力动脉循环纤维细胞的存在,如图所示图4 a e和表3。两名患者有更高数量的纤维细胞相比,其余的患者(表3)。胶原蛋白- 1阳性细胞的数量更高,但他们的起源(居民或招募)尚不清楚,有报告表明损失造血的标记在纤维细胞的分化14,15,31日。
骨髓衍生GFP +细胞明显积累的肺动脉血管周的面积和动脉壁对缺氧的反应。了上述循环GFP +细胞的招募肺血管的血管周的区域显示的co-expression CD45以及波形蛋白和胶原蛋白1,如图所示图5。几个主机派生GFP - / CD45阳性细胞也可以发现血管周的地区和代表细胞骨髓交换之前被招募。
招聘期间循环纤维细胞的轮廓肺动脉壁慢性缺氧性肺动脉高压的发展
我们的招聘量化骨髓衍生GFP +胶原蛋白1 + / GFP +胶原蛋白1 - / GFP +, CD45 + / GFP +和CD45 / GFP +细胞计数的肺动脉阻力15 - 20的细胞血管从随机部分从五个不同的部分每个老鼠的肺和六从每组动物被量化。
胶原蛋白1 + / GFP +胶原蛋白1 - / GFP +, CD45 + / GFP +, CD45 / GFP +和GFP +细胞明显积累在应对慢性缺氧肺动脉阻力动脉相比常氧动物。连续treprostinil注入70 ng·公斤的速度−1·敏−1显著抑制胶原蛋白的招聘1 + / GFP +循环成纤维细胞肺动脉壁比虚假的灌注组。招募CD45 + / GFP +显著降低了treprostinil治疗剂量水平(图6)。
讨论
实验小鼠缺氧肺动脉高压的设置可以提高肺动脉压力由于血管重塑24,25。所有类型的肺动脉高压的显著特征是内膜和中肥大导致血管收缩。的贡献不同类型的细胞(内皮细胞、平滑肌细胞、成纤维细胞,等。),提出了介质的血管重塑过程。最近的一些报告显示了循环纤维细胞的招募各纤维化病理条件下,如在哮喘气道重塑,实质改造在肺动脉高压的肺纤维化和血管重塑14,15,20.,21。
在我们的研究中,跟踪循环纤维细胞在活的有机体内,我们生成的GFP小鼠骨髓嵌合和随后受到这些小鼠缺氧诱导肺动脉高压。的在活的有机体内捐赠派生循环纤维细胞的描述(来源于GFP阳性细胞的骨)显示CD45和胶原纤维母细胞标记的表达我和波形蛋白。此外,我们表明,循环纤维细胞的存在(表达造血的标记CD45和间叶细胞标记collagen1和波形蛋白)在改建PAH患者的肺动脉。我们目前的数据提供了强有力的证据,积极招聘和循环纤维细胞的积累和其他肺血管壁骨骨髓来源的细胞对缺氧的反应。此外,循环纤维细胞招聘被连续treprostinil灌注明显抑制。
胶原蛋白1 + / GFP +循环纤维细胞显著增加血管壁的慢性缺氧小鼠的肺阻力动脉。这个细胞人口极有可能导致血管重塑过程在实验肺动脉高压。胶原蛋白1 - / GFP +细胞代表细胞的免疫系统,在肺血管重塑是悬而未决但它经常观察炎性细胞导致血管病变实验和人类肺动脉高压,可能通过分泌fibroproliferative介质33,34。Frid的数据et al。20.和伯克et al。34显示强大的招聘单核细胞的来源、主要外膜层在慢性缺氧小腿和老鼠,老年病的各种导电fibroproliferative标记血管重塑过程。
不过,我们不能发现骨骨髓来源GFP阳性肺血管的平滑肌细胞在媒体上,这是与以前的报告21失败的,但符合观察骨髓为monocrotalin诱导肺动脉高压肺血管平滑肌的老鼠35。分化的观察骨骨髓来源前体进入α-smooth肌肉表演表达myofibroblasts也不同在不同的组。菲利普斯et al。14报道myofibroblast代在实验性肺纤维化而桥本et al。19以及我们组(未发表的数据),并没有观察到这种现象在实验纤维化。其原因仍不清楚;变化移植协议,处理细胞或动物菌株可能被考虑。类似的失败骨骨髓来源的细胞填充平滑肌的肺已经被我们组在前面描述的模型补偿单侧肺切除术后小鼠肺增长23。
然而,循环纤维细胞堆积在血管周的地区为了应对慢性缺氧表明他们的贡献的发展有害的血管重塑有别于其他细胞类型。最近的数据表明,持续缺氧创建一个肺artery-specific炎性微环境与各种生长因子的上调(血管内皮生长因子(VEGF)、转化生长因子(TGF) -β),趋化因子和细胞因子、粘附分子以及单核细胞/纤维细胞生长和分化标记大鼠肺动脉高压模型,这些都可以促进招聘、保留和循环单核细胞的分化34。
桥本的研究et al。19使用类似的GFP嵌合小鼠模型,展示了重大贡献(∼27%)骨骨髓来源的胶原蛋白GFP + / 1 +博来霉素诱导的肺纤维化的成纤维细胞。此外,他们表明,孤立的GFP +肺纤维母细胞趋化因子受体CXCR4展出CCR7 + + /趋化因子受体的表达。菲利普斯et al。14解决了循环纤维细胞的作用类似的标记在肺纤维化的桥本et al。19和呈正相关的招聘CD45 + /胶原蛋白1 + / CXCR4 +循环纤维细胞胶原沉积增加博来霉素诱导的肺纤维化。这种效应被治疗逆转对CXCL12中和抗体,这是趋化因子受体CXCR4的配体14。同样的,在另一项研究中,CCR2循环纤维细胞的表达已表现出异硫氰酸荧光素诱导肺纤维化中发挥重要作用12。这些研究数据支持fibroproliferative循环纤维细胞的作用及其趋化因子受体。
趋化因子的表达增加,如基质衍生因子- 1、fractalkine,咆哮或单核细胞趋化蛋白1 (MCP),已经证明在PAH患者以及肺动脉高压动物模型36- - - - - -38。基因分析研究激光切割肺动脉也表现出各种生长因子的上调(血管生长因子和血小板衍生生长因子(PDGF))和基质蛋白(pro-collagen 1 a2和pro-collagen1A2)34,39。人类循环纤维细胞表达的CC趋化因子受体家族,即CCR3, CCR5, CCR7和科学家家族趋化因子趋化因子受体CXCR4,而老鼠纤维细胞表达CCR2, CCR7和趋化因子受体CXCR4各种生长因子,包括MCP-1 TGF-αTGF-β,VEGF和a18,40。执行定量mRNA表达分析,我们观察到显著增加循环fibrocyte-related表达的趋化因子受体CCR7在如趋化因子受体CXCR4和对缺氧的反应。招聘和连续介质的分泌细胞群可能有深远的影响等其他细胞类型的异常增殖的平滑肌细胞或内皮细胞,从而赋予起始和/或改造过程的进展通过自分泌或旁分泌循环。因此,循环纤维细胞可能部分中介效应如旺盛的细胞增殖和细胞外基质沉积在肺动脉壁导致血管管腔狭窄和血管阻力增加。显示循环纤维细胞,促进血管生成41因此可能参与neovascularisation,可能作为招聘渠道的新循环细胞从循环的损伤41。当前数据循环纤维细胞招聘在慢性缺氧鼓励我们进一步研究了循环纤维细胞的相声和其他血管细胞类型和增加我们的兴趣破译血管重塑过程的分子机制。
麽我2和它的模拟都证明可以降低平滑肌细胞增殖42。除此之外,内皮抑制生产各种细胞因子和炎症介质,抑制中性粒细胞粘附8,43。已经表明,treprostinil介导抗增殖机制居民肺成纤维细胞44。另一个环前列腺素类似物,iloprost显示在哮喘产生有益的影响45。镇压了红衣主教吸入性伊洛前列素功能的哮喘小鼠模型通过减少co-stimulatory分子表达(CD80 / CD86)树突状细胞(dc)的效应影响炎性活动。治疗也改变了细胞因子表达和抑制DCs的迁移45。循环纤维细胞也具有刺激性分子CD80 / CD86有限公司。trperostinil治疗可能会有类似的效果,本研究中提到的。因此,我们的研究结果trepostinil并行循环纤维细胞的诱导减少整体降低肺血管重塑可能被解释为:1)循环纤维细胞的增殖信号损失的居民成纤维细胞和平滑肌细胞;或2)直接抗增殖treprostinil对居民的影响细胞除了抑制CF招聘。因此,循环纤维细胞肺血管重塑的真正贡献目前不能交付;基因细胞定位方法破译这方面正在进行。
治疗实验性肺动脉高压可以进行“预防”和“扭转”协议,即。治疗后被应用在疾病发展或出现严重肺动脉高压,分别。当我们认为缺氧导致招聘CF的发病机制的一部分,缺氧小鼠接受treprostinil从缺氧暴露的开始。这是基于一项研究在低氧诱导肺动脉高压大鼠显示招聘的单核/巨噬细胞系的细胞从第一天到3 - 4周的缺氧暴露20.。另外,我们的在体外数据显示,treprostinil抑制循环纤维细胞的粘附和分化新鲜分离外周血单核细胞,但它是无效的完全分化循环纤维细胞粘附(未发表的数据)。因此我们把老鼠treprostinil从一开始来评估其影响循环纤维细胞缺氧性肺在整个招聘阶段。
treprostinil引起的肺血液动力学的变化在我们的实验性肺动脉高压模型这种药物的临床效果相似。连续注入treprostinil缺氧小鼠相比显著降低肺动脉压力缺氧和虚假的对照组。然而,结构改造不能强烈treprostinil治疗逆转的缺氧嵌合小鼠应用输液速度ng·14公斤−1·敏−1。这种输液速度施加强有力的影响人类的肺血液动力学和大约的起始剂量的病人26- - - - - -29日。患者慢性treprostinil输液治疗可能需要增加剂量,60 ng·公斤−1·敏−1。在一组额外的实验中,我们应用一个五倍剂量小鼠(70 ng·公斤−1·敏−1)相同的结果在血液动力学、血管重塑和房车肥大。微型泵植入老鼠的系统性压力(盐水填充(假的)或treprostinil填充微型真空泵(Hox + T14 Hox + T70)相比更低nonimplanted老鼠(normoxia和缺氧)。一种解释可能的外科手术和catheterisation左颈静脉。因此每当treprostinil必须评估的影响,我们将它比作sham-infused动物而非单纯缺氧组动物。
我们观察到显著的细胞招聘和血液动力学的变化但更少的变化导致血管重塑和心室肥大treprostinil治疗。底层机制缺氧诱导肺动脉高压和平滑肌细胞增生是不清楚46。直接对血管平滑肌细胞增殖的影响缺氧可能占观察肥大。的循环纤维细胞的贡献程度平滑肌细胞肥大和增生尚未定义。循环纤维细胞产生细胞外基质的能力与胶原蛋白1,纤连蛋白,然而,表明船的结构变化。据我们所知这是第一次研究显示non-reversal结构改造与treprostinil嵌合小鼠模型的治疗。最近的调查显示出类似的结果在先进monocrotaline-induced肺动脉高压大鼠模型47。
参数的功能连通性缺氧,肺动脉压力,右心室肥大和肺阻力由于血管重塑并不完全理解。微分的影响各种缺氧诱导肺动脉高压治疗已被观察到,在另一个环前列腺素类似物(iloprost)还发现降低肺动脉压力没有逆转右心室肥大和西地那非被发现与温和改善防止右心室肥大肺动脉压力21。目前还不清楚如果直接缺氧对心肌重塑的影响以及是否发生上述微分的影响药物对血管舒张,血管重塑和心肌重塑手术。
特发性肺动脉高压患者肺组织的分析揭示了低频双重积极(CD45 + /胶原蛋白1 +)纤维细胞在肺阻力动脉。这种低频率的纤维细胞在病人组织可以分配给:1)连续,长期静脉环前列腺素治疗,所有患者接受肺移植前;2)疾病的结束阶段,可能更少的细胞正在招聘;或3),而快速过渡造血的标记纤维细胞表达间充质标记表达成纤维细胞。解决细胞过渡的问题,在活的有机体内细胞跟踪研究仍然需要执行。
总之,我们已经表明,骨骨髓来源循环纤维细胞被雇来在慢性缺氧小鼠的肺阻力动脉曝光,他们可能参与了肺动脉高压的发病机制的发展。循环纤维细胞招聘可以选择性地抑制环前列腺素类似物treprostinil稳定。进一步的调查对这些细胞的起源,招聘和细胞动力学转变,具体需要对血管重塑的影响来理解这个细胞类型的重要性在肺动脉高压的发病机制。
脚注
感兴趣的语句
语句对R.T. Schermuly, w·格和r . Voswinckel可以找到www.www.qdcxjkg.com/site/misc/statements.xhtml
- 收到了2009年2月17日。
- 接受2010年5月1日。
- ©2010人队