摘要
越来越多的证据表明Rho激酶(ROCK)与肺动脉高压(PH)的发病机制有关。azaindoli -1是一种新型的高选择性和口服活性的ROCK抑制剂,目前还没有在PH条件下研究其治疗效果。
本研究旨在探讨氮杂吲哚-1对1)急性缺氧血管收缩(HPV),2)pH的肺动脉平滑肌细胞(PASMC)和3)动物模型的急性缺氧血管收缩(HPV),2)的影响。
氮吲哚-1可显著抑制分离、通气和缓冲液灌注小鼠肺中的HPV和原代大鼠PASMC的增殖体外在大鼠注射野百合碱(MCT)和小鼠缺氧暴露后21至35天内口服氮吲哚-1。氮吲哚-1(大鼠和小鼠分别为10和30 mg/kg体重/天)显著改善血流动力学和右心室肥厚。此外,外周肺动脉的内侧壁厚度和肌层化得到改善。氮吲哚-1治疗导致肺血管中磷酸肌球蛋白磷酸酶靶亚单位1和增殖细胞核抗原的免疫反应性降低注射MCT的大鼠的s,表明ROCK活性受损,增殖细胞减少。
氮吲哚-1在实验性PH值中提供治疗益处,这可能归因于其有效的血管舒张和抗增殖作用。氮杂吲哚-1可能为治疗PH提供一种有用的方法。
肺动脉高压(PAH)是一种慢性致命疾病,其特征是肺动脉压持续升高和运动耐力降低。因此,右心室后负荷增加,最终导致右心室衰竭。肺动脉高压具有复杂的肺血管病理生理学,包括血管收缩、血管重塑和血管扩张原位血栓形成。渐进的血管重塑是PAH病理的标志,可归因于血管细胞的异常,如增殖增加和抗凋亡1.–3..然而,精确的分子机制不完全理解,因此目前正在寻求治疗这种疾病的治疗方法。
小GTPase RhoA是Rho蛋白家族的成员之一,调节细胞功能,如收缩、运动、增殖和凋亡,Rho激酶(ROCK)是RhoA最具特征的下游靶点4..已经确定了两种同种型丝氨酸/苏氨酸激酶岩石:Rock-1和Rock-25.–7..岩石在包括脉管系统和心脏的组织中普遍表达。由于其在关键细胞功能中的作用,高活性岩石信号导致与持续异常血管收缩和血管重塑促进相关的心血管障碍8GydF4y2Ba,9.慢性缺氧-、monocrotaline (MCT)-、血管内皮生长因子受体抑制和慢性缺氧-、肺切除术和MCT-、博莱霉素诱导的肺动脉高压(PH)动物模型的研究表明,ROCK升高参与了发病机制10–16.此外,数据正在出现临床pH中的岩石信号,并且岩石抑制为患者提供有益的急性作用17–23.
Fasudil和Y-27632是最常见的岩石抑制剂24,25.Fasudil已被批准用于日本的人类使用,用于治疗蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛,也是其他激酶的相对有效的抑制剂,如蛋白激酶C.26,27.这些抑制剂有助于阐明ROCK在PH病理生物学中的作用。ROCK抑制剂对PH的啮齿动物模型显示有益的影响;然而,根据给药剂量、给药途径和动物模型的不同,其疗效也存在差异9.最近,报道了一种高度选择性和口服活性的唑唑类岩抑制剂28,29这种新型岩石抑制剂氮杂吲哚-1以ATP竞争方式发挥作用,其活性在低纳摩尔范围内(半最大抑制浓度(IC))50.)对于人类ROCK1和ROCK2,分别为0.6 nM和1.1 nM)。此外,口服氮吲哚-1可引起血压的剂量依赖性下降,而不会引起正常血压和自发性高血压大鼠心率的显著反射性增加28.然而,氮茚多酮-1在PH动物模型中的治疗潜力尚未被探索。因此,在本研究中,我们研究了azaindole-1对离体、通气和缓冲灌注小鼠肺中急性缺氧肺血管收缩(HPV)和大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖的影响体外,2)大鼠MCT注射和小鼠慢性低氧暴露诱导的实验性PH中的血流动力学、右心室肥厚(RVH)和肺血管重构,3)通过免疫组织化学检测MCT注射大鼠肺组织中磷酸肌球蛋白磷酸酶靶亚单位1(p-MYPT1)和增殖细胞核抗原(PCNA)的ROCK活性和肺血管细胞增殖。
方法
动物
成年雄性Sprague-Dawley大鼠(300-350克体重)和C57BL / 6只小鼠(20-22g体重)是从Charles River Laboratories,Sulzfeld,德国。按照所描述的,通过MCT(Sigma-Aldrich,Munich,Munich,德国)注射和小鼠在大鼠中诱发pH诱导的小鼠(10%)30..所有研究均按照德国Giessen大学的指导方针进行,并由当地当局批准(Regierungs Praesidium Giessen,Gi20 / 10-Nr.48 / 2009; GI 20/10 NR.39 / 2009)。
实验设计
无线电遥测研究
mct注射大鼠随机分为两组,从第21天开始给予azaindole-1 (Bayer Health Care AG, Wuppertal, Germany)或安慰剂,持续2周。如前所述,每日在transcutole -based载体中制备Azaindole-128大鼠按每公斤体重10 mg / d灌胃。安慰剂组只接受载体治疗。根据文献选择azaindole-1的剂量28和我们自己的试点实验(数据未显示)。右心室收缩压(RVSP)和心率通过植入无线电遥测系统(Dataquest A.R.T.2.1;data Sciences Inc.,St Paul,MN,USA)在线监测,如前所述30.简单地说,将一根连接到充液传感器的导管插入颈静脉,并在麻醉下发送到大鼠右心室。来自传送器的信号(型号TA11PA-C40;Data Sciences Inc.)将数据传输至远程接收器和连接至计算机的数据交换矩阵。波形显示在计算机上,并用于确保导管的正确定位。允许动物恢复,并将其单独饲养在标准鼠笼中。从e MCT注射时间。
慢性病治疗研究
为了探讨氮杂吲哚-1在pH的动物模型中的治疗疗效,进行慢性治疗研究。将MCT注入的大鼠随机分为两组,并通过氮杂吲哚-1(每公斤每天10mg)或安慰剂,口服使用饲料治疗21至35天。盐水注射大鼠用作健康对照。暴露于慢性缺氧的小鼠每天用氮孔-1(每千克每天30mg /天/天每天30mg)或安慰剂21至35天。如上所述,基于文献选择了氮孔-1的剂量28和我们自己的试点实验(数据未显示),每天准备口服。对照组小鼠保持在常氧(21%O2.).实验结束时(大鼠MCT注射第35天或小鼠慢性缺氧暴露),处死动物进行血流动力学和RVH测量。
血液动力学和RVH测量
用导管插入右心室测量RVSP通过正确的颈静脉,以及全身动脉压(SAP),如所述进行左颈动脉插管30..如前所述,使用混合静脉氧和动脉氧含量使用Fick原理计算心输出。31.以体重为指标测定总肺阻力和全身血管阻力(分别为TPR和TSR)32. 解剖心脏,将右心室与左心室加中隔分开,并计算其重量比(RV/(LV+S))作为RVH的测量值。
肺血管形态测定学
肺组织制备、切片、染色和血管形态测定均按上述方法进行33.大鼠和小鼠的腺泡内动脉被分类为全肌肉、部分肌肉和非肌肉。此外,还对血管内壁厚度进行了分析。所有的分析都是在盲目的情况下进行的。
p-MYPT1和PCNA免疫组化
厚度为3μm的石蜡包埋肺组织切片在二甲苯中脱蜡,并在分级乙醇系列中再水化为PBS(pH 7.4)。在柠檬酸盐缓冲液(pH 6.0)中通过压力蒸煮进行抗原回收。切片用过氧化氢(15%)预处理以抑制内源性过氧化物酶活性。用牛血清白蛋白(10%)封闭1h,然后用封闭血清(Impress试剂盒;Vector Laboratories,Burlingame,CA,USA)封闭20min后,切片在4°C下与一级抗体一起孵育过夜。兔抗PCNA多克隆抗体和山羊抗p-MYPT1(Thr 696)多克隆抗体(分别为1:100和1:20稀释液;美国加利福尼亚州圣克鲁斯市圣克鲁斯生物技术公司)用作主要抗体。根据制造商的说明(载体实验室),使用过氧化物酶和底物(NovaRed底物试剂盒;载体实验室)开发染料。最后,切片用苏木精(英国剑桥酵素实验室)复染,并用固定培养基覆盖。在整个切片中计数PCNA阳性肺血管细胞,并将增殖指数(IOP)确定为每个肺血管中PCNA阳性细胞的数量。假设健康对照肺的平均眼压为100%,计算安慰剂和氮吲哚-1治疗组的眼压(单位%)。
离体鼠肺
在分离、通气和缓冲液灌注的小鼠肺中采用连续低氧操作技术,以研究氮吲哚-1、法舒地尔(H139;Sigma-Aldich)和Y-27632(Y0503;Sigma-Aldich)对急性HPV的影响34.在二甲基亚砜(DMSO)中制备了ROCK抑制剂。持续10分钟的连续缺氧操作被15分钟的正常缺氧中断。ROCK抑制剂对肺泡缺氧引起的压力反应的影响(1% O2.)在重复低氧操作序列中测定。在低氧激发后5分钟将岩石抑制剂添加到缓冲液中,在第二次低氧操作完成后开始添加。通过添加抑制剂(剂量范围0.1–30.0μM)建立累积剂量-效应曲线.控制装置仅接收车辆(DMSO)。
MTT和胸苷掺入测定
如前所述进行原发性脂肪脂肪的分离,培养和增殖测定33.简单地说,从健康和mct注射的大鼠中分离细胞(第21天,n = 3),培养在37°C、5% CO的湿化环境中保持2./ 95%啊2.气氛相等数量的PASMC(∼4×104.每孔培养细胞),第二天用含0.1%胎牛血清(FCS)的DMEM/F12替代培养液,使细胞静止。血清饥饿24 h后,FCS(10%)联合不同浓度法舒地尔、Y-27632和氮杂吲哚-1 (DMSO中500、1000和5000 nM)诱导细胞重新进入细胞周期24 h,包括最后12 h的掺入3.H-thymidine(1.5μCi·毫升−1.;阿默森生物科学公司,慕尼黑,德国)。然后用500μL冷冻HBSS清洗细胞两次,用250μL冰冷甲醇固定,用250μL 10%三氯乙酸沉淀。最后,样品在0.1 M NaOH中溶解,转移到4 mL闪烁溶液中,并用β计数器计数。数值以每分钟的崩解度表示。所有实验均为一式三份。
根据制造商的说明书,使用CellTiter 96AQ试剂盒(Promega, Mannheim, Germany)通过MTT法评估细胞活力/细胞毒性。简单地说,将细胞置于96孔板上,放置6 h,然后在无血清条件下用不同浓度的法舒地尔培养,加入3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-5-(3-羧基甲氧基苯基)-2-(4-磺基苯基)-2后,在560 nm处测定甲醛散的吸光度,测定存活细胞数H- 辛盐盐1小时。所有实验一式三份进行。
数据分析
所有数据均表示为平均值±扫描电镜.通过单向Anova和Newman-Keuls分析了不同的实验组后HOC测试多重比较。p<0.05、p<0.01和p<0.001的值被认为具有统计学意义。Bonferroni多重比较的双向方差分析后HOC进行试验以比较通过遥测测量得出的RVSP值。
结果
Azaindole-1对急性HPV的影响
在分离的,通风和缓冲灌注的鼠肺中研究了氮吲哚-1和其他常用的岩石抑制剂Fasudil和Y-27632的肺血管链轴效力。所有岩石抑制剂以剂量依赖性方式显着降低了HPV(P <0.05对车辆控制)。对HPV的最大抑制作用为∼fasudil和Y-27632以及∼氮杂吲哚-1的最高浓度为90%,30μM(图1a).法舒地尔和Y-27632的疗效相当;然而,与法舒地尔和Y-27632相比,阿扎吲哚-1的剂量-反应曲线明显左移。在较高剂量(10和30μM)下,氮吲哚-1可显著降低HPV对Fasudil和Y-27632。研究结果表明,氮杂吲哚-1是一种有效的肺血管链。
氮杂吲哚-1对PASMC增殖的影响
采用胸腺嘧啶掺入法研究氮杂吲哚-1对PASMC增殖的影响。法舒地尔和Y-27632也被包括在内。不同浓度的ROCK抑制剂(500、1,000和5,000 nM)对来自健康大鼠的PASMCs的胸腺嘧啶掺入没有显著影响(在线补充)图1).在来源于MCT注射大鼠的PASMC中,法舒地尔和Y-27632在其较高浓度下有减少胸腺嘧啶核苷掺入的趋势;然而,Y-27632在5000 nM处显著减少(p<0.05)对未来作战系统控制;图1b和c)。氮吲哚-1在所有试验浓度下显著降低胸腺嘧啶核苷掺入(p<0.05)对未来作战系统控制;图1d).我们没有观察到所有ROCK抑制剂的细胞毒性作用,在我们的研究中测试的浓度,由MTT测定(在线补充)图2).研究结果表明,氮杂吲哚-1对脂肪增殖具有有效的抑制作用。
Azaindole-1对RVSP的MCT诱导渐进升高的影响
为了调查体内功效,RVSP的渐进升高通过在与氮杂吲哚-1处理MCT注射的大鼠遥测技术的在线监测。第1天(26.5±1.7mmHg)的RVSP在第21天(37.8±0.9mmHg),在接受安慰剂的大鼠中进一步(67.9±4.3mmHg)(图2a).从第21天到第35天每天服用azaindole-1可显著降低RVSP(第35天38.8±2.9 mmHg)。为了检查氮茚多酮-1是否引起任何反射性心动过速,我们监测了大鼠的心率。我们观察到,安慰剂组和azaindole-1组大鼠的心率相当(图2b).研究结果表明,azaindole-1具有明显的肺血管舒张作用体内.
azaindole-1对MCT和慢性缺氧PH值血流动力学的影响
我们研究了azaindole-1在两个独立的PH动物模型中的治疗效果,如方法部分所述。MCT诱导安慰剂组大鼠的PH值显著升高(72.3±2.6)对27.2±1.3mmHg在健康控制中)在MCT注射的第35天(图3a).与安慰剂组相比,azaindole-1组RVSP显著降低(49.5±3.7 mmHg)。安慰剂组TPR显著升高(2.96±0.24 mmHg·min·mL)−1.每100g体重)与健康对照组(1.51±0.15mmHg·min·mL)相比−1.每100 g体重)和氮茚多尔-1处理降低TPR(2.04±0.22 mmHg·min·mL)−1.每100克体重;P <0.05对安慰剂) (图3b).实验组中的SAP和TSR没有显着变化(图3c此外,心输出量分析显示,各实验组(24.9±4.2、23.8±1.9、28.8±3.5 mL·min)的心脏指数具有可比性−1.每100克体重适用于健康对照,MCT-安慰剂和氮杂吲哚-1-治疗的大鼠)(图3e).
慢性缺氧诱导小鼠接受安慰剂,其RVSP显著升高(33.3±1.2)对23.3±1.1毫米汞柱(常氧条件下)(无花果。4A).与缺氧安慰剂小鼠相比,氮杂吲哚-1的处理显着降低了RVSP(26.7±0.8mmHg)。缺氧小鼠倾向于略微减少的SAP;然而,在安慰剂和氮杂吲哚-1-处理的小鼠之间的SAP中没有观察到显着差异(分别为68.1±1.7和61.0±3.5mmHg)(无花果。4B.).与氮茚多酮-1治疗相关的动物体重没有显著影响(在线补充图3).
氮茚多酮-1对MCT和慢性缺氧PH诱导的RVH的影响
通过测量RV /(LV + S)比率来研究RVH,发现增加的RVSP在MCT-和慢性缺氧诱导的pH中伴有RVH。与健康大鼠相比,在接受安慰剂(0.48±0.01)的MCT注射大鼠中,RV /(LV + S)比显着增加(0.22±0.01)。用氮杂吲哚-1处理显着降低了RV /(LV + S)比率(0.38±0.02对安慰剂) (无花果。5A).慢性缺氧组小鼠的RV/(LV+S)比值(0.34±0.01)明显高于正常缺氧组(0.24±0.01)。azaindole-1治疗可改善慢性缺氧引起的RVH,表现为显著降低RV/(LV+S)比值(0.310±0.001)(无花果。5B.).
azaindole-1对MCT-和慢性缺氧诱导的PH血管重构的影响
肺血管重建氮杂吲哚1的效果通过测定肌型和外围肺动脉内侧壁厚度的程度进行评估。大鼠中的MCT注射和小鼠的慢性缺氧导致了增强的肺动脉肌肉,从而从增强的α-平滑肌细胞肌动蛋白的免疫反应性(无花果6得了和7A-C.).肺血管形态学显示出显着增加的容器(57.0±1.5%)显着增加(57.0±1.5%),并且在接受安慰剂的MCT注射大鼠中减少了非肌肉大鼠(2.4±0.3%),与健康对照(2.2±0.8%和42.2±3.7%)。Azaindole-1治疗显着降低了完全肌肉大小的血管(18.5±2.4%)(图6 d).在氮吲哚-1治疗的大鼠中,部分肌化血管的比例显著较高(73.3±2.2%)对安慰剂组为40.6±1.4%),表明该治疗通过阻止血管从部分肌层化向完全肌层化转变而损害了渐进性肌层化。此外,我们还测量了相同大小血管的内侧壁厚度。安慰剂组的内侧壁厚度显著增加(22.3±0.9%)对健康对照组9.7±0.4%)。azaindole-1显著降低了内侧壁厚度(14.0±0.6%),确证了完全肌肉化血管的减少(图6e-h).
在慢性缺氧小鼠中,非肌肉化的血管明显减少(4.9±1.5%)对正常氧组为49.3±1.3%),部分和完全肌肉化的血管明显增加(63.5±4.7%和31.5±3.9%)对分别为47.3±0.5%和3.5±1.3%)。azaindole-1治疗后完全肌肉化的血管明显减少(7.5±1.7%)(无花果。7D.).正如在注射MCT的大鼠中所观察到的,在接受氮吲哚-1的小鼠中,部分肌化动脉的比例较高(80.9±2.9%)。与常氧对照组小鼠(10.1±0.3%)相比,慢性缺氧导致内侧壁厚度显著增加(17.8±0.9%)(图7情况).证实完全肌化血管的减少,氮吲哚-1治疗的小鼠的内侧壁厚度显著减少(12.4±0.4%)(无花果。7h.).
氮杂吲哚-1对ROCK活性和肺血管细胞增殖的影响
我们通过p-MYPT1的免疫组织化学研究了氮吲哚-1对ROCK活性的影响。免疫反应性局限于血管中,在接受安慰剂的MCT注射大鼠的肺组织中增强。注射了氮吲哚-1的MCT大鼠的免疫反应性降低(无花果。8A).
以确认观察到的体外azaindole-1对细胞增殖也有影响体内,对PCNA进行免疫染色。我们观察到,与健康对照大鼠相比,mct注射大鼠肺组织中PCNA的免疫反应性显著增加(图8d-f)我们分析了与血管形态计量学相同大小的血管,以量化PCNA阳性血管细胞,并将结果表示为IOP。结果显示,接受安慰剂的MCT注射大鼠眼压较高(431.9±7.2%)对健康对照组大鼠100.0±25.8%)(无花果。8G).证实体外数据,IOP在接受Azaindole-1的MCT注射大鼠中显着降低(184.1±10.9%)(无花果。8G).
讨论
本研究的主要发现是:1)氮茚多酮-1显著抑制急性缺氧肺血管收缩体外以及原代大鼠PASMC的增殖体外;2) azaindole-1可显著改善mct注射大鼠和慢性缺氧小鼠的血流动力学、RVH和肺血管重构;3)大鼠血流动力学和血管重塑的改善伴随着ROCK活性受损和肺血管增殖细胞的减少,这从p-MYPT1和PCNA的免疫反应性降低可见。
在过去几年中探索有前途的目标和发展有效的pH值的有效治疗方法是一个积极的研究重点。因此,患者的延长存活率和其寿命质量的改善是通过可用于pH的治疗选择,例如内皮素受体抑制剂,前列腺素和PDE5抑制剂,以及其他治疗方法在临床调查下35,36.
近年来,ROCK信号在心血管生理学和病理生理学中的作用正在迅速展开,ROCK抑制剂法舒地尔和Y-27632已经成为一个有用的工具8GydF4y2Ba.最近,卡斯特等28报道了一种新型岩石抑制剂氮杂吲哚-1,该抑制剂通过IC在低纳摩尔范围内剂量依赖性地抑制人类岩石-1和岩石-250.值分别为0.6 nM和1.1 nM28阿扎吲哚-1比法舒地尔和Y-27632更有效,后者具有IC50.值分别为158和162 nM37.此外,纳摩尔范围内的氮茚多-1以浓度依赖的方式抑制苯肾上腺素诱导的兔隐动脉收缩28.与以前的数据一致,我们发现Azaindole-1(IC50.与法舒地尔和Y-27632(IC)相比,79.2nm)能有效抑制苯肾上腺素诱导的兔大隐动脉收缩50.分别为9313和793 nM)(数据未显示)。扩展研究结果,我们在当前的研究中显示,氮杂吲哚-1显著抑制离体、通气和缓冲灌注小鼠肺中的急性缺氧性肺血管收缩。此外,我们观察到氮杂吲哚的作用比法舒地尔和Y-27632更有效。综上所述,数据表明氮吲哚-1不仅是一种高选择性和有效的ROCK抑制剂,而且是一种比法舒地尔和Y-27632更强的血管舒张药。
ROCK的过度激活,通过抑制肌凝蛋白磷酸酶活性和增加肌凝蛋白轻链磷酸化,导致血管平滑肌细胞收缩,从而导致血管收缩4.,38.在实验性pH中,已经证明了锐肠炎的急性抑制,从而导致肺动脉缓释,因此降低了肺动脉压14,16,39. 在这一行中,我们观察到氮吲哚-1显著损害了在线监测的MCT诱导的大鼠RVSP进行性升高通过无线电遥测。然而,在心脏速率下没有观察到显着效果,表明Azaindole-1治疗不会导致反射性心动过速。我们的发现与描述岩石介导的血管收入在pH发病机制中的参与的研究一致14,39–41.此外,ROCK的抑制已被证明会损害肺血管的重塑10,42–44,我们试图测试增殖Pasmcs对氮冰雪-1的响应体外.我们观察到azaindole-1在高纳米摩尔至低微摩尔范围内显著抑制大鼠初级PASMCs中胸苷激酶的加入,其作用比法舒地尔和Y-27632更强。总的来说,我们的发现体内,体外和体外研究认为氮茚多酮-1具有强血管松弛和抗增殖的特性,因此,证实了其在PH中的治疗潜力。
因此,我们进行了慢性治疗研究,并研究了大鼠MCT注射液和小鼠慢性缺氧诱导的实验性pH中的氮杂吲哚-1的治疗效果。我们发现氮杂吲哚-1改善的pH,RVH和肺血管重塑,从显着降低的RVSP,TPR和RV /(LV + S)和外周肺血管的肌肉溶解和内侧壁厚。此外,在治疗的动物中,SAP没有显着变化。虽然乍一看似乎对卡斯特的研究结果似乎相互矛盾等28,谁观察到可自发性高血压大鼠减少接受氮孔-1的血压。然而,差异可以至少部分地解释动物模型和治疗持续时间的差异。在自发性高血压大鼠中,系统脉管系统中的岩石活动增强45;此外,清晨等28仅治疗一次和自发性高血压大鼠4天,并注意到自发性高血压大鼠,血压降低效果逐渐降低。在目前的研究中,我们使用不同的pH的动物模型并治疗动物2周。因此,我们的数据可能与卡斯特的数据不能直接相当等28.值得注意的是,PH动物模型中肺ROCK的持续激活9可能是选择性ROCK抑制剂肺特异性作用的基础。越来越多的文献描述了ROCK抑制对啮齿动物MCT和慢性缺氧诱导的PH的发展的有益影响11,15,42,44,46–48;我们的研究结果扩展了这些发现,证明了氮吲哚-1即使在疾病进展迅速时开始治疗也是有益的。此外,我们发现氮吲哚-1治疗导致ROCK活性受损,这是由p-MYPT1免疫反应性降低和增殖减少所决定的我们的数据表明,氮杂吲哚-1抑制ROCK的治疗效果可能与其血管舒张和抗增殖作用有关等10通过使用Fasudil的长期治疗,据报道,在大鼠中提高MCT诱导的pH值。然而,尽管Fasudil显示了治疗效果,但OKA等9已经讨论过,在他们最近的评论,发现的差异取决于剂量,给药途径和动物模型博士Fasudil一直在先前的研究中使用的剂量范围30 - 100毫克/公斤体重,而azaindole-1显示了显著疗效在低剂量10毫克/公斤体重,这表明不仅仅是体外但也体内氮杂吲哚-1的作用是有效的。我们的研究结果表明,氮杂吲哚-1的治疗效果与疾病的病因无关。这可能是由于ROCK参与了不同刺激诱导的实验性PH的发病机制10,13,15,16.此外,岩石信令涉及治疗方法的有益效果,该方法瞄准除岩之外的信号传导级联12,13,19,47–49.因此,似乎岩石可以是各种信号级联的会聚点,其各种信号级联涉及pH的发病机制。
MCT诱导的大鼠PH和慢性缺氧诱导的小鼠PH具有许多临床PH特征,是研究PH病理机制和治疗方法的公认动物模型;然而,它们在模仿人类PH病理学方面并非没有缺点。近年来对各种动物模型的广泛研究已经发现了有希望的治疗靶点,包括ROCK35.此外,通过存在闭塞性肺血管病变的严重pH的动物模型中证明了岩石的激活13,16.因此可以预料到氮孔-1产生治疗益处;然而,有必要进行研究以调查氮吲哚-1的抗增殖和血管链态效力是否足以改善具有在人pH中通常观察到的闭塞病变的严重改造的肺血管。关于人pH,出现文献,其暗示疾病发病机制中的岩石信号,因此该信号传导途径代表潜在的治疗目标17,19,21,23此外,法舒地尔对ROCK的急性抑制显示出有益的效果,这从严重PH患者肺血管阻力和肺动脉压的降低中可以看出17,18,20.,22因此,数据支持使用有效且高选择性的抑制剂抑制ROCK可能提供一种潜在的治疗策略。
综上所述,我们证明每天口服氮吲哚-1可改善血流动力学、RVH和肺血管重塑。据我们所知,这项研究是首次研究新型口服有效岩石抑制剂氮吲哚-1的治疗效果,在两个独立的PH动物模型中,我们还发现氮吲哚-1能有效抑制离体、通气和缓冲液灌注小鼠肺中的缺氧性肺血管收缩,显著抑制原代大鼠PASMC的增殖体外并减少mct注射大鼠肺血管细胞增殖的数量,表明azaindole-1的治疗益处可能与其血管松弛剂和抗增殖能力有关。综上所述,这些发现表明azaindole-1可能代表了一种新的治疗PH的方法。
脚注
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兴趣表
R. Kast, H. Schirok, J-P的利益声明。Stasch, N. Weissmann, F. Grimminger, W. Seeger和R.T. Schermuly可在www.www.qdcxjkg.com/misc/statements.dtl
- 已收到2009年9月4日。
- 认可的2010年4月21日。
- ©2010 ers.