文摘gydF4y2Ba
慢性阻塞性肺疾病(COPD)与组织损伤被认为由于丝氨酸蛋白酶及其抑制剂之间的不平衡。尽管中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)的作用研究,很可能其他蛋白酶发挥作用。蛋白酶3 (PR3)的重要性还没有被建立,作为特定的底物只有最近可用。gydF4y2Ba
我们研究临床稳定的主题与alpha-1-antitrypsin (A1AT)不足或通常与慢性支气管炎慢性阻塞性肺病。溶胶阶段分析了痰PR3活动和浓度,不活动和浓度,浓度的气道抑制剂(A1AT,分泌leukoproteinase抑制剂和抑弹性酶蛋白)和中性粒细胞炎症标记物。12名患者发作期间也学习。gydF4y2Ba
PR3活动存在于大多数痰样本和大于不活动(主要是发现不了的)在这两个学科组(A1AT缺乏中间PR3 128海里,四分位范围(差)33 - 558海里;0纳米,差0 - 0纳米;p = 0.0043;慢性阻塞性肺病PR3 22纳米,差0 - 103海里;0纳米,差0 - 0纳米;p = 0.015)。PR3活动期间大发作比稳定状态(p = 0.037)和中性粒细胞炎症与标记。gydF4y2Ba
PR3活动的定期识别与A1AT不足或痰从稳定对象通常慢性阻塞性肺病表明它可能比此前认为的病理生理学中发挥更大的作用。gydF4y2Ba
慢性阻塞性肺疾病(COPD)是全球发病率和死亡率的主要原因gydF4y2Ba1gydF4y2Ba]。除了戒烟和缺氧患者长期使用氧气治疗,目前治疗方法只提供好处,症状,几乎没有证据表明他们改变疾病进展或死亡。新的治疗方法,因此迫切需要提高生活质量和预后。gydF4y2Ba
疾病的病理生理学尚不清楚虽然炎症和组织损伤被认为是慢性阻塞性肺病的发展中心。特别是,中性粒细胞丝氨酸蛋白酶之间的不平衡(NSPs)及其抑制剂被认为起着关键的作用[gydF4y2Ba2gydF4y2Ba]。这种信念是基于alpha-1-antitrypsin协会(A1AT)缺乏症(这些蛋白酶的主要抑制剂)和早发性慢性阻塞性肺病(gydF4y2Ba3gydF4y2Ba),以及中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)和蛋白酶3 (PR3)能够降解细胞外基质的许多关键部件,包括弹性蛋白、IV型胶原、纤连蛋白、层粘连蛋白(gydF4y2Ba4gydF4y2Ba,gydF4y2Ba5gydF4y2Ba]。此外,这些蛋白酶也产生气肿病变时由气管内的滴剂在动物模型(gydF4y2Ba6gydF4y2Ba,gydF4y2Ba7gydF4y2Ba),可以产生慢性阻塞性肺病的其他特性包括粘液分泌过多(gydF4y2Ba8gydF4y2Ba]。NSPs在肺部的活动通常是由内源性抑制剂,如A1AT,主要来源于血清抑制NE和PR3,分泌leukoproteinase抑制剂(SLPI),主要是当地生产和抑制但不是PR3,弹力素及其前体trappin-2(也当地生产),抑制NE和PR3 [gydF4y2Ba9gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba
NE在COPD的发病机制中所扮演的角色,特别是肺气肿也已经有了很广泛的研究(gydF4y2Ba10gydF4y2Ba]。然而,东北的选择性抑制剂没有完全有效地控制neutrophil-mediated损伤航空公司(gydF4y2Ba11gydF4y2Ba),支持其他蛋白酶发挥作用的可能性。此外,KgydF4y2BaorkmazgydF4y2Baet al。gydF4y2Ba(gydF4y2Ba12gydF4y2Ba)表明,A1AT优先抑制NE, PR3只有抑制不完全中和后,表明PR3时可能会发挥更重要的作用都是释放。到目前为止几乎没有直接的证据PR3的角色,和研究受到缺乏特定的底物和抑制剂。gydF4y2Ba
PR3是一个多功能的丝氨酸蛋白酶主要位于azurophilic颗粒和细胞表面的中性粒细胞(gydF4y2Ba13gydF4y2Ba]。这是29 kDa糖蛋白或者叫myeloblastin AGP7和p29bgydF4y2Ba14gydF4y2Ba,gydF4y2Ba15gydF4y2Ba]。PR3和东北都是同时发布在中性粒细胞激活和脱粒。PR3,然而,最丰富的丝氨酸蛋白酶嗜中性粒细胞的每个单元格被估计存储大约三倍PR3 NE (gydF4y2Ba16gydF4y2Ba]。PR3的促炎作用已被激活的能力提出肿瘤坏死factor-α和白介素(IL) 1β(gydF4y2Ba17gydF4y2Ba和引起细胞凋亡gydF4y2Ba18gydF4y2Ba]。PR3的氨基酸序列和晶体结构是类似于NE (gydF4y2Ba19gydF4y2Ba],直到最近没有可用的基质可以区分这两种蛋白酶(gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba]。然而,高度敏感Abz-peptidyl-EDDnp荧光共振能量转移(FRET)基板现在可以区分这些人类NSPs和能够测量subnanomolar浓度在生物体液(gydF4y2Ba21gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba
目前的研究旨在调查PR3的存在和活动相比,NE在溶胶阶段痰从主题A1AT不足和non-deficient慢性阻塞性肺病,连同他们的同族抑制剂的浓度。结果提供了洞察PR3的贡献在肺部蛋白水解活性,因此其潜在作用与意义治疗的目标。gydF4y2Ba
方法gydF4y2Ba
主题的选择gydF4y2Ba
28临床稳定的科目(至少8周后任何急性感染)与A1AT不足(拨弦证实了基因分型)有慢性支气管炎病史的发现来自英国国家缺A1AT注册表和自发产生痰收集如前所述[gydF4y2Ba22gydF4y2Ba]。没有A1AT受试者接受增加治疗不足。慢性支气管炎是35%的受试者在英国国家注册表。gydF4y2Ba
22通常慢性阻塞性肺病患者(正常皮姆A1AT表型)是从初级护理在急性恶化的开始。这些受试者的临床诊断慢性阻塞性肺病基于历史的慢性支气管炎和劳力性呼吸困难,有或没有在表示支持肺量测定法(但后来证实符合诊断标准(gydF4y2Ba23gydF4y2Ba])。痰液收集在急性恶化的开始(第一天),然后期间解决这一事件后恢复期(56)。总共12 1样品和22天56样本足够的体积为这项研究提供了可能。gydF4y2Ba
所有受试者充分收集人口数据包括吸烟史、全肺功能测试和高分辨率ct扫描表现稳定的临床状态。A1AT不足的受试者评估他们的健康状况使用圣乔治呼吸问卷(SGRQ)。gydF4y2Ba
这项研究是由当地研究伦理委员会批准,所有受试者知情同意。gydF4y2Ba
痰标本的制备gydF4y2Ba
自发的痰样本收集(尽可能不受唾液漱口水)后,分为两个整除;一个整除被用来获得定量微生物文化如前所述[gydF4y2Ba24gydF4y2Ba),第二个是超离心机(000×50gydF4y2BaggydF4y2Ba在4°C)获得90分钟的溶胶阶段储存在-70°C到分析。gydF4y2Ba
测量PR3痰和NE活动溶胶阶段gydF4y2Ba
PR3的酶的活动和NE样本评估通过测量特定底物的水解使用纯蛋白酶作为标准。纯PR3(默克,Feltham,英国)和纯NE(美国佐治亚州雅典研究和技术,雅典)是活性部位对纯A1AT滴定(雅典研究和技术),而先前滴定对猪胰弹性蛋白酶(PPE;Sigma-Aldrich,吉林厄姆,英国)已知的活动。PPE的活动确定了使用Lineweaver-Burk双重相反策划分析gydF4y2BaNgydF4y2Ba-succinyl-Ala-Ala-Ala-p-nitroanilide (SlaaapN;Sigma-Aldrich)作为底物和出版动力学常数(gydF4y2Ba25gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba
PR3活动进行了化验使用烦恼衬底Abz-VAD-norV-ADRQ-EDDnp (Alta生物科学、伯明翰。英国),准备如前所述[gydF4y2Ba21gydF4y2Ba]。这个底物催化常数KgydF4y2Ba猫gydF4y2Ba/ KgydF4y2Ba米gydF4y2Ba3400毫米的gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba·年代gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba和显示了NE(没有明显的水解gydF4y2Ba26gydF4y2Ba]。纯PR3稀释在缓冲区(50毫米玫瑰,pH值7.4,150毫米氯化钠,0.05% Igepal ca - 630),一个活跃的10 nM和连续稀释的浓度在同一缓冲区0.625海里。缓冲区仅被用作测定空白。溶胶阶段痰样本稀释1 60和标准样品(150μL)被添加到一个黑色不透明聚丙烯低绑定板(Sigma-Aldrich)一式两份。1在60稀释最初被选为最值下降范围内的标准曲线。随后,3μL 1毫米为底物被添加到每个好,荧光测量(励磁320海里,发射420海里)定期只要曲线线性使用Biotek协同2多模标仪(美国Biotek Winooski, VT) 37°C。PR3的活动在样本插值得到的标准曲线。任何样品的价值高于或低于标准曲线重复在一个合适的稀释。使用这种烦恼衬底,PR3均获得可靠的测量范围在0.1 -10海里(gydF4y2Ba21gydF4y2Ba]。intra-assay变异系数(CV)和3.98% inter-assay简历是13.35%。所有结果修正初始样本稀释。gydF4y2Ba
不活动进行了化验使用SlaaapN作为基质,具有催化常数KgydF4y2Ba猫gydF4y2Ba/ KgydF4y2Ba米gydF4y2Ba465米的gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba·年代gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba显示没有明显的水解和PR3 [gydF4y2Ba27gydF4y2Ba]。纯不被稀释在缓冲区1μM然后连续稀释到15.6纳米。缓冲区仅被用作测定空白。溶胶阶段研究了稀释痰液样本以适当的控制。标准、样本和控制样品(30μL)被添加到96孔板在复制和衬底SlaaapN(150μL 1 mg·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba)补充说,除了控制井缓冲区添加代替基质。光密度(OD)在410 nm定期阅读60分钟使用Biotek协同HT板读者(Biotek) 37°C。东北的活动获得的样本插值从减法后的标准曲线控制的价值观。底物的检测下限15 nM和内部inter-assay CVs分别为3.48%和4.76%。任何样本值低于这一水平是re-assayed使用特定担心衬底Abz-APEEIMRRQ-EDDnp,提供可靠的测量范围的NE -10海里(0.1gydF4y2Ba21gydF4y2Ba]。intra-assay CV 3.42%和inter-assay简历是4.76%。gydF4y2Ba
的酶的活动gydF4y2Ba铜绿假单胞菌gydF4y2Ba文化上层清液和纯gydF4y2Ba假单胞菌gydF4y2Ba弹性蛋白酶(默克公司)评估使用上述基板来确认没有大的化验人体蛋白酶。gydF4y2Ba
测量PR3和NE浓度在溶胶阶段痰gydF4y2Ba
PR3的浓度和NE样本以ELISA使用商用设备。PR3 ELISA (Biorbyt,剑桥,英国)只检测到游离PR3,而东北ELISA(剑桥大学生物科学,剑桥,英国)检测自由NE和NE抑制剂。的下限PR3 ELISA检测是下午5点,14点NE ELISA。这些ELISA的内部和inter-assay CVs分别为3.59%和9.19%,分别为PR3 ELISA和5.07%和13.76%,分别为东北ELISA。gydF4y2Ba
测量抑制剂在痰液溶胶阶段gydF4y2Ba
的浓度A1AT使用国产ELISA测定。总之,96孔板(Nunc Maxisorp;Sigma-Aldrich)涂在一夜之间2 200μLμL·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba山羊反A1AT抗体结合位点,伯明翰,英国在碳酸盐缓冲,pH值9.6。与1%牛血清白蛋白阻塞后,索尔阶段痰样本(1:10,000稀释1:10 0)被添加和人类血清蛋白校准器(Dako、伊利、英国)包含1.24克·LgydF4y2Ba−1gydF4y2BaA1AT被用来制定一系列标准(1.9 ng·-62毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba)和盘子被孵化在室温下2 h。这之后,下一个抗体(200μLμL·2.6毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba山羊反A1AT过氧化物酶共轭在PBS(结合位点),0.1% (w / v)白蛋白,0.05% (v / v) Tween20)添加和板在室温下孵化2 h。衬底,tetramethylbenzidine解决方案(Sigma-Aldrich),然后添加和反应是停止了0.1 HgydF4y2Ba2gydF4y2Ba所以gydF4y2Ba4gydF4y2Ba当一个合适的颜色改变了。OD然后读取在450 nm和570 nm波长校正样本浓度被插值确定的标准。内部-和国米化验CVs分别为4.66%和4.35%,分别。gydF4y2Ba
SLPI和弹力素的浓度测量使用商用ELISA试剂盒(研发系统,阿宾顿,英国)根据制造商的指示。内部和inter-assay CVs分别为6.37%和10.76%,分别为SLPI ELISA和7.67%和4.46%,分别为抑弹性酶蛋白ELISA。gydF4y2Ba
其他测量溶胶阶段痰gydF4y2Ba
中性粒细胞炎症标志物测定时足够的样本,包括引发,白三烯b4 (LT)和髓过氧化物酶(MPO)。引发和LTB4测量使用商用ELISA试剂盒(研发系统)。内部和inter-assay CVs分别为5.97%和7.22%,分别引发ELISA和6.34%和11.9%,分别为LTB4 ELISA。MPO活性测定如前所述[gydF4y2Ba28gydF4y2Ba]。内部-和国米化验CVs MPO活性测定分别为3.85%和10.07%,分别。gydF4y2Ba
统计分析gydF4y2Ba
统计分析使用PASW统计18为Windows。正常使用Kolmogorov-Smirnov测试测试。PR3活动,PR3浓度,不活动,NE浓度、引发、LTB4、MPO、A1AT, SLPI,用力呼气量在1 s (FEVgydF4y2Ba1gydF4y2Ba)和SGRQ总分并不是正态分布,因此提出了非参数测试和数据使用中位数和四分位范围(差)。Mann-Whitney U-tests或魏克森讯号等级测试被用于独立或相关数据的比较,分别。使用斯皮尔曼等级相关系数的相关性进行评估。正态分布数据均值±gydF4y2Ba扫描电镜gydF4y2Ba和独立或配对t用于比较的数据独立或相关措施,分别。比较变量之间A1AT不足和COPD受试者基线差异调整后,对数据进行对数转换和使用线性回归集团作为一个独立因素。正常的unstandardised残差进行了测试。用于统计目的,酶活性低于检测下限为0.1 nM。如果p≤0.05结果被认为具有统计学意义。gydF4y2Ba
结果gydF4y2Ba
基线特征gydF4y2Ba
两个学科组的基线特征所示gydF4y2Ba表1gydF4y2Ba。A1AT缺乏年轻受试者,较低的吸烟史(久),FEVgydF4y2Ba1gydF4y2Ba预测(%),FEVgydF4y2Ba1gydF4y2Ba/用力肺活量(FVC)比率和一氧化碳传递系数(gydF4y2BaKgydF4y2Ba有限公司gydF4y2Ba预测(%)与慢性阻塞性肺病。28 A1AT不足的科目,七从未吸烟者,19曾经抽过烟,两人目前的吸烟者。慢性阻塞性肺病的22个主题,15曾经抽过烟,七是吸烟者。没有明显差异在性别分布或肺气肿的放射学证据之间的两组。gydF4y2Ba
PR3痰从临床稳定和不活动主题gydF4y2Ba
可检测PR3活动被发现在所有的痰样本A1AT缺乏主题(中位数128海里,IQR 33 - 558 nM)和64%的样本COPD受试者(平均22纳米,差0 - 103 nM)。PR3活动大A1AT缺乏学科相比,那些通常的慢性阻塞性肺病(p = 0.004)调整后的基线年龄的差异,吸烟史(久),FEVgydF4y2Ba1gydF4y2Ba(% pred)gydF4y2BaKgydF4y2Ba有限公司gydF4y2Ba(% pred)。游离PR3浓度以ELISA确认这些差异和价值观紧密相关PR3活动(斯皮尔曼的ρ0.879,p < 0.001),表明大部分游离PR3保持酶的活性。gydF4y2Ba
检测不活动被发现在21%的A1AT痰样本不足(中位数0纳米,差0 - 0 nM)和5%的常见慢性阻塞性肺病样本(中位数0纳米,差0 - 0海里)。NE的浓度来衡量ELISA(自由和必然抑制剂)没有明显不同(p = 0.296)对象之间A1AT不足(平均330海里,差140 - 813 nM)和通常的慢性阻塞性肺病(平均214海里,差84 - 564 nM)。A1AT缺乏组,三个受试者不活动高于PR3活动。这三个受试者被殖民gydF4y2Ba铜绿假单胞菌gydF4y2Ba虽然没有一个主题通常与慢性阻塞性肺病。既不gydF4y2Ba铜绿假单胞菌gydF4y2Ba文化上层清液和纯化gydF4y2Ba假单胞菌gydF4y2Ba弹性蛋白酶能够水解底物用于分析(数据未显示),这表明不活动是具体的。值得注意的是,gydF4y2Ba假单胞菌gydF4y2Ba不抑制弹性蛋白酶活性A1AT或者其它气道丝氨酸蛋白酶抑制剂gydF4y2Ba29日gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba
活动结果总结gydF4y2Ba图1gydF4y2Ba。PR3活动大于不活动主题A1AT不足(p = 0.004)和慢性阻塞性肺病(p = 0.015)。gydF4y2Ba
新型干法抑制蛋白质痰gydF4y2Ba
正如所料,A1AT较高的浓度痰从学科与慢性阻塞性肺病non-deficient相比A1AT不足(慢性阻塞性肺病中位数405海里,差234 - 744海里;缺A1AT平均51 nM,差19 - 83海里;p < 0.001)。此外,平时COPD受试者也更高浓度的SLPI(慢性阻塞性肺病中位数2.8μM,差1.7 - -4.4μM;A1ATμM不足值1.3,差0.8 - -2.7μM;弹力素(p = 0.002),意味着±gydF4y2Ba扫描电镜gydF4y2Ba316±37点gydF4y2Ba与gydF4y2Ba200±39点;p = 0.039)。SLPI在痰液定量,NSP抑制剂主要来自两个学科组。贡献总气道抑弹性酶蛋白的抑制能力是微不足道的,被发现在subnanomolar浓度在所有样本。所示gydF4y2Ba图2gydF4y2Ba,气道抑制剂PR3的定量少比不。gydF4y2Ba
NE的平均浓度以ELISA(免费和绑定)总浓度低于中位数的同源抑制剂与A1AT缺乏主题和慢性阻塞性肺病,如图所示gydF4y2Ba图3gydF4y2Ba,可以解释为什么大多数的痰样本两组显示没有检测到不活动主题。是不可能衡量总PR3浓度自ELISA可用只能检测游离PR3。然而,痰液样本PR3活动的存在表明PR3的数量超过了功能抑制剂的浓度。gydF4y2Ba
PR3活动和临床状态之间的关系gydF4y2Ba
12门学科与通常的慢性阻塞性肺病人痰样本可用恶化的开始和恶化后8周时临床稳定,10天1(恶化)样品和六日56(稳定)样品检测PR3活动和集团在恶化值明显大于稳定状态(p = 0.037)。这些数据所示gydF4y2Ba图4gydF4y2Ba。在这个示例的患者中,没有发现显著差异在东北活动之间的恶化和稳定的临床状态(数据未显示)。gydF4y2Ba
中性粒细胞炎症标志物以通常的慢性阻塞性肺病的多数(n = 21)样本和A1AT缺陷样品的一个子集(n = 11)来说,足够的样本。人口的COPD受试者的测量可以没有显著不同于那些认为他们不能。A1AT缺乏受试者没有可用的测量(59岁了gydF4y2Ba与gydF4y2Ba50年:p = 0.026)和较低gydF4y2BaKgydF4y2Ba有限公司gydF4y2Ba(59% predgydF4y2Ba与gydF4y2Bapred 82%;p = 0.031)比那些测量。没有明显差异在性别、吸烟史、吸烟状态,FEVgydF4y2Ba1gydF4y2Ba% pred, FEVgydF4y2Ba1gydF4y2Ba/ FVC比率,残余肺容积或SGRQ总分。gydF4y2Ba
引发的浓度(A1AT不足值6.86 nM,差2.02 - -12.39 nM,慢性阻塞性肺病中位数2.77 nM,差1.13 - -8.24 nM;p = 0.312), LTB4 (A1AT不足值6.52 nM,差4.15 - -20.02 nM,慢性阻塞性肺病中位数4.72 nM,差2.77 - -17.50 nM;p = 0.463)和MPO活动(缺A1AT平均0.40个单位·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba,差0.19 - -0.57单位·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba慢性阻塞性肺病,平均0.58个单位·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba,差0.28 - -1.65单位·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba;p = 0.293)患者组之间没有显著差异。gydF4y2Ba
PR3活动总结和其他参数之间的相关性gydF4y2Ba表2gydF4y2Ba。PR3活动将积极与NE A1AT缺乏主题活动(枪兵的ρ= 0.586,p = 0.001),即使不活动只有在检测到六个科目。PR3活动相关的积极引发数量在病人组(A1AT缺枪兵的ρ= 0.791,p = 0.004;慢性阻塞性肺病枪兵的ρ= 0.650,p = 0.001)和MPO活性(A1AT缺枪兵的ρ= 0.612,p < 0.001;慢性阻塞性肺病枪兵的ρ= 0.799,p < 0.001)。non-deficient COPD组PR3活动也将积极与LTB4(枪兵的ρ= 0.434,p = 0.049)。gydF4y2Ba
PR3活动被发现与总致病性细菌负荷A1AT缺乏组(枪兵的ρ= 0.578,p = 0.001)。主题与gydF4y2Ba铜绿假单胞菌gydF4y2Ba定量微生物文化有显著较高的不活动(p < 0.001)和PR3活动在痰(p = 0.025)相比,受试者没有。高PR3活动也发现样本中成长gydF4y2Ba流感嗜血杆菌gydF4y2Ba相比那些没有(p = 0.003),但不活动没有不同。总结了病原体隔离在痰液样本gydF4y2Ba表3gydF4y2Ba。一些科目增长超过一个病原体(三A1AT缺乏主题),而一些没有增长(10 A1AT缺乏主题和14 COPD受试者)。gydF4y2Ba
之间的显著相关性被发现PR3活动和SGRQ总分A1AT不足的科目(枪兵的ρ= 0.621,p = 0.001)。的SGRQ分数不能用于COPD受试者与往常一样。PR3活动和FEV之间没有相关性被发现gydF4y2Ba1gydF4y2Ba(% pred)或gydF4y2BaKgydF4y2Ba有限公司gydF4y2Ba对这两门课(% pred)组。gydF4y2Ba
讨论gydF4y2Ba
这项研究提供了直接证据,活跃PR3存在于溶胶阶段痰从临床稳定的学科与慢性支气管炎与A1AT不足以及non-deficient慢性阻塞性肺病。PR3活动大于不活动在这些科目,这可能反映了低气道抑制PR3的能力和更大的PR3 azurophilic中包含比不嗜中性粒细胞的颗粒。此外,协会速率常数A1AT和弹力素PR3数量级低于NE (gydF4y2Ba30.gydF4y2Ba),因此不可能是优先抑制相比PR3的炎性环境。SLPI PR3也不是抑制,存在于大量在呼吸道上皮衬里流体和主要的NE抑制剂上呼吸道。此外,PR3能够降解SLPI [gydF4y2Ba31日gydF4y2Ba),所以可能会提高其他的生物活性NSPs通常由SLPI抑制。gydF4y2Ba
PR3活动被发现在发作大于临床稳定的时期。发作通常增加中性粒细胞炎症(gydF4y2Ba32gydF4y2Ba),这将占PR3活动的相关性与其他中性标记。PR3活动显示正相关与健康状况恶化的SGRQ。PR3活动从而增加气道炎症和急性加重的一个标志,这都是受试者的不良健康状况与慢性呼吸道疾病(gydF4y2Ba33gydF4y2Ba,gydF4y2Ba34gydF4y2Ba)表明它是一个协会,而不是因果关系。gydF4y2Ba
然而,目前的研究没有证明任何PR3活动和肺功能参数之间的关系。在一项研究PR3浓度测定痰从49囊性纤维化患者,观察一个负相关PR3浓度和FEV之间gydF4y2Ba1gydF4y2Ba(% pred) [gydF4y2Ba8gydF4y2Ba]。这是有可能的,因此,目前的研究没有涉及到足够数量检测FEV之间的关系gydF4y2Ba1gydF4y2Ba和PR3活动,虽然其他特性,比如细菌殖民化(见下文)也会使这种潜在的关系。gydF4y2Ba
目前的研究在生物样品直接测量PR3和NE活动使用高度敏感和特定的底物。先前发表的研究规划的一些活动在气道分泌物用非特异性底物(如“弹性蛋白酶”gydF4y2BaNgydF4y2Ba-methoxysuccinyl-Ala-Ala-Pro-ValgydF4y2BapgydF4y2Ba-nitroanilide)和潜在的测量PR3的联合活动和不gydF4y2Ba35gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba37gydF4y2Ba]。其他研究间接测量PR3活动通过测量PR3的联合活动和NE和没有一个NE抑制剂(gydF4y2Ba8gydF4y2Ba]。尽管SlaaapN痰之前(用来测量不活动gydF4y2Ba38gydF4y2Ba),它是敏感比这里描述的不特定的烦恼衬底。个人规划活动的直接测量肺分泌物使用高度敏感和特定的底物(如这里所描述的那样)允许每个NSP总蛋白酶的贡献确定专门的负担。虽然NSPs同时释放中性粒细胞激活和脱粒后,他们的浓度可以由于地方不同等因素结合细胞膜(gydF4y2Ba16gydF4y2Ba),他们的亲和力内源性抑制剂炎症部位及其特异性肽或蛋白质基质(gydF4y2Ba30.gydF4y2Ba]。生物的后果只可能发生在活跃的存在(尤其是持续存在)酶。gydF4y2Ba
这里描述的结果来自受试者A1AT不足(拨弦表型)和non-deficient慢性阻塞性肺病慢性支气管炎表型。自发的痰生产与大中性气道炎症与受试者不吐唾液,这是与吸烟状态(gydF4y2Ba35gydF4y2Ba]。痰生产也可能与FEV加速下降gydF4y2Ba1gydF4y2Ba在慢性阻塞性肺病gydF4y2Ba39gydF4y2Ba]。因此,但重要的是要理解NSPs在这组患者的作用,这里给出的结果可能不太generalisable受试者不自发的痰生产商。自发的痰收集非侵入性和最小化dilutional错误发现与其他技术,如支气管肺泡灌洗(gydF4y2Ba40gydF4y2Ba)和诱导痰收集,可以提供关键数据在这个重要的表型。然而,使用单一的自发产生痰液样本也有局限性的日常变化与鼻咽分泌物样本收集和稀释。这种现象被描述在受试者A1AT不足和通常的慢性阻塞性肺病,在将来的研究中,可以最小化平均三个连续的样本(gydF4y2Ba41gydF4y2Ba]。然而,尽管这种潜在的缺点,本文描述的差异和相关性仍然强劲。gydF4y2Ba
在最近的研究中,三个科目A1AT缺乏殖民了gydF4y2Ba铜绿假单胞菌gydF4y2Ba和NE和PR3活动明显高于痰受试者相比。此外,大PR3活动样本中发现了gydF4y2Ba流感嗜血杆菌gydF4y2Ba而那些没有。我们组之前显示支气管扩张患者,gydF4y2Ba铜绿假单胞菌gydF4y2Ba引发更强烈的炎症反应(高架NE和MPO活动)相比gydF4y2Ba流感嗜血杆菌gydF4y2Ba,进而大于gydF4y2Ba莫拉克斯氏菌属复活gydF4y2Ba(gydF4y2Ba38gydF4y2Ba]。六个科目与A1AT缺陷检测不活动他们痰明显低浓度的SLPI和弹力素相比察觉不活动。以前的工作表明,SLPI和弹力素可以通过NE裂解,尤其是在的存在gydF4y2Ba铜绿假单胞菌gydF4y2Ba(gydF4y2Ba42gydF4y2Ba,gydF4y2Ba43gydF4y2Ba]可能因此代表产生影响,而不是原因。没有其他重要的差异观察受试者之间有或没有可检测活动。PR3活动的相关性与气道细菌负荷和气道炎症(NE和MPO活性)支持殖民的角色在气道中性粒细胞炎症(如前面表示的(gydF4y2Ba38gydF4y2Ba,gydF4y2Ba44gydF4y2Ba]),但强调了协会PR3活动,潜在影响慢性阻塞性肺病的病理生理过程及其进展。因此,这种酶可能在慢性阻塞性肺病比此前被认为更重要。gydF4y2Ba
我们已经表明,PR3活动时应确定评估蛋白酶/ antiproteinase失衡的航空公司。是否它是核心过程还有待确定,因为它仍然是可能的,一些蛋白酶可能在COPD的发病机制中发挥作用。除了NSPs,基质金属蛋白酶(gydF4y2Ba45gydF4y2Ba和半胱氨酸蛋白酶gydF4y2Ba46gydF4y2Ba,gydF4y2Ba47gydF4y2Ba)已经与组织在肺气肿直接或间接地破坏gydF4y2Ba通过gydF4y2Ba他们的交互与NSPs及其抑制剂。策略来减少蛋白酶的负担在肺部可能为COPD提供新的治疗方法。最近,我gydF4y2BaegotgydF4y2Baet al。gydF4y2Ba(gydF4y2Ba48gydF4y2Ba)已经开发出特定的PR3抑制剂。PR3的选择性抑制剂可能因此提供进一步的了解它的作用在疾病和(基于本文提供的研究)可能是炎症性肺部疾病的治疗价值。gydF4y2Ba
确认gydF4y2Ba
作者要感谢彼得·南丁格尔(英国伯明翰伊丽莎白女王医院)提供统计的建议。gydF4y2Ba
脚注gydF4y2Ba
支持声明gydF4y2Ba
这项工作从Grifols疗法使用的教育资助,葛兰素史克。然而,投资者没有参与这项研究的设计,解释结果或生产的手稿。gydF4y2Ba
感兴趣的语句gydF4y2Ba
利益冲突的信息可以发现与本文的在线版本gydF4y2Bawww.www.qdcxjkg.comgydF4y2Ba
- 收到了gydF4y2Ba2012年6月6日。gydF4y2Ba
- 接受gydF4y2Ba2012年8月11日。gydF4y2Ba
- ©2013人队gydF4y2Ba
引用gydF4y2Ba
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