文摘
极易在脓毒症肺,但其功能恶化伴有肺微循环障碍是知之甚少。本研究旨在探讨肺微循环是如何扭曲在sepsis-induced急性肺损伤(ALI)和揭示底层细胞病理生理机制。
使用一个定制的活体的肺显微成像系统在小鼠模型的sepsis-induced阿里,我们实现了直接肺微循环和循环细胞的实时可视化在活的有机体内。我们导出功能毛细管比(货代)作为定量参数的评估功能微脉管系统的一部分肺微循环和死腔。
我们确认,货代迅速减少sepsis-induced阿里的早期阶段。活体的成像显示,这减少了从死亡的生成空间,由长期诱导中性粒细胞毛细血管内的圈套。我们进一步表明,中性粒细胞有一段封存的时间和一个arrest-like动态行为,这两种触发中性粒细胞聚集在毛细血管和小动脉。最后,我们发现Mac-1 (CD11b / CD18)在隔离调节中性粒细胞,Mac-1抑制剂恢复了货代和改善低氧血。
使用活体的肺部成像系统,我们观察到Mac-1-upregulated中性粒细胞聚集导致的代死腔肺微循环恢复的sepsis-induced阿里Mac-1抑制剂。
文摘
中性粒细胞诱导肺微循环的死腔sepsis-induced阿里,恢复Mac-1抑制剂http://ow.ly/vUzO30nbUyU
介绍
脓毒症是一种最难以承受的住院条件和医院死亡的最重要的贡献者,代表一个主要全球卫生负担(1,2]。脓毒症是一种综合征的特点是响应主机入侵病原体的特异表达,包括血液动力学的改变导致多种致命器官障碍(3,4]。在受伤的器官,肺是第一步,也是最频繁的器官失败。伴随急性呼吸窘迫综合征(ARDS)的临床术语对急性肺损伤(ALI),是最重要的预后因素之一为脓毒症患者的死亡率(5]。尽管激烈的研究工作旨在治疗sepsis-induced ARDS,肺的通气策略仍然是一个主要的治疗方法,也没有有效的治疗方法针对微循环直接改善ARDS的可用ventilation-perfusion不匹配(6]。尽管“死角”评估可以在ARDS[提供重要的临床价值6,7),到目前为止它一直提出损伤肺肺泡灌注通风而不是。诚然,ARDS是知之甚少综合症对肺损伤之间的关系和微循环6,8]。最近,一项研究报告的证据在肺血管血栓,但结果是有限的,因为这是一个体外研究;的在活的有机体内过程中中性粒细胞肺微循环的涌入和随之而来的干扰仍调查(9,10]。
不受监管的招聘和激活中性粒细胞可能引起器官损伤的炎症介质的释放,包括细胞因子和活性氧(ROS) (11,12]。然而,我们的知识在中性粒细胞在肺微循环的详细动态行为主要是限于猜测从观测的体循环(13]。因为中性粒细胞的直径大于肺毛细血管,中性粒细胞必须变形通过毛细血管,这是一个相对耗时的过程(14]。这一过程,称为中性粒细胞封存,最初被描述为细胞以外的自由循环组中性粒细胞在肺和被观察到,在某种程度上,使用宏观radiolabelling成像设备(15]。先前的研究已经证明中性粒细胞在肺毛细血管封存;然而,中性粒细胞封存事件的机制导致ARDS是未知的(16,17]。考虑到重要性和默默无闻的肺微循环在ARDS,当务之急是我们理解发生在肺微循环的改变,包括中性粒细胞的动态行为,阐明病理生理学;这可能会导致新的治疗策略对于sepsis-induced ARDS [18]。
探讨肺微循环sepsis-induced ARDS,我们使用了一个定制的video-rate激光扫描共焦显微镜结合microsuction-based肺部成像窗口(19,20.]。直接使用活体的肺部成像系统,我们确定的变更microcirculatory灌注在鼠sepsis-induced ALI模型,证明了Mac-1-upregulated中性粒细胞在肺微循环的作用,这表明Mac-1抑制剂的临床潜力作为sepsis-induced阿里的治疗药物。
材料和方法
老鼠
动物实验都是按照标准进行实验动物保健和使用指南和被批准的机构动物保健和使用委员会(IACUC)韩国先进科学与技术研究院(协议号KA2014-30和KA2016-55)。所有老鼠都是单独住在通风、温度和湿度的笼子里(22.5°C, 52.5%)下十二12 h:黑暗周期和提供标准饮食和水随意。实验使用,8-20-week-old雄性老鼠(20 - 30 g)被用于这项研究。n C57BL / 6小鼠从OrientBio购买(水、韩国)。Tie2-GFP老鼠,绿色荧光蛋白(GFP)表达在endothelium-specific Tie2启动子,从杰克逊实验室(购买股票。003658;杰克逊实验室,巴尔港,我,美国)。LysMGFP / +老鼠慷慨提供的m·金教授(美国罗切斯特大学,罗切斯特,纽约)。
动物模型
生成sepsis-induced ALI模型(12),高剂量脂多糖(LPS)(10毫克公斤−1,大肠杆菌血清型055:B5, L2880;Sigma-Aldrich,圣路易斯,密苏里州,美国)或高档盲肠的结扎和穿刺(CLP)模型是利用。提供的细节补充材料。
荧光染料和抗体利用活体的成像
在活的有机体内标签的红细胞,血管,中性粒细胞(Ly6G) CD11b, CD18, dihydroethidium(她)和中性粒细胞枯竭和造型Mac-1抑制治疗是所描述的补充材料。
流式细胞术、组织学分析和动脉血气分析
提供的细节补充材料。
成像系统和活体的肺部成像
想象在活的有机体内通过肺肺微循环图像窗口中,一个定制的video-rate激光扫描共焦显微镜系统实施(21,22]。额外的成像系统的细节和鼠标的准备活体的肺部成像提供了补充材料。
图像处理
毛细管功能成像分析使用一个实时的视频DiD-labelled红细胞流入毛细血管。分割视频的颜色后,通道检测的序列图像处理与半径中值滤波器的两个像素提高信噪比。600 - 900帧的最大强度投影(20 - 30 s)显示功能生成毛细血管灌注红细胞。功能性毛细管比率(货代)是由计算功能毛细管面积之比(DiD-labelled红细胞)毛细管总面积(船区域检测到Tie2或葡聚糖信号)。所有图像处理计算货代是由ImageJ (https://imagej.nih.gov/ij/)。与三维重建图像渲染,跟踪分析红细胞、中性粒细胞和策划跟踪位移进行了使用伊万里瓷器8.2 (Bitplane、苏黎世、瑞士)。的图像处理提供了更多的细节补充材料。
统计分析
所有数据都意味着±sd或中位数(四分位范围),适当的代表群体的价值观。统计差异意味着或中位数由未配对的双尾t, Mann-Whitney测试,单向方差分析事后Holm-Sidak多个比较或克鲁斯卡尔-沃利斯测试事后邓恩的多重比较测试,是适当的。统计学意义是p < 0.05, 6.0和分析棱镜(GraphPad、圣地亚哥、钙、美国)。
结果
货物在肺微循环在sepsis-induced阿里却降低了
肺微循环的细胞动力学研究在活的有机体内在老鼠身上使用定制的活体的video-rate激光扫描共焦显微镜系统[19,20.]。红细胞被采样Tie2-GFP转基因供体老鼠心脏穿刺。标签后,过继转移到一个执行syngenic受体小鼠尾静脉(图1一个)[23]。实时快速流动DiD-labelled红细胞是清晰可见的肺血管内皮细胞内与GFP标记,使时空信息的采集个人红细胞的流动轨迹和速度(图1 b)。收购的跟踪信息在活的有机体内同时对多个红细胞和分析(图1 c和补充视频S1)。
接下来,我们使用一个小鼠endotoxin-induced间接肺损伤模型研究红细胞的变化在肺微循环流脓毒症(12]。活体的肺部成像进行管理后6 h 10毫克公斤−1腹腔内的有限合伙人,使用DiD-labelled红细胞注射在成像。尽管没有发现显著差异之间的红细胞平均速度的控制和LPS组(图1 d),红细胞LPS-treated小鼠灌注模式极大地改变了(补充视频S2)。确定和量化灌注区域,红细胞在600年连续图像帧(20岁)提出了以最大强度投影的方式(补充图S1a, b)。对照组表现出广泛的灌注和弥散特性,而分布的灌注LPS-treated老鼠更集中和重叠与小动脉和毛细血管(图1 e)。
货代然后我们定义了参数的定量测量肺微循环,从功能毛细管的比值计算区域,由红细胞轨迹(,红色)的毛细管总面积(Tie2、绿色)。代表异常灌注,减少货物在sepsis-induced阿里集团虽然没有大的差异在毛细管总面积(图1 fg)。此外,我们的货代确认结果对应于低氧血和血碳酸过多症在左心室动脉血气分析(图1 h,我)12]。
裹入中性粒细胞在肺毛细血管引起microcirculatory sepsis-induced阿里的干扰
在货代在sepsis-induced阿里成像测量老鼠,我们观察到几个地点的毛细管阻力放大视图。这些障碍引起的毛细血管内对象,可能代表的主要病理生理机制减少货代在阿里发展的早期阶段。因为中性粒细胞迅速应对系统性炎症,我们假定对象引起的阻塞可能是中性粒细胞(13]。实时活体成像的天真LysM肺毛细血管GFP / +动物显示瞬时截留的中性粒细胞在毛细循环(图2一个和补充视频S3)[24,25]。期间的毛细血管阻塞,循环细胞,假定为以红细胞为主,不能流经毛细血管。然而,毛细管流恢复后中性粒细胞通过毛细血管。相比之下,在sepsis-induced ALI模型的小鼠中性粒细胞招募增强,细胞肺微循环的流动被打断在许多地点(图2 b,c和补充视频S4)。因此,在早期炎症,先天免疫细胞招募时,我们发现中性粒细胞作为主要在肺毛细血管的微循环障碍。
血管内中性粒细胞活性最初增加然后减少逮捕在sepsis-induced阿里的早期发展
调查的动态行为个体中性粒细胞在滞留在肺毛细血管,我们进行了30分钟的延时成像的中性粒细胞在肺微循环3 h和LPS后6 h管理局(图3一、b、补充视频S5)。鉴于红细胞的流速很高(> 500µm·s−1),我们认为,中性粒细胞,发现连续超过2分钟没有流动;相反,他们被隔离(即。爬行或内部有边缘的船)。延时成像显示,幽静的中性粒细胞的比例,以及个人封存乘以LPS组,极大地提高了PBS对照组相比,大多数的中性粒细胞在隔离短暂(图3 cd)。有趣的是,在封存,3 h有限合伙人中性粒细胞的活性增加,由跟踪位移长度(图3 b,e),轨道长度(图3 f)和平均速度(图3 g)。然而,随着脓毒症的进展,6 h有限合伙人中性粒细胞能动的越来越少,而轨道长度和速度降低了。此外,蜿蜒的及时指数下降,被封存的时间和增加逮捕影响特征的中性粒细胞(图3 h)。综上所述,这些数据表明,在早期endotoxin-induced阿里,中性粒细胞开始激活和毛细血管内成为能动的;然而,在后期,他们逐渐开始逮捕毛细血管内。
中性粒细胞阻碍肺血管生成循环死腔和释放活性氧原位在sepsis-induced阿里
使用肺微循环活体成像的3 - 6 h有限合伙人管理后,我们观察到第一次死腔形成的整个过程中肺微循环。在毛细血管循环嗜中性粒细胞被困的船的一边另一边已经由另一个中性粒细胞阻塞,所显示的实时成像(图4一和补充视频S6)。两者之间的流动停止中性粒细胞,从而生成一个循环死腔。在一些毛细管网站,我们观察到集群的中性粒细胞没有流检测(补充图S2a)。这样的障碍并不局限于毛细血管,但也观察到的小动脉的分支区域连接到毛细血管(补充图开通,c)。在10分钟的延时活体的成像,我们观察到中性粒细胞迅速封锁了分支网站和干扰附近的微循环阻塞区域(图4 b和补充视频S7)。确认相关的嗜中性粒细胞封存和死腔形成,我们注入DiD-labelled红细胞和视觉功能毛细管(图4 c和补充视频S8)。功能性毛细管映射和跟踪路径分析表明,neutrophil-induced毛细血管和小动脉阻塞产生循环死腔。
识别功能和裹入中性粒细胞的激活,我们研究了隔离ROS生产中性粒细胞。使用我们的活体的成像系统,我们发现ROS生成血管内中性粒细胞在肺原位(图4 d)[26]。与对照组相比,中ROS在瞬变隔离中性粒细胞察觉,ROS-generating中性粒细胞的数量和比例都大大增加LPS-treated老鼠(图4 ef)。与之前理解的ROS生产中性粒细胞炎症(网站的27),我们的研究表明,活性氧产量开始在更早的阶段,因为发展的中性粒细胞在毛细管截留。这些发现也暗示裹入中性粒细胞释放活性氧原位,这可能会损害内皮细胞和血管内相邻结构外渗。
中性粒细胞损耗提高肺微循环在sepsis-induced阿里
进一步确认中性粒细胞的重要作用在毛细管封锁,我们调查了肺微循环neutrophil-depleted (N-dep)小鼠模型。注入200µg Ly6G-specific单克隆抗体(1 a8) 24小时前成像导致中性粒细胞减少(补充图S3)[28]。使用抗体,中性粒细胞在LysM耗尽GFP / +小鼠注射LPS前24小时,然后进行活体成像后6 h有限合伙人注入(图5一个)。与我们的假设一致,中性粒细胞消耗提高了货代有限合伙人治疗组;这是反复验证了放大成像(图5 b,c和补充视频S9)。LysM +细胞的数量减少到一定程度后中性粒细胞减少,但没有完全枯竭,因为残余LysM +细胞(图5 d),这是肺泡巨噬细胞在血管外的空间(图5 b,放大)24,25]。然而,我们的研究结果表明,LysM +细胞数量减少,主要是血管内中性粒细胞,导致肺微循环改善货代(图5 d)。这些数据支持一种观点,即中性粒细胞功能的主要组件聚集和流动的主要受体阻滞剂肺微循环在系统性炎症。
Mac-1-upregulated sepsis-induced阿里的中性粒细胞在肺隔离
尽管嗜中性粒细胞损耗增加了货代,实验到临床临床中性粒细胞减少的翻译策略是不可行的13]。因此,确定一个目标的中性粒细胞的子集,我们孤立在一个鼠标两组中性粒细胞(图6)。我们假设中性粒细胞在左心室,它已经通过肺毛细血管,将整合素表达模式不同于中性粒细胞在肺,封存发生的地方。流式细胞术进行了两组中性粒细胞封闭的Ly6G +调查他们的整合素表达(图6 b和补充图S4)。我们发现基线表达式CD11b和CD18调节中性粒细胞在LPS组。有趣的是,在相同的鼠标,中性粒细胞在肺表达高水平的CD11b和CD18比左心室的中性粒细胞(图6 c- f)。活体的肺部成像(图6克h)证实,中性粒细胞在肺隔离有限合伙人老鼠表达高水平的CD11b CD18,同意我们的流式细胞术结果(图6我- l)。因此,循环相比,中性粒细胞,中性粒细胞在肺隔离调节表达Mac-1 (CD11b / CD18)整合蛋白sepsis-induced ALI模型。
Mac-1抑制剂恢复肺微循环的货代在sepsis-induced阿里
鉴于Mac-1调节中性粒细胞在肺隔离,我们调查了Mac-1抑制剂的肺微循环的影响。脓毒症模型来扩展我们的发现一个幼童腹壁薄弱,我们进行了活体的肺部成像CLP小鼠模型。作为有限合伙人模型中,货代在CLP显著降低小鼠模型比控制(图7,b)。管理一个anti-CD11b抗体(5毫克·公斤−1腹腔内)(29日)和abciximab (10 mg·公斤−1腹腔内)(30.- - - - - -32可交叉反应的抑制剂),各种配体的结合Mac-1,恢复了货代少封存Ly6G +细胞(图7 c)。进一步证实我们的发现,货代是计算在同一站点和注射后显著增加abciximab (10 mg·公斤−1、静脉)(图7 d、e和补充视频S10)。在左心室动脉血气分析证实货物按照低氧血和血碳酸过多症,结果表明abciximab增加气体交换在这个sepsis-induced阿里小鼠模型通过改善微循环(图7 fg)。此外,肺部水肿24 h后的损伤明显改善Mac-1抑制剂模型,按照先前的结果(补充图S5)。
讨论
尽管全身和肺毛细血管网络之间的差异,我们的大多数知识微循环的脓毒症来自体循环的研究,与降低毛细血管密度和增加intercapillary功能区(33]。虽然我们在脓毒症肺微循环的研究部分同意从体循环发现,潜在的病因学microcirculatory变化是不同于体循环。内皮功能障碍和血管收缩曾被认为是潜在的中央机制受损全身微循环(34]。我们的研究结果表明,集群形成的招募中性粒细胞在肺微循环也有一个关键的不利作用的早期sepsis-induced阿里。
尽管先前的研究已经表明,封存在肺毛细血管功能作为一个防御免疫监视系统来检测病原体的循环,这并不说明嗜中性粒细胞封存进展ARDS (14,35]。相比之下,我们的研究表明,中性粒细胞形成集群和阻碍毛细血管和小动脉,导致肺微循环的再分配和妨碍,凸显了小说的中性粒细胞的作用。最近,有研究显示集群的中性粒细胞在肺活检在肺血管ARDS患者(10和小鼠真菌败血症36),支持我们的结果对中性粒细胞的聚集形成。neutrophil-induced妨碍流动增加了失配的通气和灌注,从而加剧缺氧由于sepsis-induced ARDS。相比以前的活体成像研究中性粒细胞的粘附在肺毛细血管37,38),我们的研究明确显示了死亡空间ventilation-perfusion不匹配是由中性粒细胞在微循环中创建。此外,我们可以直接形象死腔分数,据估计间接通过动脉的分压的差异与使用体积capnography呼出二氧化碳。
虽然我们的研究结果表明,中性粒细胞减少改善肺循环,有相当大的影响的争论treatment-induced中性粒细胞损耗在脓毒症,因为影响细菌清除率和全身炎症反应尚不清楚39]。因此,我们评估了分组人口可能改善肺损伤的中性粒细胞(40]。流式细胞仪显示Mac-1 (CD11b / CD18),这与ICAM-1内皮细胞和各种凝血因子,显著调节隔离中性粒细胞在肺从ALI模型。Mac-1可能,因此,是一个潜在的目标整合素改善肺微循环。先前的研究已经调查的角色L-selectin和CD11 / CD18中性粒细胞封存和显示没有所需的初始立即封存在1分钟内发生肺毛细血管。然而,一旦中性粒细胞被隔离,L-selectin和CD11 / CD18关键的依从性毛细血管床超过4 - 7分钟内中性粒细胞(14,41]。此外,一些研究表明,抑制Mac-1作为治疗预防中性粒细胞浸润在脓毒症肺损伤(42,43]。与间接分析利用在先前的研究中,我们的研究使用实时活体的显微成像表明,抑制Mac-1减少中性粒细胞封存,从阿里增加货物和提供保护。然而,最近的一项研究报道neutrophil-platelet交互在肺血管血栓形成(10,44),引发担忧:血小板血栓可能混杂效应以及是否abciximab的影响,也称为糖蛋白IIb / iii a抑制剂,是血栓决议由于与血小板的相互作用的结果。可能有血小板不确定在我们的研究中;然而,大多数的流干扰我们观察到被中性粒细胞减少解决。这意味着中性粒细胞增加集群的形成有重要作用在肺毛细血管sepsis-induced阿里(36]。此外,因为我们发现anti-CD11b和abciximab引起等效改善货物收据,abciximab的影响似乎可以归因于对中性粒细胞的anti-Mac-1活动。然而,由于血小板成像的不可用,我们无法确定的参与血小板的形成集群之间的桥接中性粒细胞嗜中性粒细胞。因此,我们不能排除abciximab瞄准的附加效应不仅嗜中性粒细胞通过CD11b也是血小板糖蛋白IIb / iii a。应该执行额外的活体的肺部成像进一步阐明neutrophil-platelet血栓形成在活的有机体内更好地了解有关肺血管病理生理学和随后的分子靶点。此外,abciximab的优势已经被美国食品和药物管理局批准用于在冠状动脉介入以防止血栓形成,这让我们的学习更接近临床领域。
总之,使用定制的实时活体的肺显微成像系统启用直接可视化的长期中性粒细胞截留在毛细血管sepsis-induced阿里在老鼠身上。由此产生的扰动流在肺微循环与死亡空间。这一发现提供了新颖的见解如何毛细管截留的中性粒细胞有助于肺microcirculatory干扰。该系统可以作为一个有用的工具为研究疾病影响肺微循环和可以用来评估潜在治疗sepsis-induced ARDS。
补充材料
补充材料
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补充材料和数据。erj - 00786 - 2018. -补充
补充视频S1。实时活体的成像在肺微循环DiD-labeled红细胞。DiD-labelled红细胞是过继转移到Tie2-GFP鼠标通过尾静脉(图1一个)。实时活体的肺部成像的红细胞(红色)在肺微脉管系统(Tie2、绿色)进行跟踪单个红细胞流动和获得跟踪信息,包括长度和速度。颜色条代表了红细胞的轨道的平均速度(0 - 1500μm /秒)。这个视频对应图1 c。比例尺描述了视频和时间标记为H: MM: SS。SSS(小时:分钟:秒)。erj - 00786 - 2018. - supplementary_movie_s1
补充视频S2。降低肺微循环的功能毛细管比sepsis-induced ALI模型。DiD-labeled红细胞是过继转移到Tie2-GFP鼠标通过尾静脉。实时活体的肺部成像的红细胞(红色)在肺微脉管系统(Tie2、绿色)中执行Tie2-GFP老鼠收到腹腔内PBS或有限合伙人成像前6小时。毛细管功能成像分析确定的分布在肺微循环灌注,对应图1 e。时间和规模的酒吧,50μm被标记为MM: SS(分:秒)。erj - 00786 - 2018. - supplementary_movie_s2
补充视频S3。中性粒细胞截留在毛细管扰乱流。咯右旋糖酐(红色)的尾静脉注射的是天真LysMGFP / +鼠标,和活体的肺部成像进行想象颞中性粒细胞封存和顺向毛细管流。在中性粒细胞诱捕瞬变流动干扰检测。这个视频对应图2一个。比例尺,10μm和时间被标记为秒。erj - 00786 - 2018. - supplementary_movie_s3
补充视频S4。增加中性粒细胞诱捕诱发毛细血管阻塞sepsis-induced ALI模型。实时活体的肺部成像C57BL / 6 n小鼠进行腹腔注射LPS后6 h。嗜中性粒细胞(Ly6G红色)被确认在肺毛细血管内,和随后的流扰动的毛细管(FITC右旋糖酐,绿色)被发现在相应的区域。这个视频对应图2 b。时间和规模的酒吧,20μm被标记为MM: SS(分:秒)。erj - 00786 - 2018. - supplementary_movie_s4
补充视频S5。变更的中性粒细胞动力学sepsis-induced ALI模型。30分钟1分钟的时间间隔活体的C57BL / 6 n小鼠肺部成像监控动态执行中性粒细胞在PBS行为,有限合伙人3 h,有限合伙人6 h组。视频由原始视频中,中性粒细胞跟踪和视频合并。嗜中性粒细胞动力学(Ly6G、红色)肺血管(FITC右旋糖酐,绿色)是确定的,和个人的轨迹中性粒细胞是形象化。颜色条代表的获得时间的轨道红细胞(0 30分钟)。这个视频对应图3一。比例尺描述了视频和时间标记为H: MM: SS。SSS(小时:分钟:秒)。erj - 00786 - 2018. - supplementary_movie_s5
补充视频S6。中性粒细胞块毛细管和触发器死腔形成sepsis-induced ALI模型。实时活体的肺部成像C57BL / 6 n小鼠进行腹腔注射LPS后6 h。5 s视频中,中性粒细胞(Ly6G、红色)捕获船的一边(FITC右旋糖酐,绿色),而其他方面曾与多个中性粒细胞阻塞。从5到35秒的视频中,中性粒细胞仍滞留在毛细管的,和不确定两个中性粒细胞之间流动。这个视频对应图4一。规模的酒吧,20μm和时间被标记为秒。erj - 00786 - 2018. - supplementary_movie_s6
S7补充视频。中性粒细胞产生集群的形成原位在小动脉sepsis-induced ALI模型。延时活体的肺部成像进行腹腔注射LPS后6 h。10分钟的视频中,中性粒细胞的整个过程(Ly6G,红色)集群的形成原位视觉效果的瓶颈区域小动脉导致毛细管(FITC右旋糖酐、绿色)。这个视频对应图4 b。时间和规模的酒吧,20μm被标记为MM: SS。erj - 00786 - 2018. - supplementary_movie_s7
S8补充视频。毛细管和小动脉阻塞的中性粒细胞聚集诱导死腔形成sepsis-induced ALI模型。实时活体的肺部成像进行腹腔注射LPS后6 h,或者DiD-labeled红细胞在活体的成像。视频由原来的视频(左),跟踪路径分析(中间),和功能性毛细管(右)。跟踪路径分析和累积毛细管功能成像处理与原视频描述灌注区。30年代的视频中,红细胞(,红色)没有被观察到在毛细血管和小动脉灌注(FITC右旋糖酐,绿色),中性粒细胞(Ly6G,洋红色)总了。这个视频对应图4 c。比例尺描述了视频和时间标记为H: MM: SS。SSS(左边,中间)或毫米:SS(右)。erj - 00786 - 2018. - supplementary_movie_s8
补充视频S9。损耗的嗜中性粒细胞增加肺微循环的货代。实时活体的肺部成像进行治疗后6 h在PBS PBS或有限合伙人,有限合伙人,N-Dep, N-Dep + LPS组。肺毛细管流(FITC右旋糖酐,绿色)及其扰动引起的中性粒细胞(Ly6G,红色)。主要从事微循环障碍PBS组相比,被发现在LPS组N-Dep和N-Dep + LPS组显示显著改善肺微循环,这对应于货代成像结果。这个视频对应图5 b。规模的酒吧,20μm和时间被标记为秒。erj - 00786 - 2018. - supplementary_movie_s9
S10补充视频。Abciximab改善肺微循环sepsis-induced ALI模型。活体的肺部成像进行腹腔注射LPS后6 h。Abciximab(10毫克/公斤,(四)注射后30年代1 s区间延时累积毛细管功能成像(Pre-abciximab), 30分钟后,其他类似功能性毛细管成像(Post-abciximab)收购调查Abciximab在肺微循环的影响。在肺微循环功能毛细管(红色)(FITC右旋糖酐,绿色)abciximab政府后明显增加。这个视频对应图7 d。时间和规模的酒吧,50μm被标记为MM: SS。erj - 00786 - 2018. - supplementary_movie_s10
确认
作者感谢Seonghye金姆(SNUBH)她在校订的实验技术援助。作者还要感谢Soyeon安,Jieun月亮,Eunji香港、神宫李Ryul金姆和Sujung香港(韩科院)建议和有益的讨论;和秀云李和Haeun金(韩科院)的技术援助。
脚注
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支持声明:本研究得到了健康奖学金基金会和全球博士奖学金项目(NRF - 2015 h1a2a1030717)韩国国家研究基金会(NRF)由教育部、韩国;全球前沿项目(nrf - 2013 m3a6a4044716),基础研究项目(nrf - 2017 r1e1a1a01074190)由科技部和ICT,韩国;和韩国医疗技术研发项目(HI15C0399)由卫生部和福利,韩国。资金信息,本文已沉积的Crossref资助者注册表。
- 收到了2018年4月26日。
- 接受2018年12月27日。
- 版权©2019人队
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