文摘gydF4y2Ba
Epithelial-to-mesenchymal过渡(EMT)涉及的特异表达上皮伤口修复导致闭塞的毛细支气管炎(OB)后肺移植。收购gydF4y2Ba铜绿假单胞菌gydF4y2Ba在移植气管已被证明是一个风险因素发展的OB。我们研究的潜力gydF4y2Ba铜绿假单胞菌gydF4y2Ba开车EMT在初级支气管上皮细胞(PBECs)隔离肺移植受者。gydF4y2Ba
上皮和间叶细胞标志物的表达变化进行评估与临床分离株的细胞受到挑战gydF4y2Ba铜绿假单胞菌gydF4y2Ba或培养gydF4y2Ba铜绿假单胞菌gydF4y2Ba激活单核细胞的细胞(THP-1)存在与否的转化生长因子(TGF) -β1。gydF4y2Ba
铜绿假单胞菌gydF4y2Ba没有驱动器或强调TGF-β1-driven EMT直接。共培养gydF4y2Ba铜绿假单胞菌gydF4y2Ba激活与PBECs并未推动EMT THP-1细胞。然而,共培养gydF4y2Ba铜绿假单胞菌gydF4y2Ba激活THP-1细胞PBECs大大加重了TGF-β1-driven EMT。gydF4y2Ba
铜绿假单胞菌gydF4y2Ba,gydF4y2Ba通过gydF4y2Ba激活单核细胞的细胞,会加重TGF-β1-driven EMT。这些gydF4y2Ba在体外gydF4y2Ba观察可能有助于解释gydF4y2Ba在活的有机体内gydF4y2Ba临床观察收购之间的联系gydF4y2Ba铜绿假单胞菌gydF4y2Ba和发展中OB的风险增加。gydF4y2Ba
在过去的25年,肺移植已经从一个实验干预一个公认的治疗选择选择终末期肺部疾病患者。迄今为止,∼28000肺移植已报告的国际注册,虽然早期结果明显改善,长期生存仍然令人失望,被限制为∼5年的中位数。移植后期失功的主要原因是由于闭塞性细支气管炎综合征(BOS)的发展gydF4y2Ba1gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
BOS的病理损伤是闭塞的毛细支气管炎(OB)为特征的炎症和纤维化在中小航空公司,导致气流阻塞gydF4y2Ba2gydF4y2Ba。疾病的发病机理尚不清楚,但这是假设,重复两同种免疫的上皮损伤和nonalloimmune机制,特别是未能重建一个完整的上皮细胞,导致气道纤维化的修复和疾病进展gydF4y2Ba2gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba4gydF4y2Ba。最近,几组建议epithelial-to-mesenchymal过渡(EMT)的潜在作用OB的发病机理gydF4y2Ba5gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba8gydF4y2Ba。EMT过程的上皮细胞改变其表型和功能的间充质细胞,包括收购产生基质金属蛋白酶和存款细胞外基质的能力gydF4y2Ba9gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
转化生长因子(TGF) -β1被认为是在多个器官纤维化的“总开关”,包括肺gydF4y2Ba6gydF4y2Ba,gydF4y2Ba10gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba14gydF4y2Ba,已被证明是提高支气管肺泡灌洗(BAL)患者BOSgydF4y2Ba15gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba17gydF4y2Ba。TGF-β1多向性的分子,其驱动能力EMT取决于数量的激活生长因子和微环境的行为。有建立证据表明急性炎性细胞因子升高BAL患者BOS,包括白介素8 (IL)、肿瘤坏死因子(TNF) -αIL-1βgydF4y2Ba18gydF4y2Ba,gydF4y2Ba19gydF4y2Ba。我们组最近表明TNF-α和IL-1β强调TGF-β1-driven EMT,并导致受伤的伤口修复上皮细胞特异表达,这表明炎性微环境可能在气道重塑中发挥作用gydF4y2Ba5gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
侮辱负责受伤上皮的原因可能是多因素的,包括氧化应激gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba,gastro-oesophageal返流性疾病gydF4y2Ba21gydF4y2Ba和感染病毒或细菌gydF4y2Ba22gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba24gydF4y2Ba。复发性细菌性感染是常见的肺移植,可能导致气道上皮损伤和重复激活先天免疫系统。之前我们有证据表明,收购gydF4y2Ba铜绿假单胞菌gydF4y2Ba在移植后肺与BOS的风险增加相关gydF4y2Ba22gydF4y2Ba。然而,如何轻度感染gydF4y2Ba铜绿假单胞菌gydF4y2Ba导致了气道重构的特点OB仍有待确定。gydF4y2Ba
基于这些观察结果,我们提出,低级的感染gydF4y2Ba铜绿假单胞菌gydF4y2Ba在肺移植可能导致气道重塑OB驾驶或突出EMT的特征。gydF4y2Ba
材料和方法gydF4y2Ba
执行本研究按照当地的研究伦理委员会的批准(纽卡斯尔和北泰恩赛德当地区域伦理委员会,纽卡斯尔,英国),通知书面同意从所有的研究获得的病人。gydF4y2Ba
细胞培养gydF4y2Ba
主支气管上皮细胞(PBECs)从稳定肺移植受者被呼吸道隔离刷牙在支气管镜检查,如前所述gydF4y2Ba25gydF4y2Ba。在小气道细胞培养生长培养基(Lonza、绝望、英国)胶原蛋白涂层烧瓶。A549细胞被维护在杜尔贝科修改鹰的介质(σ,普尔,英国)。THP-1细胞(0.5×10gydF4y2Ba6gydF4y2Ba细胞·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba)和肺泡巨噬细胞隔离球稳定的肺移植受者的rpmi - 1640年培养基培养(σ)。gydF4y2Ba
共培养实验gydF4y2Ba
THP-1细胞(1×10gydF4y2Ba6gydF4y2Ba细胞·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba)激活gydF4y2Ba铜绿假单胞菌gydF4y2Ba溶菌产物(12.5μL·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba)被添加到PBECs有或没有TGF-β1 (10 ng·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba)72 h和EMT评估或THP-1细胞(1×10gydF4y2Ba6gydF4y2Ba细胞·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba)被激活gydF4y2Ba铜绿假单胞菌gydF4y2Ba溶菌产物(12.5μL·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba)6 h然后THP-1细胞本身或从THP-1细胞条件培养基加入PBECs有或没有TGF-β1 (10 ng·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba)72 h和EMT评估。gydF4y2Ba
铜绿假单胞菌gydF4y2Ba全细胞溶解产物制备gydF4y2Ba
铜绿假单胞菌gydF4y2Ba全细胞溶解产物是准备从一个参考菌株(NCTC10662)和9从我们的本地存储库的移植后患者临床分离株(ⅰ)。菌株生长在1%马血琼脂平板,收获到PBS和标准化的光学密度在0.2的600海里。细菌悬浮液中断(使用布兰森数字声波降解器(Eemnes布兰森超声学BV,荷兰)以10%的幅度为3分钟在冰上)和孵化与脱氧核糖核酸酶II(200μg·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba)在37°C 1 h。溶菌产物被蛋白酶K(处理2 mg·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba)60°C 2 h,煮20分钟(灭活蛋白酶K)和使用前储存在-80°C。gydF4y2Ba
流式细胞术gydF4y2Ba
300年治疗后,细胞颗粒状和resuspendedμL苯酚Red-negative RPMI媒体(表达载体,佩斯利,英国)。在37°C细胞孵化30分钟,然后30μL propidium碘(1毫克·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba)添加之前评估细胞的生存能力。gydF4y2Ba
ELISAgydF4y2Ba
上层清液中细胞因子水平是衡量抗体夹心ELISA与商用匹配对。下列细胞因子测定:引发,IL-1βTNF-α(研发系统,阿宾顿,英国)。gydF4y2Ba
西方墨点法gydF4y2Ba
蛋白质浓度测定采用BCA分析工具包(英国Cramlington Perbio)。gydF4y2Ba
总细胞溶解产物在4 - 12%(10μg)分离双(羟乙基)-amino-tris -(羟甲基)甲烷凝胶(表达载体)和electrophoretically涂抹到HyBond-P聚乙二烯二氟化物(Amersham,哈特菲尔德,英国)。膜是孵化主要抗体,检测辣根peroxidase-labelled免疫球蛋白G轭合物(Abcam,剑桥,英国)。抗体复合物呈现使用西方SuperSignal Pico化学发光工具包(Perbio)。结果正常化β-tubulin是合适的。gydF4y2Ba
三氯乙酸沉淀蛋白gydF4y2Ba
三氯乙酸100% (w / v)在1:4的比例添加到培养基,在4°C的环境中10分钟。蛋白质沉淀被离心14000×颗粒状gydF4y2BaggydF4y2Ba5分钟。蛋白质颗粒在200年洗两次μL冷丙酮和干通过加热到95°C 10分钟。颗粒是由钠dodecylsulfate resuspended和分离在变性条件下聚丙烯酰胺凝胶电泳(sds - page)。膜与初级抗体和孵化发现如前所述。gydF4y2Ba
免疫荧光gydF4y2Ba
在4%多聚甲醛固定细胞孵化主要抗体和检测使用适当fluorochrome-linked二级抗体。4′,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI)被用作核复染色。图像获得使用徕卡TCS-SP-2UV显微镜(徕卡,米尔顿凯恩斯,英国)激光扫描共焦显微镜(63×放大)。gydF4y2Ba
统计分析gydF4y2Ba
从每个细胞的反应受到一系列的治疗进行评估并与未经处理的控制细胞。蛋白表达的变化(相对密度)或蛋白分泌是相对于未经处理的控制和量化表示为±gydF4y2Ba扫描电镜gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
组织之间的差异的重要性是由单向方差分析评估使用SPSS 14.0 (IBM, Feltham,英国)。不同的假定值< 0.05被认为是具有统计学意义。gydF4y2Ba
结果gydF4y2Ba
描述病人的研究小组gydF4y2Ba
文化PBECs得到从六个(两个男人和四个女人)肺移植受者之间稳定的同种异体移植物功能3和48个月移植后。没有主题显示任何证据的急性排斥反应(A2级或以上,根据国际社会对心脏和肺移植分类)或感染,和BOS阶段0(> 90%基线用力呼气量在1 s)抽样的时候。gydF4y2Ba
调查临床分离的影响gydF4y2Ba铜绿假单胞菌gydF4y2Ba在PBECs肺移植患者gydF4y2Ba
PBECs刺激与gydF4y2Ba铜绿假单胞菌gydF4y2Ba溶菌产物没有显示出显著减少细胞生存能力与未经处理的对照相比(p > 0.05;n = 3;gydF4y2Ba图1一个gydF4y2Ba),并演示了释放的增加存在剂量依赖的相关性引发μl·50毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba(p < 0.05;n = 3),之后没有观察到显著增加(p > 0.05);n = 3;gydF4y2Ba图1 bgydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
刺激PBECs与gydF4y2Ba铜绿假单胞菌gydF4y2Ba溶菌产物或gydF4y2Ba大肠杆菌gydF4y2BaO55脂多糖(LPS)对上皮表型(σ)没有显著影响(p > 0.05);n = 6)。相比之下,治疗TGF-β1 (10 ng·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba)显著降低上皮标记钙粘蛋白的表达,增加了间充质标记波形蛋白、纤粘连蛋白的表达,并增加纤连蛋白的沉积(p < 0.05;n = 6),符合EMT的感应。刺激与gydF4y2Ba铜绿假单胞菌gydF4y2Ba溶菌产物在TGF-β1纤连蛋白表达无显著影响或沉积而独自TGF-β1 (p > 0.05;n = 6;gydF4y2Ba图1 cgydF4y2Ba)。这些结果表明,尽管gydF4y2Ba铜绿假单胞菌gydF4y2Ba溶菌产物提供了其分子模式(pamp) PBECs,在引发分泌增加,它不开车EMT通过直接作用于上皮细胞,无论是单独或与TGF-β1协同起来。gydF4y2Ba
细胞因子释放THP-1细胞和肺泡巨噬细胞诱导的临床分离株gydF4y2Ba铜绿假单胞菌gydF4y2Ba
作为gydF4y2Ba铜绿假单胞菌gydF4y2Ba不直接影响EMT,我们开始确定它可以间接地吗gydF4y2Ba通过gydF4y2Ba激活免疫细胞和炎性微环境的一代。治疗THP-1单核细胞的细胞系以12.5μL·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba铜绿假单胞菌gydF4y2Ba溶菌产物诱导显著增加引发的释放(gydF4y2Ba图2 bgydF4y2Ba),IL-1β(gydF4y2Ba图2 cgydF4y2Ba)和TNF-α(gydF4y2Ba图2 dgydF4y2Ba)(p < 0.05;n = 3)在维持细胞生存能力> 80%。浓度> 12.5μL·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba铜绿假单胞菌gydF4y2Ba溶菌产物诱导小额外的细胞因子释放和受损细胞的可行性。因此,我们使用一个gydF4y2Ba铜绿假单胞菌gydF4y2Ba溶菌产物μL·12.5毫升的浓度gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba在随后的实验。gydF4y2Ba
我们比较相关的炎性细胞因子释放THP-1细胞响应实验室参考应变gydF4y2Ba铜绿假单胞菌gydF4y2Ba(NCTC10662)和9个临床移植的隔离gydF4y2Ba铜绿假单胞菌gydF4y2Ba(ⅰ)。与临床分离株的刺激gydF4y2Ba铜绿假单胞菌gydF4y2Ba诱导引发的大大增强分泌(意味着±gydF4y2Ba扫描电镜gydF4y2Ba68815±4498gydF4y2Ba与gydF4y2Ba45194±2345 pg·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba;gydF4y2Ba图3gydF4y2Ba),IL-1β(1294±83gydF4y2Ba与gydF4y2Ba780±20 pg·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba;gydF4y2Ba图3 bgydF4y2Ba)和TNF-α(2739±280gydF4y2Ba与gydF4y2Ba1202±20 pg·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba;gydF4y2Ba图3 cgydF4y2Ba比实验室参考应变)。此外,预处理与anti-CD14 THP-1细胞抗体(400 ng·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba)阻塞LPS-induced TNF-α释放(p < 0.01;n = 3),返回水平与控制(p = 0.69;n = 3;gydF4y2Ba图3 dgydF4y2Ba)。然而,anti-CD14抗体(400 ng·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba)能够抑制只有39±3.6% (p < 0.01;n = 3) TNF-α释放THP-1细胞刺激gydF4y2Ba铜绿假单胞菌gydF4y2Ba溶菌产物,表明gydF4y2Ba铜绿假单胞菌gydF4y2Ba通常作用于多个的toll样受体)和为我们提供一个更有代表性的模型,在感染gydF4y2Ba在活的有机体内gydF4y2Ba。以后,菌株G作为代表gydF4y2Ba铜绿假单胞菌gydF4y2Ba临床分离。gydF4y2Ba
确认的适用性THP-1单核细胞的细胞株培养系统作为代理巨噬细胞模型,比较很重要的分泌细胞因子反应激活gydF4y2Ba铜绿假单胞菌gydF4y2BaTHP-1细胞和肺泡巨噬细胞与球之间稳定的肺移植受者(gydF4y2Ba图4gydF4y2Ba)。引发THP-1细胞分泌略高与肺泡巨噬细胞(116±4gydF4y2Ba与gydF4y2Ba91±14 ng·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba;p = 0.02;n = 3)。然而,我们没有发现显著差异水平的TNF-α(3898±31gydF4y2Ba与gydF4y2Ba3283±372 pg·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba)和IL-1β(1309±118gydF4y2Ba与gydF4y2Ba1425±48 pg·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba分别从THP-1)分泌细胞和肺泡巨噬细胞(p < 0.05;n = 3)。因此,我们继续使用THP-1细胞所有后续实验。gydF4y2Ba
与临床分离株THP-1细胞刺激gydF4y2Ba铜绿假单胞菌gydF4y2Ba强调TGF-β1 EMT驱动gydF4y2Ba
铜绿假单胞菌gydF4y2Ba激活THP-1细胞被上皮细胞培养研究的间接影响gydF4y2Ba铜绿假单胞菌gydF4y2BaEMT。未经处理的细胞保持经典的“鹅卵石”出现的上皮细胞,表达高水平的钙粘蛋白和表达波形蛋白或纤连蛋白。与未经处理的THP-1细胞共培养细胞gydF4y2Ba铜绿假单胞菌gydF4y2Ba激活THP-1细胞没有影响形态或EMT标记表达式相比,控制(p > 0.05);n = 6)。TGF-β1治疗促进细胞失去细胞间接触和伸长,downregulation钙粘蛋白的表达,和波形蛋白和纤连蛋白表达增加(p < 0.05;n = 6)。与未经处理的THP-1细胞共培养细胞的存在对EMT TGF-β1没有额外的影响标记表达式独自TGF-β1相比(p > 0.05;n = 6)。然而,共培养细胞gydF4y2Ba铜绿假单胞菌gydF4y2Ba激活THP-1在存在TGF-β1诱导一个更具戏剧性的变化在细胞表型,大大加重了EMT标记表达的变化与TGF-β1独自(p < 0.05;n = 6;gydF4y2Ba图5gydF4y2Ba)。研究结果表明,gydF4y2Ba铜绿假单胞菌gydF4y2Ba与高架TGF-β1 EMT的环境会加重,如在肺移植,但无法驱动EMT在TGF-β1缺席的情况下。gydF4y2Ba
溶性产品释放gydF4y2Ba铜绿假单胞菌gydF4y2Ba激活THP-1细胞负责强调TGF-β1 EMT驱动gydF4y2Ba
为了进一步了解gydF4y2Ba铜绿假单胞菌gydF4y2Ba激活THP-1细胞突出TGF-β1-driven EMT,膜结合的相对贡献因素表面表达THP-1 THP-1细胞分泌的细胞因子在TGF-β1-driven EMT调查(gydF4y2Ba图6gydF4y2Ba)。培养PBECs THP-1细胞或未经治疗gydF4y2Ba铜绿假单胞菌gydF4y2Ba激活THP-1细胞没有影响EMT标记表达式比未经处理的控制细胞(p > 0.05);n = 6)。同样,媒体从未经处理的THP-1细胞或gydF4y2Ba铜绿假单胞菌gydF4y2Ba激活THP-1细胞没有影响蛋白表达与控制(p > 0.05);n = 6)。结果表明,未经处理或分泌的产品或包围的因素gydF4y2Ba铜绿假单胞菌gydF4y2Ba激活细胞THP-1 EMT没有TGF-β1之前请不要开车。gydF4y2Ba
相比之下,治疗TGF-β1下调上皮标记cytokeratin-19和钙粘蛋白的表达,并增加了波形蛋白、纤粘连蛋白的表达(p < 0.05;n = 6)。THP-1细胞或未经治疗gydF4y2Ba铜绿假单胞菌gydF4y2Ba激活THP-1细胞没有明显影响EMT标记表达式独自TGF-β1相比(p > 0.05;n = 6)。gydF4y2Ba
然而,治疗中gydF4y2Ba铜绿假单胞菌gydF4y2Ba激活THP-1在存在显著TGF-β1强调了EMT标记表达的变化与TGF-β1独自(p < 0.05;n = 6)。结果表明,分泌释放产品gydF4y2Ba铜绿假单胞菌gydF4y2Ba激活THP-1细胞,而不是表面的膜结合因素THP-1细胞,负责强调TGF-β1-driven EMT在我们共培养模型(gydF4y2Ba无花果7gydF4y2Ba和gydF4y2Ba8gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
这个观察进一步证实了共培养的上皮细胞gydF4y2Ba铜绿假单胞菌gydF4y2Ba激活THP-1细胞分离的上皮细胞在细胞培养中插入(美国康宁公司、康宁、纽约)。这种技术只允许产品从THP-1释放细胞分泌影响上皮细胞(补充图E1)。结果证实,分泌释放产品gydF4y2Ba铜绿假单胞菌gydF4y2Ba激活THP-1细胞会加重TGF-β1-driven EMT(补充图E2)。gydF4y2Ba
讨论gydF4y2Ba
病毒和细菌感染,常见的肺移植,可引起肺的气道上皮损伤和激活先天免疫系统。这样侮辱被认为是重要的在推动相声与同种免疫的机制,导致异常上皮修复BOS的发展。特别是,我们组和其他人已经表明,收购的革兰氏阴性,投机取巧的细菌gydF4y2Ba铜绿假单胞菌gydF4y2Ba在移植气管与发展BOS的风险增加相关gydF4y2Ba22gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba24gydF4y2Ba。在这项研究中,我们探索了这种生物的机制可能驱动异常在气道上皮修复。我们的数据表明临床分离株gydF4y2Ba铜绿假单胞菌gydF4y2Ba从肺移植可以培养,gydF4y2Ba通过gydF4y2Ba免疫细胞分泌的产品激活的作用,强调TGF-β1-driven EMT在气道上皮细胞与肺移植受者。这些gydF4y2Ba在体外gydF4y2Ba研究结果可能有助于解释收购的临床观察gydF4y2Ba铜绿假单胞菌gydF4y2Ba在移植气管与发展BOS的风险增加相关。gydF4y2Ba
是承认重复亚临床损伤和炎症的持续的气道上皮与缺陷再生将有利于过度fibroproliferation,和删除OB中小航空公司的gydF4y2Ba26gydF4y2Ba。在临床实践中,BOS往往是第一次诊断(或进展更快)细菌或病毒感染后,这些来源的急性炎症可能是非常重要的在强调流程已经开车慢性肺部同种异体移植物功能障碍。我们组曾表明TNF-α和IL-1β会导致伤口修复受伤的上皮细胞特异表达强调TGF-β1-driven EMT,证明急性炎症和上皮改造之间的联系gydF4y2Ba5gydF4y2Ba。从Vos之前的数据gydF4y2Baet al。gydF4y2Ba27gydF4y2Ba表明,即使是短暂的感染gydF4y2Ba铜绿假单胞菌gydF4y2Ba在肺移植受者与显著增加炎症有关。因此,我们提出收购gydF4y2Ba铜绿假单胞菌gydF4y2Ba在肺移植可能产生足够的炎症刺激,强调提供维修gydF4y2Ba通过gydF4y2BaEMT在气道上皮细胞。gydF4y2Ba
我们的数据表明,gydF4y2Ba铜绿假单胞菌gydF4y2Ba不直接驱动EMT但TGF-β1 EMT间接驱动会加重吗gydF4y2Ba通过gydF4y2Ba先天免疫细胞的激活。气道上皮细胞能够应对微生物的存在的表达通常在他们的表面,然而,这些细胞通常显示hyporesponsiveness TLR配体gydF4y2Ba28gydF4y2Ba先天免疫细胞,而肺显示TLR配体更剧烈的炎症反应。当激活时,肺巨噬细胞产生多种生长因子和细胞因子,包括蛋白质,存在于BAL患者的BOS水平升高gydF4y2Ba18gydF4y2Ba,gydF4y2Ba19gydF4y2Ba,如引发TNF-αIL-1βgydF4y2Ba29日gydF4y2Ba。越来越多的兴趣,巨噬细胞为效应细胞的作用在同种异体移植损伤和纤维化。在小鼠异位气管移植模型中,消耗的接受者巨噬细胞显著废除移植气管闭塞gydF4y2Ba30.gydF4y2Ba。在这项研究中,我们使用了THP-1单核细胞的细胞系作为肺部先天免疫细胞模型,使用人类巨噬细胞肺移植患者与健康对照组或稳定不可行是因为所需的大量细胞共培养实验。重要的是,作为验证的一部分我们的模型,我们表明,未分化THP-1细胞表现出相似的炎症反应gydF4y2Ba铜绿假单胞菌gydF4y2Ba从球稳定的肺泡巨噬细胞隔离肺移植受者(gydF4y2Ba图4gydF4y2Ba)。它也证实THP-1细胞可以分化使用佛波醇醋酸豆蔻酸盐成附着macrophage-like细胞gydF4y2Ba31日gydF4y2Ba。然而,我们需要THP-1细胞保持在我们共培养实验和暂停执行,因此,使用未分化的细胞。gydF4y2Ba
我们的模型的另一个重要方面是临床分离株的使用gydF4y2Ba铜绿假单胞菌gydF4y2Ba。整个细菌溶菌产物用于这项研究包含多个pamp,信号gydF4y2Ba通过gydF4y2Ba不同的通常和提供更多的临床相关的刺激。这是进一步证明了临床分离株的观察gydF4y2Ba铜绿假单胞菌gydF4y2Ba诱导炎症反应大于实验室参考菌株(NCTC10662)。gydF4y2Ba
上面提到的观察结果显示:指向持久性的gydF4y2Ba铜绿假单胞菌gydF4y2Ba或其炎症影响通过限制移植肺的先天免疫的激活可能是一个潜在的治疗限制特异表达上皮修复。我们组和其他显示阿奇霉素治疗可以逆转在某些BOS患者肺功能下降gydF4y2Ba32gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba35gydF4y2Ba。阿奇霉素没有任何重大anti-pseudomonal活动但已被证明表现出广泛的群体感应系统的抑制,减少毒性因子生产和损伤的氧化应激反应gydF4y2Ba36gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba38gydF4y2Ba。然而,最近的数据表明,尽管阿奇霉素展览活动gydF4y2Ba铜绿假单胞菌gydF4y2Ba生物膜、耐药突变体很容易选择和定制anti-pseudomonal疗法可能需要根除感染病人接受阿奇霉素治疗gydF4y2Ba39gydF4y2Ba。这表明,阿奇霉素是更容易发挥其好处gydF4y2Ba通过gydF4y2Ba其抗炎行动比直接行动gydF4y2BaP。gydF4y2Ba绿脓杆菌gydF4y2Ba殖民。gydF4y2Ba
最后,在文献中尚不清楚gydF4y2Ba铜绿假单胞菌gydF4y2Ba可以是一个主要驱动程序移植肺的气道重塑或实际上是加速一个已经建立的过程。我们在本文的数据表明TGF-β1背景水平的升高是必需的gydF4y2Ba铜绿假单胞菌gydF4y2Ba其强调对EMT的影响。这种支持的假设gydF4y2Ba铜绿假单胞菌gydF4y2Ba可能有一个强调影响已经闷同种免疫性损伤气道上皮细胞。gydF4y2Ba
脚注gydF4y2Ba
↵gydF4y2Ba可以从本文的补充材料gydF4y2Bawww.www.qdcxjkg.comgydF4y2Ba
支持声明gydF4y2Ba
这项工作是由一个研究来自英国医学研究委员会资助(G0700861)。a . De支持Soyza HEFCE高级讲师的职位。A.J.费舍尔由葛兰素史克的临床支持奖学金奖。gydF4y2Ba
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语句对a De Soyza和A.J.费舍尔可以找到gydF4y2Bawww.www.qdcxjkg.com/site/misc/statements.xhtmlgydF4y2Ba
- 收到了gydF4y2Ba2010年6月8日。gydF4y2Ba
- 接受gydF4y2Ba2010年8月26日。gydF4y2Ba
- ©2011人队gydF4y2Ba
引用gydF4y2Ba
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