文摘
背景尽管增加兴趣间充质基质细胞(MSC)的细胞治疗急性呼吸窘迫综合征(ARDS)的临床调查尚未成功,我们理解的潜力在活的有机体内在ARDS MSC行动机制仍然有限。ARDS是由急性严重的先天免疫失调,常常以炎症、凝固和细胞损伤。这个炎症微环境如何影响MSC功能还有待确定。
目的本研究的目的是比较评估炎性环境出现在ARDS肺与肺环境出现在健康志愿者改变了MSC的行为。
方法Clinical-grade人类骨骨髓来源msc (hMSCs)暴露在支气管肺泡灌洗液(BALF)从ARDS患者的样本或健康志愿者。曝光后,hMSCs和条件媒体广泛的相关属性面板进行评估,包括可行性,炎性细胞因子的表达水平,基因表达,细胞表面的人类白细胞抗原表达和激活凝血和补充途径。
结果促炎、pro-coagulant和主要组织相容性复合体(自我识别)相关基因表达明显调节hMSCs暴露体外从健康志愿者BALF获得。这些变化不太明显,常常相反hMSCs暴露在ARDS BALF样本。
结论这些数据提供新的见解hMSCs健康是如何表现的与肺部发炎环境,强烈建议ARDS的炎症环境诱发hMSC反应可能有利于细胞生存和行动。这进一步强调了需要了解不同的疾病环境如何影响hMSC功能。
文摘
msc暴露于一个健康的肺环境诱导炎症反应与增加基因/蛋白表达与自我有关与non-self-recognition。这些变化缺席或相反的msc暴露于一个发炎ARDS的环境。https://bit.ly/3eombO8
介绍
间充质基质细胞(msc)正被越来越多的调查作为细胞治疗抑制过度炎症急性呼吸窘迫综合征(ARDS) [1,2]。然而,msc在ARDS的临床调查的结果,而统一展示安全,没有证明疗效[3- - - - - -5]。虽然许多因素可能负责缺乏改善的结果,还有一个基本知识的缺乏管理的msc的命运和行为在活的有机体内在人类肺癌的微环境(了6])。这就提出了一个可能性,可能遇到的炎性环境大大改变潜在的MSC有效性和效力。
包括我们自己的,越来越多的研究发现,MSC功能,因此潜在的治疗措施,根据不同炎性环境遇到[7- - - - - -13]。体外暴露在支气管肺泡灌洗液(BALF)或ARDS患者血清样本对MSC功能产生重大影响,包括分泌介质和下游的形象对巨噬细胞功能的影响,经常加强抗炎行动(8- - - - - -12]。例如,BALF与肺囊性纤维化患者曲霉属真菌感染迅速有毒msc,部分真菌相关产品胶霉毒素(13]。这就提出了一个可能性,msc,某些炎症肺环境产生不良的影响,影响潜在的治疗用途。此外,与之前的信念相反,系统实施同种异体msc迅速接受间隙和/或失活(14- - - - - -17]。这可能是相关的现象称为瞬时炎症反应(IBMIR),立即炎症反应系统进行同种异体msc (18- - - - - -20.]。
因此,探讨ARDS炎性肺环境对MSC可行性的影响和作用,clinical-grade来源于MSC获得的人类骨骼健康志愿者(hMSCs)暴露出来体外个人BALF样本获得来自ARDS患者和健康对照组(高碳钢)进行比较。出乎意料,hMSCs暴露在HC BALF发达炎症反应以及增加与自我相关基因和蛋白质表达与non-self-recognition,特别是增加二级人类白细胞抗原(HLA)表达式和增加补充表达式。这些结果表明,否则non-inflamed正常的肺环境刺激同种异体hMSCs结关的机制。相比之下,基因和蛋白质表达的变化与自我有关与non-self-recognition要么是减轻,缺失或相反hMSCs暴露从ARDS患者BALF。这些发现提供证据的可塑性hMSC反应不同的临床相关的肺部环境和揭示潜在的作用机制MSC-based细胞治疗ARDS。
方法
BALF样品
BALF ARDS患者的样本没有前瞻性地收集了脓毒症作为不相关的临床研究的一部分进行的国家心脏,肺和血液研究所(NHLBI) ARDS网络(ARDSNet) (ClinicalTrials.govNCT0011216) [21]。ARDS BALF mini-BAL从第二阶段获得的样本国家卫生研究院(NIH)进行的审判ARDSNet(预防和治疗急性肺损伤(花瓣)试验)(21]。执行一个标准的40毫升mini-BAL在插管ARDS患者使用无菌生理盐水。BALF样本随后离心机和储存在−80°C。健康志愿者接受标准光纤的支气管镜检查右侧中部叶达特茅斯在适当的机构审查委员会的协议,使用20厘米3无菌生理盐水。样本相对离心机和上层清液储存在−70°C。最近这些样本,获得了2018年1月和7月之间。健康的志愿者被排除在外,如果他们有任何心肺疾病史,如果他们抽烟或特许经销商定期或如果他们采取任何免疫调节药物治疗。
体外暴露hMSCs
hMSCs得到NHLBI生产援助的细胞疗法(协议)项目和常规培养。hMSCs利用是获得一个志愿者(第二个捐赠者也用于补充和流式细胞仪实验)和水平是一样的利用在最近的干细胞治疗ARDS(开始)试验3,4]。细胞通过3 - 5。hMSCs受到个人ARDS、HC BALF样品稀释到血清媒体(20% BALF划定在先前的研究中(11,13为24小时)。无血清媒体只有20%或PBS添加到控制和如果hMSCs,分别。24小时孵化后,细胞和条件媒体(CM)收集。
RNA-sequencing分析
使用标准的试剂盒提取总RNA提取,后跟一个清洁步骤使用RNeasy旋转列(试剂盒)。RNA质量评估是一个安捷伦片段分析器工具和量化量子位荧光计(热费希尔科学)。RNA-sequencing分析进行RNA提取hMSCs暴露在PBS (n = 4), ARDS BALF (n = 5)和HC样本(n = 5)使用鲑鱼(人类基因是一致的22]。从鲑鱼是转录水平信息导入到R使用tximport [23刨边机基于图书馆),正常大小创建每百万(CPM)计数为每个基因差异表达基因和评估。通路分析基因显著不同从如果控制样本识别使用创新路径分析(www.ingenuity.com)。
统计分析
Mann-Whitney测试是用来评估两组之间的差异。克鲁斯卡尔-沃利斯(邓恩的测试事后测试)或单向方差分析(Dunnett事后测试)被用来评估三个或更多组之间的差异。统计分析使用GraphPad棱镜软件。假定值≤0.05被认为是重要的,除了在刨边机RNA-sequencing数据分析的情况下,在多个假设纠正错误发现率(罗斯福)< 0.05被认为是显著的。斯皮尔曼相关系数计算R在基地,利用t分布计算假定值在这些情况下,包括在等级关系。额外的详细描述这些和其他用于这项研究提供了方法补充材料。
结果
ARDS BALF包含HC BALF相比升高的炎症介质
最初确定BALF样本不同HC和ARDS患者的肺,炎症介质在临床BALF样本评估使用人类磁Luminex分析工具包(研发系统)。BALF样本用于总体中的每个试验研究中描述补充表S1。虽然有不同的临床分离株之间的差异,总蛋白的水平,双链DNA (dsDNA)和一系列炎症介质在ARDS相比显著升高HC BALF样本(补充表S2)。ARDS和HC BALF之间没有显著差异水平的抗炎和辅助2 (Th2)介质如白介素(IL) -10年,IL - 4和IL-13。
BALF ARDS和HC患者是hMSCs无毒
以确定BALF样本ARDS和HC肺与增加细胞死亡有关,hMSCs暴露体外个人临床BALF样本。之间没有显著差异在毒性hMSCs暴露在ARDS或HC BALF样品由光学显微镜(图1一个- c)和乳酸脱氢酶(LDH)释放(图1 d)。进一步确定毒性,线粒体呼吸hMSCs暴露于不同BALFs评估。HC和ARDS BALF显著改变hMSC基底呼吸速率、最大呼吸速率、呼吸产能闲置或其他线粒体功能而PBS-exposed hMSCs (图1 e- g,补充图S1)。有趣的是,显著减少多余的呼吸能力也观察到在ARDS和HC BALF-exposed hMSCs相比控制hMSCs无血清培养系统(媒体)(p = 0.030, p = 0.034,分别图1 g)。然而,这种减少也观察到PBS-exposed hMSCs控制hMSCs相比(p = 0.059)。
ARDS和HC BALF激活hMSCs释放介质的频谱
相比之下的PBS-exposed hMSCs, hMSC-CM暴露HC或ARDS BALF样品增加了il - 6水平(分别为p = 0.0034, p = 0.0257)和其他炎性介质,如引发(分别为p = 0.0008, p = 0.0084)和地震(分别为p = 0.0591, p = 0.0157) (图2一个- c,表1)。此外,CD44水平显著增加(分别为p = 0.0041, p = 0.0342)和表面活性剂蛋白D(分别为p = 0.0162, p = 0.0055)同样观察到hMSCs暴露ARDS和HC BALF相比PBS-exposed hMSCs (图2 d,e,表1)。hMSCs暴露在ARDS但不是HC BALF样品引起的水平明显高于肝细胞生长因子(p = 0.0180),特别是矩阵metalloproteinase-3 (MMP3) (p = 0.0041)相比,控制(图2 fg)。相比之下,hMSCs暴露在HC但不是ARDS BALF诱导显著高于趋化因子(碳碳主题)配体2 (CCL2)水平(p = 0.0208)相比,控制(图2 h)。这些数据表明,hMSCs可以获得支持和抗炎表型在特定介质存在或BALF中所没有的。
BALF IL-1β预测hMSC细胞因子的分泌
我们下一个决定是否特定BALF细胞因子相关(斯皮尔曼相关系数)与hMSC炎性介质生产。值得注意的是,IL-1βARDS和HC BALF样本的预测存在的一些炎症和凋亡诱导hMSC-CM介质,包括白介素(p = 0.0173), IL-36 (p = 0.0334), 2 (p = 0.0340), MMP-3 (p = 0.0034),细胞表面Fas死亡受体(Fas) (p = 0.0427)和引发(p = 0.0346) (图3一,补充表S3,补充图S2)。所示图3 b,表达IL-1β并不与其他BALF中细胞因子测量样本。然而,频繁的表达之间的相关性不同的细胞因子检测到厘米(图3 c)。没有一个细胞因子以CM与FAS中的(图3 c)。这些数据表明,BALF中更高浓度的IL-1β的存在可以用来预测炎性介质的存在。
HC BALF-exposed hMSCs演示增加整体基因表达与ARDS BALF-exposed hMSCs
进一步调查BALF hMSC暴露的影响函数,BALF-exposed hMSCs由核糖核酸测序和比较分析PBS-exposed hMSCs。热量地图展示了个人的细胞因子概况BALF样本用于hMSC曝光之前RNA-sequencing分析(图4一)。这些数据表明,HC和ARDS BALF利用样本的代表全组BALF样品分析(补充表S2)。尽管高水平的炎症介质在ARDS BALF样本,RNA序列表明,HC BALF样本整体更有效诱导增加hMSC基因表达而ARDS BALF减少基因表达而控制PBS接触(图4 b)。值得注意的是,许多基因的表达增加与HC BALF曝光与ARDS BALF表达减少曝光(图4 b)。有趣的是,严重急性呼吸系统综合症冠状病毒2绑定和入口受体血管紧张素转换酶2 (ACE2)和跨膜丝氨酸蛋白酶2 hMSCs (TMPRSS2)表示,尽管只在最低级别和没有BALF暴露组(观察到的差异补充表S4)。
暴露在HC但不是ARDS BALF增加促炎细胞因子基因
hMSCs暴露在HC BALF样本演示了一个总体增加多种免疫调节相关基因的表达途径相比PBS-exposed hMSCs,包括肿瘤坏死因子(肿瘤坏死因子)、细胞间粘附分子1 (ICAM110)、趋化因子(C-X-C主题)配体(CXCL10),CCL2,CCL8和interferon-β1 (IFN-B1)(图5一个)。形成鲜明对比,ARDS BALF-exposed hMSCs证明大部分的这些基因的表达水平与观察PBS-exposed hMSCs。然而,ARDS BALF-exposed hMSCs证明增加细胞因子的表达参与中性粒细胞贩卖,包括处于受控,CXCL2(巨噬细胞炎性蛋白质2α),CXCL3,CXCL8/IL8和白细胞介素6(图5一个)。然而,这些基因表达水平低于观察HC BALF暴露后。
进一步评估是进行评估的影响BALF暴露在hMSC其他关联基因的表达与著名的炎症标记物和其他介质,增加了基因(图3 bf)和蛋白表达(图2一个,补充图S3)BALF曝光后,特别是il - 6,引发和FAS。HC BALF暴露显著诱导一系列的il - 6基因相互作用而ARDS BALF暴露导致类似的表达式来观察PBS-exposed hMSCs,只有一个显著增加il - 6基因表达本身。HC和ARDS BALF接触有抑制作用在抗炎细胞因子的分泌IL-27相比PBS接触(图5 b)。同样,显著交互感应的范围广泛的FAS基因只有hMSCs暴露在HC BALF中观察到样品(图5 c)。
类似的模式观察炎性细胞因子引发,而hMSC基因但不是BALF曝光后蛋白表达增加。有一系列交互引发基因的表达增加HC BALF曝光后,与ARDS BALF暴露增加只有少数基因的表达(图5 d)。综上所述,这些数据表明,HC BALF暴露诱发多种免疫调节通路相关基因的表达增加。然而,这不是在ARDS BALF-exposed hMSCs除了少数基因,其中一些参与中性粒细胞贩卖。
暴露在HC但不是ARDS BALF增加补充基因和蛋白质表达但不组织因子或其他凝血级联的基因表达
hMSCs暴露在HC BALF样品证明了基因表达的增加补充C3b C4a以及C3A补受体(C3AR)相比PBS-exposed hMSCs (图6)。相比之下,ARDS BALF-exposed hMSCs证明C3b表达增加,与其他补体级联基因表达水平所观察到的类似PBS-exposed hMSCs (图6)。ARDS的直接比较与HC BALF-exposed hMSCs展示了各自的C4a下降和C3AR以及C2a BFb基因表达。评估的CM BALF和PBS-exposed hMSCs从两个不同的捐赠者获得证明没有检测到补(C3)生产通过HC BALF——或者PBS-exposed hMSCs (图6 bc)。然而,但可检测水平低补被认为在一些从hMSCs暴露在ARDS BALF厘米(图6 bc)。
平行coagulation-associated基因表达的评估证明没有改变组织因子途径抑制剂(TFP1)表达hMSCs暴露在HC或ARDS BALF相比PBS-exposed细胞(图6 d)。1一个孤立的激肽原基因表达的增加,固有的凝血级联的一部分,在HC-exposed hMSCs而增加一个孤立SERPIN A1(纤溶酶原activator-1物)基因表达在ARDS BALF-exposed hMSCs (图6 d)。这些结果表明,尽管complement-related基因和蛋白表达增加BALF曝光后,与IBMIR不同,没有组织因子和只有孤立的其他凝血级联的基因表达的变化。
暴露在HC但不是ARDS BALF hMSC HLA基因和细胞表面蛋白表达增加
我们下一个评估BALF暴露影响基因的表达和蛋白质,可能导致识别msc的宿主免疫系统,特别是HLA表达式。HC BALF暴露导致显著增加表达的基因和伪基因HLA I和II类相比,PBS曝光。这些包括古典(抗原,HLA-B,HLA-C)和非经典的(HLA-E,HLA-F,HLA-G基因和HLA) HLA类我包括二类基因HLA-DRA,HLA-DRB1,HLA-DMA,HLA-DMB和HLA-DPA1(主要类I和II基因中描述图7HLA基因评估中描述补充图S4)。相比之下,暴露在ARDS BALF导致显著增加HLA-C和HLA-F和显著减少HLA-G,没有变化抗原,HLA-B或HLA-E相比PBS-exposed hMSCs (图7,补充图S4)。同样,暴露在ARDS BALF导致显著增加HLA-DMA和显著减少HLA-DRA,没有任何其他二类基因的变化。引人注目的是,基因的表达显著减少编码为HLA类基因抗原,HLA-B和HLA-G和HLA II级HLA-DRB1观察当比较ARDS BALF - HC BALF-exposed hMSCs (图7)。
为了进一步验证这些观察,hMSC HLA-ABC HLA-DR蛋白质表达被暴露后流式细胞术HC评估与ARDS BALF中使用两个不同的hMSC捐助者。这些结果表明HLA-DR表达式的upregulation HC BALF-exposed hMSCs (图7 ce)。相比之下,暴露在ARDS BALF或PBS导致没有upregulation HLA-DR表面标记表达式(图7 c相比,e)。没有改变HLA-ABC表达式来控制接触后观察BALF样本或PBS (图7 bd)。从这些研究散点图所示补充图S4。这些结果说明暴露的同种异体hMSCs环境正常的肺移植自体抗原非认可的表达宿主的免疫系统,引发hMSCs的间隙。相比之下,hMSCs暴露于炎症ARDS BALF似乎在这方面的保护。
讨论
还有一个基本缺乏知识的命运和行为msc在临床肺部疾病炎症环境。在这里我们发现hMSCs暴露在ARDS BALF的表现完全不同于hMSCs暴露在HC BALF相同。暴露在ARDS BALF,与接触HC BALF相比,不仅削弱了炎性基因反应也增加与自我相关基因和蛋白质的表达与non-self-recognition。这些小说的观察提供了洞察MSC-based细胞疗法的潜在机制的行动在ARDS。
我们的数据支持的假设机制类似于IBMIR可能负责去除hMSCs积极健康的肺。类似于IBMIR文献关于血液接触,刺激与HC hMSCs BALF导致行为引发急性先天免疫反应,包括促炎症显著增加,补充和二类HLA基因和蛋白表达19,20.]。形成鲜明对比,同样的刺激与BALF hMSCs ARDS患者未能上调表达或导致相对减少这些self-antigen-encoding基因和蛋白的表达。IBMIR相比,暴露hMSCs HC或ARDS BALF没有增加组织因子基因表达,支撑的安全的一个重要的观察这些细胞在临床实践中。值得注意的是,最近的一项研究发现,同种异体MSC暴露在创伤患者的血是有效的诱导组织因子表达低于暴露在健康志愿者血液(24]。这表明IBMIR可以影响患者的炎症状态,但在这方面很少有其他数据。hMSCs不认为是生产补充因素虽然他们产生抗菌肽如LL-37 [25]。矛盾的是,一些ARDS的但不是HC BALF样本检测出刺激hMSC-CM补充(C3a)。目前,这些发现的意义仍然是未知的。
人类msc通常表达低水平的HLA类我分子和没有二级分子的组成型表达(18,26,27),属性,一直以来,人们都认为减少识别系统实施同种异体hMSCs宿主免疫监视机制(28]。然而,HLA-ABC HLA-DR表达式可以接触到几个因素引起的,包括IFN-γ,这有助于增加免疫识别和清除hMSCs [29日,30.]。因此,观察到的结果证明增加表达的几个二级分子后暴露在HC但不是ARDS BALF进一步表明一个完整的同种异体肺环境可以正常激活hMSCs参与免疫监测活动可能会导致自己的失活和间隙。重要的是,也观察到类似的结果使用hMSCs从两个不同的捐赠者,这增强了下面这个假设,这是一个一般hMSC响应。这些观察从文学平行数据显示hMSCs发炎可能会持续更长时间与non-inflamed肺部,可能允许更多的机会发挥影响炎症通路(24,31日,32]。然而,尽管IFN-γ被发现在低水平在两组没有显著差异。因此,即使暴露在HC BALF样本触发增加二级HLA表达式,这并不表现为与BALF IFN-γ。一个可能的解释是,低剂量的IFN-γ少影响MSC免疫抑制能力比较高剂量(33]。IFN-γ-dependent HLA二级反式激活因子的增加表达C2Ta观察;然而,这一发现的意义仍然是未知的34]。
值得注意的是,BALF IL-1β显著预测hMSC生产一系列重要的促炎介质。这表明IL-1β,普遍提高ARDS的肺,可以驱动hMSC行为和阻塞IL-1β可能改变hMSC行动。然而,总体情况是复杂的,作为证明图3和补充图S2。这表明健康的肺环境能引发炎症在同种异体骨骨髓来源hMSCs行为。
这项研究有几个优势。首先,hMSCs利用临床相关,还利用在最近开始系统性hMSC行政审判ARDS患者(3,4]。第二,BALF样本评估单独而不是集中样本。重要的是,目前的结果是健壮的和可再生的跨多个个人健康或ARDS BALF样本。此外,对补充和HLA蛋白表达的影响被观察到两个不同的骨骨髓来源MSC隔离来自不同的高碳钢。不过,有一点需要注意:BALF样本利用来自一系列参与机构,通过不同的运营商。因此,它不可能完全证明一致性在支气管镜检查程序利用或任何潜在的稀释样品。此外,BALF样本利用获得使用不同的隔离不同的协议和存储在原始机构(ARDS和−−80°C HC 70°C),也在我们的实验室(−20°C ARDS和−HC 70°C)。这样,尽管我们觉得这些差异不太可能占当前观测,进一步的前瞻性研究将尝试更好的控制这些变量。此外,鉴于美国健康保险流通与责任法案(HIPAA)的局限性,没有临床数据,包括微生物数据,在底层可用ARDS患者的病因学除了ARDSNet临床研究这些样本,在脓毒症/脓毒性休克患者被排除在外(21]。同样,健康志愿者有限临床信息是可用的。这个研究的另一个重要的警告是BALF利用样本是浮在表面的游离。因此,我们推测,缺乏直接的毒性后隔夜hMSC接触BALF样本可能反映了缺乏免疫效应细胞,然后通过efferocytosis可能还有其他手段清除hMSCs间隙和/或失活(15]。进一步调查,如。混合淋巴细胞研究利用BALF-exposed hMSCs或者向BALF中添加免疫效应细胞样本,对肺部炎性环境将提供重要的信息对hMSC行为的影响。
总之,hMSC接触健康的肺环境诱发一系列基因的表达编码为炎症和认可外国宿主的免疫系统。这些变化不是观察,或者在某些情况下,是相反的hMSC接触后炎性肺ARDS环境。尽管如此,这两种环境中引发经常可比生产和/或释放的赞成和anti-inflammatory-related hMSCs介质。此外,所选组件与BALF中,在某些情况下,hMSC中介发布的预测。这些观察提供了一个日益增长的复杂的相互作用的理解炎症和其他途径参与了肺的hMSC行动,为发展提供重要的信息更有效MSC-based细胞治疗ARDS和其他肺部疾病。
补充材料
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确认
作者欣然承认珍妮弗·l .皮革、皮革制品和佛蒙特大学的马修·e·波因特援助与细胞因子的测量,和埃文·霍夫曼在佛蒙特大学的优秀的整体技术援助。RNA序列是由弗雷德·w·柯灵在达特茅斯Geisel医学院基因组学共享资源,建立了设备的赠款支持从美国国立卫生研究院和NSF和癌症中心核心格兰特(P30CA023108)从美国国家癌症研究所。作者感激地感谢欧盟和人的财政支持。
脚注
可以从本文的补充材料www.qdcxjkg.com
作者的贡献:美国Rolandsson en设计并进行实验,分析和解释结果,数据准备和写的手稿。T.H.汉普顿进行了统计分析,设计和分析了RNA-sequencing实验,准备数据和回顾了手稿。j . Barua进行实验,分析结果和回顾了手稿。d.h。麦凯纳a .准备并提供患者样本空间和细胞,并回顾了手稿。大肠Amiel设计和解释细胞外通量分析和回顾了手稿。林祖嘉多斯桑托斯,K.D. Liu文学士学位斯坦顿,公元Krasnodembskaya,英国英语,硕士Matthay和P.R.M.罗克解释结果,回顾了手稿,提供意见并进行了讨论。D.J.维斯构思策略和设计实验,解释结果和写的手稿。所有作者阅读和批准了最终版本的手稿。
利益冲突:美国Rolandsson en报告赠款人/欧盟居里夫人博士后研究奖学金(RESPIRE3),在进行这项研究的。
利益冲突:T.H.汉普顿没有披露。
利益冲突:j . Barua没有披露。
利益冲突:d.h。麦凯纳没有披露。
利益冲突:林祖嘉多斯桑托斯没有披露。
利益冲突:大肠Amiel没有披露。
利益冲突:a .空间没有披露。
利益冲突:K.D.刘赠款从NIH / NHLBI报道,在进行这项研究的。
利益冲突:公元Krasnodembskaya报告来自英国医学研究委员会资助,在进行这项研究的。
利益冲突:英国英语没有披露。
利益冲突:文学士学位斯坦顿没有披露。
利益冲突:P.R.M.罗科没有披露。
利益冲突:硕士Matthay报告从NIH / NHLBI赠款,国防部门,加州理工学院的再生和罗氏Genentec,从诺华咨询公司和个人费用,外高制药和笛卡尔,提交工作。
利益冲突:D.J.维斯没有披露。
支持声明:a .空间支持R01HL122372 (NIH / NHLBI), ASHARE15A0(囊性纤维化基金会)和转化研究的核心(文学士学位斯坦顿和P30DK117469 STANTO19R0)。T.H.汉普顿和文学士学位斯坦顿支持由美国国立卫生研究院(P30-DK117469和R01 HL151385)和囊性纤维化基金会(STANTO19R0 STANTO19GO和STANTO02PO)。美国Rolandsson en支持居里夫人博士后研究奖学金(RESPIRE3)人队和欧盟H2020研究和创新计划(玛丽·斯卡洛多斯卡·居里赠款协议编号713406)。支持D.J.维斯NHBLI (HL127144 EB024329)、国防部、囊肿性纤维化和佛蒙特大学的基础。MSC制造是通过美国国立卫生研究院资助的生产帮助细胞疗法和明尼苏达大学的合同(协议),分子和细胞疗法(HHSN268201600014I;PI: d.h。麦凯纳)。英国英语是由爱尔兰研究委员会桂冠奖(IRCLA / 2017/288)。公元Krasnodembskaya由英国医学研究理事会研究奖(MRC / R025096/1先生和先生/ S009426/1)。支持P.R.M.罗科慰问Nacional de Desenvolvimento Cientifico e学府e Fundacao卡洛斯恰加斯球场德帕罗尽管更带动做里约热内卢。支持硕士Matthay NHLBI (HL134828和HL140026)。 Funding information for this article has been deposited with theCrossref资助者注册表。
- 收到了2020年11月11日。
- 接受2021年3月2日。
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