文摘
背景免疫细胞含有一种专门的蛋白酶体,即。所需的immunoproteasome细胞内蛋白质的降解。Immunoproteasomes免疫的关键调节细胞分化、炎症和自身免疫激活。Immunoproteasome功能外周免疫细胞可能改变吸烟和慢性阻塞性肺病(COPD),从而影响免疫细胞的反应。
方法我们分析了表达和活性的蛋白酶体复合物外周血单核细胞(PBMCs)隔绝年轻健康男性吸烟者以及严重的慢性阻塞性肺病患者并与匹配控制。
结果蛋白酶体表达调节慢性阻塞性肺病患者评估的量化反向transcriptase-PCR和大规模spectrometry-based蛋白质组学分析。蛋白酶体活性量化使用基于活动的调查和本地凝胶分析。我们观察到不同的激活immunoproteasomes外周血细胞的年轻男性吸烟者和重症慢性阻塞性肺病患者。本机凝胶分析和线性回归模型证实了健壮的激活和组装20年代水解酶升高,显著相关,降低COPD患者的肺功能参数。immunoproteasome明显激活在慢性阻塞性肺病患者PBMCs炎性细胞因子刺激在体外。抑制immunoproteasome减少促炎细胞因子表达COPD-derived血液中免疫细胞。
结论鉴于慢性炎性信号的关键作用和新兴的参与自身免疫反应在慢性阻塞性肺病,治疗目标的immunoproteasome可能代表一种新型治疗COPD的概念。
文摘
此研究表明,不同的激活immunoproteasomes外周血细胞的年轻吸烟者和慢性阻塞性肺病患者。特定的抑制immunoproteasome可能代表一种新型治疗慢性阻塞性肺病治疗的概念。https://bit.ly/3rEwaU7
介绍
慢性阻塞性肺疾病(COPD)是一个主要的慢性肺病估计在2030年成为全球第三大死因(1]。值得注意的是,有一个缺乏创新的治疗这种疾病。吸烟是慢性阻塞性肺病的发展面临的主要风险因素(2]。它会导致氧化应激损害DNA和蛋白质(3),导致肺组织的退化和改造,提升者先天和适应性免疫功能障碍驾驶COPD疾病发展(4,5]。
ubiquitin-proteasome系统是主要的蛋白质降解途径在细胞中。最细胞蛋白水解酶水解,包括短暂的细胞转录因子等监管机构,细胞周期和信号分子,成小肽(6,7]。降解产物用于氨基酸回收和主要组织相容性复合体(MHC)类我通过CD8抗原激活的免疫监视+t细胞(8,9]。最突出的蛋白酶体复合物是26日和20年代水解酶,与26日组成的20年代催化核心和一个或两个19 s监管机构(图1一个)[7]。免疫细胞含有一种专门的蛋白酶体,即。immunoproteasome,窝藏三个不同的催化亚基:LMP2, MECL-1 LMP7 [8,9]。Immunoproteasomes免疫细胞激活和分化的关键调节因素9,10]。特别是,他们扮演了重要的角色在炎症信号通过调节转录因子激活炎症如NF-κB [11]。immunoproteasome抵消的特定抑制自身免疫和炎症免疫反应(12,13]。
我们之前和其他人证明肺组织水解酶是由香烟烟雾抑制,导致氧化损伤蛋白积累和改变MHC抗原类我演讲(14- - - - - -17]。蛋白酶体活性在终末期慢性阻塞性肺病患者的肺组织严重受损(16,18)和蛋白质总量积累在COPD肺19]。这些数据表明,蛋白酶体功能和proteostasis COPD患者肺的严重干扰,可能导致疾病的恶化,改变我类MHC抗原表达和对病毒感染的易感性16,20.]。
在这项研究中,我们将扩展我们对蛋白酶体功能慢性阻塞性肺病的理解通过专注于分析外周血免疫细胞的蛋白酶体年轻男性吸烟者和慢性阻塞性肺病患者。我们将演示不同的免疫细胞活化水解酶在吸烟者和严重慢性阻塞性肺病患者。
方法
进一步的细节在方法、引物和抗体用于本研究中可以找到补充材料。
人类的样本
第一研究的手臂,EDTA-blood样品20年轻,自我报告健康不吸烟者和20目前的吸烟受试者获得(表1)。我们选择男性参与者排除任何潜在的荷尔蒙的变化。入选标准是男性性别,年龄18 - 30岁,身体质量指数(BMI) 18 - 30公斤·m−2每天至少10香烟在去年或从不吸烟;排除标准是慢性病,长期药物治疗或在过去3周内传染病。可替宁在血浆化验通过ELISA分析制造商的建议(可替宁ELISA CO096D;美国Calbiotech,埃尔卡洪,CA)确认吸烟现状。
第二部门,分析EDTA-blood样本30稳定的慢性阻塞性肺病患者(无疾病的恶化以来至少6周)和24个健康的同龄对照组来自路德维希马克西米利安大学的诊所(LMU)和综合门诊部肺病学中心(CPC)在慕尼黑,德国(表2)。我们也为我们获得血液样本在体外刺激实验从同一地点(补充表S1)。
所有捐助者给书面同意。这项研究是经伦理委员会批准的医学院LMU(382 - 10)学习。
外周血单核细胞(PBMCs)孤立使用Lymphoprep和SepMate管根据制造商的指示(干细胞技术,德国科隆)和存储在整除−80°C到分析。流式细胞术的完整EDTA-blood进行详细的补充材料。
基于活动的探测标签
天然蛋白溶菌产物提取从PBMCs 50 mM Tris-HCl, pH值7.5,2毫米二硫苏糖醇、5毫米MgCl20.05%,10%的甘油,2毫米ATP,洋地黄皂苷和完整的蛋白酶抑制剂(罗氏诊断,曼海姆,德国)。活性催化亚基被使用基于活动的监控探头(abp)如前所述21]。
本机凝胶分析和底物覆盖
本机凝胶分析和后续的抗体的免疫印迹检测20年代α1-7子单元(ab22674;Abcam,剑桥,英国)如前所述执行22]。
PBMC在体外刺激
孤立PBMCs镀在24-well板块(2×106细胞每),培养RPMI介质(含10%的边后卫(Biochrom,柏林,德国)和100 U·毫升−1青霉素、链霉素)和治疗有或没有75 U·毫升−1干扰素(IFN) -γ(罗氏)或1µg·毫升−1脂多糖(LPS)(σ,达姆施塔特,德国)24 h。PBMCs收获和核糖核酸或蛋白质提取。陆Immunoproteasome抑制剂- 005请提供我Hermen Overkleeft(荷兰莱顿大学、莱顿、)23]。在2 h LPS刺激,细胞处理0.5μM lu - 005 - i。
发光活性测定
胰凝乳蛋白酶、半胱天冬酶和trypsin-like活动与Proteasome-Glo测量试验设备根据制造商的协议(Promega,老总孔翰宁德国),如前所述24]。
结果
详细研究immunoproteasome函数外周血,我们使用了一个双臂研究设计反映出极端的控制和疾病组:第一臂包括分析20 - 30岁的健康男性吸烟者和不吸烟者(表1),第二个手臂主要包含终末期慢性阻塞性肺病患者和肺健康对照组47 - 84岁,其中包括16不吸烟者,两位前吸烟者和六个吸烟者(表2)。对照组不重叠,并与各自的武器研究。
外周血细胞激活immunoproteasome年轻的吸烟者
第一个研究部门评估的影响香烟烟雾暴露对蛋白酶体功能PBMCs年轻男性吸烟者(表1)。目前证实了吸烟水平升高的代谢尼古丁的副产品,可替宁,吸烟者的血浆(表1)。血流式细胞术分析细胞显示显著增加的绝对数量分析免疫细胞类型的吸烟者相比,从不吸烟对照组(补充图S1a)。然而,相对细胞成分的单核细胞和白细胞不吸烟者和非吸烟者之间的改变(补充图印地和补充表S2)。蛋白酶体活性的血液单核细胞使用两个不同的方法进行了分析。首先,我们评估活动标准的数量和使用特定abp immunoproteasome复合物27]。这些abp共价结合和标签催化地活跃的蛋白酶体单元,然后根据其分子量确定在变性十二烷基硫酸钠凝胶(27]。一组三个abp被用来区分的三个标准催化亚基蛋白酶体β1,β2β5和LMP2 immunoproteasome网站,MECL-1和LMP7 (图1 b)。ABP标签确认了immunoproteasome在PBMCs蛋白酶体的主要类型(图2一个)[28]。的催化活性PBMCs主要保存在烟草消费(图2一个)。β5活动几乎是孤立PBMCs的检测水平以下,如前所述(图2一个)[29日]。在第二种方法中,我们分析不同的蛋白酶体复合物,即。26和自由20年代水解酶,使用本机凝胶分析。通过这种方法,蛋白酶体复合物保持他们的活动,可以解决根据它们的大小(22]。酶活性的蛋白酶体复合物被量化为胶液的荧光猝灭的基质降解chymotrypsin-like蛋白酶体的活动。值得注意的是,20多岁的蛋白酶体活性略减少吸烟者与不吸烟者相比,虽然26 s和总蛋白酶体活动没有改变(图2 b和补充图S2a)。这种转变在20多岁和26 s蛋白酶体复合物之间的活动增加了吸烟者比26 / 20年代活动(图2 b)。印迹的本地凝胶和immunodetection 20年代的催化核心允许我们量化的蛋白酶体复合物在PBMC样本(22]。丰富的20多岁和26 s蛋白酶体复合物并不是不同的两组之间(补充图S2a)。通过计算活动/丰度比,我们确定的具体活动不同的蛋白酶体复合物。的具体活动26 s蛋白酶体吸烟者与不吸烟者相比显著升高(图2 b),这表明26 s水解酶在外周血细胞更活跃的年轻健康的吸烟者。作为蛋白酶体的活动网站的总人数没有严重改变取决于我们的ABP分析(图2一个),这些数据表明,烟草烟雾暴露在健康个体并不增加蛋白酶体复合物的表达和数量,而是激活酶活性26 s蛋白酶体的外周血细胞。支持这个概念类似RNA表达多种蛋白酶体单元26 s蛋白酶体的PBMCs吸烟者和从不吸烟的男性(补充图开通和补充表S2)。
Immunoproteasome激活外周免疫细胞的慢性阻塞性肺病患者
对于我们的第二个研究机构,我们应用本地凝胶蛋白酶体活性分析分析蛋白酶体活动PBMCs隔绝严重慢性阻塞性肺病患者为慢性阻塞性肺疾病(主要是全球倡议(黄金)四期/ D)和比较结果与肺部健康的年龄组(表2)。值得注意的是,我们观察到大量激活的COPD患者(20年代和总蛋白酶体活动图3和补充图S3a)。此外,大量的蛋白酶体复合物都增加,表明高组装20多岁和26 s蛋白酶体复合物血液中免疫细胞的慢性阻塞性肺病患者(图3)。的具体活动(活动/丰富)26 s蛋白酶体复杂和总额的水解酶,然而,在慢性阻塞性肺病患者显著降低(图3)。两个配合物的比例并没有改变(补充图S3b)。增加大量的免疫细胞蛋白酶体复合物在慢性阻塞性肺病患者证实了RNA和蛋白表达分析:mRNA的表达等蛋白酶体亚基immunoproteasomal基因PSMB9(编码LMP7)和PSMB10(编码MECL-1)和19 s调节亚基基因PSMC3 PSMD11,在慢性阻塞性肺病PBMCs显著升高(图4一)。此外,大规模spectrometry-based蛋白质分析PBMCs透露共同upregulation多个COPD患者的蛋白酶体单元与控制(图4 b)。这些表达数据从而支持观察慢性阻塞性肺病患者外周免疫细胞聚集更多的蛋白酶体复合物,这可能是适应性反应,以弥补减少的一部分特定26 s蛋白酶体活动。
健壮的激活20年代immunoproteasomes COPD的肺功能下降相关
蛋白酶体复合物的变化是否与COPD患者的肺功能改变,我们为蛋白酶体功能和FEV进行相关性分析1/ FVC障碍(图5一个和补充图S3c)。值得注意的是,我们观察到20年代活动的显著负相关以及20多岁,26 s和FEV总丰度1/ FVC % pred,特定26 s和总活动相关的积极与肺功能参数(图5一个)。这些数据表明,严重患者肺功能改变有更高水平的20多岁和26 s蛋白酶体复合物PBMCs。这是与更高的活动相关的20年代immunoproteasomes但不是26 s蛋白酶体复合物。而相反,26和特定的活动,即。每个复杂的活动,是更高的患者血液中免疫细胞更好的肺功能。这些数据表明一个复杂变化immunoproteasome函数外周免疫细胞的慢性阻塞性肺病患者,与肺功能损害的程度。
改变immunoproteasome活动可能会扭曲造成的免疫细胞在慢性阻塞性肺病患者的血液成分。我们的流式细胞仪分析显示的粒细胞和单核细胞百分比升高但不是淋巴细胞在慢性阻塞性肺病研究队列(补充图S4a和补充表S3)。这些后两种细胞类型代表的主要免疫细胞存在于我们的PBMC隔离(补充图S4b)。从ImmProt数据库提取数据(28]和我们自己的初步分类血液免疫细胞RNA分析(数据未显示)表明,蛋白酶体蛋白质丰度(拷贝数)非常类似于淋巴细胞、自然杀伤细胞、血浆树突细胞和单核细胞在基线,不严重分歧在免疫细胞激活(补充图S5)。这些数据表明,水解酶的数量在不同的免疫细胞,而类似的和稳定的子集,并且可能因此无法观察到的变化的根本原因在慢性阻塞性肺病患者在蛋白酶体活动。我们进一步验证数据的多个参数的线性回归模型,我们调整我们的研究人群,比如年龄、性别、体重指数、并发症以及微分血液成分和免疫抑制药物(图5 b- c和补充表S4)。值得注意的是,这些不同的参数并不影响20年代活动的显著激活和20多岁的丰度以及总蛋白酶体活性的激活血液中白细胞的COPD患者(图5 c)。此外,我们进行灵敏度分析的影响的八个ever-smokers对照组。明显的从补充表S5β,没有重大变化的估计量和整体改变immunoproteasome函数是相同的。激活20 s蛋白酶体的外周免疫细胞可以被视为一个健壮的特性严重COPD患者和与吸烟状态无关。相比之下,26 s蛋白酶体功能似乎不太健壮和受其他因素(6)模型。这一发现需要进一步分析。
慢性阻塞性肺病患者的炎症immunoproteasome监管
进一步调查是否慢性阻塞性肺病患者的免疫细胞的活化水解酶延伸到激活免疫细胞,我们挑战新鲜分离PBMC健康的捐赠者和严重的慢性阻塞性肺病患者的样本(补充表S1)与炎症刺激IFN-γ或有限合伙人24 h和蛋白酶体活性分析。我们测试了三个主要活动的蛋白酶体,即。胰凝乳蛋白酶、半胱天冬酶和trypsin-like蛋白酶体活动,使用luminogenic基质试验。值得注意的是,这三个活动显著增加慢性阻塞性肺病患者在刺激PBMCs IFN-γ(图6),但不强烈激活有限合伙人(图6 b与健康对照组相比)。这些数据表明炎症immunoproteasome激活在慢性阻塞性肺病患者。在探索性分析,我们接下来研究的抑制是否immunoproteasome影响LPS-induced炎性细胞因子的表达。预处理的PBMCs孤立,我们从控制或慢性阻塞性肺病患者的特定immunoproteasome抑制剂lu - 005我23]2 h LPS刺激前24小时,然后评估炎性细胞因子表达的RNA水平。24小时LPS刺激后,immunoproteasome仍抑制正如西方blot-based有效检测mass-shifted LMP2和LMP7亚基共价结合抑制剂(补充图S6a)和化学发光活性测定(补充图S6b)。LPS-induced转录激活白介素(IL) 1 b, IL - 6和引发被immunoproteasome抑制作用明显减弱,而IL - 10是由immunoproteasome抑制调节(图6 c)。这是最突出的COPD患者中LPS刺激强烈激活这些炎性细胞因子的表达。这些数据提供第一个概念验证的证据的潜在有益的影响治疗immunoproteasome抑制炎性细胞因子表达在慢性阻塞性肺病。
讨论
在这项研究中,我们表明,蛋白酶体明显激活在外周血细胞的年轻吸烟者和严重的慢性阻塞性肺病患者。20年代的激活immunoproteasome与肺功能障碍。此外,慢性阻塞性肺病患者的炎性刺激改变immunoproteasome激活和炎症细胞因子表达是由immunoproteasome抑制衰减在体外。因此本研究提出的第一个证据系统性的激活immunoproteasome严重慢性阻塞性肺病患者的外周血细胞。鉴于immunoproteasome的关键作用的免疫细胞的激活和自身免疫反应(9,12),我们的数据表明,特定的抑制immunoproteasome可能代表一种新型治疗慢性阻塞性肺病治疗的概念。
监管的immunoproteasome吸烟和慢性阻塞性肺病
我们之前和其他人证明抑制蛋白酶体的香烟在体外,在活的有机体内和肺移植的严重慢性阻塞性肺病患者14- - - - - -18]。受损的蛋白质被蛋白酶降解导致受损蛋白质的积累和增强蛋白在肺细胞压力还演示了神经退行性和心血管疾病(30.- - - - - -33]。
在这里,我们显示激活immunoproteasome,专业类型的免疫细胞蛋白酶体,外周血细胞健康的年轻吸烟者和严重慢性阻塞性肺病患者。我们复杂的本地凝胶分析允许我们解剖不同的20多岁和26 s蛋白酶体活动配合物,这是众所周知的不同规范(34,35]。在年轻的吸烟者,26 s蛋白酶体的特定活动明显增加,而整体表达蛋白酶体和活动并不严重改变。26 s蛋白酶体的激活,降低ubiquitinated蛋白质,可能是适应性反应调整的一部分,蛋白酶体功能蛋白质增加营业额(34,36]。这一发现是由实验数据从长期smoke-exposed老鼠,蛋白酶体活性和表达增加的小鼠肺(16,37]。
然而,在慢性阻塞性肺病患者的外周血细胞,组装和20 s蛋白酶体复合物激活的活动。尽管研究人口的规模小,效果强劲,即使调整各种参数,如性别、年龄、BMI、并存病,微分血液细胞计数和免疫抑制药物。重要的是,高20年代immunoproteasome活动COPD患者的外周血细胞与肺功能损害的程度显著相关。这些数据很好地符合既定的概念,20年代蛋白酶体活性在严重的氧化应激使ubiquitin-independent降解氧化改性和受损的蛋白质(36,38]。感应的immunoproteasome也是守恒的保护性反应,氧化应激(39,40]。蛋白酶体的组装和活动增加最有可能是由于转录激活我们观察到mRNA和蛋白水平升高外周免疫细胞的慢性阻塞性肺病患者。然而,我们也不能排除,20多岁的水解酶水平的增加还包括拆卸26 s蛋白酶体的慢性阻塞性肺病患者。26个年代的离解19和20年代复形发生在氧化应激反应(41,42]。因此,我们曾显示,26 s蛋白酶体变得不稳定和肺细胞暴露于香烟烟雾(17]。26 s蛋白酶体复合物的丰度是提高COPD患者与蛋白质含量的增加19和20年代的子单元。26 s蛋白酶体活性,然而,不是同样升高,但具体26 s活动减少。我们推测,26 s组装免疫细胞被激活的沮丧试图弥补的损失26 s蛋白酶体在慢性阻塞性肺病患者的免疫细胞活动。immunoproteasome函数外周血免疫细胞的激活观察到这里与前面描述的抑制蛋白酶体在COPD患者的肺组织活动。这种差异可能是通过外周免疫细胞的短暂的性质来解决,从而防止持续积累的氧化损伤,但倾向于急性适应氧化压力在慢性阻塞性肺病和炎症。此外,我们推测,有一个蛋白酶体照射剂量或伤害阈值函数,这将允许自适应激活或抑制有害取决于时间和程度的伤害。这个概念符合自我平衡的调节电路常见的细胞应激反应(43),反映了细胞中蛋白质质量控制的复杂性。
我们目前的研究仅限于严重的慢性阻塞性肺病的分析,但为疾病提供了第一个概念验证证据规定的immunoproteasome外周血细胞。值得注意的是,改变血液immunoproteasome活动严重的慢性阻塞性肺病患者的免疫细胞循环生物标志物可能代表一个潜在的慢性阻塞性肺病严重,疾病进展和恶化的频率。大军团纵向数据的分析慢性阻塞性肺病患者不同的黄金阶段和肺部健康控制样品,我们正在追求,将交付所需的统计力量来测试我们的生物标志物的假设。这种方法也可能让我们描绘的激活是否immunoproteasome的附带现象严重的慢性阻塞性肺病或一个早期事件和相关的慢性阻塞性肺病疾病严重程度。
immunoproteasome在慢性阻塞性肺病的治疗目标
在这里,我们描述一个小说的角色immunoproteasome在慢性阻塞性肺病患者。immunoproteasome激活在PBMCs隔绝重症慢性阻塞性肺病患者与健康对照组相比。此外,它进一步激活体外与炎症细胞因子刺激PBMCs IFN-γ或有限合伙人。重要的是,抑制特定抑制剂的immunoproteasome lu - 005我减毒LPS-induced IL-1B等促炎细胞因子的表达,il - 6,从孤立的PBMCs引发在体外。相比之下,由immunoproteasome激活抑制il - 10的表达,可能导致保护性免疫调节的关键抗炎细胞因子(44]。可以推测,immunoproteasome抑制剂的治疗应用可能有助于恢复功能失调的免疫系统在慢性阻塞性肺病。我们的数据很好地符合研究表明监管促炎细胞因子分泌il - 6等IFN-γ和肿瘤坏死factor-αimmunoproteasome抑制(45- - - - - -48]。Immunoproteasome函数也形状树突细胞规划和控制T - b细胞分化[10]。特别是immunoproteasome活动至关重要的分化和功能辅助细胞(Th)血统,即Th1和Th17细胞分化[49]。immunoproteasome透露一个扩展函数的特定抑制immunoproteasomes在自身免疫抑制促炎细胞因子分泌,浆细胞介导抗体生产和Th17细胞分化[10,45,46,50]。因此,immunoproteasome抑制剂目前正在进行临床试验治疗自身免疫性多肌炎和狼疮肾炎(12,13]。鉴于慢性炎症的关键作用信号传播的慢性阻塞性肺病是一种全身性疾病(4,51),t调节细胞的重要角色Th1 / Th17函数(52,53)和潜在的参与自身免疫反应在慢性阻塞性肺病54),治疗的目标immunoproteasome可能代表一种新型治疗COPD的概念。我们的在体外数据从血液循环降低炎性细胞因子的激活单核细胞表明immunoproteasome有益的系统性效应可能减少炎性信号的抑制COPD肺和减弱疾病进展。
补充材料
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确认
我们感激地承认人类生物材料的供应和临床数据CPC-M bioArchive及其合作伙伴在Asklepios生物Gauting, Klinikum der慕尼黑大学和Ludwig-Maximilians-Universitat慕尼黑。我们感谢出色的支持中共的帕特丽夏Sklarek(德国慕尼黑)门诊单位。
脚注
作者的贡献:即Kammerl,哈迪和美国Meiners概念的研究和设计。m .私生子k . Milger a .科赫c Pilette Behr j .(临床)提供样品和试剂。即Kammerl,哈迪,a . Urmann和j . y . Wang Peierl进行实验。即Kammerl,哈迪,y, o . Vosyka克里·豪j . Merl-Pham c弯曲和美国Meiners分析数据。即Kammerl,哈迪,h·舒尔茨和美国Meiners解释结果。即Kammerl和c弯曲准备表和数据。即Kammerl,哈迪,c .弯曲h·舒尔茨和美国Meiners起草了手稿。即Kammerl和美国Meiners编辑和修改了手稿。所有作者批准了最终版本。
利益冲突:即Kammerl没有披露。
利益冲突:美国哈代没有披露。
利益冲突:c弯曲没有披露。
利益冲突:a . Urmann没有披露。
利益冲突:j . Peierl没有披露。
利益冲突:y王没有披露。
利益冲突:o . Vosyka没有披露。
利益冲突:m .私生子没有披露。
利益冲突:k . Milger报告个人费用从阿斯利康讲座,BerlinChemie,葛兰素史克,诺华公司和赛诺菲,在提交工作。
利益冲突:j .原意没有披露。
利益冲突:a .科赫没有披露。
利益冲突:j . Merl-Pham没有披露。
利益冲突:克里·豪没有披露。
利益冲突:c . Pilette没有披露。
利益冲突:h·舒尔茨没有披露。
利益冲突:美国Meiners没有披露。
声明:本手稿中描述研究的支持和亥姆霍兹慕尼黑中心的由Else-Kroner费森尤斯公司Stiftung (2016 _a22)。美国哈代是由比利时呼吸社会,德国大学学术交流服务和Catholique de鲁汶(伊拉斯谟格兰特)。y王是由中国广州精英奖学金委员会。资金信息,本文已沉积的Crossref资助者注册表。
- 收到了2021年3月22日。
- 接受2021年7月19日。
- 版权©2022年作者。
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