文摘
一些基于分枝杆菌抗原ELISA测试被用于结核病(TB)的快速诊断,尽管演示结核分枝杆菌在涂片或文化是最可靠的方式。在目前的研究中,16-kDa的诊断价值和38-kDa分枝杆菌抗原研究的患者被诊断为肺结核的临床和/或细菌的发现在土耳其。
PATHOZYME-TB复杂+商业酶联免疫试剂盒用于测量免疫球蛋白G与38-kDa 16-kDa重组抗原。体液免疫反应分析了一组179名结核病患者(143痰检阳性,19涂阴,八淋巴腺炎和9胸膜炎),15不活跃的结核病例和对照组的40名健康志愿者20科目比结核病和其他肺部疾病。
敏感性,specifity,阳性预测值和阴性预测值的测试确定为52.5%,93.3%,95.9%和39.7%,分别在结核病例。抗体检测在截止以上三个(20%)与不活跃的15个主题结核病。
总之,ELISA试验有很好的specifity和一个可接受的敏感性和积极的预测价值。人们认为它可以与其他方法结合使用来提高诊断的准确性,尤其是culture-negative结核病例,这是很难诊断。
世界′年代大约三分之一的人口感染了结核分枝杆菌,据估计,每年有800万新病例和300万例死亡发生1。
的标准诊断结核病仍然是由临床检查,直接痰显微镜和分枝杆菌培养。为了提高结核病的诊断,更快速诊断技术近年来进行了调查。尽管增加分枝杆菌的快速鉴定技术的发展,仍然是一个需要一个简单的、敏感的和具体的检测结核病。开发一个简单和廉价的诊断工具,结核病是一个重要的目标,特别是针对全球的病例数增加活动性结核病,它主要影响发展中国家2- - - - - -4。
的需求更快速诊断过程一直专注于展示特定抗体的存在的可能性。检测的抗体是相对简单和廉价,所以血清诊断结核病的广泛调查5。的特异性血清学测试提高了高纯度和重组抗原具体介绍了结核病的复杂2。
许多分枝杆菌抗原已确定,如71年,65年,38岁的23日,19日,16日14和12-kDa蛋白质。38-kDa蛋白是一个immunodominant脂蛋白抗原孤立亲和色谱法抗原5的一个组成部分,是特定的结核分枝杆菌复杂。它是最广泛研究抗原。16-kDa抗原是一种immunodominant抗原,经常叫14 kDa,与低分子量热休克蛋白家族。该抗原包含特定的b细胞抗原表位结核分枝杆菌复杂的6,7。
ELISA是一个高度敏感的和可再生的血清学技术。不需要复杂的仪器,方法简单,并雇佣廉价的试剂,这意味着ELISA可以很容易地在实验室进行。使用高度特定抗原的ELISA方法是一个很好的选择对于结核病血清诊断2,8,9。
土耳其是一个温和的流行的国家每100000人(40例)和发病率每年每100000人(26例)的结核病10。本研究的目的是评估的临床有效性检测特定的免疫球蛋白G (Ig)使用商用免疫测定测试在结核病的诊断在土耳其。
方法和材料
设置
本研究在三级参考中心进行肺疾病和肺结核在土耳其西部,并经医院伦理委员会批准。
研究对象
从连续的病人血清样本收集一个病房在医院2003年9月至2005年5月。所有患者免疫活性的,HIV阴性,没有药物滥用者。所有患者年龄≥16岁。
结核病组
总共有179艾滋病毒血清反应阴性的样本个体进行了研究。入选标准是根据世界卫生组织(世卫组织)标准定义的结核病患者10。
非活动性结核组
这组患者治疗与一个完整的公开或提供胸片显示报告肺结核病变。所有患者的胸片稳定≥6个月,并对患者进行痰涂片和培养为阴性肺结核。15这组血清样本进行测试。
对照组
对照组由60名患者从两个主要的人口。较小的两个子组(n = 20)由患者肺疾病住院结核病。这些疾病包括肺炎、慢性阻塞性肺病、支气管扩张和肺癌。另一组由40名健康献血者,一般健康检查记录。
所有血清样本收集和储存在-40°C到使用。血清样本和积极的,消极的和截止控制包含在工具包在重复测试。
卡介苗接种疫苗和结核菌素皮肤试验状态
接种卡介苗(BCG)在土耳其是强制性的。结核菌素皮肤试验(TST)不是一个特定的诊断工具,由于BCG疫苗接种规划和结核病的地方的特性。在目前的研究中,结核菌素不上执行所有的病人为病人的血清学地位比较数据。然而,结核菌素值被发现的病人在住院期间进行了测试。BCG的伤疤都记录了所有的病人的数量。
血清学试验
商用酶联免疫试剂盒,PATHOZYME-TB复杂+(ω诊断,Alloa,英国)使用。PATHOZYME-TB复杂+工具包,38-kDa抗原,通过重组技术,混合与16-kDa重组蛋白质。这项研究是根据制造商′年代执行指令。总之,稀释(1:50)血清是分布在microtitre井和孵化为60分钟37°C。飘散的血清与缓冲溶液被洗涤。井随后被孵化与peroxidase-labelled反人类的共轭30分钟的37°C。清洗周期,过氧化物酶底物tetramethylbenzidine含有过氧化氢是添加到井和比色反应是延长15分钟在37°C,直到站在黑暗中试剂是补充道。吸光度值记录在450海里。四个标准(2、4、8和16 serounits·毫升1)提供了生成半对数的参考曲线。因为血清稀释1:50,单位从曲线外推获得serounits乘以50对结果的解释。根据制造商′年代指令,因此被认为是积极的,当样本的抗体水平高于200 serounits·毫升1。
血清样本和积极的,消极的和截止控制包含在工具包在重复测试。结果表示为血清学的数量单位的特定的免疫球蛋白g / mL,从半对数读取参考曲线,这是由包含在工具包使用标准的解决方案。
统计分析
卡方测试被用来计算积极性百分比的差异显著性(与结核病组相比)。费舍尔′年代完全测试是用于积极性百分比的差异显著性的患者相比,“他人”组(不活跃的结核病组,对照组)。敏感性,特异性,阳性和阴性预测值(PPV和NPV)计算标准方法。差异被认为是重要的假定值< 0.05时。
结果
在目前的研究中,179名结核病患者的结核病组。血清样本来自15个不活跃的结核病患者和60血清样本控制也进行了研究。多的情况下,人口特征和年龄差异主题组与控制表1中可以看到⇓。之间没有显著差异的平均年龄结核病组和对照组(p > 0.05)。结核病组′意味着年龄互相之间没有显著性差异(p > 0.05)。肺疾病群控制情况下的平均年龄明显比健康对照组(p < 0.05)。
均值±sd价值观38-kDa的抗体滴定度和16-kDa分枝杆菌抗原在痰检阳性和涂阴病人被确定为337.94±285.12,375.79±276.10 serounits·毫升1,分别。最大值、最小值和平均值的抗体滴定度为每一个检查小组如图1所示⇓和2⇓。均值结核病淋巴腺炎患者的抗体滴定度低于其他结核病组(p < 0.05)。平均值之间的差异对痰检阳性和涂阴肺结核病例不显著(p > 0.05)。肺结核和结核胸膜炎患者′平均值明显高于不活跃的结核病和控制情况。不活跃的情况下和控制之间的区别意味着值无统计学意义(p > 0.05)。
的抗体滴定度值38-kDa和16-kDa分枝杆菌抗原在测试组。OD:光密度;Sm +:痰检阳性肺结核(TB);Sm -:涂阴肺结核;结核病lymp:结核病淋巴腺炎;结核病pl:结核病胸膜炎。
![图2 -](http://www.qdcxjkg.com/content/erj/29/1/143/F2.medium.gif)
最大值、最小值和平均值的抗体滴定度38-kDa和16-kDa分枝杆菌抗原的学习小组。Sm +:痰检阳性肺结核(TB);Sm -:涂阴肺结核;结核病lymp:结核病淋巴腺炎;结核病pl:结核病胸膜炎。♦:平均值。
敏感性被发现结核病患者的52.5%。检测抗体水平高于截止水平三个(20%)的血清15不活跃的情况下。一个(5%)病人的血清肺疾病对照组和三个(7.5%)的健康对照组被发现是正的。敏感性,特异性,npv, ppv结核病例和诊断准确性的测试如表2所示⇓。痰检阳性的敏感和消极肺结核组不显著(p > 0.05);都是肺和肺外结核病组之间(p > 0.05)。然而,结核病和非活动和对照组之间的显著差异被发现(p < 0.05)。
在两个亚种群控制的情况下(健康受试者和肺部疾病除了结核),没有光密度的差异意味着和血清学的积极性率(p > 0.05)。
测试结果中观察到53例(45痰检阳性,8涂阴;27个血清反应阳性的和26血清反应阴性的)。意味着测试值是14.5±6.5毫米和17±3.9毫米在痰检阳性和消极的患者,分别(p > 0.05)。5个(9.4%)病人′TST直径小于10毫米。4这五个病人血清反应阳性的。血清反应阳性的结核菌素的平均直径和血清反应阴性的病人被确定为13.8±7.3毫米和16±4.6毫米,分别(p > 0.05)。
没有观察到BCG疤痕在11个病人。所有BCG-negative患者被发现结核菌素阳性。5 (45.4%)BCG-negative患者血清反应阳性的和6 (54.6%)BCG-negative病人血清反应阴性的(p > 0.05)。
讨论
目前的研究表明,体液反应分枝杆菌抗原可能是一个重要的指标活性肺结核,在结核病的诊断可以帮助。
根据文献,血清学测试有很高的特异性和敏感性更低的成年人口。的敏感性测试还取决于疾病的阶段和痰的分枝杆菌的存在。慢性和培养阳性的情况下,抗原刺激持续,如果病人基因能够挂载一个特定抗原的免疫反应,抗体水平预计将上升2。
38-kDa抗原血清学研究抗原最频繁,也是一个核心组件在不同商业结核病血清学测试11,12。38-kDa抗原的识别频率报告变化很大(16 - 94%),很大程度上取决于涂片状态和疾病的表现。测试报告之前的特异性一致(88 - 100%),但是报道的敏感性测试不同33 - 89%的痰检阳性结核病患者涂阴肺结核患者和16 - 54%5,13- - - - - -17。从文献的一些值如表3所示⇓为方便对比主要过去的调查。先前的研究已经报道低敏感性的重组版本38-kDa抗原,用ELISA技术范围16 - 36%的敏感性涂阴病人痰检阳性患者和36 - 67%5,7,19。蒋介石et al。8报道,38-kDa抗原诊断敏感性为64%。在接收机操作曲线分析,特异性设置为100%时,38-kDa抗原灵敏度最高的抗原进行了研究。Samanichet al。1938-kDa抗原抗体检测到57.8%的肺腔的结核病患者。在最近的一项研究在土耳其,eret al。18报道46.5%的肺结核敏感性100%的特异性。
虽然在肺结核38-kDa抗原抗体反应已被广泛研究,只有少数报道的效用38 kDa-based在肺外结核病血清学测试。抗体检测在12 - 56%的肺外结核病患者12。威尔金斯和Ivanyi4描述竞争ELISA分析基于高灵敏度和specifity 38-kDa单克隆抗体;38-kDa抗体抗原被发现在73%的肺外结核病病例选择specifity 98%。
抗原的结合还发现在血清诊断更有用22。这种结合抗原的使用最大化血清诊断的有效性,但这都是不可能检测抗体,因为这可能导致低specifity。Pottumarthyet al。23表明,最大灵敏度得到七个测试相结合时,也在控制specifity降至55%。组合使用38-kDa和16-kDa抗原可能增加测试灵敏度和单独的38-kDa抗原相比24。血清阳性的38-kDa朱利安和16-kDa抗原被发现et al。3在涂阴痰检阳性为31%,0%,8%,肺外结核,Imazet al。21在涂阴肺结核痰检阳性为58.8%和29.3%。贝克et al。7已检测到抗体16-kDa和38-kDa抗原50.9和59%的结核病患者的样本,分别。Demkowet al。2发现59,23岁,40 - 43%的利率为培养阳性,culture-negative,分别结核病节点和结核病胸膜炎。不活跃的结核病例,一些研究发现积极的利率在25%和2.9之间5,8。
结核病患者不会产生抗体抗原物质在结核杆菌的细胞壁,不同患者的特异性抗体。Lyashchenkoet al。20.指出,人与人的抗原识别的变化,而不是特定的抗原识别,是一种人类结核病体液免疫的关键属性。异质性在结核病血清抗体的抗原识别解释未能检测到特定的抗体反应在结核病患者只有少数纯化抗原结核分枝杆菌使用25。然而,重要的方差在血清学结果甚至可以通过使用获得相同的抗原与不同人群的样本。不同的抗体反应结核分枝杆菌可能是由人类白细胞抗原(HLA)类型9。霍顿et al。26指出,识别使用相同的频率38-kDa重组抗原制备与痰检阳性患者的样本范围35 - 82%从四个不同的地理区域。Weldinghet al。11观察到一个大变化灵敏度测试相同的抗原时血清从结核病患者生活在丹麦和血清结核患者生活在乌干达。依照之前的结果27,发现阳性抗体反应的比例最高的血清样本地区结核病是高度流行。除了种族背景的差异,很可能有一个不同的阶段的疾病患者和低高发地区的住院,和这个因素也可能影响抗体反应的大小固定的病人。
在大多数研究中,对分枝杆菌抗原的反应更常见的活动性结核病患者涂片是积极的,而不是涂阴病5。在目前的研究中,应对38-kDa 16-kDa抗原是在涂阴高于阳性的患者,对比结果发表在前面提到的文学。根据文献,血清学反应取决于传播肺损伤,除了疾病阶段,持续时间和HLA抗原刺激类型的病人2,3,9,20.,21。结核病组目前研究,传播损伤评估和分类。可能更高的血清学反应可能导致病人涂阴肺结核组传播病变。涂阴肺结核诊断需要更多的时间比在细菌学上的确诊病例,所以抗原刺激呈现时间会更长,体液反应可以更强。
敏感性为肺外结核病例被发现与大多数文献整合。尽管在这些组织统计力量很低由于病例数不足,由于低敏感性、诊断的实用性PATHOZYME-TB复杂+测试似乎弱。
很难评估结核活动与肺病患者症状,胸片显示报告的肺结核病变。不活跃的肺结核和涂阴肺结核病例是很难区分的。作为本研究的一部分,血清学反应涂阴例与不活跃的情况下(某些负例结核病),发现有利于分化。目前的结果表明,血清学有助于在涂阴肺结核病人结核病的评估活动。
取代“黄金标准”的文化测试,> 80%的血清学试验应具备敏感性和测试特异性> 95%,根据世卫组织的建议28。在土耳其,结核菌素不禁大大在结核病的诊断,由于温和的结核病患病率和BCG接种疫苗。研究指出,TST积极性中检测出24 - 77%的普通人群同样在56 - 69%的结核病患者29日,30.。因此,结核菌素是一种有价值的但非特异性测试评估的结核病患者在土耳其。目前的结果表明,基于分枝杆菌重组抗原的免疫球蛋白g测试(38-kDa和16-kDa)很好的特异性但低于可接受的水平的敏感性对结核病的诊断一致出版的文献。
它可以得出结论:38 kDa, 16 kDa-antigen-based测试可以与其他方法结合使用增加结核病的诊断准确性。在非活动性结核病例,敏感性显著低于肺结核组,血清学反应结合38-kDa和16-kDa抗原似乎是一个指标来评估肺结核激活。尽管在当前情况下,低灵敏度血清学方法可能在肺外结核病的诊断是有价值的,这通常是一个特别困难的形式确认患者的细菌学的人很难获得标本。
确认
作者要感谢Delibas先生帮助进行统计分析。
- 收到了2006年3月25日。
- 接受2006年7月31日。
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