文摘
我们研究的角色发展的前和产后感染慢性肺疾病(CLD)早产。
192新生儿(61项和131男女童的<与呼吸窘迫综合征妊娠34周:88,35发达CLD和八死)招募了。16 s rRNA (rRNA)基因被确定DNA PCR孤立从840年胃和肺液样本。Ureaplasma种虫害也讲究的。
16 s rRNA的基因(或1.6,95% CI 1.2 - -2.2)Ureaplasmaspp。(或3.6,95% CI 1.7 - -7.7)是随着CLD的发展显著相关。这种联系仍然16 s rRNA基因和Ureaplasma种虫害的前3天内首次发现生活(或2.4 (95% CI 1.4 - -4.1)和3.8 (95% CI 1.4 - -10.0),分别)或者首次发现经过3天的年龄(或1.7 (95% CI 1.1 - -2.8)和5.1 (95% CI 1.3 - -19.8),分别)。肺液峰值白介素(IL) 6和引发与微生物的存在显著相关(p < 0.0001, p = 0.0001)和发展CLD(分别p = 0.003和0.001)。
两个早期和晚期新生儿肺液样品中微生物存在明显与CLD的发展表明前和产后感染在CLD的发展中发挥作用。
慢性肺疾病(CLD)早产的发病率和死亡率的一个重要原因早产婴儿。尽管其风险因素已定义,其确切病因学仍然未知。最近,产前感染(已获得了高度的关注1,2]CLD的发展;然而,它是不确定的,如果肺产后感染,尤其是院内感染,也有一个角色在CLD的发展。Ureaplasmaspp。,这被认为是获得产前,似乎与CLD的发展(3,4]。在病例对照研究中193名婴儿的出生体重< 1500 g, van;et al。(5报道一个全身感染之间的联系获得CLD的产后和发展;结果后来Hernandez-Ronquillo证实了et al。(6在一个更小的病例对照研究。很少有研究报道产后肺部感染微生物的发现和他们的角色在CLD的发展(7,8]。识别微生物是阻碍目前的微生物方法和频繁使用抗生素的高危人群,从而使生物的识别困难标准文化的方法。然而,PCR扩增鉴定微生物的存在的原核的16 s rRNA (rRNA)使用普遍的细菌基因引物显示了承诺,据我们小组和其他8,9]。我们提出,产后感染CLD的发展中扮演了重要的角色。在这项研究中:1)我们旨在证明是否有微生物存在之间的关联被放大的16 s rRNA的基因;2)出于完整性的考虑,我们也寻找Ureaplasma种虫害在胃和肺液样本文化(9,10];3)我们也比较早期(即。微生物存在出生3天内)和后期(即。微生物的存在从出生3天后)CLD的发展;4)我们还研究了微生物在这些样本是否增加即促炎细胞因子白介素(IL) 6和引发,我们以前是增加16 s rRNA基因的存在(9]。
方法
病人组
192年新生儿是从地区新生儿招募单位在威尔士大学医院,卡迪夫,英国,其中包括61项(≥妊娠37周)和131年男女童(≤34周妊娠)。早产组,88名婴儿开发和恢复呼吸窘迫综合征(RDS): 35发达CLD(实际定义为氧依赖在36周post-menstrual年龄)和八个婴儿死亡前28天的年龄。庆大霉素、青霉素被用作在所有婴儿都是怀疑的一线治疗呼吸系统疾病住院新生儿加护病房,和抗生素治疗修改根据婴儿的临床状况的主治医生。
样品收集
胃液体尽可能得到。婴儿新生儿加护病房内承认经常有naso——或者orogastric管插入的喂养和降低胃。胃液体得到婴儿出生2 h内没有美联储之前,用于Ureaplasma种虫害文化和分离的DNA鉴定的基因和16 s rRNAUreaplasma种虫害脲酶基因(7,11]。婴儿接受侵入性机械通气对呼吸道疾病接受nonbronchoscopic支气管肺泡灌洗(BAL),所述在线补充(12- - - - - -15),或气管吸入物(16,17常规吸入时,如前所述。对于那些收到持续气道正压通气或self-breathing在空气或环境增加氧气,鼻咽吸入等。只要有可能,肺液样本获得常规吸的时候,尤其是在婴儿接受侵入性机械通气。样本获得每日第一周,然后每周两次到28天的年龄或放电之前,无论之前发生。样本被放置在4°C到处理12 h内集合。这项研究是由当地研究伦理委员会批准(威尔士东南部研究伦理委员会、加的夫、英国)和书面知情同意是来自父母。
检测Ureaplasma种虫害脲酶基因,PCR和测序的16 s rRNA基因
从样本中提取的DNA使用商用DNA / RNA提取工具包(试剂盒,克劳利,英国)。样本中提取DNA的完整性决定用PCR引物设计对人类线粒体细胞色素氧化酶基因,如前所述[18]。至少有一个令人满意的样品进行DNA识别16 s rRNA基因的分离是可以从164个婴儿。16 s rRNA gene-positive样本识别使用底漆27集f (AGA GTT TGA TC (AC) TGG CTC AG)和1492 r (TAC GG (CT) TAC CTT GTT ACG法案T)给1465 -英国石油产品,和测序如前所述19]。Ureaplasma种虫害是由使用引物扩增430 bp的DNA产品U4 (ACG ACG苑ATA AGC AAC T)和U5 (CAA TCT GCT CGT棉酚GTA TTA C),如前所述[7,20.]。
培养检测Ureaplasmaspp。
25μL样本接种的2毫升Ureaplasma选择性的媒体(支原体经验,赖盖特-班斯,英国),孵化在37°C和检查pH值在一段时间内增加5天(10]。正样本的确认Ureaplasma特殊技能PCR作为描述。
il - 6和引发ELISA
il - 6和引发的重复测量BAL流体样品(9从63名婴儿,包括11项婴儿,21日从RDS集团24了CLD七逝世引发(6),通过ELISA。进一步的细节在网上补充。
统计分析
非参数测试,包括Mann-Whitney和克鲁斯卡尔-沃利斯,被用来比较两个和多个组,分别,确切概率法是用来比较表格数据(使用SPSS 15.0版;IBM,萨默斯,美国纽约)。的假定值< 0.05被认为是显著的。
结果
病人的特点
病人特点所示表1。更多细节上的招生和死亡的原因在线补充。共有840个样本的参赛者来自192名婴儿在这项研究中,包括61年他出生在术语(妊娠37周)≥131和早产婴儿≤34周妊娠,其中88开发和恢复从RDS, 35发达CLD(实际定义为氧依赖在36周post-menstrual年龄)和8个死亡。88年收集到的840个样本来自这个词群,408年从婴儿RDS, 309年从CLD集团和35的婴儿死亡。
产后CLD的微生物基因和发展之间的联系
当肺部微生物基因的存在和发展协会CLD样品检查,77%的婴儿CLD组阳性比例为48%的RDS婴儿和足月婴儿的29%(或1.6,95%可信区间1.2 - -2.2;p = 0.004;表2)。一个协会之间指出肺的存在Ureaplasma种虫害和发展CLD,如图所示表3。35的婴儿CLD组中,37%为阳性Ureaplasmaspp。,相比之下,10%的RDS婴儿和15%的婴儿。当提前组织发达RDS或CLD比较,该协会CLD的发展和存在Ureaplasma种虫害高度统计学意义(或3.6,95%可信区间1.7 - -7.7;p = 0.0004)。
为了确定如果微生物获得产前或医院,我们将样品分成那些首先指出在3天或之前积极的年龄或经过3天的年龄。检测的殖民之间的联系的一天Ureaplasma种虫害和其他微生物相对于CLD所示的发展表4和5,分别。有一个重要的16 s rRNA基因和之间的联系Ureaplasma种虫害和发展CLD如果首次发现在生命的前3天(或2.4 (95% CI 1.4 - -4.1;p = 0.003)和3.8 (95% CI 1.4 - -10.0;分别为p = 0.005)),如果3天之后首次发现年龄(或1.7 (95% CI 1.1 - -2.8;p = 0.036)和5.1 (95% CI 1.3 - -19.8;p = 0.01),分别)。
il - 6和引发和微生物基因之间的关系和临床结果
峰的结果为每个婴儿的存在与否与16 s rRNA基因或Ureaplasmaspp。,如所示图1 a和b。微生物基因或阳性样品Ureaplasma种虫害的BAL液il - 6和引发值中值12604和97358 pg·毫升−1分别是6 - 4倍大于microbe-negative样本中位数的值(2074年和21970年pg·毫升−1分别;p < 0.0001)。当只有样本年龄的前3天进行检测时,发现一个重要的关系也指出il - 6和引发浓度(p < 0.05)和微生物的存在在生命的前3天(图1 c和d)。
il - 6的高峰值,并为每个诊断引发集团一起存在缺乏微生物存在与否,所示图2。BAL流体样本术语组il - 6和引发中间值最低的980和12107 pg·毫升−1,分别。RDS的婴儿中il - 6和引发的5170年和17502年水平pg·毫升−1分别,而CLD婴儿平均水平的15594和122550 pg·毫升−1(p < 0.005和0.0001,分别比较RDS与CLD组)。
微生物与il - 6的山峰和引发
从16 s rRNA gene-positive扩增子样本,恰逢山峰il - 6和引发的测序确定主要微生物物种(表6)。葡萄球菌epidermidis是最普遍的生物隔绝婴儿继续开发RDS,与一个峰值与il - 6 /引发的吗梭菌属nucleatum。革兰氏阴性细菌更频繁地与il - 6 / CLD婴儿和包括引发的山峰大肠杆菌,流感嗜血杆菌,肠杆菌属种虫害和铜绿假单胞菌,虽然革兰氏阳性细菌,包括美国epidermidis和金黄色葡萄球菌也确定了。的两倍Ureaplasma以及(两个RDS和四个CLD)是相对孤立的Ureaplasma体(一个RDS和两个CLD) RDS和CLD的婴儿。
讨论
在这项研究中,我们检查了> 800从192年新生儿肺和胃液体样本,并且发现使用普遍的细菌的微生物基因PCR引物评估产后感染CLD的发展的作用。我们也调查了促炎细胞因子il - 6和引发是否增加,为了表明微生物基因是否存在确实是可能感染的过程而非殖民化。结果表明,16 s rRNA基因的存在增加了婴儿发展中CLD相比,与那些没有;协会是最大的微生物基因检测在生命的头三天,但仍显著即使16 s rRNA基因首次检测到超出3天。微生物的存在可能是由于一个感染的过程,既是il - 6和引发明显增加BAL流体样品微生物基因检测。最后,我们证实先前的发现暗示Ureaplasma在CLD的发展3,4]。
产后感染是CLD的发展强烈怀疑。范;et al。(5),在病例对照研究中,发现产后全身感染,所评估的系统性特征,CLD的发展作为一个危险因素。Hernandez-Ronquillo报告了类似的结果et al。(6),最近,Lahraet al。(21]。然而,这些研究运用流行病学方法涉及产后系统性感染CLD的发展。很少有研究前瞻性调查本协会的产后肺部感染和CLD的识别微生物基因我们在这项研究中大量的前瞻性收集的样本192个新生儿。我们的研究表明,16 s rRNA基因如果出生3天内首次发现,表明产前收购,与CLD的发展密切相关。协会仍然如果微生物首次检测到超出3天,建议产后收购。
肺的存在Ureaplasma种虫害是同样与CLD的发展;协会再一次,剩下的最强出生3天内收集样品。Ureaplasma种虫害13个(37%)被发现的35个婴儿发达CLD,相比之下,9(10%)的88个RDS婴儿和9个(15%)的61个婴儿。肺的存在之间的关系Ureaplasma种虫害和发展CLD仍如果是第一次获得3天的年龄(后表4)。然而,现有的证据表明Ureaplasma在几天的年龄,即使首次发现,可能是产前收购。这些数据支持王的荟萃分析的结论et al。(3)和Schelonkaet al。(4)之间有一个协会CLD的发展和存在肺殖民化的有机体。然而,争议依然存在的相关性肺殖民Ureaplasma在早产婴儿,增加阴道殖民化是观察到交付和早产的母亲相比,那些提供术语(22]。其真正意义的发展CLD只能确认一个充分动力随机控制试验来确定其根除可以减少CLD的利率(23,24]。我们的数据也表明,晚的表现Ureaplasma是否获得产前,spp。将需要考虑CLD的因果关系和在未来占介入试验调查如果根除的肺Ureaplasma种虫害减少CLD的利率。
一个有趣的观察是,41%的婴儿出生在25周被殖民Ureaplasmaspp。他们开发了CLD,而42%的人出生在26周发达CLD殖民,但只有18%。这意味着最不成熟的婴儿的风险获得早期的微生物;是否这是由于不成熟的婴儿的免疫系统是投机。此外,绝大多数的微生物中获得前3天的年龄,从而也表明绝大多数感染有可能被收购在子宫内写道,尽管在这项研究中,没有差异,男女童延长胎膜破裂。不幸的是,没有全面的数据在胎盘组织学进一步调查这个早期CLD的发展之间的联系和绒毛膜羊膜炎,尽管我们之前研究并支持本协会(9]。
微生物基因的存在可能只是反映了肺殖民化,尤其是那些婴儿有气管导管原位。因此,尽管它有一定的局限性,我们测量了il - 6和引发BAL流体从那些经历了nonbronchoscopic BAL的婴儿13- - - - - -15将污染降至最低。增加BAL液il - 6和引发意味着婴儿的肺部炎症增加有利于微生物的基因,因此建议一个感染的过程,而不是微生物定殖。我们以前报道il - 6之间的联系和引发16 s rRNA基因CLD的积极性和发展通过检查子宫内的组织样本和平衡液从一群41和早产的婴儿9]。此外,我们曾表明,il - 6的浓度和引发明显高于生活的第一天Ureaplasma来华的婴儿相比,那些负面的(7]。高引发的重要性水平BAL样本可能导致中性粒细胞的招聘,主要在CLD的肺部炎症细胞(13]。孤立的生存能力Ureaplasma种虫害证实了文化但是16 s rRNA的存在基因可能只是反映了生物不能存活的,因为这些婴儿,总的来说,在常规抗生素治疗在第一周的生活,尤其是提前大选。
有趣的是,CLD婴儿殖民更频繁更致命的生物,包括革兰氏阴性的例如大肠杆菌、流感嗜血杆菌,Entrobacter种虫害和铜绿假单胞菌与RDS),比婴儿。革兰氏阴性的促炎自然内毒素脂多糖(LPS)已被证明,在早产羊肉模型中,导致肺损伤(25]。通风羊羔出生母羊谁收到intra-amniotic有限合伙人增加了炎症标记物和更少的肺泡与通风控制。美国epidermidis是流行在许多RDS和CLD婴儿。虽然它通常被认为是一个共生体和污染物,Lahraet al。(21)报道,产后系统性感染美国epidermidis有类似的效应对CLD的发展更致命的生物。
这项研究增加了进一步的证据,产后感染CLD的发展的作用。可能突显出产前感染的收购通过确定的意义,生物的存在在生命的最初3天与高水平的炎症介质白介素和引发。它还表明,院内获得感染也可能导致CLD的发展。
确认
我们要感谢研究护士,j·韦伯和l .桥(这两个地区新生儿加护病房,威尔士大学医院,加的夫、英国),对他们的帮助获得父母的同意和样本的收集。我们还要感谢孩子,父母和工作人员在卡迪夫大学医院的新生儿病房(英国卡迪夫)。
脚注
可以从本文的补充材料www.www.qdcxjkg.com
支持声明
北卡罗来纳州麦克斯韦是支持的威康信托基金会(英国伦敦)和P.L.戴维斯Arriva的部分支持由药物(阿拉米达、钙、美国)。
感兴趣的语句
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- 收到了2010年3月9日。
- 接受2010年9月7日。
- ©2011人队