文摘
白介素8 (IL)水平高于正常在囊性纤维化(CF)航空公司,导致中性粒细胞浸润和non-resolving炎症。超表达目标引发的microrna表达在气道上皮细胞可能代表囊性纤维化的治疗策略。
引发蛋白质和mRNA测量在囊性纤维化和non-cystic纤维化支气管肺泡灌洗液和支气管刷每组(n = 20)。microrna减少肺囊性纤维化和预测目标引发mRNA在βENaC-transgenic量化,囊性纤维化跨膜电导调节(雌性生殖道)- / -和野生型小鼠,主要囊性纤维化和non-cystic纤维化支气管上皮细胞和囊性纤维化与non-cystic纤维化气道上皮细胞系或细胞和脂多糖刺激,假单胞菌条件培养基或囊性纤维化支气管肺泡灌洗液。microrna的影响过度引发蛋白质生产测量。
mir - 17调节引发及其表达式在成人支气管刷囊性纤维化,减少βENaC-transgenic老鼠和支气管上皮细胞长期刺激假单胞菌条件的媒介。超表达mir - 17抑制基底和agonist-induced F508del-CFTR引发蛋白质生产纯合子CFTE29o−气管,CFBE41o−和/或IB3支气管上皮细胞。
这些结果暗示CFTR缺陷检测、炎症、嗜中性和粘液生产过剩mir - 17的监管。调制mir - 17在囊性纤维化支气管上皮细胞表达可能是一种新型抗炎的策略对囊性纤维化和其他慢性气道炎症性疾病。
文摘
超表达mir - 17的囊性纤维化气道上皮细胞减少interleukin-8蛋白的生产http://ow.ly/MZbXB
介绍
囊性纤维化(CF)是一种多系统疾病;然而,它的肺部表现主要是负责相关的高发病率和死亡率[1,2]。CF肺病的一个显著特征是中性粒细胞浸润的高水平。中积累的大量的中性粒细胞CF肺分泌蛋白酶,淹没了正常antiprotease和抗菌防御,和一起neutrophil-derived氧化剂引起呼吸道上皮表面的错乱和促进炎性基因表达(3]。因此中性粒细胞和他们的产品发挥重要作用在CF肺部炎症。重要的是,中性白细胞蛋白酶,如中性粒细胞弹性蛋白酶和其他嗜中性粒细胞或microbial-derived炎性因子在CF肺会加剧neutrophil-dominated炎症诱导表达白介素8 (IL) (4]。引发大量出现在CF肺癌和是一个强有力的中性粒细胞趋化因子。因此,抑制引发表达式代表一个抗炎策略来控制过度neutrophil-dominated肺部炎症CF。
引发支气管上皮细胞和巨噬细胞表达的肺。CF在很大程度上是一种呼吸道疾病,巨大的表面积可能发炎CF支气管上皮代表引发的主要来源。最近的研究表明,策略旨在干扰引发基因转录使用CF(转录因子诱饵可能的治疗潜力5,6]。小干扰(si) rna介导的抑制引发表达分化气道上皮细胞是另一个策略7];然而,干涉的转录后调控引发也是可能的。
微(mi)内生非编码rna)短单链rna作为转录后负调控分子。他们调节目标基因的表达通过目标信使rna降解和/或平移压迫和涉及的主要监管机构在几乎所有的生物过程(8,9]。microrna microrna的识别元素(研究硕士)主要位于(UTR)的3′端非翻译区目标mrna。治疗调制的microrna的水平是可能的过度使用合成microrna的模仿或反义抑制anti-miRs [10]。在CF肺部,引发表达式是持续高企,我们推测,microrna调节引发表达式可能会相互地下降。如果是一个超表达方法使用microrna的模仿可能有治疗潜力。
第一个在活的有机体内使用CF CF microrna测定进行了研究与non-CF支气管刷(11];然而microrna的作用在调节引发并没有解决。Hu等。(12)表明,引发容易调制mir - 520 - b在乳腺癌细胞中,而Yuet al。(13)表明,调节引发3′UTR miR-17/20集群。其他的研究已经报道,mir - 203和miR-93/106b调节引发的表达14,15]。Bhattacharyya等。(16]报道如何增加mir - 155的水平间接提升引发CF IB3细胞,CF支气管刷和CF中性粒细胞。最近,Fabbriet al。(17)表明,mir - 93调节引发生产CF气道上皮细胞系以应对heat-killed铜绿假单胞菌。
这里我们量化引发mRNA和蛋白表达水平在临床样本和CF患者的肺。我们研究的贡献改变microrna的表达谱在CF支气管刷水平高于正常引发mir - 17的水平,探索原因,引发的验证监管机构。我们比较发现候选人microrna的表达与CF-likeβENaC-transgenic小鼠肺病和CF transmembrance电导调节器(雌性生殖道)- / -老鼠,并探索可能降低基底和agonist-induced引发表达式通过CF支气管上皮细胞使用microrna的模仿。
方法和材料
在计算机分析
生物信息学分析使用microrna的目标预测数据库TargetScanHuman 6.2, MicroRNA.org,皮塔饼,搜索microrna缩影预测目标人类引发的3′UTR序列或小鼠的3′UTR KC /处于受控。
支气管肺泡灌洗液和支气管刷取样,microrna测定,主要的上皮细胞培养和定量逆转录酶聚合酶链反应
之后根据协议批准的书面知情同意博蒙特医院伦理审查委员会(爱尔兰都柏林):1)支气管肺泡灌洗(BAL)流体从CF患者(n = 12,意味着±sd27岁±1.4岁,男:女4:8)和non-CF控制个人(n = 12, 60±4.8岁,男:女3:9),如前所述[18];和2)支气管刷取样和RNA孤立如前所述11从CF (n = 8, 28.2±4.6岁,男:女4:4)和non-CF控制个人(n = 8, 48.5±6.02岁,男:女4:4)。CF个人经汗水基因型和在网上列出测试和/或补充表S1。Non-CF控制个体进行探索性调查特发性的咳嗽支气管镜检查。五个成人CF和non-CF支气管刷样品以前用于microrna的表达分析(11];其余被用于随后的microrna的验证研究和定量逆转录酶聚合酶链反应(RT)。
根据协议批准后书面知情同意的伦理审查委员会夫人的儿童医院Crumlin(爱尔兰都柏林)、原发性上皮文化建立了从七CF(3±0.61岁,男:女5:2,ΔF508 /ΔF508 (n = 5),ΔF508 / C。1766 + 1 g > (n = 1)和ΔF508 /未知(n = 1))和两个non-CF(0.54±0.45岁,男:女2:0)支气管刷收集的一部分研究宿主免疫和早期肺病CF(盾CF),如前所述[19]。此外,使用mRNA表达分析数据从三个ΔF508 /ΔF508和三个non-CF支气管刷之前报道(20.]。
引发ELISA
引发蛋白质浓度平衡液和细胞上清液测定夹心ELISA(研发系统,阿宾顿,英国)。
测量定量rt - pcr的信使rna表达水平
总RNA提取使用试剂盒(表达载体,或者美国)和反向转录成cDNA使用Quantitect逆转录工具包(美国试剂盒,瓦伦西亚,CA)。mRNA表达测量使用LightCycler 480 SYBR绿色我主人混合(罗氏,希尔伯吉斯,英国)罗氏LC480 LightCycler。引发mRNA的表达相对于β-actin决心使用2−ΔΔCt方法。引物如下使用。引发:向前5′-TTTTGCCAAGG AGTGCTAAAGA-3′、反向5′-AACCCTCTGCACCCAGTT TTC-3′;向前和β-actin: 5′-GGACTTCG AGCAAGAGATGG-3反向′5′-AGGAAGGAAGGCRTGG AAGAG-3′。定量rt - pcr也进行STAT3 TIMP2 p21和使用以下引物。信号传感器和激活的转录(STAT) 3:向前5′-GGACATCAGCGGTA AGACCC-3′,反向5′-GCTCTCTGGCCGACA ATACT-3′;金属蛋白酶组织抑制剂(TIMP) 2:向前5′-CTCATTGCAGGAAAGGCCGA-3反向′5′-GGAGGAGATGTAGCACGGGA-3′;向前和p21: 5′-GTGGACCTGTCACTGTCTTGT-3反向′5′-GGTAGAAATCTGTCATGCTGGTCT-3′。所有定量rt - pcr实验进行了一式三份,包括没有模板控制。
测量人的microrna的水平
总RNA的互补脱氧核糖核酸生成使用TaqMan微RNA逆转录工具包(美国应用生物系统公司,培育城市,CA)。microrna的表达是衡量罗氏LC480 Lightcycler使用TaqMan化验(应用生物系统公司)。microrna的表达相对于U6小核RNA (sn)确定使用2−ΔΔCt方法。定量rt - pcr实验细胞系进行了一式三份,至少三次,包括没有模板控制。
老鼠的研究
实验动物被安置在一个特定的无菌动物设施海德堡大学(德国海德堡)和可以免费获得食物和水。βENaC-transgenic(βENaC-Tg)鼠标最初生成的混合遗传背景(摘要:他×C57BL / 6), backcrossed C57BL / 6背景如前所述[21]。Transgene-positive老鼠的基因组DNA聚合酶链反应(22]。记录分析,我们收集了全部肺匀浆从枚老鼠和气管和主支气管源自两星期6周大的老鼠,如前所述[23),即。在年龄当βENaC-Tg老鼠报道展示CF-like肺部疾病(24]。肠道纠正雌性生殖道击倒(雌性生殖道- / -)小鼠overexpressing人类雌性生殖道肠脂肪酸结合蛋白启动子的控制请提供的杰弗里·a·Whitsett(肺分工生物学,辛辛那提儿童医院医学中心,辛辛那提,哦,美国),backcrossed C57BL / 6的背景,如前所述的基因(21,25]。记录的分析雌性生殖道- / -老鼠在支气管30周的老鼠,即。在一个时代雌性生殖道- / -老鼠展示multiorgan病理报告(26]。使用试剂盒试剂总RNA是孤立的。实时定量rt - pcr mmu-miR-17和mmu-let-7b正常化使用TaqMan U6核内小rna进行化验。拜尔在执行6βENaC-Tg老鼠和30周雌性生殖道- / -老鼠,从cytospin准备和微分细胞计数测定,如前所述[24]。在所有的实验中,与野生型的同胞作为控制。
荧光素酶报告分析
HEK293细胞从欧洲收集细胞培养(英国公共卫生英格兰,Porton) (2×105一式三份)瞬变co-transfected 24 h,引发3′UTR萤火虫荧光素酶记者向量包含完整的3′UTR (250 ng)(请提供的r . Pestell托马斯杰弗逊大学,费城,宾夕法尼亚州,美国(13),一个本构Renilla荧光素酶向量(100 ng)和30 nM合成Pre-miR microrna的前体(PM)或AntimiR microrna的抑制剂(AM)(应用生物系统公司),显示或紧急控制。转染进行使用GeneJuice(美国WI Novagen,麦迪逊)质粒DNA和RiboJuice (Novagen)血清microrna OptiMEM减少媒体(生命技术),推荐。AntimiRs并不总是降低目标microrna的和我们测量变量antimiR-specific目标microrna击倒的20 - 80%使用转染条件优化之前,以确保统一的转染所有井(27]。溶菌产物准备36 h post-transfection和荧光素酶活动测量使用荧光素酶检测系统(Promega)和coelenterazine(标志基因技术,尤金,或者美国)。相对荧光素酶活性进行了计算。
16 hbe14o - / CFBE41o−9 hteo——/ CFTE29o−和S9 / IB3上皮细胞的研究
人类non-CF 16 hbe14o−和9 hteo−和F508del纯合子CFBE41o−和CFTE29o−支气管和气管上皮细胞系提供作为礼物从d Gruenert(加州太平洋医疗中心研究所、旧金山、钙、美国)(28,29日]。IB3细胞是一个CF支气管上皮细胞系(F508del / W1282X), s9是他们同基因的non-CF同行,两人都来自帕梅拉蔡特林(巴尔的摩约翰霍普金斯儿童中心,医学博士,美国)(30.]。16 hbe14o−/ CFBE41o−和9 hteo−/ CFTE29o−细胞生长在MEM + GlutaMax (Gibco) 10%胎牛血清(FCS);penicillin-streptomycin Gibco)和1% (Pen-Strep;Gibco)。9 hteo−/ CFTE29o−细胞补充1×不必要的氨基酸(Lonza)。IB3和S9细胞生长在LHC-8介质(Gibco) Pen-Strep FCS为5%和1%。在一些实验S9细胞生长密度的5×105细胞·厘米−2和长期刺激(5天)31日)为1%假单胞菌条件培养基(PCM) [27在LHC-8介质(Gibco) Pen-Strep FCS为1%和1%。媒体每天都改变了。
细胞被播种在1×105,0.5×105和0.8×105细胞·厘米−216 hbe14o−/ CFBE41o−9 hteo——/ CFTE29o−和S9 / IB3分别转染了30 nM炒控制或使用RiboJuice转染试剂经前综合症。在最初的实验中,用荧光标记的细胞co-transfected新miRIDIAN microrna的模仿(Dharmacon)监控和优化转染效率;> 80 - 90%的细胞转染所监控的数字化和microrna的表达增加点转染后(24]。成熟的microrna的表达以转染细胞,以确保有效的转染。24或48小时post-transfection细胞如果或刺激铜绿假单胞菌脂多糖(LPS)(10µg·毫升−1;Sigma-Aldrich,基尔肯尼,爱尔兰),1% PCM或10µL·毫升−1CF BAL流体进一步24小时。上层清液保留了引发蛋白质分析。
统计分析
所有分析使用GraphPad PRISM 4.0(美国圣地亚哥,CA)。结果表示为±扫描电镜并通过t检验和方差分析,比较表示。方差分析,事后Dunnett测试是用于两两相比。在p≤0.05差异被认为是重要的。
结果
水平的增加引发CF与non-CF声波测井流体和支气管刷
许多研究报道引发高于正常水平的CF肺。为了证实我们的病人队列中观察到,引发的蛋白质含量在矿山测量流体收集从主题和CF。图1一个显示了引发CF的水平显著升高与non-CF BAL液样本。
接下来,引发mRNA表达测量选择CF和non-CF支气管刷。图1b显示引发mRNA的表达,相对于β-actin mRNA, CF显著增加在活的有机体内。
microrna预测目标引发3′UTR CF支气管上皮细胞
的microrna的目标预测数据库被审问microrna认同可能引发的监管作用。图2一个显示了许多microrna预测目标引发3′UTR TargetScan 6.2, MicroRNA.org和皮塔饼/缩影。这些列表是cross-compared microrna下降在活的有机体内在CF支气管刷11]。表1显示细节的microrna选择的基础上进一步研究1)的相对表达水平(重要)的microrna的CF与non-CF支气管上皮细胞;2)数量的预测研究硕士引发3′UTR;和3)microrna的支持向量识别(miR-SVR)得分。选中的microrna let-7b, mir - 17和mir - 203,这都大大降低了在活的有机体内CF支气管刷,miR-19b和mir - 125 b,预测目标引发,但表达的是一成不变的CF与non-CF刷牙。所选的microrna, let-7b和mir - 17被microrna的独立验证试验是低于正常水平的剩余原始CF与non-CF支气管刷样品用于分析(mir - 17: 1±0.42与0.38±0.21,let-7b: 1±0.85与0.57±0.21为控制与分别CF支气管刷;不显著)。图2b描述了完整的人类引发3′UTR预测绑定位置选择感兴趣的microrna。
mir - 17是引发的最有效的监管机构3′UTR荧光素酶的记者
为了确定哪些选择引发的microrna规范表达,暂时HEK293细胞转染的引发3′UTR荧光素酶记者向量。Co-transfection PMs表明PM-let-7b和PM-17显著降低荧光素酶基因表达而炒控制(图3)。pm - 203, PM-19b pm - 125 b并没有减少荧光素酶的表达,所以这些microrna并没有进一步探索。
荧光素酶检测重复使用AMs击倒let-7b的表达和mir - 17。在相同的转染条件下今年17,但不是AM-let-7b,荧光素酶的表达明显增加(图3b)。mir - 221不预测目标引发和am - 221没有荧光素酶活性降低。这些数据表明,mir - 17是最有效的监管机构引发的microrna下降在活的有机体内在CF与non-CF支气管刷。
mir - 17目标基因的表达在CF与non-CF支气管刷
除了引发,mir - 17的其他目标包括信号传感器和激活的转录(STAT) 3, TIMP2, p21、纤连蛋白和FoxA1 [32- - - - - -36]。信使rna阵列数据从CF和non-CF支气管刷进行分析,以确定这些基因的表达是否增加CF (20.]。在线补充图S1显示而没有增加纤连蛋白的表达或FoxA1 STAT3水平上升的趋势,TIMP2, p21和引发成绩单CF样本。然而,由于小样本大小和/或mir - 17的可能性可能会影响只有蛋白质而不是信使rna和蛋白质水平的这些目标,差异没有统计学意义。
在气道组织表达mmu-miR-17βENaC-transgenic老鼠和雌性生殖道- / -小鼠
mir - 17和let-7b守恒的哺乳动物。为了确定这些microrna的表达改变与CF-like小鼠肺病、mmu-miR-17的水平和mmu-let-7b以全部肺匀浆和本地气道组织(气管和主支气管)枚和两星期6βENaC-Tg小鼠和野生型的同胞和正常化U6核内小rna。在人类CF支气管刷,mmu-miR-17的表达明显减少的气道组织βENaC-Tg老鼠2和6周(图4)。Mmu-let-7b表达倾向于减少βENaC-Tg与野生型小鼠相比;然而,这种差异没有达到统计学意义。
我们也量化mir - 17和let-7b水平雌性生殖道- / -小鼠与野生型的同胞相比。let-7b表达无显著差异。mir - 17水平高得惊人雌性生殖道- / - vs野生型小鼠(图4b)。相比βENaC-Tg老鼠开发一个健壮的自发的中性粒细胞炎症,我们没有检测肺中性粒细胞计数增加雌性生殖道- / -老鼠(在线补充图S2)。此外,雌性生殖道- / -老鼠,不像βENaC-Tg老鼠,不开发杯状细胞化生和气道粘液阻塞24,37]。这些结果表明,慢性呼吸道疾病的相关因素可能有助于减少mir - 17水平CF-like肺病在活的有机体内,并可能负责观察βENaC-Tg mir - 17含量的差异而雌性生殖道- / -老鼠。
表达mir - 17在CF和non-CF细胞系,主细胞和慢性炎症条件下
mir - 17水平下降在活的有机体内在CF支气管刷和βENaC-Tg小鼠自发气道嗜中性和粘液阻塞。接下来我们量化的水平选择CF和non-CF气道上皮细胞线和主支气管细胞的孩子,没有CF。我们没有观察到一个一致的CF mir - 17在所有水平的差异与non-CF细胞系(图5);mir - 17水平略或显著减少IB3和CFBE细胞与分别non-CF同行,而mir - 17在CFTE显著增加与包括细胞。CFTE效应可能细胞系或trachea-specific。与成人支气管刷,我们没有观察到显著减少mir - 17在初级CF细胞水平的孩子,虽然mir - 17水平显示减少的趋势与non-CF主要细胞。虽然这可能是一个特定的效果,也有可能影响可能是由于缺乏特定的微生物和host-derived炎性因子在儿科CF肺样本,和/或删除这些刺激在建立的过程中主要的细胞培养。为了测试这个我们检查mir - 17表达式在S9细胞接受慢性刺激(5天)假单胞菌条件的媒介。图5表明,mir - 17表达显著减少在这些条件下。
Pre-miR-17抑制基底和LPS-induced引发蛋白质生产CF支气管和气管上皮细胞
为了测试是否mir - 17超表达可以抑制基底stimulus-induced引发人类CF气道上皮细胞表达,CFBE41o−和CFTE29o−细胞转染PM-17和对待µg·10毫升−1LPS诱导引发表达式,或不及时治疗。引发和其他mir - 17基因的mRNA水平目标是量化的紧急控制与PM-17-transfected细胞(在线补充图印地);只减少引发LPS-stimulated钢管与PM-17转染。图6表明PM-let-7b相比,无显著影响基底或LPS-induced引发蛋白质产量,mir - 17的超表达显著降低基底(62.5%和46.5%)和LPS-induced引发蛋白质生产CFBE41o(44.6%和43.7%)−和CFTE29o−分别细胞系。在气管支气管细胞PM-let-7b但不显著增加基底引发蛋白质生产;这可能是一个细胞系或tracheal-specific效果。
讨论
转录调节引发mir - 17的表情。在这里,我们表明,过度的mir - 17可以干扰基底和CF lung-specific agonist-induced引发从CF气道上皮细胞蛋白的生产在体外,这表明pre-miR-17-based药可能有潜在治疗CF肺部疾病的炎症表现。
microrna测定确定改变的microrna在活的有机体内在CF支气管刷11]。CF的microrna显著减少的样品数量预测目标引发3′UTR。考虑到他们的miR-SVR成绩,三个microrna是为本研究选择:let-7b, mir - 17和mir - 203。引发这些和其他microrna的验证目标(12- - - - - -15]。尽管,mir - 203水平低于正常CF支气管刷,有四个假定的mir - 203引发3′UTR研究硕士,pm - 203是无效的荧光素酶报告基因的研究中,因此,没有进一步探索。相反,比较mir - 17和let-7b是由敲下来,确定这个可以提高引发的表达式3′UTR荧光素酶报告基因。基于这些研究发现mir - 17在调节引发比let-7b更有效。这个观察证实了CF, PM-17气道上皮细胞研究,但不是PM-let-7b显著受损的基底和agonist-induced引发蛋白质产量。
mir - 17是mir - 17∼92编码基因簇13号染色体上。这个集群有一个角色在组织发展和mir - 17被认为是重要的在肺上皮花蕾形态发生38和肺上皮细胞祖细胞的增殖39,40]。主要在肺癌(41),很少有报道underexpression mir - 17的肺,肺纤维化和哮喘的最近的异常(42,43]。Fabbriet al。(17]发现mir - 93作为调节引发microrna的表达和可能涉及的CF病理学。有趣的是,mir - 93和mir - 17也是同样的microRNA基因家族的一部分(mir - 17微rna前体家族),但与mir - 17, mir - 93是7号染色体进行编码。我们以前报道,mir - 93 *在CF是增加而不是减少与non-CF支气管刷(11];但是没有数据表明mir - 93 *调节引发表达式。除了引发,mir - 17的其他目标包括STAT3, TIMP2, p21、纤连蛋白和FoxA1 [32- - - - - -36]。我们检查了这些mrna的表达在支气管刷和CF与PM-17气道上皮细胞转染;然而没有重大变化在这些记录的水平,除了引发,前瞻性地收集CF支气管刷或LPS-stimulated CFTE PM-17细胞转染。
βENaC-Tg肺的老鼠,mir - 17的表达降低与野生型同行相比。相比之下,mir - 17是增加而不是减少雌性生殖道- / - vs野生型老鼠。在CF的背景下,航空公司的microrna的表达改变可能发生在应对趋化因子产量的增加,气道嗜中性或粘液阻塞,等等。我们最好的知识,雌性生殖道- / -老鼠hyperinflammatory响应与健壮的肺嗜中性和趋化因子增加生产只是观察到当老鼠是挑战假单胞菌或有限合伙人。在缺乏这样的挑战,这些老鼠没有报道发展自发CF-like中性气道疾病增加处于受控和CXCL2水平和粘液堵塞,但已被证明与实质发展肺泡异常间质增厚和招聘中最为明显的肺泡巨噬细胞的老老鼠C57BL6背景(26,44]。出于这个原因,我们使用年龄(30周)雌性生殖道- / -老鼠。与之前的报道一致肺泡巨噬细胞浸润,我们发现BAL巨噬细胞是升高的雌性生殖道- / -老鼠与野生型控件(补充图2B)。然而,我们没有发现自发嗜中性的雌性生殖道- / -老鼠。而微妙的报道增加中性粒细胞(45),这不是在其他老鼠的损失雌性生殖道,虽然在不同的遗传背景(46]。相比之下,βENaC-Tg老鼠开发健壮的自发的中性粒细胞炎症除了CF-like气道粘液阻塞(22,24,37]。此外,雌性生殖道- / -老鼠,不像βENaC-Tg老鼠,不开发杯状细胞化生和气道粘液阻塞24,37];然而在当前的研究中使用的CF小鼠模型是gut-corrected背景,这可能改变整个炎性表型。粘液阻塞和缺乏自发的气道嗜中性和炎症的关键两个模型之间的差异,可能是负责观察到的差异,mir - 17的水平。有趣的是,老鼠肺部炎症的控制不同于人类。老鼠不表达引发,而是表达功能同系物的引发与KC /处于被认为是最接近的。小鼠CXCL2, CXCL5 CCL2也与引发分享重叠功能。这些记录或KC /处于预计由mmu-miR-17或mmu-let-7b。
我们最初惊讶,mir - 17水平没有下降在CF与non-CF主要气道上皮细胞,但鉴于这些儿科起源的细胞被他们不太可能接触到尽可能多的慢性炎症刺激细胞在成年人的CF支气管刷。进一步去除任何此类刺激的过程中建立主细胞培养,或与年龄相关的效应,也会占据我们的观察。为了测试炎性理论我们遭受慢性刺激气道上皮细胞假单胞菌条件的媒介。这些条件显著降低mir - 17表达和在某种程度上解释了mir - 17的机理是降低成人CF肺。综上所述,这些数据从基底和agonist-stimulated细胞系,儿科主支气管上皮细胞,成人支气管刷,βENaC-Tg和雌性生殖道- / -老鼠CFTR表明缺陷检测的炎性环境CF肺、嗜中性,杯状细胞化生和粘液阻塞因素可能有助于改变mir - 17的表情。数据不能证明减少mir - 17的表情在活的有机体内在CF肺单独负责增加引发的表情。
CF肺癌疗法是针对液化粘液,减少炎症,造成传染性微生物和恢复CFTR-mediated氯离子电导。一些抗炎方法间接引发的生产目标,例如糖皮质激素、非甾体类抗炎药物和大环内酯类。除了引发,白三烯B4 (LTB4)和其他更丰富的趋化因子肽也存在于CF肺。战略目标在CF LTB4失败在过去(47,48]。这一策略不仅抑制中性粒细胞趋化作用,也对中性粒细胞细胞毒性,从而杀死任何中性粒细胞设法转移到肺,以应对其他趋化因子。目标在控制过度肺中性粒细胞浸润到CF是恢复正常的趋化性,而不是sub-normal水平。在这方面我们的目标是抑制引发的异常表达而完整的正常流程是必要的和充分的生理中性粒细胞浸润到肺。
miR-medicines有吸引力的治疗候选人(10]。与基于dna的方法,这需要核交付,microrna只需要传递到细胞质中,和更良性细胞引起的先天免疫反应。然而,挑战存在对他们的交付和功效。我们已经证明可以提供功能PMs到CF支气管上皮细胞利用聚乙烯亚胺纳米颗粒(49]。类似的策略可以用来提供目标引发的microrna的模仿。检查任何此类方法的脱靶效应将是必要的,以确定特异性的抑制。因此,纳米药物旨在提高水平的underexpressed内生microrna代表一个新的替代现有的治疗策略治疗肺囊性纤维化的表现。我们的研究结果表明mir - 17是一个具有巨大潜力的候选人更深入的药物开发研究CF和潜在的其他慢性中性粒细胞肺疾病。
脚注
可以从本文的补充材料www.qdcxjkg.com
支持声明:此工作是感激地承认国家儿童研究中心(C / 13/1厘米Greene)和德意志Forschungsgemeinschaft (MA2081/4-1 MA商场)。为这篇文章一直存放在资助信息FundRef。
利益冲突:披露可以找到与本文的在线版本www.qdcxjkg.com
- 收到了2014年9月4日。
- 接受2015年4月29日。
- 版权©2015人队