抽象的
吸入神经激肽A (NKA)可导致哮喘患者支气管收缩。在体外两个速激肽NK1和nk.2受体可以介导气道收缩。在这项研究中,作者检查了单剂量双速激肽NK的影响1/NK2受体拮抗剂DNK333用于NKA诱导的哮喘支气管收缩。
共有19名患有轻度哮喘的成年男性患者完成了一项随机、双盲、安慰剂对照、交叉试验。增加NKA的浓度(3.3×10−91.0×10−6摩尔·毫升−1在用DNK333(100mg)或安慰剂的单个口服给药后,在1和10小时内吸入1和10小时。
在这些患者中,我们观察到DNK333并不影响基线肺功能,但对NKA诱导的支气管收缩有保护作用。意思是日志10.挑衅性浓度导致20%的强迫呼气量为NKA一秒钟,为-5.6日志10.mol·ml.−1一点 DNK333处理后的h和−6.8日志10.mol·ml.−1安慰剂之后。这相当于4.08倍剂量的差异,这减少到处理后10小时的0.90倍剂量的差异。
本报告显示的结果表明,DNK333可阻断神经激肽A诱导的哮喘患者支气管收缩。
该项目得到了比利时诺华公司的资助。这篇论文的一部分发表于2001年5月在加州旧金山举行的美国胸科学会国际会议上。
感觉神经肽P物质和神经激肽A是速激肽家族的成员,存在于肺感觉神经和免疫细胞内1.在气道中,它们主要与快速激肽(NK)相互作用1,NK2)诱导支气管混合物,支气管高反应性,粘液分泌,血管渗透,血管渗透性和吸引力和激活炎症细胞的受体2- - - - - -4.因此,药理药物抑制两种NK1和nk.2受体可能对哮喘的治疗有用。
支气管收缩是由速激肽引起的最突出和广泛研究的影响之一5- - - - - -7.哮喘患者对P物质和神经激肽A的支气管收缩作用比非哮喘患者更敏感6,8,9.来自几内亚猪航空公司研究的证据表明Tachykinin NK1和nk.2受体可能参与介导速激肽诱导的支气管收缩10.,11. 对离体人气道的研究表明,速激肽诱导的支气管收缩主要是由刺激速激肽NK引起的2受体6.然而,Tachykinins在孤立的小和中等大小的人支气管中诱导的收缩部分由Tachykinin NK部分介导1受体12,13.Tachykinin NK的存在1和nk.2气道平滑肌水平的受体已被免疫组织化学证实14.
有关速激肽受体拮抗剂对神经激肽A诱导的支气管收缩的保护作用的临床试验数据有限,到目前为止,结果并不令人印象深刻15.双速激肽NK1/NK2对拮抗剂FK 224对几内亚猪的神经蛋白A引起的支气管中的效力影响低,并且在哮喘患者中没有防止神经激素A诱导的支气管内16.tachykinin nk相对较高2受体拮抗剂,如非肽SR 48968(saredutant)和双环肽MEN 11420(nepadutant),对神经激肽a诱导的轻度哮喘患者的支气管收缩产生轻微但显著的抑制作用17,18.
在临床前研究中,新发现双速激肽NK1/NK2发现受体拮抗剂DNK333能与克隆的人NK结合1和nk.2受体。此外,DNK333抑制了Tachykinin NK诱导的支气管机构1-和NK2‐在豚鼠和松鼠猴中的受体激动剂19- - - - - -21.本研究采用随机,双盲,安慰剂控制的双治疗交叉设计,以检查DNK333洋嫩喹啉素A-诱导的支气管中的哮喘患者的影响。
材料与方法
研究设计
这是一个三个网站,随机,双盲,安慰剂控制的交叉试验,其次的洗涤间隔1至4周。调查在三个不同大学医院呼吸系统疾病部门进行。该议定书由这些中心的伦理委员会批准。符合条件的患者在进入研究之前提供书面知情同意书。
病人的选择
年龄在18-50岁之间、哮喘稳定、轻度至中度的男性成年患者有资格参加。所有患者仅根据需要吸入沙丁胺醇/特布他林。在初始筛查时,他们的早晨1秒用力呼气量(FEV1)需要≥70%的预测FEV1,用乙酰胆碱支气管刺激(按科克罗夫特法进行)et al。22)的刺激浓度,导致FEV下降20%1(电脑20),以乙酰胆碱浓度<8mg·mL−1.在第二次筛查来访时,患者接受了神经激肽a‐吸入挑战;患者被要求表现出神经激肽a诱导的FEV下降1≥20%,与挑战前值相比。
如果他们有大量吸烟历史,患者被排除在研究之外(即。在筛查1年内吸烟或吸烟> 10包的患者,筛选出过敏性哮喘以外的活性肺病,呼吸道感染或在筛选前4周内发生哮喘加剧。其他排除标准包括在筛选访问后4周内使用抗炎剂(Salbutamol / Terbutaline)或非甾体抗炎药物,在筛选前3个月内的系统性疾病,临床显着的实验室异常,历史不合规医疗方案,或药物或酒精滥用的历史。
研究协议
该研究由四个时期组成:1)筛选/运行,2)治疗I,3)洗涤和4)治疗II。要求患者在每次筛选前至少6小时扣用Salbutamol / Terbutaline至少6小时。在第一次筛选访问中进行的评估包括医学史,体检,心电图(ECG),胸部薄膜,肺功能测试来测量FEV1、甲胆碱激发试验和实验室评估。在第二次筛选来访时,进行了神经激肽a挑战。
在治疗期间I,符合条件的患者随机接受单剂量DNK333 (100mg,口服)或安慰剂,在上午提供相同的瓶子,每个瓶子含有10ml溶液。在接受治疗之前,他们的基线FEV1为了让患者继续进行检测,测量并要求在筛查期间观察到的15%以内。否则,重新安排患者测试(最多三次尝试)。所获得的测量包括剂量前实验室测试、剂量前和剂量后心电图测量。在给药后1小时和接受第一次神经激肽A挑战之前,患者的FEV1我们进行了测量。神经激肽A激发试验分别在第1次和第10次进行 单剂量DNK333或安慰剂给药后h。在神经激肽A激发前30分钟和激发后立即采集额外的血样,以确定NK333的血浆水平。患者返回24-72天 h给药后进行安全性评估。在治疗期I之后进行1-4周的冲洗期。在治疗期间II,患者接受治疗期间I的替代治疗。所有试验和随访程序均在治疗期间I重复进行。
Neurokinin吸入挑战测试
每次吸入神经激肽A前,测FEV1采用气速记录仪(Vmax 20C, SensorMedics, Yorba Linda, California, USA)测量流量-容量回路。连续三次演习的最高值在每次演习时接受评估。然后患者吸入神经激肽A稀释剂。FEV1在吸入后测量3和7分钟,随着巨大的价值被认为是后期基线。提供了Neurokinin的挑战,提供了FEV1吸入稀释液后未下降>10%。在激发期间,神经激肽A的浓度增加(3.3×10−9, 1.0×10−8, 3.3×10−8, 1.0×10−7, 3.3×10−7和1.0×10−6摩尔·毫升−1)被吸入直到FEV1与稀释后的基线值相比,至少下降了20%。
神经激肽A(分子量1133.34;英国圣海伦半岛)在含有1%人血清白蛋白的盐水中稀释(德国马尔堡贝灵沃克)。神经激肽A稀释液在每次激发的早晨制备,并在冰上保存直至雾化。使用Mallinckrodt喷气式雾化器(Mallinckrodt Diagnostica,Petten,荷兰)产生气溶胶17. 病人在2小时内从袋子里吸入了这种气溶胶 通过三通阀和吹口进行安静的潮气呼吸,直到袋子塌陷。补充氧气(4L·min−1,吸气氧分数=0.995)。患者以坐姿进行吸入,鼻子被夹子夹住。不同浓度的星云开始于10分钟的间隔,并持续到FEV1吸入后3分钟或7分钟,较相应稀释后基线下降20%。神经激肽A在PC20可以计算出NKA。如果钒铁1吸入1.0×10后,未达到20%的秋季−6摩尔·毫升−1,测试已停止。在这些患者中,一名PC20价值3.3×10−6(0.5在日志上更高10.规模)被分配。
药代动力学和安全措施
收集血液样品的预诊断和30分钟,然后在每种神经蛋白的攻击之后立即。使用美国东汉诺威的生物分析和药代动力学实验室,使用液相色谱/串联质谱法测定DNK333的血浆浓度。血浆中DNK333的定量下限为1 ng·mL−1. 仅对服用有效药物的患者的样本进行分析。为了进行安全性评估,还采取了实验室措施和心电图测量。
统计分析
对DNK333功效的主要分析基于日志的比较10.个人电脑20使用方差分析(ANOVA)模型分析DNK333‐和安慰剂治疗组之间的神经激肽A,并考虑患者、周期和治疗的因素。在FEV比较的基础上进行二次疗效分析1使用患者、周期、治疗和预给药FEV等因素的协方差分析,分析DNK333和安慰剂的差异1作为协变量。最后,采用Spearman秩相关法检测DNK333血浆浓度与对神经激肽A攻击的保护作用之间的相关性。基于Van Schoor所描述的分析方法et al。17保护效果设置为等于日志之间的差异10.个人电脑20对于DNK333和日志10.个人电脑20对个别病人使用安慰剂。除非另有说明,数据均表示为平均值±sem。所有试验均为双侧试验,显著性p=0.05。
结果
耐心
共有19名男性患者,平均年龄为27.9±7.19岁,随机化,全部完成了该研究。他们的平均值±SD基线FEV1为4.02±0.78 L,为预测值的93.6%。他们的意思是±sd PC20对于甲胆碱(mg·ml−1),为2.26±2.16(表1)⇓).
DNK333与基线肺功能
单剂量的DNK333没有改变给药后1小时的基线肺功能,并且在神经内蛋白之前是一个挑战。在1小时,后期,fev1与安慰剂相比,DNK333组中较高。治疗差异(DNK333减去安慰剂)为0.098L,相关的95%置信区间(CI)为0.009-0.206。P值为0.071表示这种差异没有统计学意义。
DNK333对神经激肽A诱导的支气管收缩的影响
虽然19名患者完成了这项研究,但一名患者在1小时后的时间点没有完成Neurokinin挑战。DNK333导致18名患者中的15名患者中的15名患者的支气管混合物保护,在这项研究中使用的最受神经激素A(即。1.0×10−6摩尔·毫升−1)如神经激肽在1℃时的剂量-反应曲线明显右移所示 h给药后。在三名患者中未发现保护作用。19名患者对神经激肽A挑战的反应如图所示 1.⇓.FEV下降百分比1DNK333在1‐h时间点的变化范围为6.8%至−39.25%,而neurokinin A挑战在1.0×10−6摩尔·毫升−1(图1⇓).意思是日志10.个人电脑20用于神经激肽A(mol·mL−1)与DNK333相比,与-6.8与安慰剂(95%CI有关差异10.个人电脑20Neurokinin A,0.841-1.616;p <0.001)。这相当于4.08倍剂量的差异。
在完成研究的19例患者中,14例患者在给药后10小时完成了神经激肽A挑战。在给药后10小时,记录10.个人电脑20由于数据的性质,我们进行了敏感性分析,以证实方差分析的结果。这是一种非参数等效方法,使用基于患者期间差异的Wilcoxon秩和检验。结果证实了上述方差分析的结果。特别是在给药后1 h, DNK333与安慰剂在PC中有显著差异20对于NKA (p<0.001),而在给药后10小时,没有显著差异(p=0.10)。
DNK333血浆浓度与神经激肽A诱导的支气管保护
DNK333的血浆浓度(ng·ml−1)在Neurokinin前30分钟,1小时的挑战是604.4±99.6(范围45.9-1,400),并且在Neurokinin的挑战后立即进行834.8±79.0(范围464-1,900)。DNK333的血浆浓度(ng·ml−1)神经激肽A激发前30分钟为232.7±26.5(范围80.2-433),神经激肽A激发后10小时为192.7±24.5(范围62.5-384.0)。根据斯皮尔曼等级相关性(30分钟前:1 h:−0.214;10 h: 0.169;挑战后1小时:0.34;10 h: 0.128)。
安全和不良事件
在研究过程中,没有严重不良事件的报告。此外,在实验室参数、生命体征或心电图测量中没有观察到临床相关的变化。共有4例患者报告了7例不良事件,包括疲劳、头痛、哮喘加重、咳嗽和喘息。所有报告的不良事件的严重程度均为轻到中度,且没有一例被怀疑与研究药物有关。
讨论
在本研究中,双速激肽NK1/NK2受体拮抗剂DNK333抑制神经激肽A诱导的哮喘患者支气管收缩。在给药后1小时观察到保护作用,但在10小时后观察不到。速激肽受体拮抗剂对基线肺功能无影响,耐受性良好。
这是Tachykinin受体拮抗剂的第一份报告,证明了对哮喘患者的诱导的支气管内诱导神经蛋白诱导的支气管内诱导。通过在用DNK333治疗后,通过对18名患者的18名患者中的15个患者进行了55个患者中,DNK333的保护作用。DNK333提供的支气管压缩程度与Neurokinin A的挑战大于与其他Tachykinin受体拮抗剂的研究大得多。使用类似的研究协议较少的有效的双触发性NK1/NK2受体拮抗剂FK224对哮喘患者神经激肽A诱导的支气管收缩没有影响16.速激肽的NK2在类似的患者组和类似的研究方法中评估受体拮抗剂SR48968(Saredutant)和MEN11420(NePAdutant),但对吸入神经蛋白A的支气管电机效应具有相当有限的保护作用17,18.在与快速激肽NK的研究中,神经激肽A的浓度响应曲线的偏移为3-52受体拮抗剂,而在本研究中,观察到至少16-20的偏移。此外,这种变化量是低估的值,因为在大多数患者中,FEV的降低20%1在DNK333治疗当天未观察到。
DNK333是一个双重朝鲜1/NK2速激肽受体拮抗剂。在配体结合研究中,DNK333与克隆的人类快速激肽NK结合1和nk.2具有相似亲和力的受体(50%浓度时的抑制浓度为4.8和5.5 nM)19.在我们研究之初,DNK333对速激肽受体的特异性就已经被研究过在活的有机体内在动物和体外人结肠粘膜细胞上。从这些数据出现,DNK333是一种特定的特异肽拮抗剂,其不影响胆碱能反应。因此,这项研究中不包括甲胆碱挑衅臂20,21.
DNK333对神经激肽A诱导的哮喘患者支气管收缩的抑制作用表明,速激肽1和nk.2受体参与吸入神经激肽a的支气管收缩效应,而快速激肽NK2受体介导了神经激肽A的大部分直接平滑肌收缩效应6近年来,快速激肽NK的作用已变得很明显1受体可参与人速激肽引起的支气管收缩。事实上,速激肽NK1发现受体参与Tachykinin诱导的中小型人类孤立的气道收缩12,13.这种情况与免疫组织化学的展示与Tachykinin NK的存在相关联1和nk.2气道平滑肌水平的受体14.此外,吸入的神经蛋白A的支气管电池效应的重要部分是间接的,可能是由Tachykinin NK介导的1受体位于炎症细胞和/或神经元细胞上23,24.因此,根据现有的证据,可以预期双速激肽NK1/NK2与快速激肽NK相比,快速激肽受体拮抗剂对神经激肽a诱导的支气管收缩提供更好的保护2受体拮抗剂。然而,这项研究不能确定每一种速激肽受体亚型对哮喘中神经激肽A的支气管收缩作用的相对贡献。在未来的实验中使用快速激肽NK可能是有趣的1和快速激肽NK2受体拮抗剂及其组合研究每种特异肽受体的相对贡献。
血浆DNK333浓度与DNK333的保护作用大小无关。在目前的研究中,无论是给药后1小时还是10小时,均未观察到血浆药物浓度与支气管保护程度之间的关系。缺乏这种相关性的一个可能原因是,血液取样和神经激肽a吸入刺激发生的时间不够近,不能观察到相关性。没有相关性的另一种可能的解释是DNK333浓度和支气管保护与身体的不同部位有关(即。血浆或肺的中央腔室)。支气管保护和DNK333浓度可能在肺中相关,但我们不知道血浆和肺中药物浓度之间的关系。
我们的研究表明双速激肽神经激肽1/神经激肽2受体拮抗剂DNK333对哮喘患者的速激肽相关支气管收缩有显著的保护作用。这些发现为神经激肽1和神经激肽2受体在速激肽诱导的哮喘患者气道收缩中的重要作用提供了进一步的证据。鉴于DNK333观察到的显著支气管保护水平,检验该药物在哮喘患者中的有效性和安全性的临床试验是值得的。
致谢
作者感谢V. Collart, J. Sele和根特大学医院、布鲁塞尔大学学术医院和CHU - Sart-Tilman, Liège大学的医疗、实验室和技术人员的宝贵帮助。作者还想感谢所有为这项研究的计划、执行和评估做出贡献的诺华同事。
- 已收到二○○二年十一月七日。
- 接受2003年9月11日。
- ©ers Journals Ltd