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人类白细胞抗原g (HLA- g)是一种非经典的Ib类主要组织相容性复合物抗原,由HLA复合物中6p21染色体上的一个基因编码1。HLA-G在妊娠它在维持免疫耐受向同种异体胎儿和胎盘中起关键作用过程中组成型表达2,3.的,但也与炎性疾病如牛皮癣,多发性硬化症,和溃疡性结肠炎,以及与固体器官移植相关的3.,4。我们最近报道了芝加哥地区哮喘家族、多代荷兰哮喘家族和哮喘高风险出生队列中HLA-G变异与哮喘风险之间的关联1,5。在哮喘发病机理为HLA-G A角色由HLA-G,可溶性HLA-G5的可溶性同种型的表达示范进一步建议,在气道上皮细胞1和在过敏性哮喘的儿童增加的sHLA-G的循环血浆水平6。由于哮喘的气道炎症涉及t辅助细胞(Th) 2型倾斜淋巴细胞类似于妊娠,HLA-G是一个有吸引力的候选分子,以促进哮喘的免疫特征。HLA-G在气道上皮细胞的定位提示其失调可能导致慢性哮喘的气道炎症。为了进一步评估这一点,我们假设在哮喘气道中HLA-G丰度会增加。
为了检验这一假设,我们在支气管肺泡灌洗(BAL)液从12非哮喘对照受试者和15名受试者患有轻度持续性哮喘获得的测量的sHLA-G的浓度。使用人类受试者批准了芝加哥机构审查委员会的大学(芝加哥,伊利诺伊州,美国)。哮喘是用国家哮喘教育和预防项目指南诊断。主题with a smoking history of ≥10 pack·yrs−1,那些在研究的6个月内使用过口服皮质激素、在研究的6个月内接受过急救护理或因哮喘住院的患者被排除在外。在每个受试者稳定的时间内进行支气管镜检查。
The demographic, clinical and pulmonary function data for the subjects in our study are presented in table 1⇓。正如预期的那样,与对照组相比,哮喘患者的强迫呼气量在1 s %预测中更低(p = 0.01),更多的atopy (p = 0.0001)和更多的外周血嗜酸性粒细胞(p = 0.02)。两组间支气管肺泡灌洗液细胞计数无显著差异。灌洗液使用中心prep超滤室(Millipore, Inc., Billerica, MA, USA)浓缩约30倍,使用3-kD分子量截止过滤器。使用酶联免疫吸附试验(Exbio, Inc., Vestec,捷克共和国)分析被滞留者是否存在sHLA-G。捕获抗体,MEM-G/9,识别shed G1和分泌G5,和二抗,抗,确保测量的可溶性G,配置的24m7。灵敏度的极限为~ 0.2 U·mL−1。值调节为集中程度,如上所述,并表示为U·毫升−1BAL流体。
sHLA-G levels were increased in the BAL fluid of 15 asthmatic subjects (median 6.8 (interquartile range, 2.8–7.8) U·mL−1与12名对照组相比(中位1.6 (1.0-3.0)U·mL)−1,p = 0.01 by Mann–Whitney test) (fig. 1⇓)。一个控制值和哮喘值均未低于该方法的检测限。我们还研究了种族背景是否可以解释在sHLA-G中观察到的差异。9例哮喘患者sHLA-G水平差异无统计学意义(中位5.6 (1.5-6.9)U·mL)−1)与6名非裔美国哮喘患者(中位6.9 (6.2,8.6)U·mL)−1,经Mann-Whitney检验,p = 0.24)。在这一组中,可供分析的非裔美国人对照组太少。
,其中内含子4组的序列的目标只存在于可溶性HLA-G;固定在10%中性缓冲的福尔马林支气管活检的免疫过氧化物酶标记物使用针对可溶性HLA-G(Exbio公司克隆2A12)的初级抗体进行。可溶性HLA-G存在于从6 9的对照受试者和11 9的受试者轻度哮喘的是有足够的存在于用于审查粘膜层上皮收集支气管活检的上皮。染色在每个主要上皮细胞类型是明显的(数据未显示)。在标记图案或强度无明显差异哮喘和对照受试者之间显而易见的,并且没有其他的粘膜下气道细胞和结构进行染色。炎性细胞无显着浸润存在于任何通过活检苏木精和伊红染色作为判断。
我们首次报道,与对照组相比,哮喘患者BAL液中sHLA-G水平升高,支持sHLA-G在哮喘发病机制中的作用。我们的结果与我们之前报道的基因调控多态性之间的关系一致HLA -G和哮喘1,5一项研究显示,27名患有特应性哮喘的土耳其学龄儿童血浆中sHLA-G水平高于26名非特应性哮喘儿童和16名正常对照组儿童6。我们注意到除一人之外的所有哮喘患者都是特应性哮喘,我们之前报道过两者之间的联系HLA-G荷兰儿童的基因型和特异反应1。因此,可能的是,HLA-G通过特应性途径影响哮喘易感性。
我们观察到的HLA-G浓度差异的来源是气道上皮,因为在其他气道结构中没有检测到HLA-G。我们认为,上皮来源的sHLA-G在调节哮喘气道中发现的关键炎症细胞的活动中具有旁分泌作用。我们注意到,在其他情况下,HLA-G已被证明可以抑制参与炎症的树突细胞和t细胞8,激活FoxP3+CD4+CD25+调节性t细胞,抑制参与气道炎症的细胞9。
我们的观察并没有提供深入了解原因和结果:是HLA-G驱动炎症在哮喘气道或者是在哮喘气道抑制炎症存在反应的尝试?在妊娠中,HLA-G被认为促进T细胞向Th2细胞表型的偏斜和活化T调节性细胞2,3.这是一种与哮喘相似的免疫表型。人们很容易推测,有些人在基因上倾向于对特定信号做出过度表达HLA-G的反应。一旦被分泌,HLA-G可能会促进一系列事件,从而导致炎症恶化。的启动子区域的几个多态性HLA-G与转录因子结合位点一致可以解释HLA-G表达的个体间差异10。我们以前确定的3' 非翻译区的多态性HLA-G这破坏微RNA靶位点和证明了微RNA的存在HLA-G的等位基因特异性表达,其结合到该目标5。因此,HLA-G缺乏抑制或过表达可能解释我们在此报道的与哮喘的关联。我们注意到,本研究中研究对象的数量较少,因此无法对遗传变异和HLA-G表达之间的关系进行更详细的分析。未来需要更大规模的研究来阐明HLA-G对哮喘临床表现的潜在调节作用以及基因变异对表达水平的作用。
综上所述,在轻度哮喘患者中,sHLA-G在BAL中的浓度更高。我们认为HLA-G的过表达或缺乏抑制参与了哮喘的发病过程,并认为sHLA-G代表了哮喘发病的一条新途径。
支持声明
这项工作是由AI056352,HL072414,HL080417,HL007605,HL095268和RR024999卫生,马里兰州贝塞斯达,美国国家研究院的支持。
感兴趣的语句
没有宣布。
致谢
在2009年5月19日举行的2009年美国胸科学会国际会议(圣地亚哥,美国加利福尼亚州)上发表了该手稿的初步版本摘要。作者要感谢S. Maleckar和E. Low(芝加哥大学,芝加哥,IL, USA)为招募病人和提供技术援助。他们还感谢克里希南就统计问题提出的建议;和J. Imperiale,芝加哥大学综合临床研究中心的工作人员和芝加哥大学的肺科和危重症护理人员(所有芝加哥大学,芝加哥,IL, USA)寻求支气管镜检查的帮助。
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