摘要GydF4y2Ba
肺发育不全和高血压占先天性膈疝(CDH)的新生儿的显着发病率和死亡率。CDH是否与表面活性剂功能障碍仍然存在争议。因此,与没有肺病的婴儿相比,我们测量了次饱和磷脂酰胆碱(DSPC)和表面活性剂蛋白(SP)-B浓度及其在CDH的婴儿中的合成率。GydF4y2Ba
2GydF4y2BaHGydF4y2Ba2GydF4y2Bao作为DSPC的前兆和1-GydF4y2Ba13GydF4y2Ba将C-亮氨酸作为SP-B的前体施用至13名婴儿,CDH和8种对妊娠期匹配的控制。DSPC和SP-B与气管血管分离,它们的分数合成率来自于GydF4y2Ba2GydF4y2BaH和GydF4y2Ba13GydF4y2Ba质谱法测定C的富集曲线。同时测定气管吸出物中DSPC和SP-B的含量。GydF4y2Ba
在CDH的婴儿中,SP-B分数合成率和量分别比没有肺病的婴儿的价值分别为62±27%和57±22%(分别为P <0.01和P <0.05)。DSPC分数合成率和金额没有显着的组差异。GydF4y2Ba
CDH的婴儿具有较低的SP-B和较少的SP-B中的SP-B和较少的SP-B。在这些婴儿中,部分SP-B缺乏可能导致呼吸失败的严重程度,其矫正可能代表治疗目标。GydF4y2Ba
先天性膈疝(CDH)是一种发育异常,每2500 - 5000个活产婴儿中就有一个患有先天性膈疝,死亡率高达30-60% [GydF4y2Ba1GydF4y2Ba那GydF4y2Ba2GydF4y2Ba].低肺顺应性和全球肺部不成熟被认为是死亡率的重要原因[GydF4y2Ba3.GydF4y2Ba].表面活性剂缺乏也可能在这种疾病中发挥作用,但问题尚未确定。在CDH动物模型中发现缺乏表面活性剂磷脂和蛋白质[GydF4y2Ba4.GydF4y2Ba-GydF4y2Ba7.GydF4y2Ba].相反,在人类中,一项研究发现羊水或肺灌洗液磷脂没有变化[GydF4y2Ba8.GydF4y2Ba],而另一个发现表面活性剂蛋白(SP)的水平降低-A [GydF4y2Ba9.GydF4y2Ba]最近,一项尸检研究将患有CDH的人类胎儿与没有肺部疾病的年龄匹配的胎儿进行比较,发现肺不饱和磷脂酰胆碱(DSPC)含量和SP表达没有差异[GydF4y2Ba10GydF4y2Ba],表明CDH不损害表面活性剂储存,并且表面活性剂产率可能适合肺部大小。然而,DSPC含量从整个肺部测量,而没有研究气道的表面活性剂组分含量。此外,该研究给出了表面活性剂生命周期的静止图像,并且该研究中的少量胎儿并不允许与表面活性剂地位相关的肺发育不全程度。目前没有数据在SP-B的人类与CDH中没有数据。GydF4y2Ba
澄清这个问题可以帮助决定CDH是否有益于表面活性剂补充剂的婴儿,因为当慢性肺病增加和增加的死亡率增加,发现了对大量婴儿的表面活性剂,增加了体外膜氧合的增加。GydF4y2Ba11GydF4y2Ba,尽管大多数婴儿使用的是含有相对少量SP-B的表面活性剂制剂。尽管如此,在一些托儿所,外源性表面活性剂经常给CDH婴儿服用[GydF4y2Ba12GydF4y2Ba].GydF4y2Ba
本研究的目的是评估重度CDH新生儿从气管吸出物中回收的气道液体中表面活性剂DSPC和SP-B的浓度GydF4y2Ba相对GydF4y2Ba匹配控制,并使用双稳定同位素方法测量这些关键表面活性剂成分的合成速率。GydF4y2Ba
材料与方法GydF4y2Ba
患者人群GydF4y2Ba
2006年至2009年,在机构伦理委员会的批准下,研究了13名CDH新生儿和8名体重和胎龄匹配的对照。GydF4y2Ba
所有CDH婴儿的呼吸衰竭需要压膜插管:五个被班诺·戈斯医院新生儿重症监护单位(NICU)(罗马,意大利),五位,帕多瓦大学(帕多瓦,意大利)和三名到马尔迈博士大学Nicu(Ancona,意大利)。在帕多瓦大学的新生儿或儿科重症监护单位,九个新生儿被称为对照。GydF4y2Ba
对照是全术语的新生儿:1)肺病史无史;2)正常胸部X型射线照片;3)吸气氧气分数(GydF4y2BaFGydF4y2Ba阿,我GydF4y2Ba2GydF4y2Ba)在研究期间之前和任何时间之前和随时的30%。它们是腹部或气道畸形或神经损伤的机械通风。纳入标准两组是:1)动脉(CDH中径向径向径向)的存在和临床监测的静脉线;2)没有感染的证据;3)施用外源表面活性剂;4)书面知情的父母同意。排除标准是存在肝功能衰竭,定义为转氨酶(天冬氨酸氨基转移酶和丙氨酸氨基转移酶)的正常值以上,肾功能衰竭(肌酐超过正常值两倍)。GydF4y2Ba
协议GydF4y2Ba
所有CDH婴儿均按三个中心共享的指导方针进行处理。所有婴儿通过出生的高频振荡通风(HFOV)镇静,随后断奶,如果平均气道压力<10cmH,则随后断奶GydF4y2Ba2GydF4y2BaO和GydF4y2BaFGydF4y2Ba阿,我GydF4y2Ba2GydF4y2Ba< 40%。手术被推迟,直到血流动力学稳定。对照组为常规通风。每6 h记录呼吸机参数和换气情况,动脉血氧张力/GydF4y2BaFGydF4y2Ba阿,我GydF4y2Ba2GydF4y2Ba比例,氧合指数和肺泡 - 动脉oGydF4y2Ba2GydF4y2Ba交货量按标准公式计算。GydF4y2Ba
方法和研究设计GydF4y2Ba
所有患者均有静脉输注2毫克·kgGydF4y2Ba-1GydF4y2Ba·hGydF4y2Ba-1GydF4y2Ba1-GydF4y2Ba13GydF4y2BaC-亮氨酸(剑桥同位素实验室,Andover,Ma,USA)溶于盐水24小时。GydF4y2Ba2GydF4y2BaHGydF4y2Ba2GydF4y2BaO(剑桥同位素实验室)的剂量为1ml·kgGydF4y2Ba-1GydF4y2Ba在研究发病中的推注,然后每12小时持续48小时,作为间歇式推注对应于总流体摄入的0.0625%,以保持体水中氘富集的稳定状态[GydF4y2Ba13GydF4y2Ba].GydF4y2Ba
血液(0.6ml),尿液(1ml)和气管吸汗[GydF4y2Ba14GydF4y2Ba]在同位素输注开始前,每6小时至72小时收集一次,然后每12小时收集一次,直至拔管。气管吸出物和血样在400×100℃下离心GydF4y2BaGGydF4y2Ba和1,300×GydF4y2BaGGydF4y2Ba分别和上清液储存在-80℃。GydF4y2Ba
气管吸气分析GydF4y2Ba
在气管抽吸标本中测定48 h内的磷脂磷[GydF4y2Ba15GydF4y2Ba]从研究开始。如前所述,从气管插入物中提取并分离DSPC [GydF4y2Ba16GydF4y2Ba]并且DSPC脂肪酸衍生为甲酯,并通过气相色谱法测量[GydF4y2Ba14GydF4y2Ba].GydF4y2Ba
采用ELISA法测定研究开始时或24小时内获得的未分离气管抽吸物的SP-B [GydF4y2Ba17GydF4y2Ba]使用针对成熟SP-B的兔抗血清[GydF4y2Ba18GydF4y2Ba].GydF4y2Ba
DSPC和SP-B浓度表示为总磷脂的百分比和上皮衬里流体中的浓度[GydF4y2Ba19GydF4y2Ba].GydF4y2Ba
从气管吸出物中分离SP-BGydF4y2Ba
SP-B与气管吸气物中分离,并如前所述水解[GydF4y2Ba20.GydF4y2Ba].单个氨基酸被衍生成它们的GydF4y2BaNGydF4y2Ba- 乙酰-n-丙基衍生物[GydF4y2Ba21.GydF4y2Ba]和GydF4y2Ba13GydF4y2Ba通过质谱法(GC-MS;安捷伦,米兰,意大利)测量亮氨酸的富集。GydF4y2Ba
根据H衍生血浆氨基酸GydF4y2BausekGydF4y2Ba[GydF4y2Ba22.GydF4y2Ba]和亮氨酸富集的气相色谱质谱测定。结果用摩尔百分比过剩(MPE)表示。GydF4y2Ba
这GydF4y2Ba2GydF4y2Ba通过气相色谱-同位素比值质谱仪(IRMS)分析棕榈酸DSPC的H富集,并在校正衍生物基团的同位素贡献后以Δ‰表示[GydF4y2Ba20.GydF4y2Ba].用高温转换元素分析仪与IRMS (TC-EA-IRMS;德国不来梅Thermo Scientific) [GydF4y2Ba20.GydF4y2Ba].GydF4y2Ba
计算GydF4y2Ba
假设稳态执行分数合成速率测量。假设基于以下考虑因素:1)在所有患者中血浆GydF4y2Ba13GydF4y2BaC-亮氨酸和尿液GydF4y2Ba2GydF4y2BaHGydF4y2Ba2GydF4y2Bao富集在同位素输注开始的6小时内达到稳定状态;2)随着时间的推移,富集曲线的斜率不会显着偏离零时间6小时和时间24小时,血浆亮氨酸和时间6小时和时间48小时尿液GydF4y2Ba2GydF4y2BaHGydF4y2Ba2GydF4y2BaO;3) 在研究的前48小时内,气管吸出物中DSPC和SP-B的浓度没有显著变化。GydF4y2Ba
根据相对于各个前体的高原富集的富集曲线的线性部分计算分数合成速率。相对于各种前体的高原富集[GydF4y2Ba19GydF4y2Ba那GydF4y2Ba20.GydF4y2Ba].GydF4y2Ba
变量表示为平均值±GydF4y2BaSD.GydF4y2Ba或适当的中位数(四分位数范围)。通过非参数测试(MANN-WHITNEY测试)或未配对的T检验进行统计分析。动力学和定量数据与使用Pearson相关性的呼吸参数相关。显着性定义为P <0.05。使用统计包SPSS 15(SPSS Inc.,Chicago,IL,USA)进行分析数据。GydF4y2Ba
结果GydF4y2Ba
我们招募了22名机械通风的新生儿婴儿,13名,CDH和Ninn,没有肺病(对照)。随后被排除在研究后诊断的主要先天性心脏病,因此21例患者完成了这项研究。报告了两组的临床特征GydF4y2Ba表1GydF4y2Ba.除了出生后年龄外,两组之间的人口统计学特征相似,而呼吸机参数具有显著差异,这符合研究设计的预期(GydF4y2Ba表1GydF4y2Ba)。在12名婴儿中,CDH在26周之前诊断出孕龄;在一个婴儿中,诊断是在出生时进行的。13个CDH病例中的四个右侧,九个左侧。它们在出生时镇静和通风在HFOV上,但在研究开始时只有六个仍在HFOV上。一名CDH的婴儿死于医院排放前的肺发育不全,但在研究完成后。没有幸存者在放电时依赖于氧依赖性。GydF4y2Ba
所有八种控制所需的间歇性正压通风:两个用于呼吸衰竭(由于先天性膈肌瘫痪和囊性淋巴管瘤),三种用于尿液和腹部手术(两个膀胱畸形和一个肝血管瘤)和三种用于神经故障(两个脑畸形,一个脑积水)。所有控制婴儿幸存下来并从医院排出。CDH也不控制婴儿在研究期间显示出感染的证据。GydF4y2Ba
在所有的研究中,婴儿尿液的同位素富集GydF4y2Ba2GydF4y2BaHGydF4y2Ba2GydF4y2BaO和等离子体GydF4y2Ba13GydF4y2BaC-亮氨酸处于稳定状态(富集值的线性回归斜率)GydF4y2Ba相对GydF4y2Ba在同位素给药期间(数据未显示)期间,时间不会显着不同于零)。中位数(胎面范围)尿液氘富集为7,603(7,382-7,962)Δ‰GydF4y2Ba相对GydF4y2Ba7,712(7,620-7,970)Δ‰,和GydF4y2Ba13GydF4y2BaC-亮氨酸富集为9.5(7.6-10.1)MPEGydF4y2Ba相对GydF4y2Ba8.1(5.9-9.3)CDH和控制中的MPE(不显着)。GydF4y2Ba
在研究期间,气管吸出物中的DSPC量也稳定。在所有研究婴儿中测量SP-B中的同位素掺入,而在DSPC中,它在21名婴儿中的20个(一个婴儿错误地获得所需的十分之一)GydF4y2Ba2GydF4y2BaHGydF4y2Ba2GydF4y2BaO剂量,因此不能检测到DSPC富集)。GydF4y2Ba
表面活性剂组成GydF4y2Ba
气管吸出物中基础的DSPC和SP-B值,以总磷脂的百分比表示,示于GydF4y2Ba图1GydF4y2Ba.两组间DSPC含量无差异(中位数(四分位间距)43.2(36.4–50.4)GydF4y2Ba相对GydF4y2Ba44.6(30.3-53.9)分别在CDH和对照中),而CDH受试者的SP-B显着低于对照(0.19(0.19(0.14-0.28)GydF4y2Ba相对GydF4y2Ba0.41(0.18-0.49),P <0.05)。GydF4y2Ba
表面活性剂DSPC和SP-B动力学GydF4y2Ba
从CDH和对照组中提取的棕榈酸酯- dspc和亮氨酸- sp - b的富集曲线如图所示GydF4y2Ba图2GydF4y2Ba.GydF4y2Ba
如前所述[GydF4y2Ba22.GydF4y2Ba, SP-B在CDH婴儿和对照组中的翻转速度都比DSPC快得多(CDH快2.9-12.4倍,对照组快14.2-16.2倍)。SP-B分数合成率(FSRs)为33.4 (24.4-43.5)% / dGydF4y2Ba相对GydF4y2Ba每天52.0(33.0-87.9.9)每天对照(P = 0.03),而DSPC FSR每天5.0(3.5-8.7)%,每天6.1(5.2-8.5)%,分别为CDH和对照,(P= 0.31)(GydF4y2Ba表2GydF4y2Ba)。GydF4y2Ba
SP-B FSR和SP-B总磷酸盐的百分比之间存在显着的直接相关性(R = 0.544,P = 0.029)。GydF4y2Ba
在CDH组中,DSPC FSR与氧合指数(r = 0.632, p = 0.021)、肺泡动脉氧合指数(O . O . O . O . O . O . O . O . O . O . O . O . O . O . O . OGydF4y2Ba2GydF4y2Ba在研究开始时梯度(r = 0.632,p = 0.021),并且在研究期间表示为平均值的氧合指数(r = 0.597,p = 0.031)。GydF4y2Ba
讨论GydF4y2Ba
关于CDH中表面活性物质成分的数据有限且存在争议。先前对患有手术造成的膈疝的绵羊胎儿和患有硝基苯诱导的CDH的大鼠胎儿的研究报告,肺组织中磷脂和SP水平降低,表面活性物质蛋白转录物减少,肺顺应性改变[GydF4y2Ba6.GydF4y2Ba那GydF4y2Ba7.GydF4y2Ba那GydF4y2Ba23.GydF4y2Ba-GydF4y2Ba25.GydF4y2Ba].然而,在类似CDH模型上工作的其他作者未报告肺泡表面活性剂组合物的变化[GydF4y2Ba26.GydF4y2Ba]甚至增加SP表达[GydF4y2Ba27.GydF4y2Ba].GydF4y2Ba
来自临床研究的数据表明,磷脂的生成是正常的,因为在33至38周之间检查的人类CDH胎儿中,羊水卵磷脂与鞘磷脂的比率和磷脂酰甘油水平与历史对照数据并无差异[GydF4y2Ba28.GydF4y2Ba].我们的小组表明,CDH婴儿未改变磷脂酰胆碱合成[GydF4y2Ba9.GydF4y2Ba那GydF4y2Ba29.GydF4y2Ba].最后,与正常胎儿相比,尸检研究发现CDH中的正常总肺DSPC和SP含量,表明CDH婴儿肺中的表面活性剂磷脂可能是正常的[GydF4y2Ba10GydF4y2Ba];然而,该研究没有测量表面活性剂组分的气道水平。GydF4y2Ba
由于表面活性剂在全肺中的含量可能不能反映其在气隙中的分布,我们通过比较CDH新生儿与肺功能正常新生儿成熟SP-B和DSPC气管吸入浓度和合成率来重新评价该研究对象。我们发现,在CDH婴儿中SP-B气道恢复和合成率显著下降,而DSPC的恢复和合成与对照组无差异,与之前的一项研究不同,与匹配的对照组相比,CDH婴儿气管吸入的DSPC数量显著下降[GydF4y2Ba9.GydF4y2Ba].从气管吸汗中恢复可以受采的稀释技术影响,因此可能不如稀释的影响的动力学研究一致。GydF4y2Ba
因此,DSPC FSR与呼吸衰竭程度直接相关,提示存在有效的补偿反馈机制,而SP-B FSR不随呼吸衰竭程度增加。因此,患有CDH的婴儿似乎有相对SP-B缺乏,可能是由于合成减少,但根据我们的数据,在不成熟和通气诱导的肺炎症的情况下,不能排除降解的变化[GydF4y2Ba30.GydF4y2Ba-GydF4y2Ba32.GydF4y2Ba].GydF4y2Ba
值得注意的是,我们的数据是指成熟的SP-B,与其他没有区分成熟的SP-B和不确定的原产地和意义形式的其他研究[GydF4y2Ba33.GydF4y2Ba]我们推测,部分SP-B缺乏,加上肺不成熟和炎症,显著导致CDH婴儿的呼吸功能不全。GydF4y2Ba
在我们的CDH婴儿中SP-B的分数合成率从5%到50%不等,表明这种缺陷的重力谱。研究婴儿的低数量不允许我们证明SP-B FSR与任何临床结局参数的相关性。有趣的是,观察所有研究婴儿,我们证明SP-B FSR与气管吸出物SP-B含量之间存在直接相关性(r = 0.544, p = 0.029)。在一个更大的CDH婴儿队列中建立呼吸功能不全程度与气道中SP-B的数量之间是否存在相关性将是有趣的。如果这种关系得到证实,气管抽吸液中SP-B的测量可以帮助临床医生决定是否给CDH患儿注射外源性表面活性剂。这不是一个微不足道的问题,因为表面活性剂治疗可以暂时改变气体交换和肺顺应性,主要风险是这些发育不全的肺出现气胸和/或纵隔气肿等并发症。GydF4y2Ba
我们的研究有两个主要的局限性。首先,在研究进行时,CDH和对照组的年龄并不匹配,因此SP-B浓度和动力学的差异可能是由于年龄差异造成的。不幸的是,关于产后早期气管吸出SP-B谱的信息很少。一项研究发现,出生一周以上的早产儿的气管吸入SP-B水平与足月婴儿的水平相当[GydF4y2Ba34.GydF4y2Ba]这些水平在出生后的9周内保持不变。我们推测,如果观察到的差异与年龄有关,它们应该同时影响DSPC和SP-B。GydF4y2Ba
其次,所有CDH婴儿在出生时都接受HFOV,但在研究时只有6名婴儿仍使用HFOV进行通气,而其他7名婴儿与对照组一样使用常规通气。然而,在CDH婴儿中,我们发现HFOV组和同步间歇强制通气组的SP-B FSR无差异(数据未显示)。在绵羊身上的实验表明,HFOV不会改变SP-B动力学[GydF4y2Ba35.GydF4y2Ba].因此,通风模式的差异不太可能是我们观察的唯一原因。GydF4y2Ba
综上所述,我们分析了与无肺部疾病的对照组相比,CDH婴儿的DSPC和SP-B气道恢复和合成率。我们发现,与对照组相比,CDH婴儿SP-B气道恢复率和合成率显著降低,而DSPC恢复率和合成率没有差异。部分肺泡SP-B缺乏可能是CDH呼吸功能不全的主要原因,如果含有重组SP-B的新一代合成表面活性剂可用,其纠正可能是治疗目标。GydF4y2Ba
致谢GydF4y2Ba
作者感谢来自BambinoGesō儿童医院,帕多瓦医院和Salesi医院的所有重症监护护士,他们为样本收集做出了贡献。GydF4y2Ba
脚注GydF4y2Ba
感兴趣的语句GydF4y2Ba
没有宣布。GydF4y2Ba
- 收到GydF4y2Ba2012年2月23日。GydF4y2Ba
- 公认GydF4y2Ba2012年6月3日。GydF4y2Ba
- ©2013年GydF4y2Ba
参考资料GydF4y2Ba
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