摘要G.ydF4y2Ba
本文探讨如何肺炎球菌型6B多糖缀合到破伤风类毒素(的Pn6B-TT)相对于比较的23价肺炎球菌疫苗(肺炎球菌多糖(PPS)-23),以免疫原性和血清调理活性在慢性阻塞性肺疾病(COPD).G.ydF4y2Ba
Patients with COPD aged 55–75 yrs were vaccinated with Pn6B-TT (n=10) or with PPS-23 (n=9). Healthy young adults (HA) were vaccinated with Pn6B-TT as controls. Total antibodies to serotype 6B polysaccharide were measured by radioimmunoassay and immunoglobulin (Ig)G antibodies by enzyme-linked immunosorbent assay. Opsonic activity was measured by a phagocytosis assay using human neutrophils as effector cells.
患者组具有可比性的年龄,吸烟史,肺功能和使用类固醇。用的Pn6B-TT或PPS-23接种的COPD患者显示在IgG抗体的增加和调理活性没有显着的增加。这是类似的IgG的增加和调理作用的HA看到。有抗体水平与COPD患者的调理作用之间的显著相关的Pn6B与-TT和PPS-23接种两种。G.ydF4y2Ba
肺炎球菌抗体已被证明能预防感染。本研究结果提示,老年慢性阻塞性肺疾病患者接种结合疫苗可获得保护性免疫。G.ydF4y2Ba
这项研究是由冰岛研究委员会的科学基金和冰岛卫生和社会保障部资助的。G.ydF4y2Ba
由于感染G.ydF4y2Ba肺炎链球菌肺炎料G.ydF4y2Ba继续成为具有各种慢性疾病的老年人发病率和死亡率的重要原因G.ydF4y2Ba1G.ydF4y2Ba-G.ydF4y2Ba3.G.ydF4y2Ba.肺炎球菌是社区获得的肺炎最常见的原因,尽管现代抗微生物治疗和重症监护,但死亡率为5-10%的死亡率G.ydF4y2Ba4.G.ydF4y2Ba那G.ydF4y2Ba5.G.ydF4y2Ba.尽管对慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者的风险一直存在争议G.ydF4y2Ba6.G.ydF4y2Ba那G.ydF4y2Ba7.G.ydF4y2Ba一项前瞻性研究表明,慢性肺,肾和心脏病的患者患有肺炎球菌肺炎最重要的风险群及其并发症G.ydF4y2Ba2G.ydF4y2Ba.G.ydF4y2Ba
用肺炎球菌多糖(PPS)疫苗接种刺激抗体生产G.ydF4y2Ba8.G.ydF4y2Ba并在健康的成年人中保护G.ydF4y2Ba9.G.ydF4y2Ba那G.ydF4y2Ba10.G.ydF4y2Ba,但在某些风险群体中,免疫原性低G.ydF4y2Ba11.G.ydF4y2Ba.几项前瞻性随机研究未能显示出对肺炎的发展的保护G.ydF4y2Ba2G.ydF4y2Ba那G.ydF4y2Ba12.G.ydF4y2Ba那G.ydF4y2Ba13.G.ydF4y2Ba,但由于缺乏统计数据,它们的有效性一直受到质疑G.ydF4y2Ba14.G.ydF4y2Ba.案例对照研究似乎表明了预防菌血症的功效,其使15-25%的住院肺炎病例复杂化G.ydF4y2Ba10.G.ydF4y2Ba,但具有可能选择偏差的缺点。抗性肺炎球菌的越来越多的膨胀率为无可争议的疗效的疫苗增加了需求G.ydF4y2Ba15.G.ydF4y2Ba那G.ydF4y2Ba16.G.ydF4y2Ba.为了增加免疫原性,已经开发出蛋白质缀合的PPS疫苗G.ydF4y2Ba17.G.ydF4y2Ba.肺炎球菌缀合物疫苗已被证明是免疫原性的G.ydF4y2Ba17.G.ydF4y2Ba-G.ydF4y2Ba20.G.ydF4y2Ba并且对PPS无反应的儿童侵袭性疾病非常有效G.ydF4y2Ba20.G.ydF4y2Ba.G.ydF4y2Ba
在本研究中,将抗体应答和Opsonic活性进行比较,在老年人COPD患者的血清中,用与破伤风毒素(PN6B-TT)缀合的肺炎球菌6B多糖疫苗或PPS-23疫苗。先前报道了与PPS相比,健康成人对该实验疫苗的抗体反应增加G.ydF4y2Ba17.G.ydF4y2Ba,但疫苗尚未在风险成人测试。抗体反应,并从的Pn6B-TT免疫接种的健康成年人血清调理素活性进行了研究作为对照组。的Pn6B-TT的重复接种疫苗后的安全性和免疫原性有报道G.ydF4y2Ba18.G.ydF4y2Ba那G.ydF4y2Ba19.G.ydF4y2Ba.G.ydF4y2Ba
材料与方法G.ydF4y2Ba
知情同意是从患者和健康的成人志愿者获得的,并由国家大学医院和雷克雅未克雷克雅未克雷克雅未克市医院的伦理委员会审查和批准了该议定书(保证No.S-8172-01),医疗委员会根据欧洲和美国法规,美国国家卫生大学(博士,MD,MD)(OH93-CH-NO24议定书),以及美国食品和药物管理局(FDA)(BB-IND 1977)。G.ydF4y2Ba
疫苗和疫苗G.ydF4y2Ba
美国伯斯达,MD,MD,MD,MD,MD,MD,MD,MD,MD的发展和分子免疫力,在发育和分子豁免实验室(Lot 55683),制备了PN6B-TT。从法国里昂的PasteurMérieux获得了二十三个VentS PPS疫苗(IMovax)。G.ydF4y2Ba
将疫苗注入0.5mL含有12μg型6B型多糖的0.5ml PN6B-TT,并且37.5μg毒素或含有0.5ml IMovax(Pasteurmérieux)含有25μg疫苗中的23个血清型中的0.5ml Imovax(Pasteurmérieux)。健康成人志愿者23-50 YRS(中位数28.9 YRS)接受了一次注射PN6B-TT(健康成人(HA),N = 15)或一剂IMovax(对照,N = 15)。10名带稳定COPD的老年人接受了0.5ml PN6B-TT(A组)的单一注射,9个接受了单一注射PPS-23 IMovax(B组)。每个受试者必须满足以下所有入境标准:1)任何类型的COPD的临床诊断;2)55-75岁;3)强制呼气量一秒钟(FEVG.ydF4y2Ba1G.ydF4y2Ba) < 1.5 L·sG.ydF4y2Ba-1G.ydF4y2Ba, FEVG.ydF4y2Ba1G.ydF4y2Ba/强制生命能力<65%,对支气管扩张剂的响应<10%;4)无免疫抑制疾病或肺炎球菌疫苗接种的历史或肺炎球菌6B型感染;5)每天没有收到类固醇或等同于<15mg泼尼松龙。在疫苗接种后1个月之前收集血样。在-20℃下保持血清,用于抗体测量和-70℃,用于分析Opsonic Activity。在COPD患者和健康成人之间比较了抗体应答和Opsonic活性。G.ydF4y2Ba
抗体G.ydF4y2Ba
根据疾病控制和预防中心,1994年10月的疾病控制和预防中心推荐的协议,通过酶联免疫吸附测定(ELISA)测量免疫球蛋白(Ig)G抗PN6B(ELISA)测量。G.ydF4y2Ba18.G.ydF4y2Ba.简而言之,ELISA板(Costar,Cambridge,MA,USA)涂有10μg·mlG.ydF4y2Ba-1G.ydF4y2BaPN6B多糖(美国型文化收集,Rockville,MD,USA)在37°C时为5小时。将标准和测试血清稀释1:25并吸附50μg·mLG.ydF4y2Ba-1G.ydF4y2Ba在室温下在室温下在室温下孵育在PN6B涂覆板中的四个双倍稀释液中,在室温下孵育30分钟的细胞壁多糖(CWPS)(Copenhagen,丹麦)。通过与生物素标记的单克隆抗体HP-6043(杂交瘤试剂实验室,Baltimore,MD,USA)孵育来检测PN6B-IgG,然后用碱性磷酸酶标记的抗生物素蛋白(Dako,Glostrup,Denmark)孵育1:2,000稀释1小时。该反应由磷酸二硝基苯基(Sigma,St Louis,Mo,USA)和光学密度在Titertek Multican分光光度计(Flow Laboratories,Irvine,UK)中以405nm读取的光密度。IgG抗PN6B水平以μg·mL表示G.ydF4y2Ba-1G.ydF4y2Ba由美国FDA, Rockville, MD, USA提供的C.E. Frasch提供的参考血清89SF校准的23价PPS成人疫苗接种库制备的内部标准连续稀释产生的曲线计算。G.ydF4y2Ba
放射免疫分析法(RIA)测定抗pn6b总抗体(Ab)G.ydF4y2Ba21.G.ydF4y2Ba并且在ng ab n·ml中表达的结果G.ydF4y2Ba-1G.ydF4y2Ba为纳克抗体N·毫升(转换因子G.ydF4y2Ba-1G.ydF4y2BaAb浓度为6.25)。G.ydF4y2Ba
细菌G.ydF4y2Ba
冻干G.ydF4y2BaS.肺炎G.ydF4y2Ba血清组6在Todd Hewith肉汤中重构,并在羊血琼脂转移(37°C,5%COG.ydF4y2Ba2G.ydF4y2Ba).通过具有特异性单克隆抗体(敏感的敏感)的亚型,发现该菌株是血清型6a(在研究完成后)。收获菌落并悬浮在Trickoset Brooth(Difco Laboratories,Detroit,Mi,USA)中储存在-70°C中。用于放射性标记,初始密度为1×10的培养物G.ydF4y2Ba4.G.ydF4y2Ba菌落形成单位·mLG.ydF4y2Ba-1G.ydF4y2Ba在5毫升Rosswell Park Memorial Institute(RPMI)1640(Gibco,Life Technologies Gibco Brl,佩斯利,佩斯利,英国),补充有10%的胎牛血清(FCS; Gibco)和500μciG.ydF4y2Ba3.G.ydF4y2BaH-标记的赖氨酸(Amersham,英国,英国,英国),在2,200×以2,200×离心阶段收集G.ydF4y2BaG.G.ydF4y2Ba20分钟,并用含有5%FCS的Hank的平衡盐溶液(HBSS,Gibco)洗涤。将标记的肺炎球菌调整为1.5×10G.ydF4y2Ba7.G.ydF4y2Ba细菌·毫升G.ydF4y2Ba-1G.ydF4y2Ba在HBSS中加入5% FCS,并立即使用。每个实验的存活率和密度通过平板菌落计数来确定。G.ydF4y2Ba
吞噬细胞G.ydF4y2Ba
从葡聚糖沉淀后,从健康成人志愿者的外周血中分离出新鲜多核白细胞(PMNL),然后是Ficoll(组织Docaque,Sigma)梯度离心以除去单核细胞。将最终浓度调节至1.5×10G.ydF4y2Ba6.G.ydF4y2Ba PMNL·mL-1G.ydF4y2BaHBSS。The blood donor was FcγRIIa-H131 homozygote (kindly genotyped by C.L. Anderson and J.M. Osborne, Ohio State University College of Medicine, Columbus, OH, USA), and FcγRIII-NA1/NA2 heterozygote (typed using fluorescence staining with monoclonal antibodies (MAb) CLBgran11 and GRM1 and analysis by flow cytometry (FACS); the MAbs were a kind gift from M. de Haas and A.E.G. Kr. von dem Borne, CLB, Amsterdam, The Netherlands).
OpsonophagocytosisG.ydF4y2Ba
血清如所述测定G.ydF4y2Ba22.G.ydF4y2Ba用新鲜多形核细胞(PMN)和G.ydF4y2Ba3.G.ydF4y2BaH标记的PN6B无需添加补充G.ydF4y2Ba19.G.ydF4y2Ba.将细菌和PMN悬浮液(每个,比例为〜10:1的比例)与试验血清以预先确定的浓度为测定的敏感度G.ydF4y2Ba8.G.ydF4y2Ba那G.ydF4y2Ba22.G.ydF4y2Ba.将0.5ml的总体积与旋转孵育(250 Rev·MinG.ydF4y2Ba-1G.ydF4y2Ba)在37℃下30分钟。对非特异性结合的控制(NSC;除了散热FCS而不是人血清外的所有反应物)和总细菌输入(TB;与所有反应物)中包括在每个测定中。通过加入2ml磷酸盐缓冲盐水+ 0.02%NaN来终止反应G.ydF4y2Ba3.G.ydF4y2Ba.通过以160×离心沉淀PMN和细胞相关的细菌(驾驶室)G.ydF4y2BaG.G.ydF4y2Ba,除了TB以2,200×离心G.ydF4y2BaG.G.ydF4y2Ba.洗涤后,细胞颗粒用0.5 mL 1.25%去氧胆酸重悬,转移到4.5 mL闪烁液(Hionic-fluor, Packard Bioscience, Meriden, CT, USA)。放射性(范围500 - 10000计数每分钟(cpm))在液体闪烁计数器(帕卡德生物科学)和百分之摄取G.ydF4y2Ba3.G.ydF4y2Bah标记细菌计算为:G.ydF4y2Ba
统计分析G.ydF4y2Ba
配对t检验对数变换值用于组和非参数符号秩检验内比较时,无法得到正态分布。组间比较,使用时正常失败或方差不等,然后采用Mann-Whitney秩和检验,除了t检验。Pearson相关用于评价调理活性和抗体浓度之间的关系。p值为<0.05被认为是显着的。G.ydF4y2Ba
结果G.ydF4y2Ba
主题G.ydF4y2Ba
两组患有COPD患者与年龄,吸烟历史和功能损伤程度相当(表1G.ydF4y2Ba⇓G.ydF4y2Ba).接受PN6B-TT或PPS-23的患者的平均年龄为69和68 YRS,FEV的平均%预测值G.ydF4y2Ba1G.ydF4y2Ba为29%和37%(P = 0.09),吸烟的持续时间分别为46毫克,P = 0.80)。与10名接受PPS-23的患者相比,10名接受PN6B-TT的患者中有五个患者进行治疗。G.ydF4y2Ba
抗体G.ydF4y2Ba
接种前,两组患者血清Pn6B总抗体几何平均(GM)分别为466和398 ng Ab N·mLG.ydF4y2Ba-1G.ydF4y2Ba,并高于被认为具有保护作用的水平G.ydF4y2Ba21.G.ydF4y2Ba.表2.G.ydF4y2Ba⇓G.ydF4y2Ba用两种抗体检测方法检测各组接种前后的GM抗体水平。总体而言,两种疫苗的抗体水平都有显著上升。COPD患者接种Pn6B-TT和PPS-23后IgG和总抗体水平无显著差异。两组均有2例抗体预防水平极低且接种后无升高,而A组1例、B组2例抗体预防水平极高且接种后无进一步升高。这在总抗体和IgG抗体中都被发现,并证明了自然免疫和免疫反应的个体差异。这种缺乏反应与类固醇摄入无关。在接种疫苗后,所有其他个体的抗体水平都有显著提高。健康成年志愿者注射Pn6B-TT后,总抗体和IgG抗体显著升高(表2)G.ydF4y2Ba⇓G.ydF4y2Ba).HA组的GM预防水平与COPD组相似,但接种后水平略高;7.32G.ydF4y2Ba与G.ydF4y2Ba4.。6.9.和5.。7.3. µg IgG·mL-1G.ydF4y2Ba和1,373G.ydF4y2Ba与G.ydF4y2Ba1,323和1,159 ng Ab N·mLG.ydF4y2Ba-1G.ydF4y2Ba分别。差异没有统计学意义。G.ydF4y2Ba
与作者以前的PN6A经验不同G.ydF4y2Ba17.G.ydF4y2Ba,对多糖和Pn6B-TT结合物的响应与本研究中看到的PPS-23相当。这促使了对这批疫苗的重新分析。没有发现共轭物的解体,但是共轭物的浓度只有原来浓度的一半(其余的附在小瓶上)。这可能与抗体反应较弱有关。G.ydF4y2Ba
篡夺G.ydF4y2Ba
调理作用试验的灵敏度范围很窄,在高血清抗体浓度时,调理作用达到~ 60%摄取的平台。5%的血清浓度是该方法的灵敏度范围,并被选择用于测定成人血清的调理活性。G.ydF4y2Ba
涉及抗6B抗体的兴起,许多与PPS-23接种或PN6B-TT接种疫苗的COPD患者显示出疫苗诱导的OPSONC活性升高(图1G.ydF4y2Ba⇓G.ydF4y2Ba),但对两组都不显著。在接种Pn6B-TT的健康成年志愿者中,观察到调理音活性高度显著增加。在两个慢性阻塞性肺病组中,GM疫苗接种后的调理活性相似(p=0.811),但在所有组中存在显著的个体差异。G.ydF4y2Ba
当与在吞噬症测定中测量的血清的Opsonising抗体水平进行比较后,发现了优异的相关性。图2G.ydF4y2Ba⇓G.ydF4y2Ba显示OPSONIC活动与NG AB N·mL中抗PN6B的后检测抗体水平之间的关系G.ydF4y2Ba-1G.ydF4y2Ba免疫球蛋白g·mLG.ydF4y2Ba-1G.ydF4y2Ba由ELISA测量所有COPD和HA受试者。调理活性和抗体水平之间的相关性高,使用RIA值总抗体(R = 0.779,P <0.001)和IgG抗体(R = 0.702,P <0.001),通过ELISA测量。根据给出的疫苗,分析了POPD患者的Postvaccation IgG和Opsonisation之间的关系。PN6B-TT组(r = 0.783,p = 0.007)中存在高度显着的相关性,PPS-23组中略小于一个(r = 0.749,p = 0.020)。通过RIA获得类似的结果,其在PN6B-TT组(R = 0.713,P = 0.021)中和PPS-23组中具有显着性,并且在PCS-23组中具有相关结果(r = 0.768,p = 0.026)。因此,抗体测量反映了功能活性。G.ydF4y2Ba
讨论G.ydF4y2Ba
在本研究中,作者比较了两组COPD患者血清的抗体应答和调理活性,一组接种Pn6B-TT,另一组接种PPS-23。两组患者的抗体水平均显著上升,与接种Pn6B-TT疫苗的HA组相比。接种疫苗后,大多数人的抗体水平显著提高;然而,在每一组患者中都有个体没有反应,这表明了个体对这些抗原免疫反应的差异性。G.ydF4y2Ba
在IgG或总抗体测定抗体水平上升伴有血清的调理活性指示功能活性的抗体的形成的相应增加。有用于与的Pn6B-TT或PPS-23接种的疫苗接种后组IgG或总抗体和调理活性之间的类似的相关性。在以前的研究的作者证明响应于与的Pn6B-TT接种疫苗所产生的抗体主要是IgG1的G.ydF4y2Ba19.G.ydF4y2Ba,这是众所周知激活补体。G.ydF4y2Ba
在健康个体的早期研究中,更大的抗体的产生已被证明是在疫苗接种后的Pn6B与-TT与PPS相比,G.ydF4y2Ba17.G.ydF4y2Ba.重复注射Pn6B-TT结合疫苗不能引起增强作用G.ydF4y2Ba17.G.ydF4y2Ba.其他结果在使用CRM197缀合物的较老年人的研究中获得了类似的结果,其中对缀合物疫苗和PPS-23的抗体反应的大小相似,并且在CRM197之后用PPS-23重新注塑后没有助力效果。共轭疫苗G.ydF4y2Ba23.G.ydF4y2Ba.然而,在患者的霍奇金病与以下同PPS-23被认为对所测试的血清型6五个后续接种七价外膜蛋白缀合物,强烈的加强效应引发的一个研究G.ydF4y2Ba24.G.ydF4y2Ba.这些发现表明,对成年人的共轭疫苗的免疫应答可能依赖于PPS缀合的载体蛋白,接种时间表,疫苗成分和/或与宿主因子相关。G.ydF4y2Ba
肺炎球菌血清型特异性的治疗活性可能是比单独血清抗体更直接的实验疫苗保护潜力的指标。对肺炎球菌感染的保护主要依赖于细菌通过类型特异性血清抗体和补体的调理作用。目前的作者已经证明,在接种多糖疫苗的成人中,几种肺炎球菌血清型,血清调理活性与IgG抗pps的相关性最好G.ydF4y2Ba8.G.ydF4y2Ba,而抗肺炎球菌CWPS的抗体几乎没有调理活性G.ydF4y2Ba22.G.ydF4y2Ba.据报道,人类抗体对成人PPS的反应主要是IgG2子类G.ydF4y2Ba25.G.ydF4y2Ba,除非高浓度或高表位密度,否则不会容易激活补体G.ydF4y2Ba21.G.ydF4y2Ba那G.ydF4y2Ba26.G.ydF4y2Ba那G.ydF4y2Ba27.G.ydF4y2Ba.此外,PPS是2型没有产生免疫记忆的T细胞无关抗原。使用与蛋白质缀合的实验PPS接种儿童和健康成人后产生的抗体主要是IgG1亚类,其容易激活恭维。使用蛋白质缀合的肺炎球菌多糖疫苗,在儿童和霍奇金病患者中证明了这种T细胞依赖性特征和增强剂反应G.ydF4y2Ba20.G.ydF4y2Ba那G.ydF4y2Ba24.G.ydF4y2Ba.G.ydF4y2Ba
在最近报道的一项儿童疗效研究中,一种七价肺炎球菌结合疫苗对侵袭性疾病非常有效G.ydF4y2Ba20.G.ydF4y2Ba.这些发现提供了希望,类似的进步可以为大量人口的成年人在严重肺炎球菌感染的风险来实现。G.ydF4y2Ba
关于PPS-23在风险成人疗效的争论可能已经降低了该疫苗的使用在世界上许多地方G.ydF4y2Ba3.G.ydF4y2Ba.需要进一步的研究来测试肺炎球菌缀合物疫苗在风险上的肺炎球菌缀合物疫苗的免疫原性和功效。在重复注射后引发增强反应的能力也需要进一步研究。这些研究可以提供有关如何改善这种重要病原体的免疫力的有价值的信息,并解决老年人和长期生病的肺炎球菌疫苗接种效用的争议。G.ydF4y2Ba
在先前对COPD患者的肺炎球菌免疫的研究中,由于频繁的抗原暴露导致,这些人已被证明具有比健康成人更高水平的抗体。G.ydF4y2Ba6.G.ydF4y2Ba那G.ydF4y2Ba21.G.ydF4y2Ba.用PPS接种疫苗接种的抗体通常与健康对照的抗体相当,但水平随着时间的推移而迅速下降G.ydF4y2Ba28.G.ydF4y2Ba那G.ydF4y2Ba29.G.ydF4y2Ba.根据本研究和之前的报告G.ydF4y2Ba30.G.ydF4y2Ba,以接种疫苗的抗体反应似乎并没有被接种前抗体水平或收件人的年龄影响。G.ydF4y2Ba
在本研究中,已经证明了与破伤风毒素诱导的老年慢性阻塞性肺病患者的功能抗体的肺炎球菌型6B多糖诱导。结果表明,在蛋白质共轭多糖疫苗接种的老年慢性阻塞性肺病患者中可以预期保护免疫。在这个年龄组中,重复注射可能是有益的,尽管仍有待表现出来。考虑到血清型6B是最少于免疫原性肺炎球菌多糖之一,预计对其他血清型的反应将更好,并且缀合物疫苗将易于对肺炎的肺炎球菌病患风险的肺炎球菌病。G.ydF4y2Ba
致谢G.ydF4y2Ba
作者谨感谢G. Ingolfsdottir提供的卓越技术援助和J.B. Robbins提供的专家建议。G.ydF4y2Ba
- 收到G.ydF4y2Ba2001年10月25日。G.ydF4y2Ba
- 接受G.ydF4y2Ba2002年4月12日。G.ydF4y2Ba
- ©ers Journals LtdG.ydF4y2Ba
参考文献G.ydF4y2Ba
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