文摘gydF4y2Ba
柴油机尾气(DE)是一个范例与交通有关的空气污染。人类适应德了解甚少,目前基于模型过于简单化。德促进过敏反应,但蛋白表达变化由这种交互尚未系统地调查。本研究的目的是为了定义的影响肺吸入DE allergen-induced蛋白质。gydF4y2Ba
我们进行了一个随机和盲控制人类接触交叉研究。参与者吸入过滤空气或德;此后,侧肺段挑战与过敏原或盐水。使用label-free定量蛋白质组学,我们全面定义DE-mediated变更allergen-driven分泌蛋白检查参与组成分泌腺()支气管肺泡灌洗。我们进一步检查表达式检查参与组成分泌腺的蛋白质所选数据在独立的验证实验中使用西方的屁股,ELISA和免疫组织化学。gydF4y2Ba
我们确定了蛋白质变化独有的一氧化碳暴露(DE +过敏原),未被发现与mono-exposures(德独自或过敏原)。验证研究证实特定的蛋白质(gydF4y2Ba如。gydF4y2Ba抗菌肽cystatin-SA)显著增强DE +过敏原mono-exposure相比。gydF4y2Ba
这项研究表明常见环境co-exposures独特改变蛋白质反应在肺部,生物学mono-exposures无法照亮。这项研究强调了人类复杂的价值gydF4y2Ba在活的有机体内gydF4y2Ba模型详细气道吸入污染的反应。gydF4y2Ba
文摘gydF4y2Ba
Allergen-induced蛋白质分泌在航空公司受柴油废气的影响而改变,在人类控制曝光模式gydF4y2Bahttp://ow.ly/gaqh30h4IsigydF4y2Ba
介绍gydF4y2Ba
柴油机尾气(DE)是一个主要因素与交通有关的空气污染,对公众健康带来重大不利影响,包括减少肺功能(gydF4y2Ba1gydF4y2Ba,gydF4y2Ba2gydF4y2Ba]。流行病学研究表明DE促进哮喘(gydF4y2Ba3gydF4y2Ba,gydF4y2Ba4gydF4y2Ba]。在动物模型的研究表明,暴露在DE粒子allergen-induced气道高反应性的增加,肺部炎症,过敏原召回响应和肺改造,所有这些都促进哮喘病理生理学(gydF4y2Ba5gydF4y2Ba,gydF4y2Ba6gydF4y2Ba]。没有定义德对全球的影响研究蛋白质变化(蛋白质组)在人类肺癌;现有的研究仅限于细胞培养gydF4y2Ba在体外gydF4y2Ba研究[gydF4y2Ba7gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba9gydF4y2Ba)或非人类(老鼠)模型(gydF4y2Ba10gydF4y2Ba]。此外,这些先前的研究已经检查肺癌蛋白质组的改变应对DE和过敏原一氧化碳暴露。因此,本研究的目的是为了全面定义DE的能力改变allergen-mediated分泌蛋白检查参与组成分泌腺()支气管肺泡灌洗(BAL),使用人工控制接触模型。gydF4y2Ba
我们空气污染暴露实验室(APEL)强劲模型现实世界的情况,包括co-exposures,确定应对空气污染在人类gydF4y2Ba11gydF4y2Ba]。我们最近发现,德和过敏原一氧化碳暴露改变基因表达(gydF4y2Ba12gydF4y2Ba)和诱导表观遗传变化(DNA甲基化(gydF4y2Ba13gydF4y2Ba和microRNA的表达gydF4y2Ba12gydF4y2Ba支气管上皮细胞)。因此,我们假设德可能会改变检查参与组成分泌腺allergen-induced人类落下帷幕。我们执行一个随机,盲法和控制人类接触交叉研究(gydF4y2Ba14gydF4y2Ba),获得BAL (n = 14)从四个接触条件——FAS(过滤空气和生理盐水),联邦航空局(过滤空气和过敏原),DES(柴油机尾气和盐水)和DEA(柴油机尾气和过敏原)——在每一个个体。我们使用label-free定量蛋白质组学定义的变化成分和蛋白质丰富的落下帷幕,gydF4y2Ba即。gydF4y2Ba检查参与组成分泌腺人类支气管,德和过敏原一氧化碳暴露。我们证明DE和过敏原吸入一氧化碳暴露独特增强分泌蛋白质在人体肺部的子集,并进一步选择独立验证单个蛋白质的表达蛋白质组学分析的落下帷幕。gydF4y2Ba
材料和方法gydF4y2Ba
研究设计gydF4y2Ba
本研究机构伦理审查委员会批准的温哥华英属哥伦比亚大学和沿海健康研究所。细节的参与者的人口登记和知情同意在这项研究中所示gydF4y2Ba表S1gydF4y2Ba。我们执行一个order-randomised,双盲交叉过敏性研究人类志愿者暴露2 h的过滤空气(FA)或柴油废气(DE)(标准化的一个点gydF4y2Ba2.5gydF4y2Ba300μg·m的浓度gydF4y2Ba−3gydF4y2Ba)[gydF4y2Ba14gydF4y2Ba]。颗粒大小是由空气动力学直径使用TSI 3936型扫描移动粒子筛选器(美国TSI Inc .、Shoreview、锰),这是用于滴定DE名义颗粒物浓度的条件每立方米2.5μm或更少(实际平均:302每立方米μg,标准差为30.5μg)。这些粒子是由元素碳比率有机碳的四倍,根据采集的样本thermo-optical透射率37-mm tissue-quartz过滤器。粒子数测定的TSI 3775凝结粒子计数器(美国TSI Inc .、Shoreview、锰),计算粒子到14纳米的下限;DE条件下,平均是540每立方厘米000个粒子,而英足总,平均每立方厘米1750个粒子。短暂,参与者(n = 14)吸入足总或德2 h。吸入后,一个肺段挑战标准化(participant-adjusted;基于水疱皮)的浓度过敏原(屋尘螨(gydF4y2Bad . pteronyssinusgydF4y2Ba)、桦木或太平洋草)在5毫升的盐水(gydF4y2Ba14gydF4y2Ba),而5毫升生理盐水就管理侧段。支气管肺泡灌洗(BAL) 48 h后获得了这些领域的挑战。过程是重复相同的4周后,但是相反吸入过敏原的挑战和新领域,导致四个采样条件:FAS(过滤空气和生理盐水),联邦航空局(过滤空气和过敏原),DES(柴油机尾气和盐水)和DEA(柴油机尾气和过敏原)。BAL样本整除和存储在−80°C到处理。gydF4y2Ba
样品处理蛋白质组学gydF4y2Ba
BAL样本解冻在冰上,离心机没有刹车500×gydF4y2BaggydF4y2Ba5分钟在4°C,去除细胞颗粒,紧随其后的是一个额外的离心500×gydF4y2BaggydF4y2Ba5分钟在4°C,获得提取游离。两步离心确保样品是免费蜂窝组件的测量液体的分泌蛋白检查参与组成分泌腺()BAL chromatography-tandem质谱(质/ MS)。随后,球样本集中到200年μL使用Amicon超- 0.5离心过滤装置与Ultracel-3 kDa膜(EMD微孔;热费希尔科学、渥太华,加拿大)。蛋白质浓度测定使用微BCA试验设备(热费希尔科学)。样本汇集和处理使用on-filter消化(10 kDa过滤器),如前所述[gydF4y2Ba15gydF4y2Ba]。短暂,总蛋白(40μg)从每个条件(n = 5)汇聚起来,而接受100毫米德勤(二硫苏糖醇)60°C 60分钟。100年样本混合冷却μL 8 m尿素和100毫米三pH值8.0 (UA缓冲区),然后转移到一个超- 0.5与Ultracel-10膜离心过滤装置,旋转在000×12gydF4y2BaggydF4y2Ba15分钟。滞留物稀释至400年μL UA缓冲和离心机(12 000×gydF4y2Bag)gydF4y2Ba15分钟去除多余的德勤,两次。50 mM碘乙酰胺(400μL)刚做好的在UA缓冲区添加到集中样本和孵化在黑暗中30分钟。样本离心机在000×12gydF4y2BaggydF4y2Ba15分钟,洗两次400μL UA缓冲减少剩余碘乙酰胺。UA缓冲区交换了50毫米三pH值8.0,5毫米CaClgydF4y2Ba2gydF4y2Ba(DG缓冲区),400年通过添加μL DG缓冲和离心法在000×5分钟gydF4y2BaggydF4y2Ba两次。Sequencing-grade胰蛋白酶(Promega)添加在1:50率和孵化16 h 37°C和温和的颤抖。消化蛋白和2 m氯化钠(最后的500毫米氯化钠浓度)和离心机在000×12gydF4y2BaggydF4y2Ba10分钟。过滤器是洗一次400μL 50%甲醇,一次在400年μL 15%乙腈和0.1% trifluoroactic酸在水里,通过离心5000×gydF4y2BaggydF4y2Ba5分钟,筛选了肽从每个清洗步骤是收集池使用SpeedVac集中器和干。gydF4y2Ba
质/女士gydF4y2Ba
tryptic-digested肽进行了分析使用2 d质/ MS,如前所述[gydF4y2Ba16gydF4y2Ba]。短暂,肽溶解在20毫米甲酸铵(800μL)和离线在C18反相柱分离成八分数10.0 pH值。每个分数分析在5600三TOF质谱计(SCIEX、加拿大)标准MS / MS数据采集模式的依赖。肽识别和定量是通过使用X !串联(气旋2012.10.01.1)。人类数据库源蛋白质组是2015年6月发布SwissProt(20186蛋白质)。肽被确定使用下面的搜索设置:常数修改C + 57.021(胱氨酸保护);变量的修改:M, W + 15.995(氧化)+ 31.989(双氧化);S T Y + 79.966(磷酸化);N, Q + 0.984(脱酰氨基作用);父母质量误差±20 PPM; fragment mass error 0.1 Da. Proteins identified with at least two unique peptide sequences and confidence values of log(e)<−3 were selected. The sum of the MS/MS fragment intensities of each member peptide was used for label-free quantitation for each selected protein, and mapped onto a log2 scale for differential analyses.
西方的屁股gydF4y2Ba
BAL样本(75μL)集中使用Amicon∼30μL Ultra-3 kDa过滤器。样品(15μL)解决在4% - -12% Bis-Tris蛋白质凝胶(表达载体),和沾染了朱红色污点枚举总值是否有不同样本之间的总蛋白质含量差异为每个参与者。质/女士进行了研究使用相同的蛋白质在样本数量,使用体积正常化在验证研究提供了更多的生理条件相关的二线的证据的蛋白质。免疫印迹分析,蛋白质被转移到硝化纤维素膜(EMD微孔,热费希尔科学),屏蔽与TBST(20毫米Tris-HCl pH 7·5, 150毫米氯化钠,Tween-20 0·1%)含有5% (w / v)奶粉、和探索人类抗体CST2 (Origene TA504268) LCN1 (Abcam ab76611)和TCN1 (Abcam ab118386) TBST含有1% (w / v)奶粉。Affinity-purified辣根peroxidase-linked二级抗体(细胞信号)是用于检测。膜是用一个Amersham发射极耦合逻辑检测系统(通用电气医疗集团)根据制造商的指示。微乐队强度是决定使用一个αInnotech成像仪与AlphaView软件。gydF4y2Ba
ELISAgydF4y2Ba
支气管冲洗(100μL)获得每次曝光条件从九个不同的参与者评估使用LSBio C4B丰富人类补C4B酶联免疫试剂盒(LS-F11162)根据制造商的建议。gydF4y2Ba
免疫组织化学gydF4y2Ba
支气管活检后48 h收集每个曝光和处理(n = 6参与者),如前所述[gydF4y2Ba17gydF4y2Ba]。简而言之,活检与冷丙酮固定含有蛋白酶抑制剂碘乙酰胺(20 mM)和phenylmethylsulfonylfluoride (PMSF;2毫米)隔夜−20°C,然后嵌入在甲基丙烯酸乙二醇酯丙烯酸树脂(GMA)。部分(2µm)处理0.3% HgydF4y2Ba2gydF4y2BaOgydF4y2Ba2gydF4y2Ba叠氮化钠和0.1%,封锁与20%胎牛血清和1%牛血清白蛋白在杜尔贝科修改鹰的媒介。的部分探索了anti-MUC16抗体(Abcam ab110640),其次是二次抗体(ba - 1000生物素化的山羊anti-rabbit免疫球蛋白(H + L)向量Z0619)。Vectastain精英ABC工具包(向量)和原子能委员会衬底溶液(微孔)是用于检测avidin-biotin-peroxidase复杂的解决方案,根据制造商的协议。部分与迈耶的苏木精复染色(Dako)。部分染色在重复,从每个活检和五个不同的地区拍摄60×放大使用evo FL汽车细胞成像系统(热费希尔科学)。彩色部分是由三个独立的评估得分的,盲目的条件,如下;0 = -(没有检测到染色);1 =焦染色(< 25%的上皮细胞阳性染色);2 =适度染色(25% -50%的上皮细胞是积极的);积极性和3 =广泛的染色(> 50%)。gydF4y2Ba
统计分析gydF4y2Ba
统计分析进行验证研究个体BAL样本进行Wilcoxon配对符号秩的测试使用GraphPad棱镜软件。假定值小于0.05的被认为是具有统计学意义。gydF4y2Ba
结果gydF4y2Ba
柴油废气改变了检查参与组成分泌腺allergen-mediated在支气管肺泡灌洗gydF4y2Ba
BAL样本(n = 5)的一个子集是汇集为每个条件和处理2 d质/女士[gydF4y2Ba16gydF4y2Ba]。光谱(MGF格式)和蛋白质定量结果可以在加州大学圣地亚哥的加入没有存档(massive.ucsd.edu)。MSV000081110。首先,检查参与组成分泌腺allergen-mediated描绘DE的效果,我们比较蛋白质强度在三个条件(FAS, FAA和DEA)。合成矩阵量化1894蛋白质高的信心(至少有两个独特的肽和蛋白质的信心值日志(e) <−3),其中869蛋白在所有三个条件(是很常见的gydF4y2Ba图1一个gydF4y2Ba)。蛋白质强度值这869个常见的蛋白质在联邦航空局正常化和DEA样本,使用FAS(控制)样本。随后这些正常的蛋白质表达水平的比较表明,DEA一氧化碳暴露显著改变检查参与组成分泌腺allergen-mediated (gydF4y2Ba图1 bgydF4y2Ba)。log2蛋白质表达的差异值两者之间的接触是转换成正常的z分数。过滤器的Z | | > 1.65用于选择最外层的10%人口,或p < 0.05为高斯分布,在869常见的蛋白质。z分数过滤器证明79蛋白的表达增加大于4倍(42蛋白质差异和37衰减)DEA一氧化碳暴露后,相比allergen-alone接触(gydF4y2Ba表S2gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
已经占了大多数基因本体论这79个蛋白质,使用InnateDB生物分子识别数据库(gydF4y2Ba18gydF4y2Ba),是细胞外水泡外来体(p < 1.0×10gydF4y2Ba−5gydF4y2Ba检查参与组成分泌腺),确认定义的“”确实是主要由分泌蛋白。使用创造力进一步审讯gydF4y2Ba®gydF4y2Ba路径分析(IPA)生物信息学工具显示40 79蛋白质被连接在一个单一的生物网络,采用直接和间接的关系(gydF4y2Ba图2gydF4y2Ba)。这个网络证明了DEA一氧化碳暴露改变allergen-induced蛋白的表达在两大相互联系的过程:先天免疫和炎症(gydF4y2Ba如。gydF4y2BaMAPK1、ERK1/2 RAB5C, CD93和粘蛋白家族蛋白)和氧化应激通路(主要是蛋白磷酸酶2)。生物学途径预测受到了DEA一氧化碳暴露使用豹代表测试是n -乙酰氨基葡萄糖的新陈代谢,细胞骨架调节RhoGTPases, toll样受体信号、FGF(纤维母细胞生长因子)信号和t细胞激活,所有广泛参与先天免疫,炎症和氧化应激。gydF4y2Ba
进一步列举DEA-mediated蛋白质变化是否由过敏原或德,我们进行k - means聚类为869年常见的蛋白质,使用信号强度值从所有四个条件(FAS, DES, FAA和DEA)。这表明,40蛋白质独特上调针对DEA,相比德或独自过敏原(gydF4y2Ba图3gydF4y2Ba)。的蛋白质被DEA增强,只有三个被allergen-alone >引起的4倍,且只有一个被DE-alone >引起的4倍,和八个蛋白中没有检测到DE-alone样本(gydF4y2Ba图3 bgydF4y2Ba和gydF4y2Ba表S2gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
Allergen-induced cystatin-SA被吸入柴油机尾气显著增强gydF4y2Ba
检查参与组成分泌腺我们的分析表明,在前10的蛋白质增加BAL DE +过敏原一氧化碳暴露,只有两种蛋白质增加以应对allergen-alone (gydF4y2Ba表S2gydF4y2Ba)。这两种蛋白质,CST1和CST2属于半胱氨酸蛋白酶抑制物的家庭。Cystatin-SA (CST2)丰度增强了allergen-alone (> 3.5 log2褶皱变化FAS相比),这进一步增加了> 16倍(> 4 log2褶皱变化),以应对DE +过敏原一氧化碳暴露。因此,我们继续验证表达式的cystatin-SA探索个人BAL样本来自个人参与者(n = 7)由西方墨迹图(gydF4y2Ba图4gydF4y2Ba)。微密度分析的所有个体西方墨迹图表明,接触allergen-alone、但不是DE-alone,显著增加大量的CST2(中位数的增强是> 5倍),而接触FAS。此外,allergen-induced CST2丰度进一步提高了DE > 20倍+过敏原一氧化碳暴露,从而确认蛋白质组学数据。gydF4y2Ba
验证选择其他蛋白表达的蛋白质组学分析gydF4y2Ba
生物多样性可以混淆omics-based研究的推论,我们选择了四个额外的蛋白质,增强≥16倍(> 4 log2褶皱变化)一氧化碳暴露DEA,联邦航空局(相比gydF4y2Ba表S2gydF4y2Ba)- - -补充C4B, lipocalin-1 (LCN1) mucin-16 (MUC-16)和transcolbamin-1 (TCN1)为进一步验证研究,如下所述。gydF4y2Ba
大量LCN1和TCN1探索个人BAL样本获得独立的参与者(n = 8)从所有四个条件(FAS, DES, FAA和DEA)由西方墨迹。LCN1 (gydF4y2Ba图5gydF4y2Ba)和TCN1 (gydF4y2Ba图5 bgydF4y2Ba)显著增加allergen-alone和DEA一氧化碳暴露,但不是针对DE-alone (n = 8)。通过DEA一氧化碳暴露Allergen-induced LCN1和TCN1增强;然而,这并没有统计学意义。因此,我们进一步评估蛋白表达的趋势LCN1和TCN1个体参与者(n = 8),其中每个参与者作为他/她自己的控制。Allergen-alone增强LCN1丰度≥2倍五的八个人(> 60%);在三个参与者,进一步增强了LCN1 DEA一氧化碳暴露(gydF4y2Ba图5度gydF4y2Ba和gydF4y2Ba表S3gydF4y2Ba)。同样,allergen-alone增强TCN1丰度≥2倍六个八个参与者(∼75%);在三种,TCN1进一步加强了DEA一氧化碳暴露(gydF4y2Ba图5 dgydF4y2Ba和gydF4y2Ba表S3gydF4y2Ba)。应该注意的是,在一个参与者,TCN1表达增强> 20倍的DEA一氧化碳暴露与FAS一氧化碳暴露相比,但没有发现allergen-alone样本。gydF4y2Ba
ELISA C4B蛋白质的浓度监测的支气管冲洗从独立参与者(n = 10)。C4B丰度显著增加了接触allergen-alone和DEA一氧化碳暴露,但不是通过接触DE-alone (gydF4y2Ba图6gydF4y2Ba)。然而,allergen-induced C4B不是增强了DEA一氧化碳暴露。统计分析在独立验证研究演示了在几个主要的统计学意义gydF4y2Ba先天的gydF4y2Ba成对比较。然而,这样的意义不再是现在在正式(Bonferroni)修正多重比较。gydF4y2Ba
MUC-16,组件产生的呼吸道粘液上皮(gydF4y2Ba19gydF4y2Ba),通过免疫组织化学方法量化在支气管活检(n = 6)。针对DEA MUC-16生产趋于更高一氧化碳暴露,相对于FAS和FAA;然而,这并不是发现统计学意义(gydF4y2Ba图7gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
讨论gydF4y2Ba
这是第一个研究提供一个详细的检查与吸入一氧化碳暴露DE如何改变allergen-mediated全球蛋白质分泌人类肺部检查参与组成分泌腺()。我们的研究结果表明,DEA独特增强了大量分泌蛋白的一个子集落下帷幕,这意味着蛋白质增强DE +过敏原一氧化碳暴露会错过mono-exposure研究。这项研究强调了使用复杂控制人类一氧化碳暴露模型的重要性,和蛋白质组分析的力量,为了更好地理解吸入环境因素的影响,如空气污染,对人类的健康。gydF4y2Ba
生物信息学分析审问的蛋白质改变针对DEA一氧化碳暴露相对于allergen-alone表明,50%以上的蛋白质相互联系在一个生物网络。抑制DEA一氧化碳暴露后的一个主要中心是MAPK1-ERK1/2轴,一个关键途径,正面和负面调节炎症(gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba]。这是符合我们之前的研究使用有针对性的方法,增加展示特定的炎症标记物的表达在流通和DE +吸入过敏原一氧化碳暴露后的航空公司(gydF4y2Ba14gydF4y2Ba,gydF4y2Ba21gydF4y2Ba]。我们还表明,microrna的表达,比如mir - 132 - 3 p,与炎症相关基因调控是改变在控制人类接触模型(DEA一氧化碳暴露后gydF4y2Ba12gydF4y2Ba),在这项研究中使用。目标基因mir - 132 - 3 - p,如CDKN1A,在我们之前的研究中详细报道由德+过敏原一氧化碳暴露,表观遗传变化调制(gydF4y2Ba12gydF4y2Ba)也被观察到在这项研究中被改变的蛋白质水平。有趣的是,已知ERK1/2通路调节mir - 132集群(gydF4y2Ba22gydF4y2Ba]。综上所述,这些研究表明,机制DE-mediated MAPK1-ERK1/2炎症反应可能是介导的通路。gydF4y2Ba
ERK1/2通路也完整地连接到控制的氧化应激反应诱导蛋白磷酸酶2 (PP2A),这是增强后DEA一氧化碳暴露在网络分析。表达的已知PP2A直接增强线粒体活性氧(ROS),我们的分析表明,DE加剧了allergen-induced氧化应激反应。这是符合我们的先前的研究发现将吸入DE-related气道反应与氧化应激代谢的基因变体(gydF4y2Ba23gydF4y2Ba,gydF4y2Ba24gydF4y2Ba]。这也证明了我们最近的研究证实DE粒子激活瞬时受体电位通道启动呼吸反射ROS-dependent机制(gydF4y2Ba25gydF4y2Ba]。DE粒子被诱导活性氧和各种流行病学研究表明DE协会与氧化应激反应(gydF4y2Ba26gydF4y2Ba]。本研究氧化应激相关蛋白BAL细节改变后吸入DE +过敏原一氧化碳暴露。总的来说,生物信息学分析表明,蛋白质被德+过敏原一氧化碳暴露主要是那些参与炎症和氧化应激通路。gydF4y2Ba
我们演示了——使用一个广泛omics-based方法和进一步有针对性的独立验证研究——allergen-induced CST2显著增加针对DE +过敏原吸入一氧化碳暴露。这是第一个研究来描述CST2表达落下帷幕。CST2是一种细胞外抗菌肽与先前描述为来自唾液蛋白酶抑制活性(gydF4y2Ba27gydF4y2Ba]。有有限的信息关于半胱氨酸蛋白酶抑制物在免疫反应的作用。已知CST2诱导促炎细胞因子的生产如IFN-γ和il - 6,并促进NF-κB活动(gydF4y2Ba28gydF4y2Ba,gydF4y2Ba29日gydF4y2Ba]。这些研究表明,CST2可以促进炎症反应。从本研究结果,证明DE-mediated allergen-induced增加炎症蛋白质CST2,对齐与我们最近的研究中,表明DE可以提高低气道炎症在过敏的人gydF4y2Ba14gydF4y2Ba]。这也证实了先前的研究证明CST2增加的表达在不受控制的哮喘患者的痰gydF4y2Ba30.gydF4y2Ba]。半胱氨酸蛋白酶抑制物的相关肽家族,cystatin-SN (CST1),与上呼吸道炎症和描述是一个生物标志物在鼻腔灌洗吸入金属毒素(gydF4y2Ba31日gydF4y2Ba]。CST1还发现>三倍增加了DEA一氧化碳暴露,allergen-alone暴露相比,蛋白质组学分析。因此,本研究的结果推动调查半胱氨酸蛋白酶抑制物,以应对空气污染的作用。gydF4y2Ba
结果从我们的独立验证研究探索个人BAL样本的一些蛋白质的丰度选择检查参与组成分泌腺的数据没有统计学意义或者没有证实蛋白质组学分析。例如,检查LCN1和TCN1个人BAL样本中不同条件下表现出相当大的生物样本之间的差异,和验证研究C4B检查参与组成分泌腺不与分析。这些验证研究强调独立的重要性,确认使用不同的方法来协调生物差异人类生物标志物的选择从omics-based分析方法。这些结果表明,虽然池体液检查参与组成分泌腺的分析是一个有效的方法来克服样本容量和体积约束(gydF4y2Ba32gydF4y2Ba),这并不是最优捕获自身内在动力和可能倾斜定量估计代表最高和样品池的变化。gydF4y2Ba
尽管观察生物可变性,我们的研究结果表明,DEA一氧化碳暴露增加LCN1 TCN1丰富落下帷幕。TCN1尚未被描述在气道炎症或呼吸道疾病。LCN1属于家庭的蛋白质称为lipocalins。LCN1最有用眼泪表达,但也在上、下呼吸道,落下帷幕,痰gydF4y2Ba33gydF4y2Ba]。这项研究的结果相似,LCN1从吸烟者(上调落下帷幕gydF4y2Ba34gydF4y2Ba]。LCN1曾被人类呼吸道疾病相关,gydF4y2Ba如。gydF4y2Ba在慢性阻塞性肺病(慢性阻塞性肺病)(gydF4y2Ba35gydF4y2Ba和囊性纤维化gydF4y2Ba36gydF4y2Ba]。动物lipocalins已知过敏原促进Th2反应和炎症(gydF4y2Ba37gydF4y2Ba]。因此,它可能LCN1也可能导致allergen-mediated Th2-skewed炎症后吸入暴露。gydF4y2Ba
我们的蛋白质组学分析确定几个黏蛋白(MUC-4 MUC-5B和MUC-16)检查参与组成分泌腺中增强BAL DE +过敏原一氧化碳暴露,而allergen-alone曝光。然而,我们在验证研究关注MUC-16这是DE >会增加16倍+过敏原一氧化碳暴露,而allergen-alone曝光。MUC-16是一个组件产生的呼吸道粘液上皮(gydF4y2Ba19gydF4y2Ba]。我们表明,针对DEA一氧化碳暴露MUC-16生产趋于更高,相对于saline-alone和allergen-alone暴露于支气管活检;然而,这并没有统计学意义。这就提出了一个可能性,MUC-16分泌,但不生产,增强了DEA一氧化碳暴露。然而,检查参与组成分泌腺球定义在本研究针对DE +吸入过敏原检查提供了理由的影响空气污染对allergen-induced黏蛋白。gydF4y2Ba
总的来说,我们已经证明,DE +过敏原吸入一氧化碳暴露可以增强人类肺分泌蛋白质的丰度。使用一个全面的蛋白质组学方法,我们已经确定了新的蛋白质候选人由德+增强过敏原一氧化碳暴露在人类身上。有些蛋白质相关炎症介质和控制哮喘,比如cystatin-SA。我们的研究结果表明,过敏性患者已经敏感过敏原暴露后可能会受到空气污染。鉴于全球患病率高的特异反应性(gydF4y2Ba38gydF4y2Ba],共性的曝光,我们的研究在国际上对公众健康有相当大的关系。gydF4y2Ba
补充材料gydF4y2Ba
补充材料gydF4y2Ba
请注意:gydF4y2Ba补充材料并不是由编辑部,编辑和上传已由作者提供。gydF4y2Ba
表S1-S3gydF4y2Baerj - 01385 - 2017 - _supplementary_tablesgydF4y2Ba
确认gydF4y2Ba
作者欣然承认Jeremy副大臣,奥列格Krokhin和约翰·威尔金斯的广泛讨论和知识投入这项研究。gydF4y2Ba
作者的贡献:CC和纳米研究构想。NM和PE进行LC / MS-MS实验,对进行了生物信息学分析,惠普执行西方的屁股,MH进行免疫组织化学和CR进行ELISA检测。纳米写的手稿,蛋白质组学的领导团队。CC是高级领导在这项研究中,进行支气管镜检查和样本收集,提供了广泛的知识输入,和广泛的编辑了手稿。所有作者审查和编辑最后的手稿。gydF4y2Ba
脚注gydF4y2Ba
可以从本文的补充材料gydF4y2Bawww.qdcxjkg.comgydF4y2Ba
支持声明:本研究经费是来自英国哥伦比亚肺脏协会神达,过敏原,加拿大卫生研究院的研究(CIHR)。n . Mookherjee M.H. Ryu和c Carlsten是加拿大呼吸研究网络的成员(CRRN)。资金信息,本文已沉积的gydF4y2BaCrossref资助者注册表gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
利益冲突:没有宣布。gydF4y2Ba
- 收到了gydF4y2Ba2017年7月10日。gydF4y2Ba
- 接受gydF4y2Ba2017年10月30日。gydF4y2Ba
- 版权©2018人队gydF4y2Ba
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