文摘gydF4y2Ba
背景gydF4y2Ba小说的疫情人类冠状病毒严重急性呼吸系统综合症冠状病毒2 (SARS-CoV-2)(也称为2019 - ncov)已成为一个全球性的健康问题。迫切需要快速和易于使用的诊断技术诊断SARS-CoV-2感染。gydF4y2Ba
方法gydF4y2Ba我们设计了一个逆转录多个cross-displacement放大(RT-MCDA)加上nanoparticle-based生物传感器测定(RT-MCDA-BS)快速、敏感和特定的诊断冠状病毒疾病2019 (COVID-19)。两套引物设计目标的开放阅读框1 a / b和SARS-CoV-2核蛋白基因。总共183份临床样本,其中包括65名患者COVID-19感染和118例其他病原体感染被用来证明试验的可行性。诊断结果报告视觉使用生物传感器。gydF4y2Ba
发现gydF4y2Ba分析设计了使用一个简单的仪器可以反应在一个恒定的温度维持在64°C只有35分钟。总COVID-19 RT-MCDA-BS测试程序可在1 h。的COVID-19 RT-MCDA-BS可以检测到目标序列的5份。从COVID-19患者65份临床样本中,22例(33.8%)阳性结果从粪便,鼻、咽、肛门拭子gydF4y2Ba通过gydF4y2BaCOVID-19 RT-MCDA-BS化验,而实时一只化验检测20例(30.7%)阳性结果在这些样品。没有积极的结果从临床样本non-COVID-19感染。gydF4y2Ba
解释gydF4y2BaCOVID-19 RT-MCDA-BS是一种快速、可靠、低成本和易于使用的分析,这将提供一个有吸引力的实验室诊断工具COVID-19在多个临床标本,特别是对于领域,临床实验室和初级保健设施在资源贫乏的环境中。gydF4y2Ba
文摘gydF4y2Ba
我们设计了一种新的方法(COVID-19 RT-MCDA-BS)诊断COVID-19。其速度、低成本和易于使用的方法的理想工具使用领域,主要和临床实验室,特别是在资源贫乏的环境中。gydF4y2Bahttps://bit.ly/3j08CU2gydF4y2Ba
介绍gydF4y2Ba
在2019年12月下旬,爆发引起的肺炎小说人类冠状病毒(严重急性呼吸系统综合症冠状病毒2 (SARS-CoV-2);也被称为2019 - ncov)出现在武汉,在中国的湖北省gydF4y2Ba1gydF4y2Ba,gydF4y2Ba2gydF4y2Ba]。这部小说新兴病毒已迅速席卷中国,和>中国以外的200个国家/地区(gydF4y2Ba3,gydF4y2Ba4gydF4y2Ba]。2020年5月28日,SARS-CoV-2影响>全世界5 593 631名患者(353 334人死亡)(gydF4y2Ba4gydF4y2Ba]。由于其快速传播速度(RgydF4y2Ba0gydF4y2Ba3.28),可能致命的进展和传染性强,冠状病毒疾病2019 (COVID-19)引发了严重的全球关注gydF4y2Ba5gydF4y2Ba]。因此,快速,易于使用的和可靠的测试工具是迫切需要诊断感染,治疗病人和控制COVID-19的蔓延。gydF4y2Ba
根据COVID-19的表现,早期诊断是高度可变的,是极其困难的gydF4y2Ba6gydF4y2Ba]。COVID-19范围从无症状感染的临床表现,非特异性类似流感的临床表现(如咳嗽和发烧)呼吸衰竭(gydF4y2Ba3gydF4y2Ba]。明显的临床表现可能发生在2天或2周后曝光。因此,设计一个快速和早期诊断方法对治疗和疾病控制是至关重要的。目前,COVID-19感染的确诊强烈依赖于pcr方法,如逆转录(RT) pcr和实时RT (rRT) pcr (gydF4y2Ba6gydF4y2Ba]。然而,他们需要昂贵的热循环装置和非常娴熟的实验室工作人员。此外,积极的62%通过pcr技术,因为他们限制在临床诊断的敏感性COVID-19病人不是有效的感染控制(gydF4y2Ba6gydF4y2Ba,gydF4y2Ba7gydF4y2Ba]。因此,一个易于使用的和具有成本效益的测试灵敏度较高的需要作为一线技术解决COVID-19领域和临床设置。gydF4y2Ba
最近,几个loop-mediated等温扩增(灯)分析设计了快速检测COVID-19在临床和刺激患者样本gydF4y2Ba8gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba10gydF4y2Ba]。然而,COVID-19灯化验只检测一个目标基因(开放阅读框1 a / b (F1ab))。产生假阳性结果时应用于检测临床样本包含高度同源的序列,如基因从蝙蝠严重急性呼吸道症状冠状病毒(基因库gydF4y2BaKY417152.1gydF4y2Ba)。此外,灯的结果报道gydF4y2Ba通过gydF4y2Ba琼脂糖凝胶电泳,SYBR染料或酸碱指示剂。特别是,电泳是一个繁琐,费时的过程,和颜色变化的评估肉眼可能是主观的模糊测试造成的低浓度的模板。新颖的技术,可以克服这些技术上的困难,不断要求。gydF4y2Ba
多个cross-displacement放大(MCDA)技术是一种容易执行和可靠的诊断分析,放大目标核酸的条件下(通常是58°C到69°C)在很短的时间内(20 - 40分钟;通常30分钟)(gydF4y2Ba11gydF4y2Ba]。简单的设备(如水浴加热块,甚至一个热水瓶杯)足以让MCDA测试。MCDA技术已被用于诊断各种传染病产生积极的结果从目标序列的三份,显示其快速、简单和高特异性[gydF4y2Ba12gydF4y2Ba,gydF4y2Ba13gydF4y2Ba]。实现同时检测多个目标和快速分析MCDA产品,nanoparticle-based生物传感器测试已经加上MCDA实现客观的检测结果。生物传感器测定简单、容易行为和低成本,不需要复杂的仪器和技术人员(gydF4y2Ba14gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba
我们设计了一种一步法,单管反转录MCDA (RT-MCDA)加上nanoparticle-based生物传感器测定(RT-MCDA-BS) (gydF4y2Ba图1gydF4y2Ba和gydF4y2Ba2gydF4y2Ba),它可以通过同时检测诊断COVID-19 F1ab和核蛋白(N)基因。整个检测过程就可以完成高精度内1 h。因此,RT-MCDA-BS方法可能使诊断COVID-19更容易,更快和更可靠,即使在资源有限的设置。gydF4y2Ba
方法gydF4y2Ba
nanoparticle-based生物传感器的制备gydF4y2Ba
nanoparticle-based生物传感器(4×60毫米),描述了gydF4y2Ba图2一个gydF4y2Ba,包括一个示例垫、共轭垫、硝化纤维素(NC)膜的吸水垫装配在一个塑料粘合底布卡(Jie-Yi生物科技、上海、中国)。捕获试剂,包括绵羊anti-digoxigenin抗体(anti-Dig 0.25 mg·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba;Abcam,剑桥,英国),兔子anti-fluorescein抗体(anti-FITC, 0.2 mg·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba;Abcam)和生物素化的牛血清白蛋白(biotin-BSA 4毫克·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba;Abcam),被分发到NC膜测试线1 (TL1),测试线2 (TL2)和控制(CL),分别与每一行由5毫米。检测试剂(streptavidin-dye-coated聚合物纳米粒子(SA-DPNs), 129海里,10 mg·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba;100毫米硼酸,pH值8.5与0.1% BSA,渐变20 - 10毫米0.05% EDTA)喷洒到共轭区域的生物传感器。因此,生物传感器可以检测到三个目标,包括两个目标产品(F1ab-MCDA扩增子和N-MCDA扩增子)和色谱法控制。最后,与会的生物传感器被切成4毫米试纸条,dry-stored在室温下使用。gydF4y2Ba
RT-MCDA引物设计gydF4y2Ba
两套RT-MCDA引物(F1ab-MCDA和N-MCDA底漆集),目标F1ab基因和N基因,分别SARS-CoV-2(基因库gydF4y2BaMN908947gydF4y2BaWuhan-Hu-1),设计根据MCDA原则(gydF4y2Ba图3gydF4y2Ba)。每个MCDA引物组包含两个位移引物(F1和F2),两个cross-primers (CP1和CP2),和六个扩增引物(C1, D1, R1 C2, D2和R2)。F1ab——N-MCDA引物的特异性集进行分析使用国家生物技术信息中心基本局部比对搜索工具。此外,OligoAnalyzer在线软件(V3.1;美国综合DNA技术,珊瑚镇,IA)是用于底漆,二聚体和二级结构的调查。RT-MCDA底漆的细节设计,引物的位置,序列和修改中列出gydF4y2Ba图3gydF4y2Ba和gydF4y2Ba补充表S1gydF4y2Ba。所有低聚物合成和纯化Tianyi-Huiyuan生物技术(中国,北京)高效液相色谱净化等级。gydF4y2Ba
RT-MCDA反应gydF4y2Ba
标准RT-MCDA (F1ab-MCDA / N-MCDA)是在一步反应进行25-μL混合物12.5μL 2×等温反应缓冲区(40毫米Tris-HCl (pH值8.8),氯化钾40毫米,16毫米MgSOgydF4y2Ba4gydF4y2Ba,20毫米(NH4)gydF4y2Ba2gydF4y2Ba所以gydF4y2Ba4gydF4y2Ba、2 M甜菜碱和0.2% Tween-20) (HuiDeXin Bio-technique,天津,中国);8 U Bst 2.0 DNA聚合酶(新英格兰生物学实验室;美国伊普斯维奇,MA);10 U禽成髓细胞瘤病毒逆转录酶(表达载体;沃尔瑟姆,妈,美国);1.4毫米dATP;1.4毫米dCTP;1.4毫米dGTP;1.4毫米dTTP;0.1毫米biotin-14-dCTP; 0.1 mM biotin-14-dATP; 0.4 μM each of displacement primers F1 and F2; 0.8 μM each of amplification primers C1, C2, D1, D1, R1 and R2; 0.8 μM each of cross-primers CP1* and CP1; 1.6 μM cross-primer CP2; and template (1 μL for the standard plasmid).
此外,COVID-19 RT-MCDA执行在一步反应25-μL混合物12.5μL 2×等温反应缓冲区(40毫米Tris-HCl (pH值8.8),氯化钾40毫米,16毫米MgSOgydF4y2Ba4gydF4y2Ba,20毫米(NH4)gydF4y2Ba2gydF4y2Ba所以gydF4y2Ba4gydF4y2Ba、2 M甜菜碱和0.2% Tween-20) (HuiDeXin Bio-technique);8 U Bst 2.0 DNA聚合酶(新英格兰生物学实验室);10 U禽成髓细胞瘤病毒逆转录酶(表达载体);1.4毫米dATP;1.4毫米dCTP;1.4毫米dGTP;1.4毫米dTTP;0.1毫米biotin-14-dCTP;0.1毫米biotin-14-dATP;0.275μM F1ab-F1 F1ab-F2; 0.55 μM of F1ab-C1, F1ab-C2, F1ab-D1, F1ab-D2, F1ab-R1 and F1ab-R2; 0.55 μM of F1ab-CP1* and CP1; 1.1 μM of F1ab-CP2; 0.125 μM of N-F1 and N-F2; 0.25 μM of N-C1, N-C2, N-D1, N-D2, N-R1 and N-R2; 0.25 μM of N-CP1* and CP1; 0.5 μM of N-CP2; and template (1 μL for the each standard plasmid, 5 μL for samples).
实时浊度(la - 320 c),视觉检测试剂(VDR)和生物传感器应用于演示MCDA反应和确定最优放大温度。gydF4y2Ba
RT-MCDA-BS测定的灵敏度gydF4y2Ba
两个质粒(F1ab-plasmid和N-plasmid),它包含F1ab和N基因,分别建立了商业Tianyi-Huiyuan生物技术(中国,北京)。根据制造商的手册,初始浓度的F1ab——N-plasmids 5×10gydF4y2Ba8gydF4y2Ba本·µLgydF4y2Ba−1gydF4y2Ba。然后,连续稀释10倍(5×10gydF4y2Ba4gydF4y2Ba5×10gydF4y2Ba−2gydF4y2Ba张)F1ab-plasmid和N-plasmid用来评估检测极限(LoD) COVID-19 RT-MCDA, F1ab-RT-MCDA N-RT-MCDA化验。考试进行了独立一式三份。同时,质粒的浓度在LoD层次用于确认的最佳等温时间COVID-19 RT-MCDA化验。gydF4y2Ba
特异性的COVID-19 RT-MCDA-BS化验gydF4y2Ba
的分析特异性COVID-19 RT-MCDA-BS分析是评估通过比较COVID-19模板与模板提取各种病毒、细菌和真菌(gydF4y2Ba补充表S2gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
临床样本验证的可行性COVID-19 RT-MCDA-BS使用gydF4y2Ba
总共65份临床样本(包括粪便和肛交,鼻腔和咽拭子)是获得患者在急性期和恢复期COVID-19发送到贵州省疾病控制中心(CDC) (gydF4y2Ba补充表S3gydF4y2Ba)。分析这些RNA模板使用COVID-19 RT-MCDA-BS化验是经贵州省疾病预防控制中心。咽、鼻和肛门拭子样本收集使用聚集无菌塑料擦洗器,这是放置在一个普遍的病毒传输介质(UVIM)病毒(HiDNA;YIMi生物技术、台州、江苏、中国)。的粪便样本,整除(∼1 g)的凳子被置于一个管,含有1.5毫升UVIM。然后,粪便样本离心机5000×gydF4y2BaggydF4y2Ba10分钟,上层是放在一个新管。整除(200µL) UVIM(咽、鼻和肛门拭子样本)和上层的粪便样本进行RNA模板的提取过程,只需要15分钟使用一个快速RNA提取试剂盒(天龙生物科技,杭州,中国)。5整除µL模板被用于进行rt - pcr和COVID-19 RT-MCDA-BS方法。RNA模板提取不同类型的临床样本收集在贵州省疾控中心rrt - pcr性能后,进行了使用正式批准临床rt - pcr试剂盒。rt - pcr诊断工具包的LoD 500本·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba根据它的手册。循环阈值(Ct)的价值< 37 COVID-19感染定义为积极的结果;Ct值> 40,或者如果没有获得Ct值被定义为一个阴性结果COVID-19感染;37-40之间不确定的Ct值,测试应该再次检查。此外,non-COVID-19病人收集的118份咽拭子样本也进行验证检测的特异性COVID-19 RT-MCDA-BS方法。gydF4y2Ba
结果gydF4y2Ba
示意图机制COVID-19 RT-MCDA-BS化验gydF4y2Ba
在COVID-19 RT-MCDA系统,两个核心引物,包括F1ab-CP1和N-CP1,标签在5′末端与digoxigenin(挖)和FITC,分别。新F1ab-CP1 N-CP1引物称为F1ab-CP1 *和N-CP1 *。与此同时,两个组件(biotin-14-dCTP和biotin-14-dATP)被添加到COVID-19 RT-MCDA反应混合物(gydF4y2Ba图1一个gydF4y2Ba)。所示gydF4y2Ba图1 bgydF4y2BaSARS-CoV-2模板(RNA)首先被转化为互补脱氧核糖核酸的补充禽成髓细胞瘤病毒逆转录酶在放大的温度(64°C)。然后,互补dna作为模板MCDA放大。F1ab-CP1 *和N-CP1 *引物退火到目标区域,并延长位移酶(gydF4y2BaBstgydF4y2Ba2.0),因此biotin-14-dATP和biotin-14-dCTP纳入新合成的产品。因此,大量的可检测double-labelled产品形成F1ab-MCDA扩增子同时贴上挖和生物素和N-MCDA扩增子FITC和生物素(gydF4y2Ba图1 cgydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
生物传感器的原理的可视化COVID-19 RT-MCDA结果gydF4y2Ba
nanoparticle-based生物传感器所示的细节gydF4y2Ba图2一个gydF4y2Ba。放大后,整除(1μL) COVID-19 RT-MCDA产品是沉积在生物传感器的样品垫(gydF4y2Ba图2 bgydF4y2Ba步骤1),紧随其后的是添加一个整除(100μL)运行缓冲同一地区(gydF4y2Ba图2 bgydF4y2Ba步骤2),运行缓冲可以沿着生物传感器通过毛细管作用,然后再水化的蹩脚SA-DPNs共轭地区。F1ab-MCDA扩增子特别被TL1 anti-Dig固定,和N-MCDA扩增子被TL2 anti-FITC固定。COVID-19 MCDA产品的生物素可以绑定SA-DPNs可视化。多余的SA-DPNs被生物素化的组织固定在CL,评估生物传感器的工作状态(gydF4y2Ba图2 bgydF4y2Ba的解释,步骤3)。COVID-19 RT-MCDA结果gydF4y2Ba通过gydF4y2Ba生物传感器是显示在gydF4y2Ba图2 cgydF4y2Ba。gydF4y2Ba
确认和分析F1ab - N - COVID-19 RT-MCDA产品gydF4y2Ba
使用船舶、积极F1ab - N -和COVID-19 RT-MCDA船只被肉眼的视觉亮绿色,而消极的船只和空白控制保持无色(gydF4y2Ba补充图S1gydF4y2Ba上面一行)。在生物传感器,两个红色乐队被TL1和CL积极F1ab-RT-MCDA放大(gydF4y2Ba补充图S1agydF4y2Ba底下一行),TL2和CL积极N-RT-MCDA放大(gydF4y2Ba补充图印地gydF4y2Ba底下一行)。同时红乐队TL1 TL2和CL生物传感器显示的积极结果COVID-19 RT-MCDA放大(gydF4y2Ba补充图就是S1cgydF4y2Ba底下一行)。红带在CL只代表消极和空白控制(gydF4y2Ba补充图S1a-cgydF4y2Ba底下一行)。这些数据表明,F1ab N-MCDA底漆集,和COVID-19 RT-MCDA目标序列检测的检测是可行的。然后,64°C的最佳反应温度COVID-19 RT-MCDA也决定(gydF4y2Ba补充图S2和S3gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
的敏感性COVID-19 RT-MCDA-BS化验gydF4y2Ba
所示gydF4y2Ba图4gydF4y2Ba,COVID-19 RT-MCDA-BS分析可以检测五份F1ab-plasmid或N-plasmid船。值得注意的是,SARS-CoV-2 F1ab和N基因的同时放大一步正确地用自己的引物,单管反应(gydF4y2Ba图4一gydF4y2Ba)。获得的结果gydF4y2Ba通过gydF4y2Ba生物传感器与VDR试剂和实时浊度是一致的,而VDR和实时浊度方法不能实现多个目标检测(gydF4y2Ba图4 bgydF4y2Ba和c)。最重要的是,F1ab——N-RT-MCDA化验还透露的检出限5份目标序列的反应,这是符合COVID-19 RT-MCDA试验(gydF4y2Ba图4gydF4y2Ba和gydF4y2Ba补充图S4和S5gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
所需的最优反应时间COVID-19 RT-MCDA-BS试验在放大阶段进行了测试。模板(5×10级最低gydF4y2Ba0gydF4y2Ba副本F1ab——或N-plasmid显示三个红色的乐队(TL1 TL2和CL)等温反应时进行了25分钟在64°C (gydF4y2Ba补充图S6gydF4y2Ba)。因此,对于临床样本分析,35分钟的反应时间是推荐包括逆转录过程(10分钟)。因此,整个诊断过程的COVID-19 RT-MCDA-BS技术,包括样本收集(3分钟),快速模板制备(15分钟),RT-MCDA反应(35分钟)和结果报告(< 2分钟),可在1 h(完成gydF4y2Ba图5gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
特异性的COVID-19 RT-MCDA-BS化验gydF4y2Ba
covid - 2019 RT-MCDA-BS试验专门检测到积极的控制(包含5×10gydF4y2Ba3gydF4y2Ba每个副本F1ab N-plasmids),而其他目标模板从non-COVID-19病毒、细菌和真菌没有检测到(gydF4y2Ba补充表S2gydF4y2Ba)。这表明covid - 2019 RT-MCDA-BS试验有很好的特异性。gydF4y2Ba
评价COVID-19 RT-MCDA-BS测定在临床样本gydF4y2Ba
65 RNA样本急性期和恢复期的病人,使用rRT-qPCR最初发现在贵州省疾病预防控制中心2020年,测试来验证我们的可行性分析。我们COVID-19 RT-MCDA-BS化验检测22例(33.8%)阳性结果从不同类型的临床标本(gydF4y2Ba如。gydF4y2Ba粪便和鼻,肛交和咽拭子),而rrt - pcr,仅发现20例(30.7%)阳性结果(gydF4y2Ba补充表S3gydF4y2Ba)。数据显示,我们COVID-19 RT-MCDA-BS化验检测COVID-19患者是更强大的,特别是对于那些病毒负荷很低。此外,没有积极的结果从这些样本收集non-COVID-19患者(gydF4y2Ba补充表S4gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
讨论gydF4y2Ba
SARS-CoV-2感染的意外发生在武汉,这部小说人类冠状病毒已经蔓延在中国和其他国家/地区(gydF4y2Ba15gydF4y2Ba]。因此,它是至关重要的发展足够的诊断技术,它可以提供一个简单、快速、可靠和易于使用的策略来检测SARS-CoV-2感染。这种诊断方法不仅需要在COVID-19正在蔓延的国家,而且在国家受到COVID-19的威胁。有效地应对流感大流行,我们成功地设计了一个新颖的方法诊断COVID-19,称为COVID-19 RT-MCDA-BS化验。gydF4y2Ba
的COVID-19 RT-MCDA-BS化验合并反转录,cDNA等温扩增,nano-biosensor和多路检测,实现的快速诊断COVID-19一步,单管反应。极其简单的仪器,如加热块、水浴或甚至一个热水瓶杯,可以保持一个固定的温度为30分钟(64°C),足以让COVID-19 RT-MCDA-BS测试。重要的是,生物传感器提供了一个易于使用的平台,可以客观、直观地表明COVID-19 RT-MCDA结果,并消除了使用特殊的色度指标如电泳和光学设备。整个诊断过程的COVID-19 RT-MCDA-BS,包括临床样本收集(3分钟)、快速模板制备(15分钟),等温扩增(35分钟)和结果报告(2分钟内),可以在1小时内完成。,COVID-19 RT-MCDA-BS是一种经济、快速、简单的方法,它提供了一种实用的测量“现场”,领域和临床设置,尤其是对经济贫困的地区。gydF4y2Ba
F1ab-MCDA和N-MCDA底漆集设计,针对10地区F1ab和N基因,分别,确保高选择性COVID-19诊断。特异性分析表明COVID-19 RT-MCDA-BS可以正确诊断没有假阳性结果的目标病原体从non-SARS-CoV-2观察模板,包括细菌、真菌和病毒基因组模板(gydF4y2Ba补充表S2gydF4y2Ba)。此外,COVID-19 RT-MCDA-BS可以同时检测两个目标基因(F1ab和N)一步等温反应,确保COVID-19诊断的可靠性,消除假阳性或假阴性结果的概率是其他COVID-19诊断方法相比,只有检测单个分子标记(gydF4y2Ba如。gydF4y2BaF1ab生物标记)。gydF4y2Ba
检测极限分析表明COVID-19 RT-MCDA-BS敏感可靠检测的目标序列。的敏感性COVID-19 RT-MCDA-BS很高和纯质粒模板到5份(每个F1ab-plasimd或N-plasmid)反应,完全按照检测结果从F1ab-RT-MCDA-BS N-RT-MCDA-BS化验(gydF4y2Ba图4gydF4y2Ba和gydF4y2Ba补充图S4和S5gydF4y2Ba)。相比singlex F1ab-RT-MCDA-BS N-RT-MCDA-BS化验,COVID-19 RT-MCDA-BS没有显示降低或提高分析灵敏度。gydF4y2Ba
65 RNA样品分离粪便和鼻,肛交和咽拭COVID-19患者检查证明临床试验的可行性。数据表明,COVID-19 RT-MCDA-BS试验能够分析不同类型的临床样本(gydF4y2Ba补充表S3gydF4y2Ba)。22 RNA阳性样本根据COVID-19 RT-MCDA-BS,而只有20 RNA样本显示积极的rrt - pcr在贵州省疾病预防控制中心。研究结果表明我们COVID-19 RT-MCDA-BS化验检测COVID-19患者是更强大的,特别是那些与病毒负荷很低(gydF4y2Ba补充表S3gydF4y2Ba)。降低诊断的rrt - pcr可能解释为抑制剂的存在,特别是影响rrt - pcr分析,或低拷贝数SARS-CoV-2 RNA模板,rrt - pcr分析方法的检出限。此外,等温amplification-based化验,包括MCDA-based方法(gydF4y2Ba如。gydF4y2BaRT-MCDA-BS测试),不太敏感的各种抑制剂,或影响较小的各种样品缓冲盐,或可以容忍大量的核酸的抑制作用[gydF4y2Ba16gydF4y2Ba]。尤其是,没有积极的结果从non-COVID-19样本,这进一步验证了分析的特异性COVID-19 RT-MCDA-BS化验。gydF4y2Ba
结论gydF4y2Ba
我们设计了一个方法(COVID-19 RT-MCDA-BS)诊断COVID-19使用逆转录多路检测和等温扩增加上nanoparticle-based生物传感器。我们的数据表明,COVID-19 RT-MCDA-BS高度特异、敏感的诊断分析,并可以作为一个有吸引力的实验室诊断工具COVID-19在不同类型的临床标本。的诊断测试COVID-19 RT-MCDA-BS可能在1 h,完成,不依赖昂贵的试剂和仪器。集体,它的速度,低成本和易用性使COVID-19 RT-MCDA-BS方法理想工具用于字段中,初级保健和临床实验室,特别是在资源贫乏的环境中。gydF4y2Ba
补充材料gydF4y2Ba
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请注意:gydF4y2Ba补充材料并不是由编辑部,编辑和上传已由作者提供。gydF4y2Ba
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确认gydF4y2Ba
我们要感谢朝阳(HSS研究所特种外科医院,威尔康奈尔医学,纽约,纽约,美国)的语言帮助在这个手稿的修改。gydF4y2Ba
脚注gydF4y2Ba
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作者的贡献:易建联王先生和李广州市的构思和设计研究。广州市李Weijia江、黄Junfei刘英,Lijuan任,李庄,Qinni郑,明王、鲁伊·杨,曾易和彝语王做了实验。广州市李Weijia江、黄Junfei和彝语王分析数据。广州市李Weijia江、黄Junfei刘英,Lijuan任,李庄,Qinni郑,明王,鲁伊·杨和易建联曾造成试剂和分析工具。广州市李Weijia江、黄Junfei Lijuan任,李庄,Qinni郑,明王、鲁伊·杨和彝语曾庆红贡献的材料。易王软件进行。Shijung李和彝语王起草了手稿。易王修订后的手稿。gydF4y2Ba
利益冲突:美国没有披露。gydF4y2Ba
利益冲突:w .江泽民没有披露。gydF4y2Ba
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利益冲突:r·杨没有披露。gydF4y2Ba
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利益冲突:y王没有披露。gydF4y2Ba
支持声明:本研究是由他支持计划[2020]4 y182钱,钱他人才平台[2018]-5606年,由他[2016]-4021号,钱钱他从科技平台[2018]-5767号贵州。资金信息,本文已沉积的gydF4y2BaCrossref资助者注册表gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
- 收到了gydF4y2Ba2020年3月25日。gydF4y2Ba
- 接受gydF4y2Ba2020年8月14日。gydF4y2Ba
- 版权©2020人队gydF4y2Ba
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