文摘
背景肺泡巨噬细胞计数升高和减毒吞噬能力与慢性阻塞性肺疾病(COPD)。调节巨噬细胞吞噬作用因素知之甚少。在这项研究中我们旨在比较气道上皮细胞分泌物的影响慢性阻塞性肺病患者,没有慢性阻塞性肺病(non-COPD)对巨噬细胞的吞噬活动,以及抗菌肽的作用(安培数)。
方法上层清液从non-COPD和慢性阻塞性肺病小气道上皮细胞(SAEC)文化接触non-typeable流感嗜血杆菌(NTHi)应用于人类monocyte-derived巨噬细胞吞噬作用(mdm)来评估他们的影响。SAECs AMP表达的变化分析了定量逆转录PCR和选择安培对巨噬细胞表型和功能的影响是通过流式细胞术和代谢活动分析评估。
结果分泌物的顶端和基底表面NTHi-exposed SAECs在mdm non-COPD捐助者引起优越的吞噬能力。此外,NTHi暴露导致了快速增加的表达一系列的安培non-COPD SAECs,但这种反应在慢性阻塞性肺病SAECs延误了。我们证明治疗2安培β-defensin和S100钙结合蛋白A8 / S100钙结合蛋白A9 (S100A8 / A9)改善mdm的吞噬能力。深入分析的影响S100A8 / A9 mdm透露这AMP在巨噬细胞表型和功能的作用。此外,我们表明,S100A8的表达和S100A9 WNT /β-catenin信号,直接由一个已知的管制途径在慢性阻塞性肺病。
结论总之,第一次,我们表明,气道上皮细胞从COPD患者有能力降低支持巨噬细胞的吞噬功能,以应对急性NTHi曝光,和我们确定WNT /β-catenin signalling-modulated和epithelium-derived S100A8 / A9巨噬细胞表型和功能的有力监管机构。
文摘
COPD气道上皮细胞减少了支持能力巨噬细胞的吞噬功能,以应对急性NTHi曝光,和epithelium-released S100A8 / A9调节巨噬细胞表型和功能https://bit.ly/3CVprKM
介绍
慢性阻塞性肺疾病(COPD)是全球发病率和死亡率的主要原因之一(1),特点是肺实质破坏(肺气肿),慢性炎症(2与致病菌)和增加肺殖民化,包括non-typeable流感嗜血杆菌(NTHi) [3]。气道上皮代表了一个关键障碍微生物和微生物产品通过其黏膜纤毛的清除能力和抗菌肽的分泌(安培)4,5]。安培,也称为宿主防御肽是天然阳离子小蛋白质可以直接灭活病原体(6]。研究群体的人类安培defensins和抗菌肽(LL-37) [7]。水平的安培在痰液和血清调制在慢性阻塞性肺病急性加重(8]。此外,不同的细菌杀死non-COPD活动和慢性阻塞性肺病上皮细胞分泌物曾被报道,与AMP表达差异(β-defensin 2 (BD2) lipocalin 2 (LCN2)和S100钙结合蛋白A7 (S100A7)) (9]。肺巨噬细胞也有效清除细菌的航空公司的关键。巨噬细胞数升高已报告在慢性阻塞性肺病;然而,他们的吞噬能力受损10,11]。作为重要的先天免疫机制,疾病改变吞噬作用和音箱生产可能导致增加细菌群落在慢性阻塞性肺病急性加重11]。有趣的是,neutrophil-derived LL-37和人类嗜中性粒细胞肽1 - 3安培已报告对巨噬细胞产生免疫调节的影响通过提高其吞噬能力(12,13]。然而,机制上皮secretion-induced巨噬细胞吞噬能力的变化和安培的角色在这个相声目前未知。
在这项研究中,我们试图理解的能力之间的差异non-COPD和慢性阻塞性肺病上皮分泌物刺激巨噬细胞吞噬作用,我们调查的参与在这个过程中气道epithelium-derived安培。
方法
分离外周血单核细胞和单核细胞,巨噬细胞的生成
Leukopak集中在乌尔姆DRK-Blutspendedienst获得健康的捐赠者和所有捐助者提供的书面同意。外周血单核细胞(PBMCs)是独立于这些leukopak集中与Ficoll-Paque标准密度梯度离心法。
单核细胞分离使用EasyStep人类单核细胞隔离设备(# 19359,干细胞技术)结合RoboSep(干细胞技术)。
巨噬细胞随后由播种单核细胞与UpCell Nunc板表面(ThermoFisher) XVIVO10媒体(无酚红,没有转铁蛋白,Lonza)的100 ng·毫升−1巨噬细胞集落刺激因子(csf)(米特- 130 - 096 - 489,Miltenyi研究)。
细胞培养
从non-COPD小气道上皮细胞(SAECs)和慢性阻塞性肺病(描述参与者的个人表1)从Lonza购买(cc - 2547)和培养在气液界面(ALI)设置。融合细胞增长到80% Pneumacult-ex +媒体与补充,1%氢化可的松和1% penicillin-streptomycin(所有干细胞的技术)。接下来,细胞被trypsinised和播种到transwell插入(# 3470,康宁)涂上牛胶原蛋白(# 5005、医疗工业GmbH)。从顶端细胞达到融合后,媒体室是吸气,这样细胞暴露在空气中,在基底外侧和媒体室交换了Pneumacult ALI2媒体的维护补充剂,2%肝素钠,5%氢化可的松和1% penicillin-streptomycin(所有干细胞的技术)。细胞培养4周,直到完全分化。这个阶段是确定的文化达到一个稳定的transepithelial电阻(te)的1000Ω·厘米2(形成稳定的障碍),粘液生产和纤毛跳动在transwell表面的文化。
NTHi实验、基底外侧介质交换介质没有抗生素NTHi除了前24小时。的顶端表面SAECs被温暖的PBS和20µL PBS或NTHi (107细菌)补充道。细胞培养3 h或24 h。后来,基底外侧媒体(基底上层清液(SN))和顶端表面洗(顶端SN;洗两次与PBS总额300µL)收集。SNs是离心机在14 000 g 10分钟去除细胞碎片和任何细菌残留。
WNT调制,SAECs受到FH535(20µM;# 4344/10,Tocris), WNT5A (100 ng·毫升−1;# 645 - wn,研发系统)或Chir99021(2µM;# 4423,Tocris) 24 h。后来细胞被洗一次PBS和储存在−80°C到RNA隔离。
评估的影响,NTHi WNT5A表达式,M-CSF-generated monocyte-derived巨噬细胞(mdm)暴露在NTHi 24 h, PBS清洗和保存在−80°C到RNA隔离。
吞噬作用分析
巨噬细胞被播种在96孔板(30 000细胞)和休息2 h。对于SAEC SNs的实验,细胞治疗与SN 1:1混合XVIVO10媒体和co-exposed pHrodo大肠杆菌粒子(埃森生物科学)。对于重组安培的实验,细胞预处理的1 h和重组蛋白:BD2 (# 167300 - 49 - b, Peprotech),分泌白细胞肽酶抑制剂(SLPI)(# 1274 -π- 100、研发系统),S100A8 (# 9876 - s8 - 050、研发系统),S100A9 (# 9254 - s9 - 050、研发系统)和S100A8 / A9 (# 8226 - s8 - 050、研发系统)(所有5µg·毫升−1基于文献[14])或车辆控制。随后,细胞与pHrodo co-treated大肠杆菌或金黄色葡萄球菌粒子和粒子荧光(当局部吞噬溶酶体的酸性环境中)用一个IncuCyte S3 Live-Cell测量分析系统(埃森生物科学)监控吞噬作用随着时间的进展。
统计分析
统计分析使用GraphPad棱镜(GraphPad软件、圣地亚哥、钙、美国)。数据表示为代表或意味着±扫描电镜。意味着两组之间比较使用Mann-Whitney测试或t。比较两组多由克鲁斯卡尔-沃利斯检验之后,邓恩的测试或单向方差分析后跟Sidak多重比较检验。假定值< 0.05被认为是表明一个统计上的显著差异。
额外的方法中可以找到补充材料。
结果
SNs从NTHi- - - - - -暴露COPD气道上皮细胞影响减少支持巨噬细胞的吞噬能力
研究的影响non-COPD和慢性阻塞性肺病epithelium-derived因素对巨噬细胞的功能,SAECs non-COPD和慢性阻塞性肺病的人(捐赠信息表1)暴露在PBS或NTHi顶端表面。non-COPD之间没有明显的差异和慢性阻塞性肺病SAECs SAECs基于苏木精和伊红染色,三通和表达分析上皮和间叶细胞标记(补充图S1)。SN收集SAEC的顶端基底表面和媒体文化和随后用于刺激mdm(计划中描述图1一个)。SN从non-COPD-obtained SAECs暴露于n 3 h,相对于PBS-exposed SAEC SN,支持巨噬细胞吞噬功能明显好于基底COPD-obtained SN的顶端和SN (图1 bc;均值±扫描电镜对于non-COPD与慢性阻塞性肺病:3 h顶端:2 h 114±6.4%与99.6±3.1%,4 h 115±6.1%与98.5±2.1%,6 h 116±5.3%与98±2.6%;3 h管基底:2 h 101±2.5%与92±2.5%,4 h 101±2.2%与92±2.2%,6 h 101±2%与93±1.8%)。然而,微分non-COPD和慢性阻塞性肺病SNs对巨噬细胞吞噬作用的影响不再明显加长的上皮NTHi后超过24小时(图1 de),没有观察到明显的区别在巨噬细胞暴露于non-COPD的可行性和慢性阻塞性肺病SNs (补充图S2a)或在表面标记表达谱(补充图开通)。总的来说,这些结果显示延迟慢性阻塞性肺病上皮分泌反应暴露于细菌。
COPD气道上皮细胞产生延迟NTHi AMP反应
虽然最近的实验证据表明,neutrophil-derived安培可以调节巨噬细胞的功能(12,13),对潜在的epithelial-derived安培对巨噬细胞功能的影响。
基于文献[9,12和未发表的数据,我们选择了一个已知的epithelial-derived安培进行调查。我们评估了AMP表达的增强作用NTHi接触(白细胞介素6信使rna表达作为一个积极的控制细菌刺激所示补充图S3a;ΔΔCp均值±扫描电镜对于non-COPD与慢性阻塞性肺病:3 h: 3.2±0.38与2.7±0.28;24小时:1.7±0.27与在non-COPD 1.34±0.37)和慢性阻塞性肺病SAECs和识别几个不同监管安培;DEFB4A,SLPI,S100A9和PI3更有高度表达NTHi-exposed non-COPD比慢性阻塞性肺病SAECs 3 h后NTHi暴露(±ΔΔCp意味着什么扫描电镜对于non-COPD与慢性阻塞性肺病:DEFB4A2.44±0.3与1.1±0.38;SLPI0.38±0.12与−0.1±0.1;S100A91.3±0.19与0.67±0.19;图2),也有高表达的趋势S100A83 h后NTHi曝光(1.5±0.27与0.66±0.35)。然而,这些差异在上皮AMP表达式没有24小时后观察NTHi曝光,符合细菌感染在慢性阻塞性肺病上皮延迟反应。
S100A8 / A9异质二聚体和BD2调节巨噬细胞的吞噬作用
基于这些发现,我们下一个审讯的能力选择安培(BD2(编码基因DEFB4A)、SLPI S100A8, S100A9 S100A8 / A9异质二聚体)直接影响巨噬细胞的吞噬作用。我们使用细菌粒子在这些分析中,而不是活细菌,消除可能的安培的直接杀菌效果。
我们没有观察到调制与SLPI吞噬作用,也与S100A8或S100A9为(补充图S4)。然而,我们发现S100A8 / A9异质二聚体和BD2可以增强吞噬作用大肠杆菌(革兰氏阴性)粒子(意味着±扫描电镜S100A8 / A9相对于车辆:2 h 105.3±1.9%, 4 h 102.8±0.9%, 6 h 103±0.45%;相对于车辆BD2: 2 h 104±1.9%, 4 h 105.7±1.6%, 6 h 106.5±1.4%, 12 h 105.2±1.3%;图3一)以及金黄色葡萄球菌(革兰氏阳性)粒子(意味着±扫描电镜S100A8 / A9相对于车辆:2 h 120±6.4%, 4 h 98.8±3.2%, 6 h 98±3%;相对于汽车BD2: 2 h 136±2.2%, 4 h 122±1.8%, 6 h 120.8±1.3%;图3 b)。在的情况下金黄色葡萄球菌,在急性照射积极的效果最为明显。因此我们调查潜在的添加剂/协同效应在早期的时间点,发现有一个趋势的累加效应在MDM吞噬S100A8 / A9和BD2应用在一起(意味着±扫描电镜S100A8 / A9: 120±6.4%;BD2: 136±2.2%;和S100A8 / A9 + BD2: 145±3.2%;图3 c)。
S100A8 / A9和BD2蛋白质差异受NTHi non-COPD和慢性阻塞性肺病SAEC分泌物
因为我们发现BD2和S100A8 / A9蛋白能提高巨噬细胞的吞噬功能,我们研究了这些蛋白的表达在SAEC SN NTHi曝光。我们发现3 h (NTHi刺激显著增加BD2蛋白质的表达的顶端SN non-COPD SAECs(意味着±扫描电镜相对于控制100%:117±6.4%),但不是COPD SAECs (114±13%)。S100A8 / A9, NTHi没有增加的可检测水平AMP的顶端SN non-COPD SAECs(81±9%),但明显降低COPD的表达在SN SAECs (70±9%)。然而,NTHi刺激没有影响的分泌BD2或S100A8 / A9基底外侧间室(图4和补充图S5)。
S100A8 / A9调节巨噬细胞表型和新陈代谢
BD2相关我们的研究结果支持在以前的报告中公布的数据显示BD2的作用在增强巨噬细胞吞噬细菌的15]。因此,我们决定进一步描述S100A8 / A9的未知作用调制MDM表型和功能。
分析S100A8 / A9的下游影响巨噬细胞(证据绑定S100A8 / A9 MDM提出了补充图S6)显示增强的分子的磷酸化,ERK1/2 HSP27、物1/2/3,MSK的1/2,AKT 1/2/3, c-JUN, p70S6, RSK 1/2/3和STAT3 (图5一个和补充图S7)。许多这些信号分子与吞噬作用[16- - - - - -18]。此外,我们发现S100A8 / A9也显著改变受体的表达在吞噬作用中发挥作用,诱导的upregulationFCGR2A,马可和TLR2信使rna的差别,对这些基因FCGR1A和TLR4(图5 b)。我们能够确认upregulation CD32 (FCGR2A)和马可fluorescence-activated细胞蛋白表达的排序(流式细胞仪),尽管没有改变在mRNA水平,流式细胞仪分析也揭示了细胞表面表达CD64的增加(FCGR1A)蛋白在S100A8 / A9接触(图5 c)。
我们调查的表达谱的表面标记在S100A8 / A9描述巨噬细胞表型的变化,我们发现,CD163 CD40, CD80和CD38明显调节,而CD206和CD11C没有影响(图5 c)。另外,巨噬细胞的分泌概要文件是相当调制S100A8 / A9曝光后,诱导多种细胞因子(图5 d)。这些S100A8 / A9-induced巨噬细胞表型的变化也与增强糖酵解(图5 e和补充图S8)。综上所述,这些数据表明,S100A8 / A9的有力调制器巨噬细胞表型和功能。
WNT信号受到NTHi和可以调节放大器在气道上皮细胞的表达
接下来,我们旨在了解一些上游的因素参与的微分调节S100A8 / A9 COPD气道上皮细胞的表达。我们执行KEGG通路分析COPD的公开数据集与non-COPD小气道上皮细胞,这表明WNT信号通路是一个最突出的管制途径在慢性阻塞性肺病(补充图S9a)。因此,我们集中我们的注意力是否WNT信号有助于disease-dependent S100A8 / A9的监管。S100A8和S100A9启动子分析显示多个结合位点β-catenin (TCF /中位数),规范的一个关键球员WNT /β-catenin信号(补充图S9b)。有趣的是,我们还发现,NTHi敞口减少WNT信号COPD-derived SAECs(如图所示AXIN2目标基因表达),而在mdm我们发现它诱导的表达WNT5A(负WNT信号调节器)(补充图S10)的直接影响WNT S100A8 S100A9我们暴露SAECs WNT /β-catenin调节器,WNT诱导物Chir99021和WNT抑制剂WNT5A或FH535(据说还拮抗剂PPAR [19])。我们确认Chir99021显著增加,而WNT5A FH535显著降低,的表达AXIN2(WNT /β-catenin目标基因)在上皮细胞(图6)。重要的是,我们发现S100A8和S100A9监管与WNT信号活动;WNT诱导物Chir99021 WNT抑制剂WNT5A和增强他们的表达而FH535减毒的表达这些安培(图6 b)。
总的来说,这些结果说明NTHi可能减弱WNT /β-catenin信号在上皮细胞,既直接影响上皮和间接诱导表达的负面WNT通路调节器WNT5A巨噬细胞。此外,我们表明,WNT /β-catenin信号活动直接影响S100A8和S100A9肺上皮细胞的表达。因此,减少WNT /β-catenin信号可能导致受损S100A8和S100A9肺上皮细胞的表达。
讨论
在这项研究中,我们首次展示在接触NTHi SAECs COPD患者引起延迟的安培响应与受损macrophage-mediated吞噬作用相关联。我们进一步确定BD2和S100A8 / A9气道epithelial-derived安培,可以增强人类巨噬细胞的吞噬能力,我们表明,S100A8 / A9巨噬细胞表型和功能的有力调制器。我们的数据点异常WNT /β-catenin信号作为一个潜在的贡献机制延迟AMP表达式的COPD气道上皮细胞在NTHi曝光。总的来说,我们的研究确定了安培的作用在调节微生物之间的相互作用因素,肺上皮细胞和巨噬细胞吞噬活性。
被巨噬细胞吞噬作用是关键机制来控制微生物种群屏障表面。吞噬吸收流感嗜血杆菌和肺炎链球菌在肺泡巨噬细胞受损,mdm在慢性阻塞性肺病患者20.,21)和一些慢性阻塞性肺病患者巨噬细胞施加进一步的障碍在吞噬COPD恶化[22]。,多种因素可以归因于改变巨噬细胞表型和受损的吞噬能力在慢性阻塞性肺病,病变气道上皮的异常线索可以发挥突出作用鉴于协调macrophage-epithelial相声的重要性在细菌性急性加重。我们的数据表明,在暴露于微生物产品,分泌物COPD SAECs低劣的能力来支持MDM吞噬作用。这种效应与分泌物收集3 h后观察,但24小时后消失。这些数据表明,健康的气道上皮细胞可以快速应对急性微生物接触,但是这个过程在慢性阻塞性肺病上皮延迟,导致次优的巨噬细胞吞噬作用的支持。值得注意的是,在我们的研究中我们利用mdm来自健康人。由于渗透的重要性单核细胞/巨噬细胞外围的呼吸道细菌间隙(23),上皮细胞和巨噬细胞的物理距离,我们的结论是,mdm代表我们研究相关巨噬细胞的人口。气道epithelium-derived的可能影响因素对lung-resident肺泡巨噬细胞将对未来感兴趣的调查。
因为我们的主要目标是non-COPD和COPD气道上皮的比较,我们打算与一个主巨噬细胞人口很可能忠实和重复性良好应对epithelium-derived因素;因此,我们决定利用巨噬细胞来源于健康的人。然而,这将是一个有趣的未来方向也评估影响巨噬细胞来源于上皮细胞的慢性阻塞性肺病患者因为patient-derived巨噬细胞可能引起偏见的功能性质的预压力像烟雾或NTHi。
我们的数据与先前的鼠标是一致的研究表明小鼠结肠上皮细胞和肺泡II型细胞衍生SN在巨噬细胞吞噬作用24,25),也符合之前的报道,NTHi-stimulated支气管上皮细胞的表达安培S100A7, BD2降低COPD患者细胞(9]。
此外,我们不仅表明,NTHi-induced AMP分泌延迟在慢性阻塞性肺病小气道上皮细胞,而且S100A8 / A9和BD2可能直接影响人类mdm的吞噬能力。THP-1细胞系的研究报道,BD2可以加强吞没铜绿假单胞菌以及形成的吞噬溶酶体16]。有趣的是,BD2水平降低COPD患者的痰和恶化的频率具有负相关性(26]。此外,BD2 mRNA表达已被证明是降低COPD患者和中央航空公司的积极与用力呼气量在1 s /用力肺活量(FEV1/ FVC)比率[8]。这些报告,结合我们的数据,建议的角色BD2在慢性阻塞性肺病加重病人的发病机制。
第一次,我们已经表明,S100A8 / A9异质二聚体可以提高在mdm吞噬作用。互惠关系S100A8 / A9,微生物暴露和肺上皮修复曾被提出,因为缺乏S100A8 / A9促进小鼠肺炎的发展所致金黄色葡萄球菌感染(27)和治疗用重组异质二聚体减少lipopolysaccharide-induced肺损伤在活的有机体内(28]。S100A8 /据报道,A9调节吞噬细胞的迁移在实验肺炎肺泡(29日)和控制聚合的微管蛋白在吞噬细胞(30.]。尽管S100A8和S100A9都证明是增加支气管肺泡灌洗液的COPD患者中,异质二聚体S100A8 / A9的形成并不是评估(31日]。
我们进一步证明S100A8 / A9改变巨噬细胞表型和新陈代谢的能力。据我们所知,这是第一次深入调查S100A8 / A9的影响几个方面对人类巨噬细胞,包括蛋白质磷酸化状态、表面标记物的表达,phagocytosis-associated受体,分泌和代谢活动。我们已经表明,一些蛋白质磷酸化S100A8 / A9曝光,包括物(17],c-JUN [18),一种蛋白激酶和p70S619),之前所有的信号通路与吞噬。
受体参与吞噬作用的多个组,包括调理素的受体Fc (如。CD32和CD64)和non-opsonic受体(如。清道夫受体马可和toll样受体)[32]。在这里,我们表明,S100A8 / A9直接移植CD32的表达,在mdm CD64,马可和TLR2受体。有趣的是,它已经表明,马可在慢性阻塞性肺病表达下调,而且其修复移植在慢性阻塞性肺病巨噬细胞吞噬作用[33]。同样,TLR2,结合lipopeptides流感嗜血杆菌和肺炎链球菌慢性阻塞性肺病,减少巨噬细胞(34]。我们还表明,S100A8 / A9改变表面标记物的表达,符合改变MDM两极分化。此外,我们发现S100A8 / A9-exposed巨噬细胞的分泌状况也改变了,包括之前许多细胞因子与吞噬作用有关,如。白介素(IL) 1β,interferon-γ、肿瘤坏死factor-α[35),il - 6和il - 1036]。的分泌物S100A8 / A9-treated mdm可以归因于M1和M2的两极分化,从而发挥赞成和消炎作用。我们发现S100A8 / A9也增强巨噬细胞的糖酵解活性,与代谢偏好一致,预计将在M1-biased分化的背景下(37]。
分析上游通路可能调节S100A8 / A9表达式显示WNT信号最放松管制的途径之一,在慢性阻塞性肺病上皮细胞,证实了先前的报道(38]。此外,WNT /β-catenin活动和AMP表达之间的联系已经建立在其他细胞类型(39]。因此,我们探讨了假设WNT /β-catenin通路可能调节放大器在气道上皮细胞的表达。我们发现几个结合位点β-catenin S100A8和S100A9启动子。我们还展示了第一次WNT信号/β-catenin活动直接影响AMP表达在人类主要小气道上皮细胞。虽然文献证据突出的贡献一些信号通路和外部因素,包括香烟、AMP表达式的规定(9),有许多研究连接WNT信号活动吞噬作用(40)和音箱生产(39,40]。因此,它很容易推测治疗WNT /β-catenin信号的调制可以探索作为药理方法校准的巨噬细胞吞噬活性。
总之,我们已经表明,慢性阻塞性肺病小气道上皮展品延迟AMP感应反应NTHi non-COPD上皮细胞相比,这对应于一个显著降低COPD上皮分泌物对巨噬细胞吞噬作用的影响。我们已经确定了上皮安培,BD2 S100A8 / A9对MDM吞噬能力产生积极的影响。此外,我们综合分析S100A8 / A9异质二聚体的影响揭示了它在调节巨噬细胞分化和代谢方面的作用,以及自己的监管WNT /β-catenin信号,著名的管制途径COPD气道上皮细胞。进一步的研究解决的潜在效用S100A8 / A9提高巨噬细胞的功能在慢性阻塞性肺病影响其他疾病的病理特征可以为COPD提供新的治疗途径。
补充材料
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确认
作者感谢科妮莉亚Tilp和Jochen搅拌机(免疫学和呼吸道疾病研究,勃林格殷格翰集团)为他们的帮助与代heat-inactivated NTHi以及Bernd Guiliard他的帮助与阿里文化和詹妮弗Schuett(免疫学和呼吸道疾病研究,勃林格殷格翰集团)进行质谱测量。作者感谢Birgit Stierstorfer和官Nadine Rehm(药物发现科学,勃林格殷格翰集团)提供免疫组织化学染色。
脚注
可以从本文的补充材料www.qdcxjkg.com
作者的贡献:w . Skronska-Wasek和美国Pflanz构思这个项目。w . Skronska-Wasek, k .小猫,摩根大通(J.P.加内特和美国Pflanz参与实验设计。w·Skronska-Wasek s Durlanik H.Q. Le和诉施罗德进行了实验。w . Skronska-Wasek分析数据。w . Skronska-Wasek和美国Pflanz起草了手稿。所有作者参与写作或编辑。
利益冲突:w . Skronska-Wasek没有披露。
利益冲突:美国Durlanik没有披露。
利益冲突:H.Q.没有披露。
利益冲突:诉施罗德没有披露。
利益冲突:小猫没有披露。
利益冲突:摩根大通(J.P.加内特没有披露。
利益冲突:美国Pflanz没有披露。
- 收到了2020年7月13日。
- 接受2021年8月10日。
- 版权©2022年作者。
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