文摘
结核病仍是死亡的主要原因之一从一个全球传染病。十分关注的结核控制耐药性的出现。由于没有治疗的耐多药菌株结核分枝杆菌,担心他们可能传播到世界各地,强调了需要额外的控制措施,如新的诊断方法,更好的药物治疗,和一个更有效的疫苗。
肺结核可以诊断的症状,胸片、痰涂片镜检和培养结核分枝杆菌,这被认为是黄金标准。在分子生物学和分子流行病学最新进展,更好地了解结核病耐药的分子基础的快速诊断提供了新工具;然而,大多数这些技术的高成本,及其复杂的设备和熟练的人员要求杜绝它们的实现在常规的基础上,尤其是在低收入国家。
其他非传统的诊断方法提出了包括寻找生化标记、检测的免疫反应和早期检测结核分枝杆菌除了菌落计数方法。
在本文中,这些方法将审查和实施的可行性诊断实验室将讨论。
系列“肺结核有争议的问题”
答:托雷斯和j . Caminero编辑
这一系列的9号
结核病仍是死亡的主要原因之一从一个全球传染病。总共有大约二百万人死亡的99%,每年有超过八百万例新病例的95%发生在中低收入国家。世界卫生组织(世卫组织)报告1估计,2002年,全球发病率的880万例新病例,包括390万例痰检阳性。22个高负担国家集中这些病例的80%。这种情况恶化的艾滋病流行,因为艾滋病毒感染患者的死亡风险没有结核病结核病是艾滋病病毒感染者的两倍2。据估计,1200万名患者合并感染艾滋病毒和结核分枝杆菌截至2000年,绝大多数生活在撒哈拉以南的非洲和东南亚。
十分关注的对疾病的控制耐药性的出现(博士)由于没有治愈一些耐多药菌株(MDR)结核分枝杆菌,担心他们可能在全球迅速蔓延。博士已经发现在所有调查的国家和地区,特别是在东欧,新的耐多药结核病患病率高的领域包括中国和伊朗3。直接观察治疗短期课程(点),认可的治疗策略,是有效预防博士的出现;然而,在实践中,实际上只有27%的结核病患者接受点4,强调需要额外的控制措施,如新的诊断工具、更有效的药物,甚至更有效的疫苗。
肺结核,最重要类型的结核病从公共健康的角度来看,可以诊断的症状,胸片、痰涂片镜检和培养的结核分枝杆菌。患者的比例,然而,不是证实了细菌,只有诊断的基础上高临床怀疑和抗结核药物反应5。
结核病诊断的金标准的培养结核分枝杆菌。它可以进行各种各样的标本,如痰和支气管洗涤剂和其他nonpulmonary样本。比显微镜敏感得多,它允许其他研究细菌的恢复,如药敏测试和基因分型。在某些情况下,结核病的诊断变得更加有问题由于几个因素与患者immunosuppresion有关,因为它发生在艾滋病毒感染者或潜伏性感染或肺外结核。由于其特异性的临床表现,诊断结核病的儿童也有问题。
分子生物学领域的最新进展和进步在博士的分子基础的理解结核分枝杆菌为它的快速诊断提供了新的工具通过分子生物学方法6。然而,大多数这些技术的高成本,以及他们的要求复杂的设备和高技术人员,杜绝在常规的基础上实施,尤其是在低收入国家7。其他非传统方法最近提议包括寻找生化标记、检测的免疫反应和早期检测结核分枝杆菌除了菌落计数方法。在本文中,这些方法将审查和实施的可行性诊断实验室将讨论。
新的结核感染的检测方法
因为世界人口的三分之一是感染结核分枝杆菌,重要的是能够预测谁潜伏性感染将开发疾病中,以治疗前活动性结核病。唯一可用的测试来检测感染,直到最近,结核菌素皮肤试验(TST)。然而,替代在体外T-cell-based最近提出的方法8- - - - - -10。干扰素(IFN) -γ化验都是基于这一事实与结核抗原t细胞敏感时将产生IFN-γ气鳔分枝杆菌抗原。大量的IFN-γ生产然后推测与结核感染11。第一个IFN-γ化验用纯蛋白衍生物(产后抑郁症)作为刺激抗原;最近的分析,使用特定的抗原结核分枝杆菌,如早期分泌抗原目标6 (ESAT6)和文化滤液蛋白10 (CFP10)8。这些蛋白质抗原编码基因位于该地区的差异1 (RD1)结核分枝杆菌基因组和更具体的比产后抑郁症,因为他们不共享牛分枝杆菌卡介苗(BCG)复合菌群或大部分非结核分枝杆菌(特种加工)除外m . marinum,m . sulzgai和m . kansassi。
目前有两个商业IFN-γ化验,QuantiFERON-TB化验(Cellestis有限公司、卡内基、澳大利亚)和T SPOT-TB测试(英国牛津Immunotec牛津)。这些测试测量的生产IFN-γ应对结核抗原的t细胞ELISA和酶联immunospot分别。QuantiFERON-TB,遗传分析,最初产后抑郁症作为抗原,增强版,QuantiFERON-TB金,使用ESAT6和CFP10。相比之下,T SPOT-TB化验使用外周血单核细胞和ESAT6和CFP10抗原测量生产IFN-γT细胞的数量。此外,一些非商业内部提出了方法12。
一般来说,执行的研究已经表明,IFN-γ化验使用RD1结核菌素抗原有一些优势,如特异性更高,更好的相关性与先前的接触结核分枝杆菌、低交叉反应由于BCG接种疫苗或先前的特种加工。同时,人们已经发现,IFN-γ化验使用抗原的鸡尾酒,而不是单个抗原有更好的精度13。然而,需要更多的研究来评估这些测试的有效性管理的免疫力低下的个人,在儿童和肺外结核病患者。
非传统和BACILLOSCOPY的新方法
在许多国家,结核病是由显微镜检查诊断痰涂片染色的Ziehl-Neelsen(锌)方法。虽然容易执行和具体,它缺乏敏感性,要求≥10000杆菌·毫升−1痰变成积极的。几项研究已经评估的有效性执行添加化学试剂,如次氯酸钠、液化,然后进一步集中的痰液离心增加灵敏度。在大多数的研究中,一个积极的比例显著提高涂片或灵敏度得到;然而,由于一些原因,次氯酸钠,也被称为“漂白”方法不常用在许多设置14。使用金胺荧光方法检测分枝杆菌痰提出了许多年前,重新评估后使用auramine-O和若丹明15。这种荧光方法与更高的检测率有关,由于幻灯片可以检查在较低的放大。熟练测试最近的一项研究在167年实验室、金胺和/或金胺/罗丹明方法表现得比锌染色或其Kinyoun修改16。因此,通常认为锌的荧光方法应给予优先和Kinyoun方法。一般来说,应该使用荧光方法通过与大型实验室标本的数字。然而,它是更昂贵的比传统的锌染色需要荧光显微镜17。
非传统和文化的新方法
的培养结核分枝杆菌从临床样本的诊断活动性结核病的黄金标准。它可以检测杆菌·100毫升−1的痰与5000 - 10000年相比杆菌·毫升−1所需的显微镜18。它还提供了材料进行进一步的鉴定和药敏试验。传统的文化依赖于基于鸡蛋的方法和媒体为原料,如Lowenstein-Jensen (LJ)介质和麦德琼脂19,20.。去污和液化过程后,痰液样本接种和培养形态增长,这通常发生几周后孵化。的识别结核分枝杆菌是通过执行几个进一步生化测试19,21。然而,这是费力而耗费时间要求从3 - 8周获得结果。
的引入BACTEC放射系统(BACTEC tb - 460;美国马里兰州,正欲火花)在1980年代是一个突破,因为它允许的检测结核分枝杆菌在几天内周相比传统的培养基22。然而,使用放射性同位素和设备的成本阻碍了它的使用在日常的基础上,除了参考实验室主要在发达国家。几年前正欲提出另一个系统基于荧光检测分枝杆菌生长23。分枝杆菌生长指示管(MGIT)系统是基于一个包含修改后的玻璃管麦德布鲁克7 h9肉汤一起荧光quenching-based氧传感器嵌入底部的管。当接种结核分枝杆菌时,溶解氧的消耗产生荧光紫外灯照亮。MGIT系统已经彻底评估在临床设置分枝杆菌的检测和恢复。Badak等。24相比与BACTEC MGIT系统结核病- 460和1441年LJ培养基临床标本。178隔离恢复,30 (17%)结核分枝杆菌与MGIT系统恢复28(93%)相比,25例(83%)恢复LJ培养基。在另一项多中心的研究中,Pfyffer等。25分析了1500份临床样本检测113年共有180种分枝杆菌组成结核分枝杆菌复杂的隔离。MGIT和发现BACTEC 171(95%)的分离检测结核分枝杆菌9.9天相比,与固体培养基和BACTEC 9.7天,20.2天证明MGIT放射系统是一个有价值的选择25。
最近MGIT系统完全自动化,变成了BACTEC MGIT 960系统,这是一个nonradiometric,非侵入式系统管孵化在紧凑的系统自动读取它们。在一项多中心研究BACTEC MGIT 960系统与放射BACTEC结核病- 460系统和LJ培养基。分析2576份标本,获得最好的收益与BACTEC结核病- 460(201株),与190年相比隔离与BACTEC MGIT 960年和168年与LJ培养基分离26。在另一项研究Idigoras等。27比较了BACTEC MGIT 960系统灵敏度和时间与固体培养基检测分枝杆菌,和显微镜在稳固的媒体。敏感的媒体与媒体的增长结核分枝杆菌为93%,76%,79%和75% 960年MGIT麦德布鲁克7 h11, LJ和Coletsos分别。时间检测MGIT 960系统是12.7天相比,与固体媒体> 20天。一般来说,自动和手动MGIT系统都显示出类似的结果相媲美之前与BACTEC辐射度方法。操作和成本效益评估这些系统的实际影响的研究仍然缺乏在低收入和中等收入国家。
其他分枝杆菌快速检测的近期发展包括手动方法像MB-Redox (Heipha Diagnostika生物监测,海德堡,德国)基于四唑盐指标的降低液体介质28和自动化设备国产化方法像MB / BacT系统(Teknika欧,波斯特,荷兰)基于比色检测分枝杆菌产生的二氧化碳的增长在一个封闭的系统29日,特别是文化系统II(迷航诊断,Inc .,克利夫兰,哦,美国)基于检测压力变化在一个密封的小瓶的培养基在分枝杆菌生长30.。这些系统还没有被广泛使用在工业化国家实验室外。
最近的另一个有趣的发展是phage-based分析依赖的能力结核分枝杆菌支持感染mycobacteriophage的增长。内源性噬菌体的数量,代表原始的可行性结核分枝杆菌在快速发展,然后决定分枝杆菌,等m . smegmatis31日。FASTPlaque结核病试验(研究,伊普斯维奇,萨福克郡,英国),一个商业测试这项技术的基础上,提出了一个测试,如果与涂片镜检结合使用可以提高结核病的诊断32。几项研究已经评估这项技术。艾伯特等。32在比较研究1692年金胺涂片镜检和LJ培养基痰标本发现FASTPlaque结核病测试发现结核病culture-confirmed病例的75%和70%的病例的临床诊断结核病的特异性分别为98.7%和99.0%。相比之下,集中金胺涂片镜检灵敏度为63.4%和61.3%,特异性为97.4%和97.3%,文化——确认所有情况下,分别32。
在巴基斯坦进行的另一项研究比较了LJ FASTPlaque结核病抗酸的涂片镜检和文化媒介33。FASTPlaque结核病,他们发现88.2%和87.4的敏感性和特异性,分别在痰检阳性标本和98.4%和67.1的敏感性和特异性,分别在涂阴样本。如前所述Takiff和Heifets34这些研究最重要的发现是,FASTPlaque结核病能够检测分枝杆菌在50 - 65%的涂阴标本的特异性为98%,结合测试与涂片镜检证实的存在结核分枝杆菌培养阳性标本的80 - 90%。不过,约有13%的痰检阳性标本没有FASTPlaque结核病测试和涂阴样本中检测到的8 - 19%的标本作了假阳性的结果。
最近,在一个比较研究FASTPlaque结核病测试和最初的内部方法的执行在赞比亚,Mbulo等。35发现没有方法能够比直接显微镜痰液样本。此外,污染率的40%的人获得FASTPlaque结核病测试,认为结核病诊断的phage-based化验没有优势,设置。提出了一些其他phage-based技术的快速检测结核分枝杆菌36,37;然而,他们还没有彻底high-endemic国家评估在临床设置。
非传统方法和识别的新方法
分枝杆菌识别一直是传统上基于几个生化测试和表型特征、增长率和色素等,它允许一个特定菌株的分类的一组定义良好的分枝杆菌。虽然简单的执行,而不需要复杂的设备,,尽管如此,费力而繁琐,拖延在许多情况下迅速而正确的分枝杆菌鉴定。尽管如此,他们仍然和在临床实验室构成识别的主要过程,特别是在缺乏资源的环境中。分枝杆菌的霉菌酸概要文件也提出了识别是一种快速的选择。这可以通过薄层色谱法和高效液相色谱法,它的优点是可以在几个小时内完成,这是相对便宜,可以识别各种分枝杆菌的物种。设备的初始投资成本是其主要缺点作为识别方法38。
分子方法最近引入了分枝杆菌的识别。第一个可用的方法是AccuProbe (Gen-Probe, Inc .,圣地亚哥,美国),一个商业方法基于物种特异性DNA探针杂交rRNA识别的几个重要的分枝杆菌,包括结核分枝杆菌复杂的,m . avium,m . intracellulare,m . avium复杂的,m . kansasii,m . gordonae。探测器都进行了广泛的临床评估,并显示很好的敏感性和特异性给结果∼2 h从培养阳性标本39。
其他商用方法包括INNO-Lipa分枝杆菌(脂肪酶;Innogenetics,根特,比利时)分枝杆菌的同时探测和识别,包括结核分枝杆菌复杂和放大的基础上16 s-23s间隔区域结合反向杂交线性探针测定。评估对DNA探针,传统生化测试,PCR-restriction片段长度多态性分析显示明确的结果40,41
最近的基因型分枝杆菌试验(海Diagnostika, Nehren,德国)临床样本的识别和液体文化引入了。它是基于放大的16 s-23s核糖体DNA间隔地区紧随其后与16个特定寡核苷酸探针杂交;它的优点是检测分枝杆菌混合感染42。
一个商业系统主要为文化设计确认,结核病肽核酸荧光原位杂交(Dako / S斯特鲁普、丹麦)也被提出。它是基于肽核酸探针结合分枝杆菌16 s rRNA序列的选择区域允许区分结核性和特种加工;检测是通过荧光原位杂交显微观察紧随其后43。它也被检测的直接检测结核分枝杆菌对痰检阳性痰样本和formalin-fixed,石蜡包埋切片44。
在许多实验室pcr测序技术是现在常见的分枝杆菌的鉴定。他们用genus-specific由放大的分枝杆菌DNA引物测序放大产品紧随其后。的识别是通过比较序列与参考株45,46。最常用的目标一直是基因编码16 s rRNA,尽管其他目标基因也为特征的47,48。
PCR-restriction片段长度多态性分析(PRA)基因编码的热休克蛋白hsp65也被用于分枝杆菌的快速识别,包括结核分枝杆菌49。在最近的一些研究PRA与传统方法相比都表现不错50,51。
最近,DNA微阵列或高密度寡核苷酸阵列已经申请物种分枝杆菌的识别。fluorescently-labelled PCR扩增的方法是基于杂交产品从分枝杆菌殖民地获得DNA包含核苷酸探针阵列52,53。
一般来说,分子方法提供了优于传统的快速探测和识别的技术结核分枝杆菌为结果,如周转时间、可靠性、再现性和可能改善病人的管理。然而,由于额外的设备和训练有素的人员的要求,大多数这些方法尚未获得容易获得常规程序中执行临床mycobacteriology实验室特别是在低收入国家,结核病是一个更重要的健康问题。
非传统和药敏测试的新方法
药敏测试(DST)方法包括比例方法,绝对浓度法,电阻率的方法19,54。的介绍BACTEC辐射系统,执行DST的适应结核分枝杆菌22,55这四个方法被认为是黄金标准。56。长周转时间(乙)和laboriousness这些方法刺激寻找替代和更快的技术。这些新方法可以分化成基因型和表型方法。
基因型的方法
这些方法寻找抵抗而不是抵抗表型的遗传因素。一般来说,他们有两个基本步骤:分子核酸扩增步骤,如PCR的放大部分结核分枝杆菌基因组,已知耐药菌株和第二步改变评估特定突变的放大产品关联与阻力。这些方法有几个优点:快答(几天而不是几个星期),不需要增长的生物,直接应用于临床标本的可能性,减少生物危害风险,为自动化和可行性。不幸的是,他们也有缺点,包括问题抑制剂临床样本直接应用这些方法。
扩增产物菌进行基因的DNA测序已经使用最广泛的方法,成为黄金标准。它已经完成了手动和自动程序尽管后者一直是最常用的57- - - - - -59。它已经彻底用于描述在rifampicin-resistant rpoB基因的突变株和检测突变负责对其他抗结核药物57,60,61年。提出了其他一些基因型的方法来检测抵抗抗生素,如PCR-single链构象多态性57,PCR-heteroduplex形成62年和固相杂交检测。此外,线性探针测定(LiPA-Rif)基于放大培养的菌株的DNA的杂交或临床样本10探针包括rpoB基因的核心区域结核分枝杆菌,由于硝基地带63年,测试基因型结核分枝杆菌(MTB)博士(德国海恩),一个商业系统的检测结核分枝杆菌复杂,其耐利福平和异烟肼从文化样本检测的基础上最常见的突变和rpoB katG基因,分别。LiPA-Rif分析被评估在不同的设置给了令人鼓舞的结果64年。
DNA微阵列和实时PCR技术也被建议作为替代方法用于耐药性检测;前仍无法达到临床诊断实验室,而后者越来越有前景的结果的评估65年,66年。
表型方法
新的表型方法评估抑制结核分枝杆菌在抗生素的使用各种技术通过检测早期增长的迹象,例如,测量代谢指标,借助颜色或耗氧量,早期micro-colonies可视化和噬菌体的使用。
MGIT系统,手动或自动版本和耗氧量测量的基础上,已经彻底对DST的评估结核分枝杆菌一线和二线药物显示出良好的一致性与黄金标准比例的方法67年- - - - - -69年。
电性能测试,另一个商业系统(AB BIODISK、桑纳、瑞典),基于与浸渍梯度带的抗生素药敏测定允许的最小抑制浓度直接在琼脂板上。几项研究已经评估这个测试相比,比例方法找到一个协议> 90%70年。另外两个商业和自动化方法DST MB / BacT系统(工具论Technika)和ESP文化系统II(美国Accumed国际、芝加哥、IL)。两个系统依靠重型设备和在几项研究也被评估71年,72年。
在最近的内部方法DST的申请结核分枝杆菌,三种类型的方法值得提及:1)phage-based化验;2)比色方法;和3)硝酸盐还原试验。
应用DST phage-based化验,无论是最初的内部方法73年或商业分析74年正在申请检测利福平耐药性结核分枝杆菌在文化样本和直接从痰。结果是可用的,平均在2天> 95%的一致性与金本位相比比例的方法。
比色方法是基于减少彩色指示器添加到培养基结核分枝杆菌已经暴露在体外不同的抗生素。抵抗是被改变的颜色指标,这是直接与可行的分枝杆菌的数量成正比的媒介75年。不同指标评价了DST的一线和二线药物提供可比的结果与金标准,协议比例的方法76年- - - - - -78年。
硝酸盐还原试验是一个非常简单的技术能力的基础上结核分枝杆菌减少硝酸盐亚硝酸盐,发现通过添加化学试剂培养基。结核分枝杆菌在抗生素的存在及其培养能力减少硝酸盐测量10天后孵化。耐药菌株将减少硝酸酒色呈颜色在中透露,虽然敏感菌株将松散的这种能力是由抗生素抑制,离开中无色79年。对DST测试最近评估一线和二线药物,效果很好80年,81年。它的优势是使用相同的格式和培养基用于标准比例法。
在他们当前的格式,比色方法似乎更适合参考实验室生物安全设施和条件操作液体文化微型板块格式的小卷。phage-based分析可以实现mycobacteriology诊断实验室与适当的训练有素的人员,而硝酸盐还原试验是理想的实现在结核病诊断实验室常规DST表演。
表1⇓展示了主要的DST方法的准确性、评估成本、易用性和药物。
核酸扩增方法
显著改善结核病的诊断的发展几个核酸扩增(NAA)技术,如PCR已广泛为结核病的快速诊断评估。几种内部PCR方法已经开发和测试在过去的年,多项研究已经发表在PCR诊断结核病的应用82年,83年。这些研究发现,缺乏特异性的问题比缺乏敏感性,和不使用任何特殊的方法。它也发现,许多实验室没有使用足够的质量控制84年,85年。
目前有两个批准商业中子活化分析方法:放大结核分枝杆菌直接测试(AMTD) (Gen-Probe)和Amplicor结核分枝杆菌测试(Amplicor;罗氏诊断系统,Inc .,新泽西,美国)。MTD基于一个由Kwoh描述方法等。86年使用放大16 s核糖体成绩单,发现DNA探针87年。Amplicor是dna测试,使用genus-specific放大16 s rRNA基因引物,检测到比色反应88年。这两种方法已被批准的直接检测结核分枝杆菌在痰检阳性呼吸道标本。最近,一个增强的MTD也被批准用于涂阴病人呼吸道标本的怀疑89年。几项研究已经评估测试的检测结核分枝杆菌在临床样本90年。与文化和临床状态相比,这些方法具有较高的敏感性和特异性的痰检阳性标本,但较低的价值观得到涂阴标本阻碍他们在屏幕上使用排除疾病。由于这个原因,建议分子方法应该被结合病人的临床资料91年。
其他两个方法最近推出了结核病诊断涉及到实时PCR和链置换扩增方法。放大的实时PCR技术是基于杂交核酸荧光色探测器生成DNA区域的利益和监控内部热循环92年。荧光信号放大产品的数量成正比增加的反应管。
实时PCR在几项研究已经评估文化物质和最近在临床样本。这些研究的灵敏度范围从71 - 98%,特异性接近100%93年。实时PCR的主要优势是它的速度给结果,1.5 - 2 h后DNA提取,降低污染的风险,因为反应和检测发生在一个单一的管。进一步的研究是必要的来确认这个新方法的真正价值在临床设置。
使用的链置换扩增技术是BDProbe Tec MTB测试,正欲开发的半自动系统的快速检测结核分枝杆菌在呼吸道样本。它是基于酶复制目标序列的插入序列IS6110 16 s rRNA基因。用光度计放大产品检测94年。结核分枝杆菌BDProbe Tec测试已经在几项研究评估;Pfyffer等。95年与799年一项研究中,呼吸道标本,获得一个全面的敏感性为97.6%,特异性为95%。主要的缺点,然而,假阳性结果的出现,减少后的人员获得的经验技术,和样品制备所需的时间≥2 h。这个系统的改进版本,BDProbe Tec ET(正),最近在呼吸道标本在临床环境评估96年。研究包括更积极的结核病患者需要确认这些初步结果。表2⇓显示了主NAA的敏感性和特异性值测试。
分子流行病学技术
DNA指纹分析技术包括限制性片段长度多态性(RFLP)输入最常用的方法在结核病的流行病学和发病机理的研究。它是基于插入序列IS6110出现在结核分枝杆菌和被接受为标准的输入方法97年。RFLP被用来区分的结核分枝杆菌为监控传输,定义集群内人口压力、区分外源性再感染和复发,确定实验室交叉污染,研究分子进化的物种水平和更好地了解疾病的发病机制。
另一个分子打字技术广泛使用的是垫片oligotyping或spoligotyping,这是一个简单的方法允许同时检测和打字结核分枝杆菌在临床样本。博士是基于染色体的多态性位点,其中包含一个变量的短期直接重复穿插nonrepetitive间距器。大多数临床分离株显示独特的杂交模式,而从集群共享相同的模式菌株98年。多态GC-rich重复序列(pgr)打字也被用于此目的99年。pgr是最丰富的重复的元素结核分枝杆菌复杂,存在于大量的副本,由96个碱基对的串联重复序列(bp) GC-rich序列。pgr类型主要是用作二级类型IS6110菌株与低拷贝数的方法。
最近,另外两个pcr进行分子类型:技术开发基因删除分析和分枝杆菌点缀的重复单位(MIRU)打字One hundred.,101年。基因缺失分析使用DNA微阵列检测相对于参考株基因组缺失结核分枝杆菌。它可以用来提供见解的流行病学、基因组进化,和人口结构结核分枝杆菌。
可变性的MIRU打字是基于串联重复序列的数量是40 - 100个基点分散在基因间区域的元素结核分枝杆菌基因组;共有41个位点结核分枝杆菌其中12显示多态性。这种打字技术已经与RFLP打字和spoligotyping生产更多不同的模式102年。目前认为MIRU-based技术将最终取代古典IS6110 RFLP输入一次标准化的协议了103年。
结核病血清学诊断的
结核病的控制的一个重要问题是潜伏性感染的诊断和治疗的能力。传统的方法来评估这是结核菌素。产后抑郁症在结核菌素已广泛用于诊断结核病在诊所和50岁为流行病学筛查结核病控制规划的目的8。产后抑郁症是一个原油的混合抗原与其中一些共享的限制结核分枝杆菌,牛分枝杆菌BCG和一些特种加工。因此,结核菌素特异性低在总量作为分母人口和这之前暴露于特种加工11。灵敏度也可以低immunosuppresed个体,如艾滋病毒感染者。
提出了不同类型的血液检测结核病血清学诊断5,104年,105年。第一个研究使用部分纯化抗原允许anti-mycobacterial抗体的检测在结核病患者,但测试显示可怜的特异性106年。使用高纯度本机或重组抗原特异性增加,但灵敏度下降。它也被发现,结核病是异构的体液反应程度107年;因为这个原因,使用基于混合多个血清学诊断测试结核分枝杆菌提出了抗原108年。然而,直到现在,这些测试都不足以证明预测来保证他们常规使用作为结核病的诊断测试。
其他NON-MICROBIOLOGICAL诊断技术
non-microbiological中诊断技术应用于肺结核、检测腺苷脱氨酶(ADA)获得了最多的关注作为一个间接的诊断方法。艾达是一个酶存在于大多数细胞,但被发现在结核性胸腔积液(TPE)增加。诊断TPE是困难的低灵敏度直接镜检和文化。此外,淋巴细胞分泌物可以发生在其他疾病,如恶性肿瘤和系统性红斑狼疮109年。测定ADA水平一直被称赞为有前途的标志,因为它可以很容易执行,迅速,以较低的成本比色法。李等。110年表明ADA水平在其他组的患者没有超过诊断截止电平TPE。其他研究已经评估的有效性测量ADA含量为诊断结核性脑膜炎的脑脊液,在血清和肺结核的诊断。这些研究表明,测量ADA诊断水平不是一个好的标志111年,112年。
最近,结合使用PCR和ADA的诊断TPE的结核病患病率高的地方允许确认14的16阳性患者的疾病。作为建议,不应使用ADA取代现有的诊断方法,但在诊断作为一个额外的工具113年。
实现对新诊断方法和观点
提出了一些新的诊断方法对结核病和其他几个人肯定会出现在不久的将来。最重要的考虑考虑新的诊断方法是,他们应该一样好或者比目前现有的工具,与此同时,适合资源缺乏的国家的结核病负担更重要。例如中子活化分析方法,尤其是商业工具的优点是标准化和可复制的,显示高度敏感和特定的痰检阳性样本;然而,这些值要低得多在肺外涂阴样品或样本,这些新工具的实用性更可取的。成本是另一个重要的考虑因素,因为在目前的价格这些商业工具仍然是大部分的结核病诊断实验室在资源缺乏的国家。其他分子程序甚至呼吁使用复杂昂贵的设备和高技能人员只能在发达国家或中央实验室设施结核病流行国家。只要这些约束不妥善解决,昂贵的商业工具利用中子活化分析技术仍将局限于发达国家或学术和研究实验室与适当的资金,但远离结核病控制规划。
关于结核病血清学诊断的方法,没有几个测试提出了直到现在使用各种分枝杆菌抗原都不足以证明预测来保证他们的常规使用结核病的诊断测试。显然,使用混合抗原测试,而不是一个更特定的抗原,有更好的结果。新ELISA-based像QuantiFERON-TB测试和T SPOT-TB试验,测量生产的IFN-γ激活T细胞,是承诺;然而,需要更多的研究在不同的设置来评估其效用作为诊断工具在特定的人群,如主题immunosuppresed被艾滋病毒感染或其他疾病,和孩子。这些测试的成本,因为他们也可以作为一个商业工具,会影响在常规的基础上实施的可行性。
phage-based测试也被评估在不同背景下作为一个商业工具或者内部的方法。这些研究获得的低灵敏度的可能是由于低噬菌体的传染性,也可以受到样品的年龄和条件的影响35。相比之下,在phage-based方法的研究已经表明增加灵敏度比直接显微镜和文化,使用的样本体积是5次高于用于文化。看来,在当前的格式,phage-based化验没有准备好作为一种工具来提高结核病的诊断。然而,他们似乎适合快速利福平耐药性检测73年。
许多研究,在寻找新的结核病快速诊断方法,是希望找到“神奇的子弹”,使结核病的诊断在几小时内或在现场。也许不应该这样,研究人员不应排除简单而务实的手段,更接近是什么可行的实现在high-endemic国家结核病诊断实验室。例如,一个简单的方法是用Mejia描述等。114年和基于micro-colonies的快速检测结核分枝杆菌一个标准的显微镜下,允许检测> 60%的阳性样品前10天内,两周之后,> 80%是积极micro-colony LJ培养基方法相比,10%。同一作者,包括> 1800份临床样本的一份报告中显示,72%的敏感性与标准相比在LJ培养基和培养得出结论,同时使用两种媒体增加检测的灵敏度115年。最近其他的方法,比如一个由Angeby描述等。79年使用硝酸还原应该探索作为快速诊断工具。文化传媒将硝酸钾和利福平可以直接使用检测不仅净化痰液样本结核分枝杆菌,但也同时rifampicin-resistant杆菌。同样的方法也可以用于比色方法描述的最近,将彩色指标在中,直接与净化痰样本接种。
最后一个考虑是,任何新的方法或方法,复杂,商业或内部,应该在设计良好的临床试验和控制评估和测试在high-endemic,资源匮乏地区的实现和使用这些方法更需要对结核病控制的改善作出贡献。
脚注
本系列之前的文章:没有。1:卡多纳·P-J Ruiz-Manzano j .的本质结核分枝杆菌潜在的细菌。欧元和J2004;24:1044 - 1051。2号:Rieder h .年度感染的风险结核分枝杆菌。欧元和J2005;25日:181 - 185。3号:Mitchison哒。耐药结核病。欧元和J2005;25日:376 - 379。4号:金SJ。在结核病:药敏测试方法和结果的可靠性。欧元和J2005;25日:564 - 569。5号:Dlodlo RA,藤原π,Enarson哒。结核病的治疗和控制应解决hiv感染和未感染的个体不同?欧元和J2005;25日:751 - 757。6号:Caminero农协。耐多药结核病管理和病人再处理。欧元和J2005;25日:928 - 936。7号:Dasgupta K,孟席斯d .成本效益在移民和难民的结核病控制策略。欧元和J2005;25日:1107 - 1116。8号:马丁c .结核病疫苗的梦想;新疫苗改进或更换BCG吗?欧元和J2005;26日:162 - 167。
- 收到了2005年4月26日。
- 接受2005年4月28日。
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