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抗生素治疗间接恢复足够的功能F508delCFTR CF lymphomonocytes水平http://ow.ly/Ncydg
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囊性纤维化(CF)是最常见的白人人口和缩短的遗传性疾病是由于突变CF跨膜电导调节器(雌性生殖道)基因导致蛋白质的功能障碍,通常作为氯通道。这个基本的缺陷与进步和致命的肺病1]。投机取巧的呼吸道感染是常见的CF患者的肺,使抗生素的常规护理的一个重要组成部分。
在目前的研究中,我们调查是否过程中静脉抗生素治疗(10天)肺纤维化患者恶化导致肺功能改善与蛋白质的表达变化形成正确的雌性生殖道功能所需的大分子复合物lymphomonocytes (LMNs)。
而多形核中性粒细胞(中性粒细胞)优先积累CF表面上皮细胞,单核细胞软骨破坏的地区主要的细胞群。单核细胞的作用在CF肺部疾病目前知之甚少,虽然最近,淋巴细胞已被证明的优势渗透到牙龈支气管组织的儿童CF (2]。淋巴细胞在支气管黏膜下层的CF科目产生高水平的interleukin-17,促炎细胞因子,调节粒细胞生成和中性粒细胞招募3]。
17个不吸烟的主题与CF为F508del突变纯合子(平均年龄27.3岁,范围11-43年),所有的人胰腺癌不足,当时注册入学的临床诊断肺恶化CF区域中心(意大利巴里)。研究伦理委员会批准的Azienda Ospedaliera大学联盟“亲自”(巴里)(n.1373 / CE / 2012)和执行按照1964年的赫尔辛基宣言,书面知情同意后从成人研究对象,获得或近亲,看护人或监护人代表了孩子。
最初的抗生素选择每个病人抗生素(一,二,三)包括阿奇霉素(n = 8)、环丙沙星(n = 6),妥布霉素(n = 5),头孢他啶(n = 4),二甲胺四环素(n = 2), meropenem (n = 1),左氧氟沙星(n = 1),磺胺甲恶唑/甲氧苄氨嘧啶(n = 1),阿米卡星(n = 1), imipenem (n = 1), teicoplanin (n = 1)和linezolid (n = 1)。所有治疗急性恶化导致显著降低循环中性粒细胞(占全国总人口62.6%,白细胞(WBC)计数与总额的57.5%的白细胞计数抗生素,p = 0.01),平行的血清c反应蛋白的变化(19.5 mg·dL−1pre -与11.3 mg·dL−1抗生素,p = 0.02)。抗生素治疗也导致了重大改进的用力呼气量1 s(47.2%预测预处理与预测抗生素52.4%,p = 0.04)和用力肺活量(59.8%预测前置与预测抗生素65.1%,p = 0.04)。
此外,急性发作期间,CF患者LMNs严重受损的表达式的成熟雌性生殖道乐队对LMNs从健康受试者4]。在这里,在确认的研究中,图1一个显示了一个典型的免疫印迹我们加载LMN溶解产物来源于健康的捐赠者和从一个代表性的CF患者预处理和抗生素治疗。在健康LMNs,野生雌性生殖道被表示为完全糖化蛋白的成熟形式,乐队C (180 kDa)和糖基化的形式,核心乐队B (160 kDa)。正如所料,在CF LMNs抗生素治疗,F508delCFTR几乎完全表示为不成熟的乐队B,虽然少量成熟带C蛋白也观察到三个。抗生素治疗导致的外观乐队C,相应功能的蛋白质,经spectrofluorimetric分析使用chloride-sensitive染料,MQAE (N——(ethoxycarbonylmethyl) 6-methoxyquinolinium溴化)。氯化CFTR-dependent射流中没有检测到LMNs CF患者急性恶化而抗生素疗法显著增加射流中发现类似的水平non-CF LMNs (图1b)。观察雌性生殖道功能的恢复不是与雌性生殖道mRNA水平显著增加抗生素治疗(数据未显示),因此这可能表明抗生素治疗间接调节细胞膜的贩卖F508delCFTR通过调制的陪伴和cochaperones (90 - kda热休克蛋白(一半)/ 70 kda热休克蛋白(Hsp70))已知CFTR绑定检测(5]。
F508delCFTR救援活动相反的表达变化相关组件multiprotein复杂CFTR-sodium /氢交换器调节因子(NHERF) 1-ERM (ezrin-radixin-moesin)肌动蛋白是参与调节雌性生殖道本地化和活动(6]。的确,抗生素治疗显著增加NHERF1 moesin蛋白质表达水平(分别为64%和45%)相比,水平在急性恶化,都明显低于健康LMNs (图1 c和1 d),按照我们以前的观测在人类细支气管上皮细胞(7,8]。
ERM蛋白质一直也涉及淋巴细胞激活的其他方面,比如迁移(9moesin],我们调查是否观察到的差异蛋白表达可能与移民CF LMNs而改变。transwell迁移研究的结果表明,循环LMNs获得CF患者急性恶化增加了迁移率而迁移回到non-CF值后抗生素治疗(图1 e)。值得注意的是,我们的实验没有使用趋化因子,从而表明CF LMNs本质上显示这个迁移性质,即。他们是预先激活末梢循环。这种“影射”状态可能导致脱落的促炎细胞因子的肺,他们在哪里产生高水平的CF加重(10]。
众所周知,ERM函数部分控制通过守恒的苏氨酸磷酸化在actin-binding域(11]。此外,据报道,与上皮细胞,ERM主要发生在其积极的磷酸化蛋白质构象在淋巴细胞(12]。符合这些发现,我们观察了ERM蛋白质磷酸化在健康LMNs与CF LMNs相比,以及磷酸化水平CF LMNs抗生素治疗,几乎比得上健康LMNs (图1 f)。这些结果表明,一个关键的生理作用ERM蛋白质激活淋巴细胞。ERM蛋白去磷酸化是影响趋化因子信号并导致microvillar LMNs崩溃,从而促进从拘束和滚动integrin-dependent信息粘附[13,14]。因此,它很容易推测,细胞骨架更放松,为了减少水平的激活moesin,可能促进增加LMN迁移中观察到急性恶化的情况。
在CF患者中使用的不同的抗生素阿奇霉素显著激活氯射流在CF人类支气管上皮细胞(15,16]。因为这大环内酯物被用于许多的CF患者在这项研究中,它可能是,至少部分负责拯救影响雌性生殖道和大分子复杂,使正确的定位和功能上的雌性生殖道等离子体膜。
总之,我们证明,第一次,抗生素治疗恢复足够的LMNs的CFTR功能检测水平,因此有助于提高CF患者的临床状态。我们的假设是antibiotic-mediated监护人的监管可能会允许增加CFTR突变检测蛋白质的折叠和交易,从而诱导部分雌性生殖道功能恢复。尽管缺乏的病人考虑和抗生素治疗的异质性,我们发现他们的临床状态改善不断增加功能的CFTR缺陷检测氯通道的表达,表达的增加NHERF1 moesin,和随后的减少LMN迁移,可能表明单核细胞也参与CF气道的炎症性损害。
脚注
支持声明:这项工作得到了意大利法律548/93 1999年- 2003年,项目“囊性纤维化的影响预后因素的研究”。
利益冲突:没有宣布。
- 收到了2014年10月13日。
- 接受2015年4月17日。
- 版权©2015人队