文摘
反人类白细胞抗原的存在供体特异性抗体(员)与肺移植后的不良预后显著相关。目前,地区体育会使用Luminex检测技术,这可能是过于敏感。新C1q试验允许独家发现补(C1q)绑定抗体,抗体介入拒绝。我们调查是否早期发现complement-binding地区体育会与慢性肺部同种异体移植物功能障碍(复合)和生存。
从2009年到2012年,肺移植受者从三个移植中心进行了DSA和筛选complement-binding能力在6 - 12个月post-transplantation病情稳定。
分析包括168名患者。3年期利率自由从穿着和移植物存活率低的患者complement-binding地区体育会(分别为33.6%和53.7%),而患者non-complement-binding地区体育会(分别为61.9%和77.4%)和病人没有DSA(分别为70%和84.9%)(p < 0.001, p = 0.001)。检测complement-binding DSA与移植物丢失的风险调整后几乎增加了两倍临床、功能、组织学和免疫因素(危险比为2.98,95%可信区间1.33 - -6.66;p = 0.008)。
评估C1q-binding DSA的能力似乎是有用的在确定稳定的肺移植受者移植肺失的风险很高。
文摘
C1q试验允许更好地鉴别肺移植受者移植失败的风险最高http://ow.ly/CkmY30kz7P8
介绍
同种抗体针对的潜在破坏性的角色捐赠的人类白细胞抗原(HLA)在首次记录生存超过四十年前肾移植后(1]。在肺移植,供体特异性抗体的有害作用的证据(员)发展的慢性肺部同种异体移植物功能障碍(复合)和贪污损失(2- - - - - -12后),主要是固相的引入分析:首先ELISA,然后bead-based技术然后Luminex-based化验包括single-antigen流珠(SAFB)在2000年代初13]。Luminex技术与实施以来的敏感性的增加在大多数移植中心,肺移植受者的比例与检测anti-HLA抗体急剧增加,达到大约一半的接受者在一些中心(9,14]。然而,批评者认为SAFB化验是过于敏感,如何解释和应用这些结果临床继续讨论(15),特别是Luminex-detected地区体育会肺移植受者稳定。自从发现anti-HLA lymphocytotoxic抗体,补体级联的激活被认为是一个关键组成部分抗体介入拒绝(AMR)和C4d沉积在毛细血管被认为是肾移植(AMR损伤的足迹16- - - - - -18最近在肺移植()和19- - - - - -21]。anti-HLA抗体结合的能力,补充部分C1q,经典激活补体级联的第一步,决定了他们的细胞毒性的潜在18]。同样,提出在肺移植,只有一些Luminex-detected DSA抗体能够修复补可能参与肺移植物损伤AMR,而non-complement-fixing抗体被认为是少或non-deleterious。这些不确定性的精确标记的体液排斥反映最近的国际社会的共识报告心脏和肺移植(ISHLT)肺AMR (19],它定义了AMR诊断的确定性程度取决于是否存在多个标准的示范(同种异体移植物功能障碍、肺组织学C4d染色和地区体育会的存在)。因此,尽管DSA抗体被认为是有害的,移植物损伤这些抗体相关的光谱范围广泛,从没有承认移植物失功损害(12,22,23]。
小说C1q化验了定义子集的抗体可能是临床意义重大,但有SAFB的敏感性分析(24]。我们提出complement-binding属性包DSA抗体参与发病和肺移植失败,并可能更好的分层肺移植后免疫风险,为了提高识别要求的脱敏治疗的患者。因此,我们进行一项多中心研究,以确定评估C1q-binding DSA抗体的存在肺移植术后第一年可能改善复合移植发生和肺失的危险分层。
患者和方法
我们回顾了数据连续所有病人肺移植2009年1月至2012年12月在医院Bichat福煦和Marie-Lannelongue(法国),和幸存者≥6个月后移植。所有可用的患者至少有一个anti-HLA抗体检测使用SAFB Luminex执行分析(美国一个λ,加州公园,CA)移植后6 - 12个月,谁是自由的穿着的日期Luminex SAFB测试被纳入本研究。这个人群的HLA打字和试验发表之前(25),和详细在线补充材料。HLA执行输入的收件人使用分子生物学(Innolipa HLA输入设备;Innogenetics,根特,比利时)。肺移植捐赠者,抗原/ B /博士/ DQ组织类型涉及microlymphocytotoxicity技术与组织分型托盘(λ),并使用分子生物学控制。
后续
急性排斥反应的监测方案监测肺感染和慢性同种异体移植物功能紊乱(复合)在后续使用Bichat医院一直在前面描述的(26,27)和福煦和Marie-Lannelongue医院详细的在线补充材料。包被分为两个临床表型:闭塞性细支气管炎综合征(BOS)定义的古典ISHLT定义(28]或限制性的同种异体移植物综合症(RAS) [29日,30.]。严重的RAS被定义为需要氧气治疗。
免疫抑制
Bichat医院使用的免疫抑制的协议已经被前面描述的(26],福煦和Marie-Lannelongue医院详细的在线补充材料。本研究机构的伦理委员会批准,按照良好的临床实践和建议关于人类研究包含在《赫尔辛基宣言》。
地区体育会的检测和描述
历史Luminex SAFB化验
从2009年1月,路易常规Luminex试验是在实验室中实现医院筛查anti-HLA抗体针对HLA类I和II类抗原(文理学院;一个λ),鉴定SAFB Luminex化验,正如前面和详细的报道在线补充材料。患者接受Luminex试验第0天,月1,然后每三个月第一次术后一年,而且在医生的三个中心的自由裁量权。所有珠子正常化平均荧光强度(MFI) > 500被认为是积极的,和DSA检测抗体的性质被分配当至少一个珠轴承上方的供体抗原是积极的阈值。DSA的检测到SAFB Luminex化验移植后第一个6 - 12个月内,血清值最高的MFI immunodominant DSA和与相应的功能稳定性联系在一起(没有穿着)被选中。为所有的病人包括在这项研究中,所有由SAFB Luminex测定血清筛选综述了post-transplantation 6 - 12个月内,平均数量的DSA检查后的6 - 12个月内每个病人移植2.6±1.9 SAFB化验。与缺乏地区体育会在任何可用的血清测试Luminex SAFB试验在移植后6 - 12个月,我们选择血清样品最接近6个月post-transplantation日期。只有一个每个病人血清样本选择。6-12-month时期post-lung移植的选择评估DSA的存在是根据以往的研究报道之间的平均时间的发展DSA 6和12个月post-lung移植(5,6,31日]。
EDTA-Luminex化验
对所有患者包括地区体育会检测移植后6 - 12个月内,所选择的历史血清样本另外测试循环DSA抗体的识别与SAFB Luminex使用EDTA预处理血清化验修改。地区体育会被SAFB Luminex化验与EDTA也重新解释和命名重新解释EDTA-DSA (r-DSA) (在线补充材料)。
C1q化验
对于所有的病人,每个历史选择血清样本检测的DSA或r-DSA当时测试与使用SAFB Luminex C1q蒙蔽的方式分析路易医院免疫学实验室的技术人员都不知道病人的状态。所涉及的试验C1q-Screen工具包(λ),根据制造商的建议(在线补充材料)。
统计分析
提出了连续变量均值±sd或中值(范围),比较采用t检验或Mann-Whitney紫外线测试。分类变量提出了n(%),比较使用卡方测试或确切概率法。连续变量之间的相关性被斯皮尔曼等级相关系数的评估。
时间的开始(自由的)和时间死亡或再移植(移植物存活率)估计使用kaplan meier生存率较估计和比较。移植物的生存、自由从穿着和后续计算在所有患者C1q测试的时间。单变量和多变量Cox模型建立评估之间的联系存在补体固定或non-fixing地区体育会和自由的生存和移植物存活率与调整了潜在的干扰因素。从复合和移植物生存与自由相关的因素单变量分析的意义(p < 0.2)被选为多元分析。DSA状态(正面或负面)评估肺移植后6 - 12个月,并因此包括Cox模型的时间独立的协变量。后续评估C1q之日起对所有患者进行测试。所有生存模型的最后随访日期是2016年6月。中心影响占通过允许不同的基线风险函数在每个中心Cox模型(地层选择:coxph函数R)。比例风险假设测试使用Grambsch和T.M. Therneau测试基于加权残差(考克斯。zph函数R) [32]。量化的后续使用kaplan meier估计潜在的后续执行(33]。对所有分析,p < 0.05被认为是具有统计学意义。分析占据v12用于Macintosh(美国StataCorp,大学城,TX)。本研究机构的伦理委员会批准,按照良好的临床实践和建议关于人类研究包含在《赫尔辛基宣言》。
结果
病人的特点
我们包括168名患者(70人在Bichat, 58福煦和40 Marie-Lannelongue医院)主要分析。患者分为三组,如下所示。1)患者没有DSA抗体(n = 100);2)患者non-complement-binding地区体育会(n = 41);和3)患者complement-binding地区体育会(n = 27) (图1)。表1描述的基线特征根据历史DSA分类群。DSA检测频率为男性高于女性接受者(p = 0.02)。我们比较C1q患者之间的免疫抑制治疗+DSA+与其他病人(那些没有DSA或C1q−员),没有发现区别组织关于存在的诱导治疗抗胸腺细胞球蛋白组有(或白介素2受体抗体)(p = 0.62)和接受他克莫司的患者比例与环孢霉素(p = 0.98)。频率的地区体育会HLA-DR和hla dq与DSA捐助者与接受者不匹配(MM)更高+C1q−和DSA+C1q+患者比那些没有DSA(预制DSA 44%和44%与29%,p = 0.03;HLA-DR MM的63%和72%与42%,p = 0.004;hla dq MM的41%和47%与35%,p = 0.03)。其他病人特征三个病人组之间没有差别。
自由从穿着和移植物存活率根据检测DSA和complement-binding属性
自由的
中位数(95% CI)后续C1q后评估为4.2(4.0 - -4.5)年和三个病人组中没有显著差异(4.3(4.0 - -4.5)岁,4.0(3.8 - -4.8)和4.6(4.0 -∞)年,分别;p = 0.28)。复合开发的72名(42.9%)患者在随访中。一个病人死亡后1月内C1q采样的日期,但没有开发复合之前死亡,只是审查评估复合的自由。自由的患者较低地区体育会(n = 68) DSA的患者,比(n = 100): 1 - 3年自由频率(95% CI) 71%(61.8 -83.4%)和51.0% (40.1 - -64.8%)与86.7%(80.2 -93.7%)和70.6%(62.0 -80.4%)(风险比(人力资源)2.1,95%可信区间1.3 - -3.3;p = 0.002) (图2一个)。当患者移植后地区体育会随后被分类根据complement-binding能力,患者C1q-binding地区体育会有穷的1年和3年的自由从复合(54.3%(38.2 -77.2%)和33.6%(19.4 - -58.4%),分别为;人力资源3.36,95% CI 1.9 - -5.9),与患者相比non-C1q-binding地区体育会(82.9%(72.2 -95.3%)和61.9%(48.3 - -79.3%),分别为;人力资源1.49,95%可信区间0.85 - -2.62)和病人没有DSA(86.7%(80.2 -93.7%)和70.6%(62.0 - -80.4%),参照组)(p < 0.0001) (图2 b)。
移植物存活率
总的来说,43(25.6%)患者死亡,10例(6.0%)进行了再移植和115年(68.5%)还活着的后续。移植患者的生存频率低于没有地区体育会:1 - 3年移植物存活频率(95% CI) 88.2%(80.9 -96.2%)和68.1% (57.7 - -80.4%)与95.0%(90.8 -99.4%)和84.9% (78.2 -92.3%)(HR 2.0, 95%可信区间1.2 - -3.4;p = 0.01) (图3一)。当患者移植后地区体育会随后被分类根据complement-binding能力,患者C1q-binding地区体育会有贫穷的1年期和3年移植物存活率(81.5%(68.1 -97.5%)和53.7% (37.5 - -77.1%);人力资源3.1,95%可信区间1.6 - -5.9),相比之下,那些non-C1q-binding DSA(92.7%(85.0 -100%)和77.4% (65.3 - -91.6%);人力资源1.4,95%可信区间0.7 - -2.8),没有DSA(95.0%(90.8 -99.4%)和84.9%(78.2 - -92.3%),参照组)(p = 0.001) (图3 b)。
根据重新解释自由从穿着和移植物存活率r-DSA和complement-binding属性
此外,我们分析了自由从穿着和移植物存活率根据重新解释Luminex EDTA-SAFB地区体育会(r-DSAs)移植后状态,与历史地区体育会和观察到相似的结果(在线辅助图S1)。患者C1q-binding r-DSAs从穿着最穷的1年和3年自由(34.2%(15.5 -75.2%)和17.1%(4.9 - -60.1%),分别)和最贫穷的1年和3年移植物存活率(76.9%(57.1 -100%)和38.5%(19.3 - -76.5%),分别)。包的细节分析,并根据r-DSAs移植物存活率和complement-binding属性详细在线补充数据S2和S3。
的决定因素的出现和移植失败
协会临床、功能、组织学和免疫因素与发病和贪污损失评估穿着单变量分析和反向淘汰多变量Cox回归分析。几个变量显示包与发病和移植物存活率在单变量分析中,包括供体特异性anti-HLA抗体的存在和C1q-binding供体特异性anti-HLA抗体(表2)。在多变量分析中,我们发现1)C1q-binding DSA和C1-binding r-DSA检测是包都发生的独立预测指标(HR 2.60, 95%可信区间1.27 - -5.32;p = 0.009和人力资源8.35,95%可信区间3.44 - -20.28;分别为p < 0.0001)和贪污损失(HR 2.98, 95%可信区间1.33 - -6.66;p = 0.008和人力资源6.05,95%可信区间2.50 - -14.69;分别为p < 0.0001);而2)仅检测non-complement绑定r-DSA穿着的是一个独立预测因子(HR 1.89, 95%可信区间1.04 - -3.41;p = 0.03 (表2)。
Complement-binding DSA仍独立与复合发展的风险调整后的MFI地区体育会的价值(HR 2.85, 95%可信区间1.09 - -7.46;p = 0.03)。kaplan meier对自由的生存曲线从复合和移植物存活率分层MFI C1q-binding DSA患者的DSA相似,无论平均荧光强度很低(< 2000任意单位)或高(≥2000任意单位;分别为p = 0.92和0.44)(图4一和b,分别)。最后,我们和那些没有预先DSA患者相比,并没有发现显著差异在自由穿着(log-rank, p = 0.94)和生存之间(log-rank, p = 0.44)两组。
敏感性分析
在敏感性分析中,我们通过调查评估结果的鲁棒性协会分别在每一个研究中心。在三种移植中心,患者complement-binding DSA复合发生率最高和最低的移植物存活率(p < 0.05) (在线辅助图S4)。
严重程度和复合表型DSA类型的检测
最后随访,患者包严重的频率更高了complement-binding DSA (n = 14人,52%),与病人没有DSA (n = 17日17%;p = 0.0006)或non-complement-binding DSA患者(n = 10 24%;p = 0.03) (在线辅助图S5)。BOS3表型和严重的相对比例RAS表型最后随访中相似组(n = 10 BOS3和n = 4严重RAS C1q患者+DSA,比n = 10 BOS3 RAS和n = 7严重病人没有DSA和n = 6 BOS3 n = 4严重患者RAS non-C1q-binding DSA;卡方检验,p = 0.74)。
MFI DSA的价值被标准SAFB rEDTA-SAFB C1q-assay
均值±扫描电镜MFI SAFB-detected员的价值高于没有相应C1q-binding (4043±827.4 n = 27与2270±342.1 n = 41;p = 0.02) (在线辅助图S6),和一个类似的差异观察r-DSAs (在线辅助图S7)。
均值±扫描电镜MFI所有地区体育会C1q试验中发现价值是4102±795。均值±扫描电镜小额信贷机构的价值地区体育会在DSA C1q试验相似+C1q+病人和利比亚+C1q+患者(4671±1071 n = 27与2705±707 n = 11;p = 0.2684) (在线辅助图S8)。
讨论
我们的研究表明,存在C1q-binding地区体育会检测肺移植后第一年是一个独立的预测复合开发和移植失败,1 - 3年后检波。C1q试验显著提高个人危险分层,风险增加近3倍的移植物失功的发生和患者发现complement-binding地区体育会,风险最高的免疫相比,患者没有地区体育会或non-complement-fixing DSA。值得注意的是,大多数complement-binding地区体育会是二类anti-HLA DQ特异性抗体,这表明轨迹的关键作用DQ抗原抗体介入拒绝事件与补伤。
我们的研究结果与以前的研究一致显示强烈的预制和/或检测之间的联系新创地区体育会和移植失败的风险增加3- - - - - -10]。最令人信服的示范免疫移植失败的风险与DSA抗体与最近被允许使用高灵敏度SAFB Luminex技术在2000年代早期6,8,9,31日,34],它揭示了更高比例的患者比之前发现的接种,减少敏感技术(3,35,36]。在我们的研究中,我们进一步扩展这些结果,并表明,与传统方法相比只基于地区体育会的存在肺移植后移植物丢失的风险因素,C1q分析我们使用,集地区体育会将补充的能力,确定一个额外的组患者的风险增加的发病和贪污损失。在这一群体中,穿着有更高比例的严重疾病患者与其他患者相比,没有优势的特定表型(即。BOS与RAS)。此外,我们看着一群27可用系统transbronchial活检患者包括C4d染色分析,进行接近C1q抽样日期之前或之后(1个月)。其中,没有C4d染色> 50%视为重要的建议ISHLT [19]。他们包括17名病人没有DSA,与C1q 7−与C1q地区体育会和三个+地区体育会。它表明C4d染色C1q似乎并没有关联+地区体育会检测肺移植受者稳定,但没有结论可以得出由于小数量的科目。
我们的结果复制的庞大的人口kidney-recipient研究Loupyet al。(37)执行相同的HLA实验室的合作,在一个修改我们的研究为基础的设计。在这群1016肾移植受者,C1q-binding DSA的存在抗体检测移植后第一年也被发现是一个独立的预测移植肾移植损失> 5年之后,和与贫困相关的结果相比,存在non-C1q-binding地区体育会,没有地区体育会。我们发现类似的结果在筛选使用相同的协议对于该地区体育会在路易医院肾移植研究[37]。有关的特定风险non-complement-fixing抗体,患者non-C1-binding r-DSA与风险增加有关复合/移植失败的出现而没有r-DSA集团,但这种差异没有或只有轻微观察到当比较non-C1q-fixing DSA患者和那些没有DSA。因此,缺乏地区体育会的补体固定属性或r-DSAs在一些病人不排除他们的有害作用,但致病性non-complement-mediated通路,如可能直接上皮损伤(38),或Fc-mediated参与巨噬细胞、自然杀伤或γδT-cells [39)仍有待定义在肺移植。
在移植后第一年,40%的人口被认为是接种,同意26 - 61%的频率发现在其他肺移植受者接受SAFB Luminex试验随访期间(8,9,14,31日]。我们发现男性,HLA DQ - DR-mismatches和预制地区体育会地区体育会post-transplantation第一6 - 12个月内的存在。因为女性比男性更有可能是敏感由于怀孕,男性比例的增加与DSA我们发现似乎不一致。虽然我们没有明确的解释,但地区体育会男性患者的优势已经被报道在肺9和肾移植40]。HLA不匹配,或博士发现了DQ基因座与肺移植后发展地区体育会DQ(最近研究9)或轨迹博士(7),但不是在其他使用相同的SAFB Luminex试验(8,31日]。并行惊人的发现在我们群的大部分DQ-specific地区体育会发现SAFB Luminex和C1q化验,也观察到肺移植最近的一项研究[9)和肾移植研究只使用SAFB Luminex试验(41- - - - - -43]。最后,我们观察到的频率增加的地区体育会C1q患者+地区体育会和C1q−地区体育会。这同意之前发现一些研究预制地区体育会被确定为DSA肺移植后发展的危险因素(7,44),而不是在其他的研究发现(9]。
我们执行的主要分析C1q-assay历史从SAFB血清筛查结果已用于临床实践,但我们也测试选中的血清与EDTA-modified SAFB分析与重新定义出现的地区体育会(r-DSA),每当相关(即。当抗体反应与等位基因不表达的供体抗原)[45]。r-DSA定义DSA-positive患者的DSA的数量减少+C1q病人,与历史相比DSA定义,但DQ的高患病率持续。分析地区体育会和r-DSAs,小额信贷机构在那些值高于没有相应的补体固定,同意数据显示,高MFI值作为最重要的因素预测补体激活(46]。重要的是,一些患者MFI值C1q-binding地区体育会在500年至2000年之间,如此低的MFI值并不排除补体固定属性。此外,C1q试验不需要激活的补体级联或任何功能事件如激活补体分割产品(如。C4d)。因此,应该确定地区体育会,将来可能会有问题,即使他们目前不激活补体级联。
作为一个临床的角度来看,C1q分析的使用与标准SAFB测定移植后第一年可以帮助患者更好的识别宽容,以减少不必要的先发制人的脱敏治疗,并且可能识别患者早期移植失败的风险更高,为了使用anti-complement-targeted治疗[47]。此外,反复的潜在效用C1q测试在后续还有待调查,因为抗体类开关是动态的,有可能从补体固定-non-fixing状态转换,和反之亦然。
总之,我们的研究结果表明,无论DSA SAFB筛查试验使用,DSA的complement-binding能力保持最好的因素与免疫学发病风险增加复合发病和肺移植后移植失败。地区体育会的complement-binding能力是一个独立的预测结果差,DSA MFI的独立价值。因此,与标准SAFB试验相比,新C1q测定免疫的可能允许更好的分层复合在肺移植受者和移植物衰竭的风险。
补充材料
脚注
可以从本文的补充材料www.qdcxjkg.com
作者的贡献:o . Brugiere:采集和分析的数据,写手稿。a . Roux j . Le Pavec g . Thabut J-L。陶品:设计研究中,数据的采集和分析,编写手稿。d . Sroussi g . Jebrak g . Dauriat c·杜宾诉Bunel, p . Pradere g . Mourin a . caz b . Lortat-Jacob s让-巴蒂斯特·c·Suberbielle:数据的采集和分析。h . Mal y Castier, p .媒染剂,s . Caillat-Zucman f . Parquin c·琳:设计研究和采集的数据,检查手稿。
利益冲突:h . Mal报告个人费用从罗氏,勃林格CSL贝林,外提交的工作。
支持声明:本研究是由Vaincre la Mucoviscidose (VLM)。资金信息,本文已沉积的Crossref资助者注册表。
- 收到了2017年9月18日。
- 接受2018年6月13日。
- 版权©2018人队