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过敏性哮喘的炎症过程由T-辅助(TH)型细胞引发,其产生细胞因子的曲目,包括白细胞介素(IL)-4,IL-5,IL-9和IL-13,这是必要的用于免疫球蛋白(IG)E生产,气道嗜酸性粒细胞和脚酚细胞增生[GydF4y2Ba1GydF4y2Ba]。IL-18是另一个促炎细胞因子,最初被描述为干扰素(IFN)-γ-诱导因子[GydF4y2Ba2GydF4y2Ba]。IL-18可作为Th2细胞开发和IgE生产的辅助因子[GydF4y2Ba3.GydF4y2Ba]。最近,据报道了IL-18基因多态性与哮喘严重程度和更高的血清IL-18水平相关:RS5744247变体,其转录活性高于野生型等位基因[GydF4y2Ba4.GydF4y2Ba]。此外,IL-18受体(IL-18R)基因(2Q21)已被鉴定为与儿童哮喘易感性相关的候选基因[GydF4y2Ba5.GydF4y2Ba[基因的多态性与过敏性哮喘和气道高反应性(AHR)有关[GydF4y2Ba6.GydF4y2Ba]。与过敏性无发血对象和健康对照相比,我们评估了IL-18的血清IL-18水平和IL-18Rα的表达以及其他TH2相关细胞因子的表达,以及其他哮喘的哮喘受试者。GydF4y2Ba
我们研究了36项受试者,其中包括15个过敏性哮喘受试者,11个非发育过敏受试者和10个健康对照(GydF4y2Ba表格1GydF4y2Ba)。所有受试者都经历了甲胆碱吸入挑战[GydF4y2Ba7.GydF4y2Ba]并对16个环境过敏原的面板进行皮肤刺测试。使用市售的ELISA试剂盒(医学和生物实验室有限公司,日本名古屋;研发系统,测量总IgE和血清IL-18,IL-4,IL-10,IL-12,IL-13和IFN-γ;研发系统,Minneapolis,Mn,USA; Drg International Inc.,山腰,NJ,美国)。在过敏原季节外面研究过敏科目。Fibreoptic支气管镜和气道活组织检查来自四个过敏性哮喘受试者。呼吸道活组织检查用10%福尔马林固定,并嵌入石蜡蜡中。如先前报道的免疫组化分析[GydF4y2Ba8.GydF4y2Ba]。GydF4y2Ba
外周血单核细胞(PBMC)与外周血使用Lymphoplep®(Nycomed,Oslo,挪威)密度梯度分离。PBMC在荧光激活的细胞分选(FACS)缓冲液中洗涤(补充有0.1%叠氮化钠和0.5%牛血清白蛋白的PBS),并悬浮在1×10的密度GydF4y2Ba6.GydF4y2Ba在100μl小鼠嵌段中的细胞(5%小鼠血清和FACS缓冲中的5%人血清; Sigma-Aldrich,ST路易斯,Mo,USA),然后孵育20分钟。接下来是用浮藻(PE) - 缀合的IL-18Rα(R&D Systems),太平洋蓝缀合的CD45(eBioscience,San Diego,Ca,USA),Pe-Cyanin7-Concugated CD3,荧光素异硫氰酸酯 - 共轭CD4,联合蛋白(APC) - 缀合的CD56(BD Pharmingen,San Diego,CA,USA),APC-CON-CONG8(BD Biosciences,San Jose,CA,USA)或PE缀合的同种型匹配小鼠IgG1对照抗体(BD Pharmingen)在4°C下黑暗30分钟。接下来,将样品以405×离心GydF4y2BaGGydF4y2Ba(1,500 rpm)在4°C下10分钟。吸出上清液,用350ml 1%多聚甲醛固定,细胞固定。然后将染色的细胞在暗中储存在4℃直至在染色后的流动细胞计量拍摄<48小时。GydF4y2Ba
使用配备有三个激光器(Becton Dickinson仪器系统,Franklin Lakes,NJ,USA)的15型色彩LSR II流式细胞仪进行细胞使用Facsdiva软件(BD Biosciences)。在侧散散射(SSC)的淋巴细胞细胞群周围设置淋巴细胞门GydF4y2Ba相对GydF4y2BaCD45绘图然后转移到SSCGydF4y2Ba相对GydF4y2BaCD3图以鉴定CD3阳性和阴细胞群。通过CD4与CD4和CD8阳性细胞群分离CD3阳性细胞群GydF4y2Ba相对GydF4y2BaCD8情节。将CD3阴性细胞群与CD56图和CD3图分离出CD56阳性细胞群。使用同种型匹配的小鼠IgG1对照检测CD3-,CD4-,CD8-和CD56阳性细胞中的IL-18Rα-阳性细胞群。非参数测试(Kruskal-Wallis和Mann-Whitney U-Tests)用于比较组之间的差异。统计显着性被认为是p <0.05。GydF4y2Ba
如预期的那样,哮喘受试者具有甲胆碱诱惑浓度,导致1 s(PC)的强制呼气量减少20%GydF4y2Ba20.GydF4y2Ba)显着低于非发育过敏受试者和健康对照的值(P <0.01)。在非惊血病过敏受试者和哮喘学中,IgE的总IgE水平也明显高于健康对照(P <0.05)(GydF4y2Ba表格1GydF4y2Ba)。GydF4y2Ba
我们认为哮喘受试者的IL-18血清水平显着高(平均值±GydF4y2BaSEM.GydF4y2Ba336.12±36.95 pg·mlGydF4y2Ba-1GydF4y2Ba),与非发育过敏受试者或健康对照相比(218.70±20.85和213.68±15.62 pg·ml相比GydF4y2Ba-1GydF4y2Ba分别)(P <0.05)(GydF4y2Ba如图。1GydF4y2Ba)。相比之下,血清IL-4,IL-10,IL-12,IL-13和IFN-γ之间的血清水平在组之间没有显着差异(GydF4y2Ba如图。1GydF4y2Ba)。在哮喘受试者中,血清IL-18水平和甲素PC之间存在显着相关性GydF4y2Ba20.GydF4y2Ba(r = -0.517,p <0.05),并且在整个人口中,血清IL-18水平与IgE水平之间存在显着相关性(r = 0.33,p = 0.053)。在组之间CD3,CD4,CD8和CD56细胞的IL-18Rα表达没有显着差异。GydF4y2Ba
IL-18蛋白在气道上皮细胞中强烈表达,并在来自过敏性哮喘受试者的气道活组织检查中的平滑肌细胞。IL-18Rα在气道上皮中弱表达,但不在气道平滑肌上。代表性示例显示在GydF4y2Ba图2GydF4y2Ba来自所有四个过敏性哮喘受试者的活组织检查中,在活组织检查中看到了类似的变化。GydF4y2Ba
先前已在哮喘受试者中鉴定出更高的血清IL-18水平[GydF4y2Ba9.GydF4y2Ba与健康对照组相比;然而,该研究不包括对照组过敏性,无发血受试者。与健康受试者相比,急性严重哮喘的患者还描述了血清IL-18水平显着更高[GydF4y2Ba10.GydF4y2Ba]。在我们的研究中,与正常对照组相比,过敏性的非惊厥受试者没有升高的IL-18水平;这表明循环IL-18的增加对于哮喘是特异性的。GydF4y2Ba
用甲素PC的血清IL-18水平相关的证明GydF4y2Ba20.GydF4y2Ba哮喘受试者的价值和与所研究的全部受试者群体中与血清IgE相关的趋势也是新的观察结果。IL-18与IgE水平增加的最合理的解释和IgE和甲素AHR的关联是这些是间接影响的。以前的研究表明,IL-18在过敏原诱导的TH2细胞的发育中起作用,并且在IL-4和IL-13中可能有关的TH2细胞因子(例如IL-4和IL-13),这对于IGE产生和AHR是必需的在老鼠中,是负责任的。GydF4y2Ba
IL-18蛋白在气道上皮细胞和平滑肌细胞中强烈表达,而IL-18Rα仅在气道上皮上表达。这些结果表明,气道结构细胞具有在哮喘学中产生IL-18的能力。此前还报道了IL-18蛋白在患有非常严重的COPD患者的支气管和肺泡上皮中强烈表达[GydF4y2Ba8.GydF4y2Ba]。不幸的是,我们没有来自过敏或正常对照的气道活组织检查,以确定蛋白质和受体表达的位置是否对过敏性哮喘特异。GydF4y2Ba
我们得出结论,促炎细胞因子IL-18可以通过其在IGE和AHR的发育中发病性在过敏性哮喘发病机制中起重要作用。进一步的研究为了阐明IL-18在过敏性哮喘中的重要性需要人源化的抗IL-18单克隆抗体来阻断IL-18的作用。GydF4y2Ba
致谢GydF4y2Ba
我们感谢Kawayama,Y. Sakazaki和C. Ohki(所有Kurume University,Kurume,日本)的技术援助。GydF4y2Ba
脚注GydF4y2Ba
支持声明GydF4y2Ba
本研究得到了加拿大卫生机构的支持(研究资助#9362)。GydF4y2Ba
兴趣表GydF4y2Ba
下午的兴趣表。可以找到o'byrneGydF4y2Bawww.www.qdcxjkg.com/site/misc/statements.xhtml.GydF4y2Ba
- ©ers 2011.GydF4y2Ba