文摘
我们的目标是描述微生物群在囊性纤维化(CF)支气管肺泡灌洗液(BALF),并确定其与炎症和疾病的关系状态。
儿科和成人CF患者BALF和儿科疾病临床上控制进行分析了支气管镜检查的总细菌负荷和16 s rDNA测序的微生物群。
我们检查了191份BALF样本(146 CF和45疾病控制)来自13个CF中心。CF患者年龄< 2年,非传统类群(如。链球菌,普氏菌和韦永氏球菌属)构成了∼50%的微生物群,而在CF患者年龄≥6年,传统CF类群(如。假单胞菌,葡萄球菌和Stenotrophomonas)成为主流。测序检测到一个占主导地位的分类单元不是传统上与CF (如。链球菌或普氏菌)在20%的CF BALF和识别细菌在24%的culture-negative BALF。微生物多样性和相对丰富的链球菌,普氏菌和韦永氏球菌属与气道炎症成负相关。微生物群社区在CF与不同的疾病控制,但没有基于CF肺恶化状态不同。
CF微生物群BALF中发现随着年龄的不同。CF患者年龄< 2年,链球菌主导的,而经典的CF病原体在大多数年龄较大的儿童和成年人占主导地位。
文摘
细菌类群在囊性纤维化发现支气管肺泡灌洗液相差年龄和炎症反应http://ow.ly/2uV230eFA0W
介绍
进步肺部疾病继发于慢性呼吸道感染和炎症的发病率和死亡率的主要原因是囊性纤维化(CF) [1]。铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌连同其他革兰氏阴性细菌(如。伯克不过复杂的,Stenotrophomonas maltophilia和无色菌仕达屋优先计划。从CF)是最频繁的病原体培养气道样品和与肺有关下降(2]。分子测序方法扩大了这一传统观点的呼吸道感染(3- - - - - -9]。CF痰样本目前已知包含复杂的细菌群落,包括兼性和专性厌氧生物10- - - - - -12]。区分病原菌导致呼吸道疾病和共生微生物群痰已经证明具有挑战性和测序结果的临床应用仍是一个障碍13,14]。
支气管镜检查和支气管肺泡灌洗液(BALF)集合允许降低呼吸道病原体的识别,同时限制上呼吸道污染样品。然而,支气管镜检查不推荐常规监测的CF由于需要镇静/麻醉和缺乏证据表明其使用改善的结果(15,16]。大多数微生物监测CF在美国是通过nonexpectorating患者的痰集合或口咽拭子。支气管镜检查通常是保留给感染的病人被怀疑,但没有确定口咽或痰液样本,当呼吸道症状持续,尽管治疗,或另一个外科手术麻醉的时候(如。窦或胃肠道手术)[17,18]。
BALF的分子分析标本在其他条件,包括哮喘、慢性阻塞性肺疾病、健康的吸烟者,艾滋病毒感染和间质性肺疾病,已经确定了一个较低的呼吸道微生物群不同于上呼吸道细菌(尽管有重叠)19- - - - - -22]。小,只有对CF BALF微生物群的研究发现典型的CF病原体和厌氧细菌23,24]。更大规模的研究较低的CF患者在年龄和疾病的气道BALF样本光谱缺乏,和数据链接微生物群,临床特点及气道炎症是有限的。
解决这些漏洞,我们收集了来自不同群体的CF患者BALF经历一场临床显示支气管镜检查13 CF中心在美国。BALF样本non-CF疾病控制协调网站收集。测序数据与标准文化相比,微生物群之间的关系,BALF细胞学测定和临床特征。本研究初步结果已经之前报道以抽象的形式(25]。
材料和方法
研究设计和主题
CF患者来自13个CF的在美国和疾病控制中心协调网站(科罗拉多州儿童医院(CHCO),极光,有限公司,美国当时招募临床显示支气管镜检查。CF患者(2个月50岁)至少有0.2毫升遗迹BALF剩余后临床试验都有资格参加。接受临床儿科患者支气管镜检查显示除了CF被招募为疾病控制。这个研究机构审查委员会批准的在每个站点。书面知情同意和健康保险流通与责任法案(1996年健康保险携带和责任法案》)获得授权从所有的病人年龄≥18年或父母或法定监护人的病人年龄< 18年。同意了从病人- 17岁。临床数据的支气管镜检查和西雅图肺恶化得分(PES)对CF患者(26)都进入到一个安全的、基于web的电子数据库(搬运工)27]。参与者与CF被归类为1)临床稳定,定义为没有报道呼吸道症状和PES < 5 (如。BALF集合执行并发手术),2)肺恶化,定义为呼吸道症状导致支气管镜检查,肺恶化对治疗或PES≥5或3)未知。
标本采集和处理
支气管镜检查和BALF收集每个网站的标准临床过程后进行。大多数的程序进行使用喉罩通气或气管内管,最小化上呼吸道污染。标准BALF文化,包括细菌、真菌复合菌群和非结核分枝杆菌的文化,是由当地临床微生物实验室按照CF基础指南(28),细胞计数和差异表现和记录在本地显示时由监督医生决定。残余BALF(1毫升)在cryovials整除,冷冻1小时内的集合在−70°C。研究样本收集在一夜之间,参与网站被batch-shipped CHCO干冰。
实验室化验
DNA提取和定量PCR
提取DNA进行0.2μL BALF使用试剂盒EZ1先进的自动提取平台(美国试剂盒,瓦伦西亚,CA)。总细菌负荷(台)测量使用定量实时PCR试验(29日]。稀释系数应用于结果转换为基因拷贝/毫升。试剂控制进行分析,以确定细菌负荷和背景估计的极限检测(LOD;定义为指的是台控制+ (3.3×sd控制))(资源分析。台值低于LOD记录,但LOD相关数据所示。
测序
细菌的概要文件是由广泛的扩增和序列分析16 s rDNA在之前的出版物(之前的描述方法和验证后30.- - - - - -35]。使用引物扩增子生成针对∼300个基点的V1 / V2 16 s rRNA的可变区域的基因。Illumina公司paired-end测序500年MiSeq平台使用一个周期执行版本2试剂盒(Illumina公司、圣地亚哥、钙、美国)。
分析Illumina公司paired-end读取
质量控制程序进行paired-end序列描述的补充材料。装配序列对齐和分类与新浪版1.2.11 [36)使用席尔瓦111数据库(37)作为参考配置为产生席尔瓦的分类(www.arb-silva.de)。排序paired-end序列数据存入国家生物技术信息中心序列读取存档(www.ncbi.nlm.nih.gov sra)加入SRP044029数量。软件包Explicet版本2.10.5 (www.explicet.org)[38)是用于显示、分析良好的覆盖,和计算的丰富性,均匀度和香农多样性指数、均匀度和丰富的综合衡量,497年在稀疏点序列。
统计分析
描述性统计包括均值±sd或中值(范围),指定。测序深度的不同,每一个分类单元的相对丰度计算(为特定的分类单元的组合数/序列总数×100)。使用的所有疾病控制和CF科目比较只有样本儿科学科(定义为≤21岁,疾病控制从儿童医院的患者,包括病人年龄21年);成人的CF患者单独考虑。Wilcoxon rank-based测试和卡方测试被用来比较人口统计信息,资源,多样性,患病率和类群的相对多度组。BALF和细菌的DNA样本下的极限放大计算排序被认为是负面的患病率和协议与文化的结果。斯皮尔曼相关系数是用于确定之间的关系资源,生态参数,临床变量(肺恶化状态、肺功能、身体质量指数和年龄)和气道炎症标记物(白细胞计数,绝对中性白细胞计数和中性粒细胞百分比)。我们进行了多元回归分析的气道炎症标记物和类群假单胞菌,链球菌,韦永氏球菌属和普氏菌。我们也比较微生物群落由病人年龄分组到年龄。利用克鲁斯卡尔-沃利斯rank-based测试资源和多样性进行了比较。主坐标分析(PCoA)使用Morisita-Horn距离之间的关系应用于想象微生物群社区可以按年龄分类,CF中心,肺恶化状态和队列(疾病控制或CF)。调整为多个使用错误发现率过程进行了比较。分析使用SAS 9.4版(SAS研究所卡里、数控、美国)。
结果
主题特征和文化的结果
191份BALF样本收集从136年儿科CF, 10个成人CF和45儿科疾病控制参与者。患者在支气管镜检查显示在特征表1。最常见的适应症CF患者的支气管镜检查(参与者可能有多个迹象)是持续的咳嗽(41%)、对治疗没有反应(29%),需要降低气道文化(27%),并发手术(21%),肺功能下降(8%)。最常见的诊断和疾病控制哮喘患者支气管镜检查的迹象或哮喘(38%),肺炎/复发性肺炎(36%)、吞咽困难/食管返流(33%)和慢性咳嗽(24%)(补充表S1和S2)。BALF细菌培养(145年获得CF和所有疾病控制患者)是积极的在九成人CF 10例(90%),94年的135(70%)儿科CF和15的45(33%)疾病控制参与者。
总细菌负荷
台高在儿科CF与疾病控制BALF中值(范围)7.5 (6.8 - -10.7)与7.2(6.4 - -8.7)日志10rDNA本·毫升1;p < 0.01),在那些积极的细菌培养与消极文化(CF与CF中值(范围)7.9 (6.8 - -10.7)与7.3(6.9 - -8.6)日志10rDNA本·毫升1;p < 0.01) (图1一个和b)。台成人和儿科CF没有差异(p = 0.35)。LOD(资源估计在7.4日志10rDNA本·毫升1基于试剂控制(计算基于意味着资源发现188年试剂控制核糖体rna基因拷贝/ PCR反应)。
测序
CF样本测序更可能成功放大,与微生物群序列数据获得80%的成年CF和66%的儿科CF与疾病控制BALF的27% (p < 0.01)。资源较低(在或低于LOD)相比,BALF样品测序失败与成功放大(见补充数据部分和补充图S1)。我们比较病人的特点CF科目之间成功测序的样品与那些没有序列(补充表S3)。团体之间的主要区别是在文化的结果,有89%的BALF文化积极积极sequence-positive组与33% sequence-negative组(p < 0.01)。
生态
香农多样性指数、均匀度和丰富度,计算样品的测序数据,在疾病控制与CF相比显著提高参与者(图1 c和补充表S4)。我们没有发现显著差异的多样性,丰富或成人和儿科CF参与者之间的平衡,虽然成年人的数量是很小的。香农多样性指数、丰富度和均匀度与积极的细菌培养(CF BALF中最低图1 d和补充表S4)。
分类单元
主要类群(定义为最高的类群相对丰度)疾病控制和CF BALF中所示表2。与典型的CF病原体(相关类群如。假单胞菌,葡萄球菌,Stenotrophomonas,嗜血杆菌,无色菌和洋葱)是主要的类群在儿科CF的47%和60%的成年CF BALF样本;这些类群在疾病控制BALF除了占主导地位嗜血杆菌(4%的疾病控制)。值得注意的是,20%的儿科和成人CF BALF包含一个主要分类单元和一个未知的疾病严重程度和发展协会CF(这里称为“非传统类群”)(链球菌,普氏菌,博代氏杆菌属,韦永氏球菌属,莫拉克斯氏菌属,奈瑟氏菌属和棒状杆菌属)。博代氏杆菌属三个CF BALF样本中,检测出的相对丰度> 50%,所有的参与者认为肺恶化。显著差异的患病率和类群的相对多度观察儿科CF和疾病控制BALF之间图2一个和b,和补充表S5)。具体地说,没有疾病控制BALF样本包含的相对丰度> 1%假单胞菌,葡萄球菌,Stenotrophomonas或洋葱。测序结果显示在一个热图补充图S2。
我们检查了微生物群社区基于年龄之间的差异,文化的积极性,肺恶化状态,CF中心和支气管镜的方法(气管导管,喉罩通气或鼻)使用PCoA。Culture-negative样本社区,聚集在一起,尽管有重叠培养阳性样本(补充图S3)。社区的年轻患者倾向于聚集在一起,尽管年龄组之间有重叠。社区没有集群通过肺恶化状态。我们进一步研究了细菌菌落收集方法的影响。只有11(8%)的CF样本收集通过鼻路线,这些都是来自同一CF中心;7这些样品有足够的细菌负荷测序和微生物群社区,聚集在一起的PCoA(通过收集方法和网站)。聚类比较喉罩通气时没有被观察到与气管导管的方法或其他网站。
CF BALF微生物群之间的关系,气道炎症和临床特点
气道炎症是由BALF细胞计数和测量结果给出了补充表图S4 S6和补充。在CF患者中,低多样性是与年龄有关,增加气道炎症,但不是用力呼气量在1 s,可能由于缺乏肺量测定法数据< 6岁儿童(图3)。链球菌,韦永氏球菌属和普氏菌与年轻有关年龄和降低气道炎症的标志。在多元回归分析中,关联的链球菌,韦永氏球菌属和普氏菌与气道炎症标志物仍在控制假单胞菌相对丰度。低多样性也与当前抗生素使用相关(p = 0.01)。审查时使用抗生素BALF集合表示,多数CF参与者(77%的儿科CF和100%成人CF)在至少一个吸入、口服或静脉注射抗生素(中位数(四分位范围)数量的抗生素1(1 - 4)),有33个不同的抗生素,限制我们的能力来比较抗生素的影响。
肺急性加重和微生物群
CF患者归类为临床稳定(n = 44(30%),肺恶化(n = 90(62%))或未知(n = 12 (8%))。最常见的适应症为临床稳定的CF参与者进行支气管镜检查记录(参与者可能有多个迹象)包括并发手术(55%),physician-determined需要降低气道文化(20%)、常规临床CF保健(18%)和没有提供指示(7%)。铜绿假单胞菌相对丰度和中性粒细胞百分比高于那些肺临床恶化而稳定的参与者(补充表S7)。我们没有发现显著差异(资源或香农多样性指数基于肺恶化状态(图4一和b)。组之间细胞总数和绝对中性粒细胞也没有差别(数据没有显示)。微生物群社区也没有集群通过肺恶化状态使用PCoA(补充图S3)。
微生物群在CF和年龄
鉴于呼吸道感染不同时代发生的CF,我们试图研究微生物群的年龄(39]。在年龄组病人特点(< 2、2 - 5、6 - 10,11日至17日这段时间内,18 - 24和≥25年)S8补充表所示。(资源跨年龄组没有差别,而在年轻群体多样性较高(图4 c和d)。与CF相关类群,最突出假单胞菌是存在于更高的相对丰度中值年龄更大的年龄组(图5一个)。相反,链球菌< 6岁儿童最高()在人出席> 20%相对丰富,相比之下,那些年龄> 10年平均相对丰度下降< 3%。6岁,平均70%的细菌群落由传统CF类群(假单胞菌,葡萄球菌,嗜血杆菌,Stenotrophomonas和洋葱)(图5 b)。疾病控制患者按年龄(资源和多样性补充数据部分所示;虽然人数不多,多样性的差异按年龄未见的疾病控制在CF(补充图S5)。
我们专门研究类群报道之前CF微生物群和扩大文化分析(40- - - - - -42]。罗思氏菌属检测与中值的相对丰度0.15%,从0.97%那些< 2岁0%年龄≥18年。Gemella检测与中值的相对丰度0.15%,从0.55%年龄在< 2年0%的18 - 24岁,和0.19%≥25岁。肠杆菌科检测与相对丰度1.5%的中值年龄< 2年和0.3%年龄在2 - 5年,但没有发现任何参与者年龄> 11年。分枝杆菌检测相对丰富的中值为0.01%。
讨论
在这个大,CF BALF的多中心研究,我们发现,呼吸道微生物群实质上不同的病人年龄。链球菌是幼儿最突出的CF。传统CF类群(如。假单胞菌,葡萄球菌和Stenotrophomonas)由< 50%的细菌在< 2岁儿童社区。在老年患者,传统CF细菌是主导,构成> 70%的社区> 6岁儿童和成人。相对丰富的链球菌,韦永氏球菌属,普氏菌和嗜血杆菌随着年龄的增长呈负相关,而假单胞菌随着年龄的增长呈正相关。多样性较低在老年群体中,由于一个分类单元的优势。尽管微生物群分类单元的差异和多样性,资源之间没有显著不同的年龄群体。虽然传统CF类群经常主导微生物群落在老年群体中,细菌类群不是传统上与CF (如。普氏菌和链球菌)是占主导地位的社区成员在儿科和成人CF BALF的20%。
非传统类群的临床影响,尤其是厌氧细菌,仍在调查之中。我们组曾表明,气道炎症的存在增加了典型的CF病原体,特别是假单胞菌少,而厌氧类群出现炎性(40,43]。在这项研究中,我们发现增加气道炎症在CF与疾病控制BALF相比,包括样品没有病原体检测到文化。非传统类群(如。社区具有更高的相对丰度链球菌,普氏菌和韦永氏球菌属)相关炎症较低的总细胞数少、中性粒细胞。然而,这些分类单元不应被解释为完全良性炎症增加在所有CF BALF和疾病控制BALF相比,表明厌氧感染可能煽动炎症反应即使钝化与典型的CF组相比病原体。此外,这些分类单元包含一个不同的组的细菌;因此,它是可能的,这些群体的一些成员可能在肺部疾病中发挥作用,特别是如果目前占主导地位的细菌(44,45]。社区由混合厌氧类群可能早些时候的一个标志和/或不太严重的疾病,引发炎症反应,最终选择为典型,高度自适应CF病原体。厌氧混合感染的潜在炎症感染和其他幼童腹壁薄弱支持先前的研究在CF和non-CF科目(46- - - - - -48]。增加炎症也可能与潜在的CF跨膜电导调节器功能障碍没有传染性的触发器。然而,我们的数据显示复杂的微生物群的存在气道内样本表明,这些细菌社区可能的贡献,尤其是在早期疾病,炎症反应。我们没有检测之间的关联假单胞菌相对丰度和炎症,尽管CF BALF和积极的微生物样品文化相比有更高的炎症与消极的文化。这一发现可能是由于大量的BALF和样品检测结果的相对丰度相对较低假单胞菌。
而non-CF儿科疾病控制,从参与者BALF CF显示细菌负荷较高,较低的多样性和不同的社会结构。比较CF BALF和疾病控制,从两组也发现类似的类群;然而,有不同的不同类群的相对多度的范围内细菌社区。这些发现表明,接触的航空公司传统CF类群和厌氧菌在CF和non-CF病人可能是常见,但宿主环境或暴露于抗生素可能改变这些微生物生存的能力在社区内。虽然我们人数相对较小,多样性不是疾病控制患者与年龄相关的CF组。包含一个对照组提供重要的信息之间的相对细菌负荷和群落结构的孩子CF和其他疾病。然而,解释结果的异质性是有限的潜在疾病对照组和相对较少的疾病控制BALF样品测序成功(可能与细菌减少负担)。
测序检测细菌社区CF和疾病控制BALF和样品负文化。大多数的这些细菌社区包含挑剔的细菌或细菌通常被认为是上呼吸道微生物群的一部分,因此进化并不总是通过临床微生物实验室。然而,嗜血杆菌发现了两个CF和一个疾病控制的主要类群样本与消极的文化,和较低的相对丰度的假单胞菌中检测出4 CF样本。测序也发现假单胞菌,洋葱和Stenotrophomonas从这些细菌病原体样本为阴性标准文化技术。这些发现表明,利用文化和分子方法相结合的方法可以提高微生物诊断在未来,尽管还需要更多的研究来了解积极的临床重要性排序设置的消极文化。测序缺乏敏感性复合菌群检测非结核分枝杆菌,符合其他研究[49]。
大多数以前的研究在CF呼吸道微生物群都集中在痰或口咽的标本,而不是降低气道BALF样本。Coburnet al。(50)研究了269 CF患者的痰液样本,包括76名儿科患者(4-17岁)。检测到的微生物群由核心链球菌,普氏菌,罗思氏菌属和韦永氏球菌属,假单胞菌成为一个核心微生物> 18岁的病人。除了罗思氏菌属,在我们的研究中,很少发现这些类群在CF BALF非常普遍。主要类群是最常见的那些通常与CF细菌病原体(如。假单胞菌,嗜血杆菌和洋葱)。我们的研究结果支持先前的小,只有BALF的研究,使用微阵列方法分析BALF从22个年幼的孩子24]。Renwicket al。(24香农多样性指数明显降低)发现了一个CF BALF相比non-CF BALF样本。CF和non-CF组织相似的微生物群的患病率,但明显对不同类群丰富。我们组也报道不同细菌社区检测BALF的测序在一个小的婴儿与CF (n = 8)链球菌,洋葱,普氏菌,嗜血杆菌,Porphyromonas和韦永氏球菌属发现在相对丰度最高的51]。
我们的研究也有一些局限性。抗生素暴露在支气管镜检查是基于数据中心的报告和许多不同的抗生素使用有限的能力来确定对微生物群的影响。抗生素在支气管镜检查有关多样性较低,但定量数据的长度和类型抗生素并不可用。鉴于我们收集样品说明临床支气管镜检查的时候,样本可能不完全代表CF人口。然而,患者包括与一系列的临床症状(主要是与BALF中执行紧要关头与另一个外科手术)与肺恶化不响应处理。我们没有发现明显的差异在这些团体之间的微生物群,表明微生物群可能在疾病状态相对稳定。
有一个持久的担忧从上呼吸道贡献到低气道样本。BALF收集方法不统一;然而,临床过程的典型使用CF中心> 60%的BALF收集程序通过气管内管或喉罩通气、限制上呼吸道污染。样品收集的鼻/口头路线似乎PCoA集群,表明集合的路线可能会影响微生物群社区发现。虽然我们的数量太小,不足以得出结论,执行BALF集合的方式减少上呼吸道的贡献可能是重要的。当前测序技术是有限的能力准确地识别细菌物种水平。我们发现强有力的分类单元之间的相关性被测序和相关的物种被文化(如。假单胞菌通过测序高度相关铜绿假单胞菌通过文化)。然而,测序方法的进步需要提高系统分辨率。BALF集合了不同卷,这可能影响了细菌负荷,虽然我们没有看到一个协会可能会随着年龄的增长,如果体积灌输我们的结果,产生系统性偏差。BALF样本也存储整洁而不是处理;因此,测序可能检测到细菌从额外的样品如果旋转获得细胞颗粒(23]。然而,我们发现强大的文化之间的协议和排序状态,∼80%的积极的文化和测序或负样本的方法,表明许多LOD以下的样品测序可能是“真正的否定”,虽然我们不能排除一些细菌存在,未被发现。尽管有这些限制,我们的研究提供了新的信息下呼吸道细菌社区检测到CF BALF从幼年到成年并与non-CF疾病控制。
总之,在这个多中心研究BALF的多样化的群体,我们发现儿童与CF有更多不同的气道细菌社区与CF与成年人相比,比例较低的社区组成的传统CF类群;6岁,> 70%的社区由传统CF类群。非传统类群的微生物群社区主导的子群与CF成人和儿童。增加大量的厌氧菌是降低气道炎症的标志,尽管炎症增加CF与疾病控制无论细菌检测。不同微生物群社区中最常见最年轻的患者,确定这些细菌的临床影响因素发展传统CF植物可以提高早期治疗。
补充材料
披露的信息
补充材料
参考书籍Chmielerj - 00832 - 2017 - _chmiel
R.L.吉布森erj - 00832 - 2017 - _gibson
哈里斯。erj - 00832 - 2017 - _harris
助教拉古纳erj - 00832 - 2017 - _laguna
S.A. McColleyerj - 00832 - 2017 - _mccolley
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g . Retsch-Bogarterj - 00832 - 2017 - _retsch鲍嘉
美国南达科他州Sagelerj - 00832 - 2017 - _sagel
P.L.蔡特林erj - 00832 - 2017 - _zeitlin
E.T. Zemanickerj - 00832 - 2017 - _zemanick
确认
作者感谢研究协调员,梅格·安东尼,和数据库管理器,埃丽诺托勒,极光,科罗拉多州儿童医院有限公司,美国,和站点研究协调员:科莱特Bucur(彩虹婴儿和儿童医院,克利夫兰,哦,美国),凯伦·卡拉汉(美国马里兰州巴尔的摩约翰斯·霍普金斯大学),罗莉段(辛辛那提儿童医院医学中心,辛辛那提,哦,美国),伊丽莎白·哈(匹兹堡儿童医院,匹兹堡,美国),特里·约翰逊(全国儿童医院,哥伦布,哦,美国),维姬Kociela(圣路易斯大学医学院,圣路易斯,密苏里州,美国),卡罗琳·奥康纳LaFave(北卡罗莱纳大学教堂山分校、数控、美国),莎伦·麦克纳马拉(美国西雅图儿童医院、西雅图、佤邦),瓦莱丽·尤班克斯冰斗湖(美国阿拉巴马大学、伯明翰、AL),玛丽Teresi(美国爱荷华大学爱荷华市,IA), Noopur辛格和凯瑟琳的权力(安和罗伯特·h·Lurie儿童医院的芝加哥,芝加哥,美国)和翠西格(明尼苏达大学,明尼阿波利斯,美国),患者和家庭提供的数据样本,使这项工作成为可能。作者还要感谢吉尔VanDalfsen和邦妮拉姆齐(疗法发展网络协调中心,西雅图,佤邦,美国)的支持这个项目。
作者的贡献:E.T. Zemanick导致了研究设计,数据分析和解释,写的手稿。最初瓦格纳导致了数据分析和统计解释,并参与编写和审查的手稿。石球罗伯逊导致了数据分析和解释,并回顾了手稿。参考钢筋Ahrens Chmiel,摩根大通(J.P.克兰西,R.L.吉布森。哈里斯,g .当助教拉古纳,S.A. McColley, k . McCoy g . Retsch-Bogart K.T. Sobush和P.L.蔡特林所有担任网站调查原则,造成了研究设计和回顾了手稿。M.J.史蒂文斯导致样品处理和分析,回顾了手稿。F.J. Accurso s.d Sagel导致了研究设计、数据解释和回顾了手稿。J.K.哈里斯导致了研究设计、样品分析、数据分析和解释,并参与编写和审查的手稿。
脚注
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支持声明:本研究支持的囊性纤维化基金会ZEMANI11A0,美国国立卫生研究院的资助K23HL114883和NIH / NCATS科罗拉多CTSA目前格兰特UL1 TR001082。内容是作者的唯一责任,不一定代表官方的美国国立卫生研究院的观点。资金信息,本文已沉积的Crossref资助者注册表。
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- 收到了2016年7月27日。
- 接受2017年8月10日。
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