文摘
理解的成分和临床重要性真菌mycobiome最近被认定为一个重要的主题在“研究优先事项”共识声明中支气管扩张。
患者的一部分CAMEB研究:一个国际多中心横断面的亚洲和欧洲支气管扩张患者匹配。mycobiome决心在238年病人的有针对性的扩增子鸟枪测序18 s-28s rRNA内部转录间隔区区域ITS1和ITS2。具体定量PCR检测和分生孢子的量化范围的气道曲霉属真菌物种了。痰半乳甘露聚糖、曲霉属真菌特定的IgE,免疫球蛋白和TARC水平(胸腺和激活规范的趋化因子)测量系统和相关的临床结果。
支气管扩张mycobiome截然不同,以特定的真菌属,包括曲霉属真菌,隐球菌和Clavispora。来自烟曲霉属真菌(在新加坡/吉隆坡)曲霉属真菌terreus(在邓迪)主导的概要文件,后者与恶化。高频率的曲霉属真菌,相关疾病包括敏化作用和过敏性支气管肺的曲霉病被发现。每个显示不同的mycobiome概要文件,与更严重的疾病,肺功能较差,增加了急性加重。
肺mycobiome支气管扩张的临床意义。筛查曲霉属真菌相关疾病应考虑显然即使在稳定的患者。
文摘
支气管扩张的气道mycobiome与临床意义上的疾病http://ow.ly/MCKj30knVrn
介绍
支气管扩张是一种慢性呼吸道疾病的特点是进步的支气管扩张。到目前为止,没有授权的疗法治疗。地理区域说明优势为特定目的,如。post-tuberculous疾病流行国家感染(1]。初期的支气管扩张感染煽动有害的炎症反应和疾病进展。黏膜纤毛的清除受损的“恶性循环”,反复感染和慢性炎症,与建立链接到细菌,导致进步的疾病;然而,真菌的作用知之甚少。
肺部微生物及其与慢性呼吸道疾病协会是一个新兴的研究领域。文化无关气道测序揭示小说呼吸道微生物之间的关联和肺部疾病2]。到目前为止,大多数呼吸道微生物研究细菌的焦点,一个提供疾病的方法了解发病和预后[3,4]。相比之下,然而,测序的真菌微生物(mycobiome)落后于应用研究相对较少,而我们所知,没有一个在支气管扩张5]。
真菌孢子环保无处不在,因此他们的呼吸吸入是一个不可避免的后果6]。同时提示黏膜纤毛的和吞噬间隙发生在健康的肺,解剖异常和免疫功能不全的航空公司比如在支气管扩张的风险较高,真菌收购,殖民和潜在疾病(6]。我们组和其他人进行广泛的工作描述真菌在囊性纤维化(CF)有关的支气管扩张殖民地和作为病原体与贫穷相关临床结果(7- - - - - -10]。
真菌,尤其是曲霉属真菌spp。,引起一系列的肺的后果,包括过敏、慢性和/或侵入性疾病(11,12]。一个过分主机响应曲霉属真菌例如,是临床上重要的与真菌敏化作用严重哮喘,慢性阻塞性肺疾病(COPD)和CF (13- - - - - -15]。真菌在支气管扩张的作用不是因为CF,然而,没有那么明确。曲霉属真菌敏化作用和/或过敏性支气管肺的曲霉病(ABPA)是一种引起(∼10%),重要的是,支气管扩张的结果(6,10,16]。mycobiome在支气管扩张的作用尚未全面调查,和它的重要性和相关性显然是强调优先研究领域在这一领域17]。
我们首次描述mycobiome支气管扩张,评估其临床相关性两个地理上不同的军团从CAMEB研究中,包括四个亚洲网站在新加坡/吉隆坡和一个欧洲网站在邓迪。
材料和方法
研究人群
稳定的支气管扩张患者招募在三个国家作为CAMEB研究的一部分,亚洲和欧洲与支气管扩张的横断面队列。在新加坡招聘包括三个站点(新加坡总医院、樟宜综合医院和谭候Seng医院(n = 124),一个马来西亚的网站(UKM医疗中心,吉隆坡(n = 14)),和一个年龄、性别和疾病severity-matched集团从一个欧洲网站(Ninewells医院,邓迪,英国(n = 100)、和是2016年3月和2017年7月之间进行的。全部细节对病人纳入和排除标准,nondiseased控制和CAMEB人口提供的补充材料。临床特点、支气管扩张的病因学和病人的人口统计数据所示表1。该研究机构审查委员会批准所有参与机构和所有病人给书面知情同意参加。给出进一步的细节补充材料。
方法
详细临床资料和标本收集、统计分析和分子方法,包括mycobiome分析,痰液定量PCR (qPCR)检测真菌和免疫学生物,是提供的补充材料。
结果
支气管扩张的肺mycobiome是截然不同的
支气管扩张的肺mycobiome文化无关分析表明,子囊菌类主导气道在门级(p < 0.01, Mann-Whitney u测验)(图1)。真菌多样性显著降低支气管扩张,以确定类群的数量(p < 0.01)和香农多样性指数(p < 0.05, Mann-Whitney u测验)(图1)。真菌的局限性在内部转录间隔区(ITS)数据库可能占百分比(95.3%)观察到较低的分类与细菌相比,在genus-level操作可以实现分类单位分类∼99% (19]。尽管子囊菌类主导整体mycobiome概要文件,相当数量的支气管扩张患者(49% (n = 116))怀有某种程度的气道担子。10% (n = 23)担子菌类占至少四分之一的整体形象,而4% (n = 9)展出Basidiomycota-dominant概要文件(图2一个)。假丝酵母,酿酒和青霉菌是最常发现在两组属,而不同的丰富,包括bronchiectasis-associated属曲霉属真菌,隐球菌,Clavispora,葡萄孢属和链格孢属(图2 b和3)。
CAMEB的设计研究中,n = 100年亚洲病人(新加坡/吉隆坡)匹配分别从欧洲队列(邓迪)患者的年龄,性别和总支气管扩张严重程度指数(BSI)评分(表1)。这使得评估结果在两个地理上不同的人群提供洞察潜在支气管扩张mycobiome地区差异。地理变异mycobiome签名检测(图3一)。病人从新加坡/吉隆坡方面表现出显著的和更高的平均的相对丰度Simplicillium,毛孢子菌属和曲霉属真菌,而患者邓迪是杰出的丰度较高Wickerhamomyces,Clavispora和隐球菌组(p < 0.05)后评估差异使用metastats统计分析(20.]。假丝酵母,迄今为止最经常观察真菌属、观察在相同频率的两个组别,而来自邓迪表现出更高的患者酿酒,青霉菌,隐球菌,Clavispora和葡萄孢属在特定的。唯一的真菌属患病率较高的前10名在新加坡/吉隆坡曲霉属真菌发现,尽管这是在所有的采样地点(图3 b)。鉴于我们的识别曲霉属真菌作为独家bronchiectasis-associated真菌属高气道丰度及其致病作用建立在其他慢性呼吸道疾病(10,12,13,15),我们追求进一步的调查。
来自烟曲霉属真菌和曲霉属真菌terreus确定在支气管扩张和副发作
我们接下来进一步描述具体的存在曲霉属真菌物种在气道qPCR使用建立协议我们组和其他人发布的(7,21]。我们评估了四个主要的曲霉属真菌物种(答:来自烟,答:terreus,答:flavus和答:尼日尔),发现nondiseased个人没有可检测气道曲霉属真菌在协议与我们mycobiome分析(图4一)。相比之下,高比例的支气管扩张患者(从所有网站)检测答:来自烟和/或答:terreus展示,没有耐心答:flavus或答:尼日尔(图4一)。有趣的是,类似比例的招募从亚洲网站答:来自烟和/或答:terreus高,而患者邓迪演示答:terreus(图4一),同事增加急性加重(图4 b)。重要的是,大量的病人(40% (n = 96))同时怀有两个物种。其中,组间平均分配招募从新加坡/吉隆坡和观察邓迪(44%与52%;p = 0.22) (图4 c)。病人从新加坡/吉隆坡同样有可能没有,或者两个物种在气道,从邓迪与病人表现出更高的可能性答:terreus(图4 c)。有更多的急性加重患者答:terreus单独或在两个物种比那些没有真菌或在场答:来自烟独自一人(图4 d)。
量化的答:来自烟来答:terreus分生孢子的比率和相关的急性加重负担
我们下一个量化答:来自烟和答:terreus分生孢子的负担我们小组发布的使用建立协议(7]。基于每克痰分生孢子的数量,然后我们将检测到负载低(< 500分生孢子·g−1痰)、中级(500 - 2000分生孢子·g−1痰)或高(> 2000分生孢子·g−1痰)。测量中不同分生孢子的负担曲霉属真菌艾滋病患者,和病人之间相当招募了来自新加坡/吉隆坡和邓迪(图5一个)。有趣的是,患者同时怀有两个物种,比例不同:患者从网站在新加坡/吉隆坡表现出更高的比例答:来自烟(中位数69%的分生孢子的负载),而邓迪队列有一个更高答:terreus负担(中分生孢子的负荷总量的89%)(图5 b)。这同意我们早些时候的观察区域变异,群体在新加坡/吉隆坡倾向于更多答:来自烟和邓迪群体大答:terreus当真菌单独存在或在一起。当病人被检测到分组曲霉属真菌物种和相应的分生孢子的负担(使用高负载切断),之间存在显著的关联高并发的分生孢子的负担曲霉属真菌物种和更大的急性加重(图5 c)。具体地说,然而,当高的分生孢子的负担答:terreus被发现,无论是单独或结合答:来自烟,更恶化也发生(图5 c)。
临床相关的高频率曲霉属真菌相关疾病发生在支气管扩张
之前的工作从我们的小组和其他突出了协会曲霉属真菌相关疾病(曲霉病)与不良临床结果在一系列慢性呼吸道疾病(7,13,22]。考虑到高的频率曲霉属真菌发现,我们下一个评估曲霉病的发生和支气管扩张的临床意义。要做到这一点,我们使用一个修改后的免疫分类系统开发的CF (补充表E4)[14]。除了标准描述了Baxteret al。(14),我们的修改版本包括整合的潜力答:terreus(通过包含的相关疾病答:terreus特定的IgE和qPCR)以及其他详细进行小的修改补充表E4。值得注意的是,虽然总IgE测量,它不是用于我们分类的病人可能发生因为它被描述ABPA IgE浓度低于既定标准的描述的否决(23]。患者分为以下五类:nondiseased (ND),曲霉属真菌,殖民(AC),曲霉属真菌,敏感(如),血清学ABPA (sABPA)和慢性肺曲霉病疑似(sCPA)。大量CAMEB队列中遇到了一个标准曲霉属真菌相关的疾病状态(ND 1.7%, AC 3.4%, 76.5%, 18.1% sABPA和sCPA 0.3%) (图6)。测定血清总IgE,曲霉属真菌特定的免疫球蛋白和痰半乳甘露聚糖之间不同的患者组(补充图E1)。特定的IgE对粗抗原答:来自烟和a . terreus分别是最高(0.77和0.57 kU·L−1)和sABPA(0.92和0.93 kU·L−1)(p < 0.001) (图6和b)。TARC(胸腺和激活规范的趋化因子),发现CF-ABPA的标志,也是评估(24]。我们发现TARC是一个贫穷的指标作为支气管扩张和/或sABPA,假阴性率高的两组(图6 c)。此外,假阳性也观察到少量的ND患者(图6 c)。sABPA患者表现出明显的加重,肺功能较差和最严厉的疾病与其他组(图6 d和f)。与大发作有关,而交流预示更恶化,保护肺功能,减少严重疾病(图6 d和f)。交流,因此sABPA州似乎存在越来越连续的疾病严重程度。只有一个病人遇到sCPA标准,从而排除了进一步的分析。曲霉属真菌相关疾病支气管扩张因此频繁,变量和临床相关的,包括在患者出现临床稳定(入选标准为我们的研究特点)。
曲霉属真菌支气管扩张相关疾病有着独特的mycobiome概要文件
高频率的曲霉属真菌相关疾病观察支气管扩张基于我们修改分类系统,我们下一个评估的存在不同的分类资料,可能与临床的五个州的四:ND,交流,和sABPA,不含sCPA因为这组只包含一个病人。尽管无人监督的β多样性分析显示三种不同的mycobiome组(补充图E3),他们与临床表型并不明显。因此,我们采取了监管策略比较mycobiome我们确定免疫类之间的配置文件。每个临床状态显示mycobiome概要文件的特点是结合不同的真菌属(图7)。ND组表现出明显的丰度高Phellinus,Magnusiomyces菌和Phlebia相对丰度较低酿酒,曲霉属真菌和青霉菌(图7)。这三个属,然而,增加他们的相对丰度在光谱和交流,和sABPA (图7和补充表E5)。的属隐球菌和Clavispora随后和类似的光谱相似,随着从交流相对丰富,sABPA。球腔菌属和葡萄孢属在场只有在患病的州没有特定的模式(图7 b和d)。其他真菌属包括特征毛孢子菌属和枝孢属交流的状态,Wickerhamomyces和链格孢属在和sABPA州(图7 b)。重要的是,的相对丰度曲霉属真菌检测到从mycobiome概要文件是在协议与我们qPCR-based量化的分生孢子的负担答:来自烟和答:terreus在所有疾病类别,与大发作在和sABPA (图7)。Mycobiome档案所独有的曲霉属真菌相关的疾病状态因此可能有用的未来支气管扩张的研究专注于真菌病的诊断和endo-phenotyping。
讨论
我们首先描述,文化无关的分析肺mycobiome执行在支气管扩张,迄今我们所知,第一次呼吸研究精心匹配地理上不同的患者群体允许我们评估潜在mycobiome地区差别。18 s-28s通过应用高通量测序和其他分子技术,我们划定mycobiome成分及其相关临床相关的状态。我们的分析表明曲霉属真菌支气管扩张的主要真菌属,类似于其他慢性呼吸道疾病(描述6,12]。一个有趣的观察是特定的流行曲霉属真菌物种描述我们的新加坡、吉隆坡和邓迪的同伴答:来自烟和答:terreus最常发现在每个各自的集团,后者与恶化。病人进一步分层分组包括AC和sABPA状态显示高临床重大疾病的发生,甚至在“稳定”的病人,和不同的判别分类群mycobiome概要文件的存在为每个组。
改变地区肺生长条件创造一个有利的环境殖民和感染的病原微生物(2]。鉴于总支气管扩张的解剖变形特征,因此奇怪微生物差异是观察与nondiseased相比。慢性支气管侮辱耦合解剖变形,破坏黏膜纤毛的清除,持续中性反应和复发性感染所有支持致病真菌的生长及其随后的临床后果在支气管扩张6,25]。
这个和其他的研究中观察到,气道mycobiome是由子囊菌类26]。Ascomycota-dominant概要文件是支气管扩张的特点,虽然一个重要的少数民族有很高的气道担子。担孢子环境更加丰富和小于子囊孢子,解释他们的气道存在(27]。相比之下,子囊菌类,包括建立呼吸道病原体曲霉属真菌和假丝酵母,具体的担子在支气管扩张中的作用尚不清楚。值得注意的是,致病性担子菌类隐球菌,裂褶菌属,Phellinus,Ceriporia和毛孢子菌属都是在我们的工作中发现(28]。隐球菌在支气管扩张显著升高,先前记录的观察意见,这使得现在需要进一步调查29日]。肺担子的存在可能反映动态贩卖“罕见的生物圈”真菌(“移民和消除”),暗示着一个更健康的呼吸状态,而不是持续的和不利的环境与子囊真菌结果(2,5]。横断面设计的研究中,然而,杜绝纵向评估稳定和稍纵即逝的mycobiome随着时间的推移,对将来工作的一个重要的考虑因素。
Bronchiectasis-associated真菌属包括曲霉属真菌,Issatchenkia,Wickerhamomyces和Simplicillium。专用菌种qPCR哪里曲霉属真菌了,只有答:来自烟和答:terreus在支气管扩张可识别的。有趣的是,答:来自烟有一个来自新加坡的优势在亚洲人群/吉隆坡,在吗答:terreus表现出更高的患病率和邓迪的负担的病人。即使在患者两个物种、地理来源比例占主导地位的决定。患者严格匹配的年龄、性别和疾病严重程度以面对瘟疫支气管扩张的异质性研究并允许我们更好地评估潜在的地理变异。研究更多的军团从欧洲和亚洲需要确定这些是否真正地理或病人选择或转诊模式的区别反映在参与网站。这些地理表型是伴随着不同的肺mycobiome概要:青霉菌,Clavispora和隐球菌在邓迪的病人明显更高的频率,而担子属Phlebia,毛孢子菌属,Ceriporia,Phellinus,裂褶菌属,Psathyrella和Peniophora病人从新加坡独有/吉隆坡整体表现出更高的担子。识别差异可能反映了无数的区域变量对比大气状况等因素之间的温带和热带的气候,包括温度和湿度,每个记录影响真菌(30.,31日]。有趣的是,我们确定的地理变异答:terreus优势在邓迪发生尽管报道英国患病率较低的真菌,暗示浓缩的支气管扩张人口(32]。CF-related支气管扩张也同事答:terreus和一位身份不明的环境暴露的可能相关性邓迪队列是归因于这个物种33,34]。其他关键要考虑地理因素包括饮食偏好、遗传学、空气质量和/或生活方式,所有影响收购和持久性的微生物包括真菌(35]。有趣的是,标志着我们的身体质量指数差异“匹配”军团对肠道微生物的潜在差异提出了疑问,反过来可能与气道mycobiome鉴于新兴lung-gut轴关系,面积增加相关性呼吸健康(36]。其他混杂因素包括药物处方及其地区差异考虑顺向mycobiome影响。这些都是重要的考虑给予区别我们的邓迪和新加坡/吉隆坡军团的吸入型皮质类固醇激素,长期预防性抗生素(在邓迪)和黏液溶解的使用(在新加坡大/吉隆坡)(表1mycobiome组成),所有功能的潜在影响,值得进一步研究。虽然我们的研究结果可能是特殊的邓迪,新加坡和马来西亚,generalisability支持数据显示,苏格兰邓迪病人是相似的和生成的数据一直generalisable 10多个欧洲军团最近分析(37,38]。
我们组和其他以前调查的作用曲霉属真菌相关疾病CF-related支气管扩张,尽管缺乏集中在non-CF支气管扩张(7,35,39- - - - - -41]。重要的是,然而,Everaertset al。(22评估的发生答:来自烟敏化作用在慢性阻塞性肺病,当检测到,它与支气管扩张的风险很高。这些数据支持的作用曲霉属真菌作为一个支气管扩张病原体作为原因或结果。我们的数据与高可观察到的特定的IgE水平进一步证实这种联系答:来自烟和答:terreus。使用修改后的免疫分类,改编自CF,我们描述的高发病率和CAMEB sABPA疾病群,概述其临床意义甚至在患者出现临床稳定(14]。TARC提议CF-ABPA的标志,发现可怜的敏感性和特异性,当应用于CAMEB群,说明困难翻译结果CF non-CF支气管扩张(24]。每个分类的临床状态伴随着不同的机械mycobiome模式暗示链接需要未来的研究。
一个潜在的作用答:terreus支气管扩张是一个小说发现这项工作。相比,答:来自烟,答:terreus研究更少。然而,以殖民CF肺,能引起ABPA和同事与机会性感染42- - - - - -44]。赋予其抗多烯抗真菌治疗宿主而生存优势答:来自烟(45,46]。虽然答:terreus分生孢子通过识别迅速吞噬dectin-1和甘露糖受体,他们表现出增加巨噬细胞而生存答:来自烟(46]。快速发芽答:来自烟在巨噬细胞内的代价的脆弱性增加宿主免疫力。相比之下,答:terreus柱头在低利率有利于其持久性。我们的工作亮点支气管扩张患者的比例都高答:来自烟和答:terreus。此外,这类患者表现出更强的加重,暗示在组合这些真菌不同主机上有重要的临床影响加剧疾病的途径。因此,评估气道真菌分生孢子的支气管扩张的负担是很重要的。
而我们的工作是小说,它确实有局限性包括其横断面设计。这是我们努力的结果强劲与亚洲和欧洲军团在研究解决疾病异质性,支气管扩张研究的关键问题。此外,我们必须考虑我们的三个参与国的“generalisability”相比,更广泛的亚洲和欧洲次大陆,包括发作的潜在病因学的变化,他们的管理包括支气管扩张治疗,气候和地理差异、温度和空气质量。流行病学真菌研究事实上说明物种不同国家甚至在同一个次大陆(32]。此外,我们只包括一小群nondiseased(健康)个人(所有从新加坡),妨碍我们定义一个“健康”mycobiome很明显,这不是这个工作的主要目的。然而,未来的研究应该集中在评估nondiseased肺mycobiome从超过一个单一的地区,包括个人评估潜在的地理变异。此外,有针对性的扩增子测序,甚至通过平行猎枪ITS1和ITS2序列,分析低分辨率而付出更大的代价,挑战全基因组鸟枪宏基因组的方法,提供了优越的物种形成和功能注释。我们专注于曲霉属真菌主要bronchiectasis-associated真菌病原体;然而,我们mycobiome分析表明,其他真菌属也可能角色。最后,构思CAMEB队列时,决定比赛在新加坡/吉隆坡和邓迪基于年龄、性别和疾病严重程度。这匹配总BSI而不是特定的组件,包括急性加重、放射学或微生物学,限制我们的能力来执行更具体的分析。我们组登记主要是严重的支气管扩张患者数量相对较低的轻微疾病患者(BSI 0 - 4)。
总之,我们已经完成了第一个真菌分析研究支气管扩张到目前为止使用两个“匹配”军团在三个国家。我们说明了高水平的呼吸道真菌和关键群体之间的差异。这些数据表明,真菌的作用,特别是曲霉属真菌,在支气管扩张和常规筛查具有重要意义曲霉属真菌,相关疾病应被视为包含在未来的支气管扩张的指导方针。筛选可能包括皮肤测试,曲霉属真菌相关的特定的IgE和曲霉属真菌特定的免疫球蛋白与潜在的后续免疫监测的临床影响。我们发现mycobiome概要文件相关的临床疾病也应该阐明未来工作。
补充材料
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补充方法和表erj - 00766 - 2018 - _supplement
补充图E1。测量水平的)总IgE (IgE) b)曲霉属真菌特殊免疫球蛋白g和c)患者的痰半乳甘露聚糖免疫分类十几(ND);曲霉属真菌殖民(AC);曲霉属真菌敏感();血清学过敏性支气管肺的曲霉病(sABPA)和慢性肺曲霉病疑似(sCPA)(补充表E1)。虚线显示各自的否决表明积极的测试每一个标记(总IgE: 100 IU⋅毫升1;曲霉属真菌特殊免疫球蛋白:5盟⋅毫升1;半乳甘露聚糖:OD450年0.5)。erj - 00766 - 2018 - _figure_e1
补充图E2。Genus-level稀疏曲线测序的地区。每个样本的稀疏曲线代表,(n = 248;即。238支气管扩张+ 10十几),属的数量确定的分数测序数据分析(平均3.29±018.4万测序深度阅读/样本)。测序数据的分数之间的关系(低采样率的使用x设在)来识别属在样本的数量(y设在)。分数越增加,属identfied越多。曲线高原说明足够的数据已经生成,这样足够mycobiome可以假定的重演。erj - 00766 - 2018 - _figure_e2
补充图E3。主坐标分析(PCoA)情节Bray-Curtis距离产生genus-level mycobiome丰度观测到。Beta-diversity,由Bray-Curtis距离,说明了相似mycobiome概要文件在支气管扩张患者(n = 238),大致分类患者分为三组。虽然绝大多数mycobiome档案落在组1(绿色,假丝酵母主导,n = 202)另外两组也发现:组2(红、曲霉属真菌主导,n = 23)和组3(蓝色,酿酒主导,n = 13)。b)的相对丰度(%)每个确定的主要判别分类群mycobiome集团是表示对所有三组。erj - 00766 - 2018 - _figure_e3
脚注
可以从本文的补充材料www.qdcxjkg.com
利益冲突:F.T.咀嚼报告个人费用从森达美技术中心,奥兰国际有限公司和第一资源,在提交工作。J.D. Chalmers报告从阿斯利康赠款,资助从葛兰素史克公司和个人费用,勃林格殷格翰的发言,辉瑞、拜耳医疗和Grifols外从Napp和个人费用,提交工作。
支持声明:本研究支持新加坡卫生部国家医学研究理事会在其过渡奖(NMRC / TA / 0048/2016)(同时追捕Chotirmall)和樟宜综合医院科研补助金(CHF2016.03-P)低(结核)。执行的工作在新加坡国立大学是新加坡教育部学术研究基金的支持下,新加坡免疫学网络和国家医学研究理事会:n - 154 - 000 - 038 - 001, r - 154 - 000 - 404 - 112, r - 154 - 000 - 553 - 112, r - 154 - 000 - 565 - 112, r - 154 - 000 - 630 - 112, r - 154 - 000 - a08 - 592, a27 r - 154 - 000 - 597 - 06 - 006标志,标志- 08 - 020和NMRC / 1150/2008 (F.T.咀嚼)。支持J.D. Chalmers葛兰素史克/呼吸研究的英国肺脏基金会主席。资金信息,本文已沉积的Crossref资助者注册表。
- 收到了2018年1月16日。
- 接受2018年5月26日。
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