抽象的GydF4y2Ba
慢性阻塞性肺疾病的病理生理特征GydF4y2Ba(GydF4y2BaCOPD)-ASTHMA重叠理解得很差,并且没有研究重叠患者的血浆或痰生物标志物。为了澄清重叠和COPD或哮喘之间的相似性和差异,我们研究了四种潜在的COPD潜在的生物标志物:表面活性剂蛋白A(SP-A),用于先进的糖糖末端产物(SRAGE),髓氧化酶(MPO)和中性粒细胞明胶酶相关的脂素(Ngal)。SP-A和SRAGE是肺细胞衍生的标记。MPO和NGAL是中性粒细胞衍生的分子,但NGAL也可以通过呼吸上皮细胞表达。GydF4y2Ba
采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定134例非吸烟者(26例)、吸烟者(23例)、哮喘(32例)、COPD(39例)和COPD -哮喘重叠患者(14例)的血浆SP-A、sRAGE水平和诱导痰中MPO、NGAL水平。GydF4y2Ba
copd -哮喘重叠患者与哮喘患者相比,痰MPO和血浆SP-A显著升高,而血浆sRAGE水平降低。COPD -哮喘重叠组与COPD组相比,仅痰NGAL显著升高(p=0.00016),可用于区分重叠组与COPD组。GydF4y2Ba
诱导痰中NGAL水平升高可能是重叠的一个特征,提示copd -哮喘重叠中中性粒细胞性气道炎症和/或气道上皮损伤增强。GydF4y2Ba
抽象的GydF4y2Ba
COPD -哮喘重叠患者与COPD/哮喘患者中中性粒细胞明胶酶相关脂蛋白水平升高GydF4y2Bahttp:///wly/qxc8x.GydF4y2Ba
介绍GydF4y2Ba
哮喘和慢性阻塞性肺病(COPD)是全世界最常见的慢性肺病。哮喘和COPD的鉴别诊断很重要,因为不同的治疗方法和不同的临床结果在发病率和死亡率[GydF4y2Ba1GydF4y2Ba那GydF4y2Ba2GydF4y2Ba].尽管哮喘和慢性阻塞性肺病在炎症模式、免疫机制和气流限制可逆性程度上各不相同,但仍有大量患者表现出与这两种疾病相关的症状和体征[GydF4y2Ba1GydF4y2Ba-GydF4y2Ba3.GydF4y2Ba].哮喘和COPD的共存可以经常在一般人群中看到,特别是老年患者[GydF4y2Ba4.GydF4y2Ba].重要的是,这些重叠患者可能具有明显的临床特征,例如与肺功能异常程度相同的单独COPD患者相比,与健康相关的生活质量较低或加重频率增加[GydF4y2Ba5.GydF4y2Ba那GydF4y2Ba6.GydF4y2Ba].GydF4y2Ba
肺活量测定在诊断和评估COPD严重程度方面至关重要,但它在评估症状负担和帮助与哮喘进行鉴别诊断方面的效力有限。此外,迫切需要澄清临床相关的COPD表型及其潜在的生物学机制[GydF4y2Ba7.GydF4y2Ba].为了阐明COPD哮喘重叠的病理生理学,我们设计了四个潜在的生物标志物。研究的两种生物标志物预先表现出良好的中性粒细胞源性炎症分子,髓氧化酶(MPO)和中性粒细胞明胶酶相关的脂素(NGAL),两者都与吸烟有关疾病的炎症和早期气道损伤有关[GydF4y2Ba8.GydF4y2Ba].最近,我们利用二维电泳和质谱技术发现表面活性剂蛋白A (SP-A)在肺宿主防御中具有多重免疫调节作用,与吸烟引起的肺损伤和COPD的发展有关[GydF4y2Ba9.GydF4y2Ba-GydF4y2Ba11.GydF4y2Ba].高级糖化末端产物(RAGE)的受体是在I型肺细胞中大量表达的多配体受体。Copd肺的愤怒表达显着降低,特别是在严重疾病中[GydF4y2Ba12.GydF4y2Ba].血浆中的可溶性同种型(SRAGE)可能代表COPD的潜在标志物,因为它的水平在COPD患者的水平下降并在加剧期间进一步降低[GydF4y2Ba13.GydF4y2Ba-GydF4y2Ba15.GydF4y2Ba].GydF4y2Ba
我们假设哮喘、COPD和COPD -哮喘重叠患者的生物标志物谱有所不同。本研究的目的是测定哮喘患者、COPD和COPD -哮喘重叠患者血浆和诱导痰中四种潜在COPD生物标志物的水平。另一个目标是研究这些标志物的水平是否与包年、肺功能和痰细胞谱等变量相关。GydF4y2Ba
方法GydF4y2Ba
主题GydF4y2Ba
收集134名志愿者的血浆和诱导痰样本。根据他们的病史和自我报告的问卷数据,研究对象被分为五组:健康非吸烟者(NS, n=26)和无症状健康吸烟者肺功能正常(HS, n=23),哮喘患者(哮喘,n=32),慢性阻塞性肺病患者(COPD, n=39),哮喘和不可逆梗阻患者(COPD -哮喘重叠,n=14)。这些患者是芬兰哮喘和COPD患者纵向随访队列的一部分[GydF4y2Ba5.GydF4y2Ba那GydF4y2Ba16.GydF4y2Ba],由赫尔辛基大学中央医院(HUCH)连续招募。控制科目由响应者组成,以休斯和当地媒体的广告。肺活量测定和肺部一氧化碳的漫射能力(GydF4y2BaD.GydF4y2BaLCOGydF4y2Ba)在所有参与者上进行。通过标准肺活量测定(Medikro M 903; Medikro Oy,Kuopio,芬兰)评估肺活量值,并根据美国胸部社会(ATS)/欧洲呼吸协会(ERS)建议进行[188bet官网地址GydF4y2Ba17.GydF4y2Ba].从芬兰参考值获得参考值的肺活量测定值[GydF4y2Ba18.GydF4y2Ba].GydF4y2Ba
哮喘的诊断是基于英国哮喘管理指南[GydF4y2Ba19.GydF4y2Ba,有以下一项或多项发现,且有哮喘相关的临床病史:支气管扩张剂后1秒内用力呼气量(FEV)增加GydF4y2Ba1GydF4y2Ba)≥12%,呼气流量峰值(PEF)记录中支气管扩张剂反应≥15%或日变化≥20%,中度至重度支气管高反应,或FEV下降GydF4y2Ba1GydF4y2Ba≥15%COPD是根据ATS/ERS工作组的建议诊断的[GydF4y2Ba16.GydF4y2Ba那GydF4y2Ba20.GydF4y2Ba],定义为不可逆的慢性气道阻塞(FEV)GydF4y2Ba1GydF4y2Ba/强制生命能力(FVC)<0.70或FEVGydF4y2Ba1GydF4y2Ba/预测FVC <88%)在长期吸烟相关的支气管扩张后肺活量测定中[GydF4y2Ba1GydF4y2Ba那GydF4y2Ba18.GydF4y2Ba].当患者满足哮喘和COPD的诊断标准时,制备COPD哮喘重叠的诊断。具有COPD和重叠的所有案例都没有α的历史GydF4y2Ba1GydF4y2Ba-抗胰蛋白酶缺乏症在纳入前一个月,没有患者接受口服类固醇治疗或病情恶化。对照组为从不吸烟或目前吸烟,肺功能正常,无肺部疾病史。GydF4y2Ba
本研究经伦理委员会赫尔辛基大学中央医院批准,并按照1975年赫尔辛基宣言所设立的道德标准进行。所有参与者提供了书面知情同意书。GydF4y2Ba
血液采集及痰标本诱导GydF4y2Ba
采集外周全静脉血置于EDTA管中,血浆于4500 rpm离心10-15分钟,-80℃保存至分析。吸入高渗生理盐水诱导痰,并按照ERS工作组的建议,用二硫代赤四醇(Sigma,慕尼黑,德国)治疗,之前已详细描述[GydF4y2Ba21.GydF4y2Ba那GydF4y2Ba22.GydF4y2Ba].上清液-80℃冷冻,用于生化分析。在Burker室用台盼蓝研究细胞活力[GydF4y2Ba23.GydF4y2Ba].细胞纤维纤维制剂是通过Cytospin(Thermo Sciencific,Wilmington,De,USA)制备的,并以4053×离心GydF4y2BaGGydF4y2Ba6分钟。幻灯片由May-Grunwald-Giemsa染色(Merck,Darmstadt,德国)染色,用于细胞差分计数,每个载玻片计算400个细胞。评估所有痰样品的细胞谱。仅接受具有<70%鳞状上皮细胞的样品进行进一步评估。将载玻片在-20°C中冷冻[GydF4y2Ba23.GydF4y2Ba].GydF4y2Ba
血浆及痰上清中SP-A、sRAGE、MPO、NGAL的测定GydF4y2Ba
SP-A,SRAGE,MPO和NGAL水平由市售的酶免疫测定/ ELISA试剂盒(Kokusai-F套件(Sysmex,Kobe,Japan),研发系统(Minneapolis,Mn,USA),亚联符(核桃,加利福尼亚州)那你S.一种), and Uscn Life Science Inc. (Wuhan, China), respectively) according to the manufacturers’ instructions. The detection limits of sRAGE, SP-A, MPO and NGAL were 78 pg·mL-1GydF4y2Ba,1 ng·mlGydF4y2Ba-1GydF4y2Ba,0.78 ng·mlGydF4y2Ba-1GydF4y2Ba和0.039 ng·mlGydF4y2Ba-1GydF4y2Ba, 分别。GydF4y2Ba
统计分析GydF4y2Ba
结果用平均值±表示GydF4y2BaSEM.GydF4y2Ba.组间比较采用重复测量方差分析,然后采用Fisher保护最小显著差异检验(PLSD)。GydF4y2Ba事后GydF4y2Ba比较。通过绘制接收器操作特征(ROC)曲线进一步分析血浆和痰生物标志物在区分患者与COPD那些重叠的患者中的预测性能力,以及患有哮喘或NS的患者的患者。通过Spearman的秩相关来计算具有人口统计学,肺功能和痰细胞谱的血浆和痰标记物的相关性。为了获得每个生物标志物的独立预测因子,进行多变量逐步回归分析。P值为<0.05被认为是统计学上显着的。所有统计分析都与SPSS 16.0软件程序(SPSS Inc.,Chicago,IL,USA)进行。GydF4y2Ba
结果GydF4y2Ba
主题特征GydF4y2Ba
研究对象的人口统计学特征和临床特征见GydF4y2Ba表格1GydF4y2Ba.这些患者的年龄比对照组大。COPD合并重叠的患者包年更长,FEV明显更低GydF4y2Ba1GydF4y2Ba和GydF4y2BaD.GydF4y2BaLCOGydF4y2Ba比NS,HS和哮喘群体中的那些(GydF4y2Ba表格1GydF4y2Ba)(其次为方差分析GydF4y2Ba事后GydF4y2BaFisher的PLSD;数据未显示)。与哮喘或COPD患者相比,重叠患者对PEF的可逆性试验和昼夜变异有更大的改善。哮喘存在的确认通常通过改进FEV来制造GydF4y2Ba1GydF4y2Ba经支气管扩张剂治疗后,14例经PEF日变化测定,6例经支气管反应性增加测定。在研究前一个月,没有参与者经历过病情恶化或呼吸道感染。GydF4y2Ba
所有受试者均诱导痰,但根据细胞谱评估,接受99份样本进行进一步分析:NS (n=18)、HS (n=17)、哮喘(n=25)、COPD (n=28)和重叠(n=11)。与NS、HS和COPD组相比,哮喘组和重叠组的痰嗜酸性粒细胞百分比较高(GydF4y2Ba表格1GydF4y2Ba).慢性阻塞性肺疾病和重叠组的痰中性粒细胞百分比高于NS和HS组。GydF4y2Ba
COPD和COPD -哮喘重叠时血浆sRAGE降低,血浆SP-A增加GydF4y2Ba
COPD和重叠组的血浆水平显着降低(715.8±51.2和790.6±81.8 pg·mLGydF4y2Ba-1GydF4y2Ba分别与哮喘组相比(分别为0.025和P = 0.013)(GydF4y2Ba图1一个GydF4y2Ba).COPD组和重叠组血浆SP-A水平分别升高(45.5±4.1、54.5±7.5 ng·mL)GydF4y2Ba-1GydF4y2Ba(分别)与NS,HS和哮喘组相比(GydF4y2Ba图1 bGydF4y2Ba).COPD和重叠组之间的血浆SP-A水平没有显着差异(P = 0.124)。GydF4y2Ba
与COPD相比,痰NGAL增加了COPD - 哮喘重叠GydF4y2Ba
重叠组MPO水平升高(22.3±5.1 μg·mL)GydF4y2Ba-1GydF4y2Ba)与NS,HS和哮喘群相比(GydF4y2Ba图2一个GydF4y2Ba).与哮喘相比,COPD患者的痰中MPO水平也显著升高。COPD与重叠组的痰中MPO水平无显著差异(p=0.129)。与此相反,NGAL的痰液水平重叠(9.1±2.2 μg·mL)GydF4y2Ba-1GydF4y2Ba)显着高于COPD(p = 0.00016)(GydF4y2Ba图2 bGydF4y2Ba).重叠组与NS组、HS组与哮喘组、NS组与COPD组的NGAL痰液水平也有显著差异。痰NGAL值在COPD和哮喘之间没有显著差异,尽管COPD有增加的趋势(p=0.058)。GydF4y2Ba
痰NGAL可以从COPD区分COPD-ASTHMA重叠GydF4y2Ba
进行ROC曲线分析以评估生物标志物的敏感性,特异性和诊断准确性(GydF4y2Ba表2GydF4y2Ba).曲线下面积(area under The curve, AUC)统计结果显示,四种标志物均能与非吸烟者区分COPD和重叠(ROC AUC > .7)。这些指标也可用于区分重叠与哮喘患者,血浆sRAGE和痰MPO可区分COPD与哮喘患者。但是,只有痰NGAL才能区分重叠与COPD患者。GydF4y2Ba
痰NGAL与气流梗阻显著相关,与痰中性粒细胞水平无关GydF4y2Ba
为了分析生物标志物浓度和不同变量之间的相关性,研究对象被汇集在一起。血浆sRAGE水平与GydF4y2BaD.GydF4y2BaLCOGydF4y2Ba在单变量和多变量分析中(GydF4y2Ba表3.GydF4y2Ba和GydF4y2Ba4.GydF4y2Ba).血浆SP-A水平与包年相关系数在单因素分析中最高。然而,多因素分析显示FEVGydF4y2Ba1GydF4y2Ba/FVC是血浆SP-A的独立预测因子。有趣的是,痰MPO水平与痰中性粒细胞水平独立相关,而痰NGAL水平与% pred FEV相关GydF4y2Ba1GydF4y2Ba,独立于痰中性粒细胞(GydF4y2Ba表4GydF4y2Ba).GydF4y2Ba
讨论GydF4y2Ba
本研究评估了COPD -哮喘重叠患者、COPD单独患者和哮喘单独患者以及对照组中四种炎症和肺损伤相关生物标志物的血浆和痰液水平。重叠合并COPD患者血浆SP-A、sRAGE及痰MPO异常模式相似。重叠组和COPD组与哮喘组相比,血浆SP-A、痰MPO水平升高,血浆sRAGE水平降低。总的来说,AUC统计显示,这三种标志物可以区分COPD -哮喘重叠和COPD与哮喘和非吸烟对照,但它们不能区分重叠和COPD。重叠组与慢阻肺组相比,仅痰NGAL水平显著升高,痰NGAL可区分重叠组与慢阻肺组、哮喘组和NS组。因此,痰液NGAL水平升高可能是copd -哮喘重叠的特征性表现。GydF4y2Ba
气道炎症在慢性阻塞性肺病的发展和进展中非常重要,大量证据支持中性粒细胞在这种吸烟相关综合征的病理生理学中发挥中心作用[GydF4y2Ba24.GydF4y2Ba].髓过氧化物酶是一种过氧化物酶,在中性粒细胞的初级颗粒中大量表达。COPD患者的痰MPO水平已被证明升高,并与COPD加重相关,这是中性粒细胞局部激活的证据[GydF4y2Ba8.GydF4y2Ba那GydF4y2Ba25.GydF4y2Ba那GydF4y2Ba26.GydF4y2Ba].痰液的MPO水平与Sorputum中性粒细胞单独相关,这与此吻合良好。因此,痰MPO的本结果可以表明,两个重叠和COPD都与增强的气道中性炎症有关。GydF4y2Ba
本研究最显著的发现与痰NGAL有关。与COPD相比,COPD -哮喘重叠患者中其水平显著升高。NGAL最初被认为是一种由中性粒细胞释放的先天免疫抗菌因子,但它也由肾脏的管状细胞以及肠道和呼吸道的上皮细胞产生[GydF4y2Ba27.GydF4y2Ba那GydF4y2Ba28.GydF4y2Ba].现在,尿NGAL被广泛认为是急性肾损伤的敏感标志物,因为它反映了管状细胞损伤[GydF4y2Ba28.GydF4y2Ba].KGydF4y2Ba吃的GydF4y2Ba和BGydF4y2Baarnes.GydF4y2Ba[GydF4y2Ba8.GydF4y2Ba[据报道,COPD患者升高的痰NGAL水平。COPD患者还显示支气管灌洗和血浆NGAL水平[GydF4y2Ba29.GydF4y2Ba那GydF4y2Ba30.GydF4y2Ba[和Bronchoalveolar灌洗液NGAL在吸烟者中是否与肺气肿有关[GydF4y2Ba31GydF4y2Ba].已经证明NGAL在COPD发病机制中发挥了两种潜在重要作用:抑制细菌生长和基质降解的增强[GydF4y2Ba32GydF4y2Ba].因此,NGAL可以很好地与COPD相关联,如在我们的研究中观察到的气流阻塞的痰NGAL的独立相关性。应当注意,增加的痰NGAL可能不属于激活的嗜中性粒细胞,因为呼吸上皮细胞也可能响应炎症刺激的鼻窦分泌[GydF4y2Ba27.GydF4y2Ba那GydF4y2Ba33GydF4y2Ba].因此,痰液NGAL水平可能与中性粒细胞性炎症和/或持续的呼吸道上皮损伤有关。GydF4y2Ba
血浆sRAGE水平在重叠组和COPD组中同样下降,但在哮喘组中没有下降。在多变量分析中,血浆sRAGE水平与GydF4y2BaD.GydF4y2BaLCOGydF4y2Ba.该协会与前一份报告完全一致,即减少血浆SRAGE水平与肺气肿的严重程度有关[GydF4y2Ba14.GydF4y2Ba].RAGE主要在肺泡1型肺细胞上表达,可以帮助这些细胞获得蔓延的形态[GydF4y2Ba34GydF4y2Ba那GydF4y2Ba35GydF4y2Ba].因此,RAGE可能在肺泡完整性中发挥作用,而sRAGE水平的降低可能与肺泡结构的破坏有关。另一种可能的解释是,sRAGE的减少可能改变中性粒细胞性气道炎症,因为sRAGE通过捕获RAGE配体而具有抗炎特性[GydF4y2Ba36GydF4y2Ba].这一概念符合具有中性粒细胞气道炎症的重叠和COPD的血浆血管水平降低的事实。此外,最近的研究GydF4y2BaukkarGydF4y2Ba等GydF4y2Ba.[GydF4y2Ba15.GydF4y2Ba]已证实支气管肺泡灌洗液sRAGE与气道中性粒细胞性炎症之间存在明确的相关性。因此,本研究结果提示,COPD -哮喘重叠和COPD患者外周血管破坏可能与血浆sRAGE降低有关,但其调节肺炎症的机制和潜在作用尚需进一步研究。GydF4y2Ba
在肺泡II细胞中合成的糖蛋白SP-A和远端肺上皮的非实践的支气管细胞分泌到呼吸道中,因此增加的循环SP-A可以由肺上皮屏障的泄漏引起[GydF4y2Ba37GydF4y2Ba].此前,我们据报道,SP-A浓度与吸烟者中的吸烟有关的肺损伤有关[GydF4y2Ba10.GydF4y2Ba]并在COPD患者中升高[GydF4y2Ba9.GydF4y2Ba],结果与以往的报告一致[GydF4y2Ba37GydF4y2Ba-GydF4y2Ba39GydF4y2Ba].在目前的研究中,与哮喘和对照组的患者相比,COPD和重叠组呈现出血浆SP-A水平的增加。同意我们之前的研究结果[GydF4y2Ba10.GydF4y2Ba],血浆SP-A水平与吸烟史、气道阻塞程度和周围组织损害程度有关。这些结果表明,COPD和COPD -哮喘重叠可能与吸烟引起的肺损伤有关,其机制与哮喘病理生理学假设的机制不同[GydF4y2Ba2GydF4y2Ba].GydF4y2Ba
最近,我们和其他人报道,与COPD相比,COPD -哮喘重叠与健康相关生活质量显著降低和加重率增加有关,这不能用患者的人口统计学、肺功能或肺气肿的计算机断层扫描结果来解释[GydF4y2Ba5.GydF4y2Ba那GydF4y2Ba6.GydF4y2Ba].在本研究中,与哮喘相比,COPD -哮喘重叠组和COPD组血浆SP-A和痰MPO水平升高,而血浆sRAGE降低。此外,与包括COPD在内的所有其他组相比,重叠患者中只有痰NGAL显著升高。综上所述,这些与COPD相关的生物标志物的结果表明,虽然气道中性粒细胞炎症和周围肺破坏是重叠和COPD中常见的病理过程,但COPD-哮喘重叠与气道炎症增强相关,这可以通过痰液NGAL水平的升高检测到。这些发现可能对copd -哮喘重叠的独特临床特征具有启示意义,但需要进一步的研究来明确气道炎症的机制以及重叠患者的最佳监测和治疗策略。GydF4y2Ba
这是一个横断面研究,因此,需要进一步的预期调查,以评估这些血浆和痰标志物与慢性气道疾病的发展的关联。有必要基础研究探讨该协会背后的机制。本研究具有重要的优势。首先,没有任何控制受试者有任何其他曝光。其次,对哮喘,COPD和COPD - 哮喘重叠的诊断基于临床历史和严格和客观标准,这使得这些疾病之间的特征能够进行无偏见的比较。虽然样品尺寸有限,但目前的结果似乎揭示了与哮喘和COPD相比的COPD-哮喘重叠的生物标志物的差异。GydF4y2Ba
总之,我们已经证明,COPD -哮喘重叠患者与COPD患者在血浆SP-A、sRAGE和痰中MPO水平有相似的生物标志物谱,这与哮喘患者不同。此外,痰NGAL水平升高可能是重叠的一个特征,可以区分重叠与COPD,提示COPD -哮喘重叠中中性粒细胞性气道炎症和/或气道上皮损伤增强。GydF4y2Ba
致谢GydF4y2Ba
T. Marjomaa和S. Nummijoki(赫尔辛基大学肺科医学系和赫尔辛基大学中心医院内科,赫尔辛基,芬兰)因他们的帮助和/或出色的技术援助而获得认可。我们感谢P. Piirilä(芬兰赫尔辛基赫尔辛基大学中心医院临床生理学和核医学系临床生理学实验室)帮助我们进行肺功能测试。GydF4y2Ba
脚注GydF4y2Ba
支助声明:这项工作得到了赫尔辛基大学中心医院的EVO基金的财政支助,GydF4y2Ba芬兰抗尿嘧啶协会基金会GydF4y2Ba部分由国际海事组织(IMO)的SalWe研究项目(Tekes -芬兰技术和创新基金资助机构资助编号648/10)资助。GydF4y2Ba
利益冲突:披露可以在本文的在线版本旁边找到GydF4y2Bawww.www.qdcxjkg.com.GydF4y2Ba
- 收到了GydF4y2Ba2013年2月7日。GydF4y2Ba
- 公认GydF4y2Ba2013年5月28日。GydF4y2Ba
- ©2014人队GydF4y2Ba
参考文献GydF4y2Ba
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