文摘
主肺动脉高压(PPH)与特定的结构变化,包括细胞内膜的增厚,内膜的纤维化和丛状的病变。
确定表型的平滑肌细胞(smc)在这样的病变,肺组织的作者进行了免疫组织化学分析从两个产后大出血的患者,使用两个antimuscle肌动蛋白抗体,HHF35 CGA7,和两个anti-SMC肌凝蛋白重链标记,anti-SM1 anti-SM2抗体和抗体有关。细胞染色阳性(+)与HHF35 CGA7, anti-SM1, anti-SM2被认为是smc的成熟状态。相反,那些彩色正面HHF35和anti-SM1,但弱阳性(+ /−)或负面(−)CGA7 anti-SM2,被认为是smc表现出一种不成熟的状态。
不成熟的细胞内膜的增厚是由smc表型(HHF35 + CGA7 + /−, SM1 + SM2 + /−),伴随着纤连蛋白的表达和巨噬细胞的存在;内膜的纤维化包含成熟smc (SM1基因HHF35 + CGA7 + +, SM2 +);和丛状的病变包括增生性内皮细胞(血管性血友病factor-positive细胞,增殖细胞核抗原阳性细胞)和潜在的不成熟的smc (HHF35 + CGA7−, SM1 + SM2−)与纤连蛋白表达和巨噬细胞浸润有关。
这些发现表明,平滑肌细胞与特定表型可能导致特定的血管病变的发展主肺动脉高压。
肺动脉高压与特定的结构性改变,从内侧细胞内膜的增厚增厚,内膜的纤维化和丛状的病灶1。尽管早期的报告显示,血管平滑肌细胞(smc)是包含在高血压肺血管病变2,3,smc表型在这些特定的病变尚未确定。使用一系列新的肌动蛋白和肌凝蛋白重链标记,smc表型的经皮穿冠状血管成形术(PTCA)后neointima最近被证明以及动脉粥样硬化斑块4- - - - - -6。在这项研究中,确定的smc表型与原发性肺动脉高压肺血管病变(PPH),产后大出血患者肺组织的免疫组织化学分析,使用各种antismooth肌肉(anti-SM)和相关抗体。
方法
在尸检肺组织得到来自两个产后大出血的病人,一个28-yr-old 8-yr-old男孩和男性。8-yr-old男性被称为医院因为晕倒的一集和水肿。当时,他在终端阶段的疾病,由心脏肥大(心胸比率;0.65)的胸部x线摄影在超声检查和suprasystemic肺动脉压力。这些研究结果,结合磁共振成像和肺灌注扫描,显示没有其它原因造成的肺动脉高压。病人进行性心力衰竭无论药物和6个月后去世。28-yr-old男性相当稳定的观察了10年之后的初始集咯血。心导管进行7个月前他死于心脏衰竭,和pulmonary-to-aortic系统性压力比是0.83,没有肺血管反应吸入一氧化氮。没有发现其它原因造成的肺动脉高压。获得尸检肺组织,从三个病人无肺动脉高压(21-yr-old男性恶性淋巴瘤; 29-yr-old male with embryonal carcinoma; 38-yr-old male with fulminant hepatitis), were also studied as controls.
组织固定在methanol-Carnoy的解决方案和嵌入式石蜡。从每一块二十串行部分被剪掉了5μm厚。每一个第一和第二部分是沾haematoxylin-eosin Weigert弹性van Gieson污点,分别。剩下的部分被用于免疫组织化学染色。贴上streptavidin-biotin复杂系统,采用氯化镍颜色修改。部分是计数器与甲基绿染色。SMC在血管病变immunophenotyped使用两个antimuscle肌动蛋白标记,HHF35 (Dako A / S,斯特鲁普、丹麦)和CGA7(恩佐物化学公司、纽约、纽约),和两个anti-SMC肌凝蛋白重链标记,anti-SM1 anti-SM2抗体,在我们的研究报道immunophenotypic调制的SMC neointima现场PTCA和在人类动脉粥样硬化斑块4- - - - - -6。anti-SM1和anti-SM2抗体(分别anti-SM1和anti-SM2)识别两个肌球蛋白重链亚型SMC, SM1 SM2,分别为SMC血统非常特定的标记5,6。免疫组织化学结果使用HHF35 CGA7、anti-SM1 anti-SM2, antifibronectin抗体进行分析,调查人员(YM和μ)的两个半定量的方式如下:+ +,超过三分之二的细胞阳性;+,大约一半的细胞阳性;积极+ /−,< 10%;−,负面的。细胞染色阳性与HHF35、CGA7 anti-SM1,和anti-SM2被认为是SMC的成熟状态;相反,那些彩色正面HHF35和anti-SM1,但弱积极或消极CGA7和anti-SM2被认为是表型调制SMC表现出一种不成熟的状态4- - - - - -6。单克隆抗体对细胞增殖核抗原(PCNA);Dako A / S)是用于检测细胞增殖。其他使用单克隆抗体antifibronectin抗体(Cosmo生物有限公司、东京、日本);antimacrophage抗体,HAM56 (Dako A / S);和antivon血友病因子(vWf)抗体(Dako A / S)。
结果
细胞内膜的增厚,内膜的纤维化和丛状的病变观察患者的肺组织PPH (Heath-Edwards分类等级4)。没有内膜的损伤是控制患者的肺组织中发现的。细胞内膜的增厚包含细胞表现出椭圆形的细胞核和细胞质丰富的弹性蛋白的沉积(图1 a和B⇓)。这些病变细胞染色阳性HHF35和anti-SM1,但只有弱和CGA7 anti-SM2(图1氟⇓;表1⇓)。这些病变显示明显的纤连蛋白和明显的积累巨噬细胞(图1 g和H⇓;表1⇓)。PCNA-positive细胞内膜中发现。内膜的纤维化包含纺锤状细胞,表现出密度弹性蛋白的沉积(图2⇓)。这些病变细胞染色阳性与HHF35 CGA7 anti-SM1, anti-SM2(图2 c和D⇓;表1⇓)。这些病变显示少量的纤连蛋白(图2 b⇓;表1⇓),只有一些零散的巨噬细胞。PCNA-positive细胞缺席。两个患者产后大出血的媒体在肺血管和三个控制患者均匀和HHF35染色阳性,CGA7, anti-SM1, anti-SM2,纤连蛋白表达和PCNA积极性(表1)。
![图1. -](http://www.qdcxjkg.com/content/erj/17/2/316/F1.medium.gif)
细胞内膜的增厚。a -描述串行部分。)Weigert弹性van Gieson污点;*:不同的细胞内膜的增厚;M:媒体。B) Haematoxylin-eosin污渍。C)与HHF35染色。D)与CGA7染色。E)与anti-SM1染色。F)与anti-SM2染色。 G) Staining with HAM56. H) Staining with antifibrinoectin antibody. (Internal scale bar=50 µm)
内膜的纤维化。板模拟描述串行部分。)Weigert弹性van Gieson污点;*:内膜纤维化;M:媒体。B)与antifibronectin抗体染色。C)与anti-SM1染色。D)与anti-SM2染色。(内部规模酒吧= 30µm)。
丛状的动脉瘤性和angiomatoid小血管病变包含一丛(图3⇓)。血管性血友病因子(vWf)阳性发现内皮细胞在支架表面损伤(图3 b⇓)。细胞在内皮细胞染色阳性HHF35和anti-SM1,但消极和CGA7 anti-SM2(图3 c和D⇓;表1⇑)。纤连蛋白的损伤表现出一种独特的表现(图3 e⇓;表1⇑)和巨噬细胞的浸润。此外,观察PCNA阳性细胞在内皮细胞和邻近腔的表面(图3)。⇓
![图](http://www.qdcxjkg.com/content/erj/17/2/316/F3.medium.gif)
丛状的病变。面板f描述串行部分。一)Haematoxylin-eosin污渍。丛状的病灶(箭头)。B)与anti-von血友病因子抗体染色。C)与anti-SM1染色。D)与anti-SM2染色。E)与antifibronectin抗体染色。F)与anti-PCNA抗体染色。(内部规模酒吧:= 80µm; B–E=60 µm; F=25 µm)
讨论
的主要发现两例产后大出血患者的肺组织如下:a)细胞内膜的增厚是由不成熟的smc表型(HHF35 + +, CGA7±, SM1 + +, SM2±),伴随着纤连蛋白的表达(+ +)和巨噬细胞的存在;b)内层的纤维化所包含的一个成熟的smc表型(HHF35 + +, SM1基因CGA7 + +, + +, SM2 + +);和c)丛状的病变包括增生性内皮细胞(vWf-positive PCNA-positive)和潜在的不成熟的smc (HHF35 + +, CGA7−, SM1 + +, SM2−)与纤连蛋白表达(+)和巨噬细胞浸润。媒体是一个成熟的表现型(HHF35 + +, SM1基因CGA7 + +, + +, SM2 + +)的SMC没有纤连蛋白沉积和巨噬细胞浸润。这些发现是通过结合使用了一系列新的antimuscle抗体,杰出的成熟不成熟表型的SMC在动脉粥样硬化和balloon-injured冠状血管4- - - - - -6。
目前的研究表明,内膜的损伤与PPH包含smc表型不同。这些发现符合早期的报告,描述了不同的免疫反应性在内膜的损伤,与一些immunonegative,和其他人被immunopositiveα肌动蛋白7。目前发现内膜的损伤是有趣的,因为pnenotypic smc的变化可能与特定的形成在PPH内膜的损伤。结果在血管内膜病变PPH像以前发现neointima PTCA后人类冠状动脉4,5。观察到,在neointima PTCA后20天,由不成熟的smc与CGA7彩色正面HHF35但负面。5个月后,内膜的损伤是由成熟的smc与HHF35和CGA7染色阳性4。PTCA同样,在2 - 5个月后,血管内膜细胞表达SM1但不是SM2。6个月后,他们积极的SM1和SM2,像那些在正常的媒体5。这些观测结果强烈表明,smc表型变化导致PTCA受伤后的愈合过程4,5。在目前的研究中,然而,协会的smc表型变化的进展内膜的损伤不能确定,因为只有在终端检查肺部分阶段的疾病。
PCNA阳性发现内皮细胞相邻支架表面的丛状的病变,建议新生血管病变形成的贡献。之前的报告丛状病变的细胞成分一直存有争议。超微结构的研究已经证明,丛状的病灶由myofibroblasts和待定性质的细胞含有胞质纤维,所谓的纤丝的细胞3。相反,最近的一项研究,采用免疫染色表明,丛状的病变是一种血管生成增生性内皮细胞组成的病变8。目前的研究表明,内皮下细胞染色阳性HHF35和anti-SM1,但负面CGA7和anti-SM2,暗示不成熟的SMC的内皮下膜的存在。这些细胞可能对应于myofibroblasts,观察之前的超微结构的研究3。这些观察表明,新血管形成伴随着潜在的不成熟的smc的外观可能导致丛状病变的形成。
不成熟smc增殖活动的观察发现与巨噬细胞和纤连蛋白表达在内膜的增生和丛状的病灶可能表明一个不成熟的smc的积极作用这些病变的发病机理。之前的报告表明,新生内膜巨噬细胞在人类发现PPH加上纤连蛋白的表达,这可能是诱导巨噬细胞释放细胞因子9。浸润的巨噬细胞是人类PPH丛状的常见的病变,这表明巨噬细胞释放的细胞因子可能影响这些病变的发展8。一个在体外研究表明,纤连蛋白促进smc的调制从收缩到合成表型10。总的来说,这些发现表明,巨噬细胞浸润和纤连蛋白的表达可能是重要的形态发生内膜的和产后大出血的丛状的病灶通过smc表型调制。
总之,初步研究表明,细胞内膜的增厚和丛状的病灶包含不成熟的平滑肌细胞,这与研究结果表明积极的血管重塑:平滑肌细胞增殖细胞核抗原阳性,巨噬细胞浸润和纤连蛋白沉积。相比之下,内层的纤维化包含成熟平滑肌细胞没有这样的积极的结果。这些发现表明,平滑肌细胞与特定表型可能导致特定的发展在肺动脉高压血管病变。未来的研究需要更多的情况下,进一步阐明平滑肌细胞表型之间的关系和具体在肺动脉高压血管病变。
- 收到了1999年1月13日。
- 接受2000年7月18日。
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