文摘gydF4y2Ba
本文探讨如何肺炎球菌6 b型多糖共轭破伤风类毒素(Pn6B-TT)而23化合价的肺炎球菌疫苗(肺炎球菌多糖(PPS) -23)对免疫原性和血清调理素的活动在慢性阻塞性肺病(COPD)患者。gydF4y2Ba
年龄在55 - 75岁的COPD患者接种Pn6B-TT (n = 10)或PPS-23 (n = 9)。健康的年轻成年人(HA)与Pn6B-TT作为控制接种疫苗。总抗体血清型6 b多糖测定通过放射免疫检定法和免疫球蛋白(Ig) G抗体酶联免疫吸附试验。调理素的活动是衡量人类中性粒细胞吞噬试验使用的效应细胞。gydF4y2Ba
患者组相比,年龄、吸烟史、肺功能和使用的类固醇。慢性阻塞性肺病患者接种Pn6B-TT或PPS-23显示增加免疫球蛋白抗体和调理素的增加无意义的活动。这是类似于免疫球蛋白的增加和调理素的活动哈。有显著相关性慢性阻塞性肺病患者的抗体水平和调理素的活动与Pn6B-TT PPS-23接种疫苗。gydF4y2Ba
肺炎球菌感染抗体已被证明提供保护。本研究的结果表明,保护性免疫可以预期在老年慢性阻塞性肺疾病患者与共轭疫苗接种。gydF4y2Ba
这项研究是由冰岛的科学基金资助研究理事会和冰岛卫生部和社会保障。gydF4y2Ba
感染的原因gydF4y2Ba链球菌引起的肺炎gydF4y2Ba继续是发病率和死亡率的一个重要原因和各种慢性疾病的老年人gydF4y2Ba1gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba3gydF4y2Ba。肺炎双球菌肺炎的最常见原因,死亡率为5 - 10%,尽管现代抗菌治疗和重症监护gydF4y2Ba4gydF4y2Ba,gydF4y2Ba5gydF4y2Ba。虽然风险慢性阻塞性肺病(COPD)患者一直是有争议的gydF4y2Ba6gydF4y2Ba,gydF4y2Ba7gydF4y2Ba前瞻性研究显示,患者慢性肺、肾和心脏疾病最重要的危险群体由肺炎球菌病及其并发症gydF4y2Ba2gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
接种肺炎球菌多糖(PPS)刺激产生抗体gydF4y2Ba8gydF4y2Ba和保护健康的成年人gydF4y2Ba9gydF4y2Ba,gydF4y2Ba10gydF4y2Ba,但在某些高危人群免疫原性低gydF4y2Ba11gydF4y2Ba。一些前瞻性随机研究未能证明预防肺炎的发展gydF4y2Ba2gydF4y2Ba,gydF4y2Ba12gydF4y2Ba,gydF4y2Ba13gydF4y2Ba,但其有效性已经在怀疑由于缺乏统计力量gydF4y2Ba14gydF4y2Ba。病例对照研究似乎表明功效在预防菌血症,这就不利于15 - 25%的住院肺炎病例gydF4y2Ba10gydF4y2Ba,但有可能选择性偏差的缺点。全球蔓延的增加抗肺炎双球菌添加到需要疫苗的无可争议的功效gydF4y2Ba15gydF4y2Ba,gydF4y2Ba16gydF4y2Ba。增加免疫原性,protein-conjugated PPS疫苗开发gydF4y2Ba17gydF4y2Ba。肺炎球菌结合疫苗免疫原性已被证明gydF4y2Ba17gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba和高效的侵入性疾病在儿童对PPSgydF4y2Ba20.gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
在目前的研究中,抗体反应和调理素的活动是在老年COPD患者的血清相比,接种与肺炎球菌6 b型多糖共轭与PPS-23破伤风类毒素(Pn6B-TT)或。增加健康成年人的抗体反应这个实验性疫苗相比,PPS以前报道gydF4y2Ba17gydF4y2Ba,但高危成人疫苗没有被测试。血清的抗体反应和调理素的活动从健康成人接种Pn6B-TT也研究作为对照组。的安全性和免疫原性Pn6B-TT重复接种疫苗后报告gydF4y2Ba18gydF4y2Ba,gydF4y2Ba19gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
材料和方法gydF4y2Ba
获得知情同意的患者和健康成人志愿者和协议进行审核和批准由国立大学医院的伦理委员会和雷克雅未克市立医院在雷克雅未克,冰岛(保证没有。s - 8172 - 01),国立卫生研究院,医学委员会的贝塞斯达,医学博士,美国(协议OH93-CH-NO19和OH93-CH-NO24)和美国食品和药物管理局(FDA) (BB-IND 1977)根据欧洲和美国的规定。gydF4y2Ba
疫苗和疫苗接种者gydF4y2Ba
Pn6B-TT准备实验室的发展和分子免疫,儿童健康和人类发展研究所的贝塞斯达,医学博士,美国(55683多)。23化合价的PPS疫苗(Imovax)从巴斯德Merieux获得法国里昂。gydF4y2Ba
疫苗接种者注射0.5毫升Pn6B-TT包含12µg 6 b型多糖和37.5µg破伤风类毒素或0.5毫升Imovax(巴斯德Merieux)包含25µg每个23种血清型的疫苗。健康成人志愿者年龄23-50岁(平均28.9岁)收到一个注入Pn6B-TT(健康成人(HA), n = 15)或一剂Imovax(控制,n = 15)。十年老患者稳定的慢性阻塞性肺病收到一个注入0.5毫升的Pn6B-TT (a组),和9收到一个注入PPS-23 Imovax (B组)。每个主题必须满足所有下列条目的标准:1)任何类型的慢性阻塞性肺病的临床诊断;2)年龄在55 - 75岁;3)在一秒用力呼气量(FEVgydF4y2Ba1gydF4y2Ba)< 1.5 L·sgydF4y2Ba−1gydF4y2Ba,FEVgydF4y2Ba1gydF4y2Ba/用力肺活量< 65%,< 10%支气管扩张剂反应;4)没有免疫减弱疾病或肺炎球菌疫苗接种史或6 b型肺炎球菌感染;5)收到任何类固醇或相当于< 15毫克每天强的松。血液样本采集前和接种后1个月。血清是保存在整除−20°C抗体−70°C的测量和分析调理素的活动。抗体反应和调理素的活动比较慢性阻塞性肺病患者和健康的成年人。gydF4y2Ba
抗体gydF4y2Ba
免疫球蛋白(Ig) G anti-Pn6B以酶联免疫吸附试验(ELISA),根据协议推荐的肺炎球菌疾病控制和预防中心车间,亚特兰大,乔治亚州,美国,1994年10月,一些细微的修改gydF4y2Ba18gydF4y2Ba。总之,ELISA板(配角、剑桥、马、美国)被涂上一层µg·10毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2BaPn6B多糖(美式文化收藏,罗克维尔市,医学博士,美国)5 h在37°C。标准和测试血清稀释1:25和吸附µg·50毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba细胞壁的多糖(cwp) (staten Seruminstitute,哥本哈根,丹麦)在室温下30分钟,孵化之前在四个双倍稀释Pn6B-coated 2 h的盘子。Pn6B-IgG被孵化与biotin-labelled单克隆抗体检测hp - 6043(杂种细胞试剂实验室,巴尔的摩,医学博士,美国)在1:50 0稀释,其次是孵化与碱性phosphatase-labelled亲和素(DAKO、斯特鲁普、丹麦)下稀释1 h。对硝基苯磷酸反应是由(σ,圣路易斯,密苏里州,美国)和光学密度在405 nm Titertek断层分光光度计(流实验室、欧文、英国)。免疫球蛋白anti-Pn6B水平表达µg·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba,计算曲线生成的连续稀释的内部标准准备成年后23-valent PPS接种池,校准参考血清89科幻,提供的着力点Frasch,美国食品及药物管理局,美国马里兰州罗克维尔市。gydF4y2Ba
总anti-Pn6B抗体(Ab)是衡量radio-immunoassay (RIA)gydF4y2Ba21gydF4y2Ba结果用ng表示Ab N·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba(转换因子ng Ab N·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2BaAb浓度是6.25)。gydF4y2Ba
细菌gydF4y2Ba
冻干gydF4y2Ba肺炎链球菌gydF4y2Ba血清组6重组在托德Hewith肉汤和亚文化羊血琼脂(37°C, 5%有限公司gydF4y2Ba2gydF4y2Ba)。通过子类型化特定单克隆抗体(staten Seruminstitute),血清型的菌株被发现6(研究已经完成后)。殖民地被收获,悬浮在Tryptoset肉汤(美国Difco实验室、底特律、MI)存储在−70°C。radiolabelling,一种文化的初始密度1×10gydF4y2Ba4gydF4y2Ba集落形成单位·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba成立于5毫升Rosswell公园纪念研究所(RPMI) 1640 (GIBCO BRL GIBCO,生活技术,佩斯利,英国),补充10%胎牛血清(FCS;和500µCi GIBCO)gydF4y2Ba3gydF4y2BaH-labelled-lysine (Amersham, Amersham,英国),在mid-log阶段通过离心收集2200×gydF4y2BaggydF4y2Ba20分钟,洗在汉克的平衡盐溶液包含5% FCS(哈佛商学院,GIBCO)。肺炎双球菌标签被调整到1.5×10gydF4y2Ba7gydF4y2Ba细菌·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba在哈佛商学院5% FCS,立即使用。证实了可行性和密度板为每个实验菌落计数。gydF4y2Ba
吞噬细胞gydF4y2Ba
新鲜的多形核白细胞(PMNLs)分离出一个健康的成年志愿者的外周血葡聚糖沉积聚蔗糖紧随其后(Histopaqueσ)梯度离心法去除单核细胞。最终浓度调整到1.5×10gydF4y2Ba6gydF4y2BaPMNL·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba哈佛商学院。献血者是FcγRIIa-H131纯合子(请C.L.安德森和基因分型的J.M.奥斯本俄亥俄州立大学医学院的哥伦布,哦,美国),和FcγRIII-NA1 /钠分子杂合子(类型使用荧光染色和单克隆抗体(MAb) CLBgran11 GRM1和流式细胞术分析(流式细胞仪);马伯是一种礼物m·德·哈斯和A.E.G. Kr.冯民主党承担CLB,阿姆斯特丹,荷兰)。gydF4y2Ba
OpsonophagocytosisgydF4y2Ba
血清是化验所描述gydF4y2Ba22gydF4y2Ba小修改,使用新鲜的多形核细胞(中性粒细胞)和gydF4y2Ba3gydF4y2BaH-labelled Pn6B没有添加补充gydF4y2Ba19gydF4y2Ba。细菌和中性粒细胞悬浮液(150µL,∼10:1比例)与测试血清混合在一个预定浓度测定的灵敏度范围gydF4y2Ba8gydF4y2Ba,gydF4y2Ba22gydF4y2Ba。0.5毫升的总量是孵化与旋转(250·敏牧师gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba在37°C) 30分钟。非特异性结合的控制(NSC;与所有反应物heat-inactivated FCS代替人类血清除外)和总细菌输入(结核病;与所有反应物)包含在每一个试验。反应是停止通过添加南2毫升的磷酸缓冲盐+ 0.02%gydF4y2Ba3gydF4y2Ba。中性粒细胞和细胞相关细菌(出租车)被离心160×颗粒状gydF4y2BaggydF4y2Ba,除了结核病在2200×离心机gydF4y2BaggydF4y2Ba。洗后,细胞颗粒在0.5毫升的1.25% resuspended脱氧胆酸盐和转移到4.5毫升的液体闪烁(Hionic-fluor,帕卡德生物科学、梅里登,CT,美国)。放射性(范围500 - 10000每分钟计数(cpm))在液体闪烁计数器测量(帕卡德生物科学)和每分的gydF4y2Ba3gydF4y2BaH-labelled细菌被计算为:gydF4y2Ba
统计分析gydF4y2Ba
用配对t检验在对数转换值比较组和非参数符号秩检验正态分布时没有获得。为对比组,用t检验除了常态失败或方差不平等时,那么Mann-Whitney rank-sum测试使用。皮尔逊相关性是用来评估调理素的活动和抗体浓度之间的关系。的假定值< 0.05被认为是显著的。gydF4y2Ba
结果gydF4y2Ba
主题gydF4y2Ba
两组COPD患者类似的关于年龄、吸烟史和程度的功能障碍(如表1gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)。的病人Pn6B-TT或PPS-23,平均年龄是69年和68年,平均% FEV的预计值gydF4y2Ba1gydF4y2Ba分别为29%和37% (p = 0.09),和吸烟的持续时间是46岁,35岁,分别为(p = 0.80)。五10个病人Pn6B-TT被用类固醇治疗相比,三个10个病人PPS-23。gydF4y2Ba
抗体gydF4y2Ba
在接种之前,几何平均数(GM)总Pn6B两组患者的血清抗体水平在466年和398年ng Ab N·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba以上分别被认为是保护水平gydF4y2Ba21gydF4y2Ba。表2gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba显示每组的通用抗体水平两抗体疫苗接种前后的测量方法。作为一个整体,组织了一个高度疫苗抗体水平显著升高。没有差别的postvaccination总抗体的免疫球蛋白水平或在慢性阻塞性肺病患者接受Pn6B-TT或PPS-23。每组两名患者没有prevaccination非常低水平的抗体和疫苗接种后上升,而一个病人组和两个在B组prevaccination很高水平,没有疫苗接种后进一步增加。这是发现总数和免疫球蛋白抗体和展示了个人变化自然免疫和疫苗接种的响应。这种缺乏反应不与类固醇的摄入量。其他所有人在接种疫苗后抗体水平大幅增加。健康的成年志愿者注射Pn6B-TT回应总显著上升,免疫球蛋白抗体(表2gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)。HA组也有类似的通用prevaccination级别作为COPD组,但postvaccination水平较高;7.32gydF4y2Ba与gydF4y2Ba4.69和5.73µg免疫球蛋白g·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba和1373年gydF4y2Ba与gydF4y2Ba1323年和1159年ng Ab N·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba,分别。差异没有统计学意义。gydF4y2Ba
Pn6A与作者的经验gydF4y2Ba17gydF4y2Ba应对多糖和Pn6B-TT共轭相媲美,看到PPS-23在目前的研究。这促使这种疫苗的再分析。没有发现共轭的瓦解,但共轭的浓度被发现只有一半的原始浓度(其余被发现附着在瓶)。这可能与较小的抗体反应。gydF4y2Ba
OpsonisationgydF4y2Ba
opsonisation测定的灵敏度范围狭窄和opsonisation达到高原∼60%吸收高血清抗体浓度。5%血清浓度测定的灵敏度范围,被选为测量成人血清调理素的活动。gydF4y2Ba
同意anti-6B抗体上升,许多慢性阻塞性肺病患者接种PPS-23或Pn6B-TT显示调理素的活动诱发的增加(图1所示gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba),尽管两组不显著。与Pn6B-TT健康成人志愿者接种,观察调理素的活动高度显著增加。转基因postvaccination opsonisation活动是类似在COPD组(p = 0.811),但有一个显著的个体变异在所有组。gydF4y2Ba
当postvaccination opsonising活动的比较血清抗体水平吞噬作用分析,衡量一个优秀的相关性被发现。图2gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba显示了调理素的活动之间的关系和postvaccination抗体水平在ng anti-Pn6B Ab N·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba以RIA和µg免疫球蛋白g·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba衡量所有慢性阻塞性肺病的ELISA和HA科目。调理素的活动之间的相关性和抗体水平高总抗体使用RIA值(r = 0.779, p < 0.001)和免疫球蛋白抗体(r = 0.702, p < 0.001)以ELISA。之间的关系postvaccination免疫球蛋白和opsonisation分析慢性阻塞性肺病患者根据给定的疫苗。Pn6B-TT组有极显著相关性(r = 0.783, p = 0.007),和一个稍微小一个PPS-23组(r = 0.749, p = 0.020)。RIA类似结果,显著相关与opsonisation Pn6B-TT组(r = 0.713, p = 0.021)和PPS-23组(r = 0.768, p = 0.026)。因此,抗体测量反射机能活动。gydF4y2Ba
讨论gydF4y2Ba
在目前的研究中,作者比较了抗体反应和调理素的活动两组COPD患者的血清,与PPS-23接种Pn6B-TT和另一个。两组反应被发现与抗体水平显著上升,在一群HA与Pn6B-TT接种疫苗。大多数人对疫苗与抗体水平显著增加;然而,在每一组的病人有个人没有回应,展示个人变化的响应与这些抗原疫苗接种。gydF4y2Ba
抗体水平的上升测量总抗体免疫球蛋白或调理素的活动是伴随着相应增加的血清指示功能活性抗体的形成。postvaccination之间有类似的相关免疫球蛋白或总抗体和调理素的活动组与Pn6B-TT或PPS-23接种疫苗。在作者之前的研究表明,反应中产生的抗体与Pn6B-TT主要是IgG1接种疫苗gydF4y2Ba19gydF4y2Ba,这是众所周知的,激活补容易。gydF4y2Ba
在早期健康个体的研究,更多的抗体生产已经被证明与Pn6B-TT疫苗接种后与PPS相比gydF4y2Ba17gydF4y2Ba。升压效应不能引起后重复注射Pn6B-TT结合疫苗gydF4y2Ba17gydF4y2Ba。其他研究也获得了类似的调查结果的老年人使用CRM197共轭的大小结合疫苗的抗体反应和PPS-23相似,也没有升压效应可能与PPS-23 re-injection后发现后CRM197-conjugate疫苗gydF4y2Ba23gydF4y2Ba。然而,在一项研究中患者的何杰金氏病" heptavalent外膜蛋白结合,一个强大的升压效应与PPS-23后续疫苗接种后5 6种血清型的测试gydF4y2Ba24gydF4y2Ba。这些发现表明,共轭疫苗的免疫反应在成年人可能依赖于载体蛋白的PPS共轭,疫苗接种时间表,疫苗成分和/或与宿主因素有关。gydF4y2Ba
肺炎球菌serotype-specific血清调理素的活动可能是一个更直接的指标的防护潜力比血清抗体单独一种实验性疫苗。防止肺炎球菌感染主要取决于opsonisation特定类型的细菌血清抗体和补充。目前作者显示几个成人的肺炎链球菌血清型与多糖疫苗接种疫苗,血清调理素的活动与免疫球蛋白g anti-PPS相关性最好gydF4y2Ba8gydF4y2Ba,而肺炎球菌抗体cwp没有调理素的活动gydF4y2Ba22gydF4y2Ba。人类抗体反应PPS在成人已报告的主要IgG2子类gydF4y2Ba25gydF4y2Ba不容易激活补体,除非在高浓度或抗原决定基密度高gydF4y2Ba21gydF4y2Ba,gydF4y2Ba26gydF4y2Ba,gydF4y2Ba27gydF4y2Ba。此外,PPS是2型的独立抗原t细胞,不产生免疫记忆。抗体产生后接种疫苗的儿童和健康的成年人使用实验PPS共轭的蛋白质主要是IgG1子类,这容易激活恭维。这样一个t细胞依赖特性和升压反应证实了儿童和何杰金氏病的患者使用protein-conjugated肺炎球菌多糖疫苗gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba,gydF4y2Ba24gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
在最近报道功效研究儿童,heptavalent肺炎球菌结合疫苗对侵入性疾病非常有效gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba。这些发现提供希望类似的进步可以实现人口众多的成年人严重的肺炎球菌感染的风险。gydF4y2Ba
成人的争议有关的功效PPS-23风险可能已经减少了使用这种疫苗在世界的许多地方gydF4y2Ba3gydF4y2Ba。还需要进一步的研究来测试肺炎球菌结合疫苗的免疫原性和有效性在成人面临风险。重复注射后引起升压反应的能力还需要进一步的研究。这样的研究可能提供有价值的信息关于如何提高免疫力这一重要病原体和解决争议的效用,接种肺炎球菌疫苗在老年人和慢性病患者。gydF4y2Ba
在以前对COPD患者的肺炎球菌免疫的研究,这些人已被证明有更高水平的抗体比健康的成年人可能由于频繁的抗原暴露gydF4y2Ba6gydF4y2Ba,gydF4y2Ba21gydF4y2Ba。接种疫苗的抗体反应PPS通常是与健康对照组,但是水平随着时间的推移更快速下降gydF4y2Ba28gydF4y2Ba,gydF4y2Ba29日gydF4y2Ba。根据目前的研究和先前的报道gydF4y2Ba30.gydF4y2Ba,接种疫苗的抗体反应似乎没有受到prevaccination抗体水平或接受者的年龄。gydF4y2Ba
在目前的研究中,它已经表明,肺炎球菌6 b型多糖共轭破伤风类毒素诱导生产功能性抗体在老年慢性阻塞性肺疾病患者。结果表明,保护性免疫可以预期在老年慢性阻塞性肺疾病患者接种protein-conjugated多糖疫苗。重复注射可能在这个年龄段是有益的,虽然这还有待证明。考虑到血清型6 b是一种免疫原性肺炎球菌多糖,预计响应其他血清型会更好和共轭疫苗将被证明是更有效的与成人肺炎球菌病的风险。gydF4y2Ba
确认gydF4y2Ba
作者希望感谢g . Ingolfsdottir优秀的技术援助和j·b·罗宾斯的专家建议。gydF4y2Ba
- 收到了gydF4y2Ba2001年的10月25日。gydF4y2Ba
- 接受gydF4y2Ba2002年4月12日。gydF4y2Ba
- ©人期刊有限公司gydF4y2Ba
引用gydF4y2Ba
- ↵gydF4y2Ba
- ↵gydF4y2Ba
- ↵gydF4y2Ba
- ↵gydF4y2Ba
- ↵gydF4y2Ba
- ↵gydF4y2Ba
- ↵gydF4y2Ba
- ↵gydF4y2Ba
- ↵gydF4y2Ba
- ↵gydF4y2Ba
- ↵gydF4y2Ba
- ↵gydF4y2Ba
- ↵gydF4y2Ba
- ↵gydF4y2Ba
- ↵gydF4y2Ba
- ↵gydF4y2Ba
- ↵gydF4y2Ba
- ↵gydF4y2Ba
- ↵gydF4y2Ba
- ↵gydF4y2Ba
- ↵gydF4y2Ba
- ↵gydF4y2Ba
- ↵gydF4y2Ba
- ↵gydF4y2Ba
- ↵gydF4y2Ba
- ↵gydF4y2Ba
- ↵gydF4y2Ba
- ↵gydF4y2Ba
- ↵gydF4y2Ba
- ↵gydF4y2Ba