摘要GydF4y2Ba
以前的研究已经发现囊性纤维化(CF)中中性粒细胞的氧化反应异常,但尚不清楚这种变化是否与膜囊性纤维化跨膜电导调节(CFTR)的丧失有关,还是与该疾病中存在的炎症环境有关。本研究的目的是确定CF患者的中性粒细胞是否表现出呼吸破裂的内在异常。GydF4y2Ba
由稳定ΔF508纯合蛋白CF患者分离的中性粒细胞的呼吸爆发活性和匹配的健康对照通过化学血清素和细胞色素C.减少量化。NADPH氧化酶组分和CFTR的表达通过Western印迹和RT-PCR测定。GydF4y2Ba
从CF嗜中性粒细胞的氧化输出响应于受体联和微粒刺激没有从该控件不同。NADPH氧化酶组分的表达在CF和非CF嗜中性粒细胞是相同的。虽然CFTR基因的低水平可能在正常人中性粒细胞进行识别,我们无法检测人中性粒细胞裂解物或免疫沉淀CFTR蛋白。GydF4y2Ba
CFTR在控制中性粒细胞氧化活性方面没有作用;先前报道了CF和非CF受试者之间的中性粒细胞功能的差异最有可能与分离细胞的炎症性Milieu有关。GydF4y2Ba
囊性纤维化(CF)是影响高加索人的最常见的遗传疾病,并赋予2000年的生育队列的50年估计减少(但改善)预期寿命GydF4y2Ba1GydF4y2Ba.死亡率主要是由肺部疾病引起的,持续不断的感染和炎症循环破坏呼吸道和肺实质,从而导致呼吸衰竭。中性粒细胞被促炎介质如白三烯B招募到肺中GydF4y2Ba4.GydF4y2Ba,白细胞介素(IL)-8和粒细胞 - 巨噬细胞菌落刺激因子(GM-CSF)GydF4y2Ba2GydF4y2Ba和释放蛋白酶和反应性氧(ROS);这种反应未能清除感染细菌GydF4y2Ba3.GydF4y2Ba而是有助于肺损伤和进一步的炎症循环GydF4y2Ba4.GydF4y2Ba.GydF4y2Ba
CF的表型主要涉及来自上皮细胞的CF跨膜电导调节剂(CFTR),导致导管疾病。还有证据表明,CF中的免疫应答异常,炎症可能会使感染。中性粒细胞是先天免疫反应的主要效果GydF4y2Ba5.GydF4y2Ba并在背后CF过度旺盛的炎症反应,但目前还不清楚这是否是由于嗜中性粒细胞功能的主要异常或是否CF嗜中性粒细胞被适当地响应于升高的促炎刺激。报告CF中的中性粒细胞功能异常涵盖趋化性GydF4y2Ba6.GydF4y2Ba那GydF4y2Ba7.GydF4y2Ba,粘附GydF4y2Ba8.GydF4y2Ba,藐视GydF4y2Ba9.GydF4y2Ba和呼吸爆发活动GydF4y2Ba10.GydF4y2Ba那GydF4y2Ba11.GydF4y2Ba.然而,在许多这些研究的病人群体是异质的年龄,遗传缺陷,感染状态和殖民生物体或用药方面,可调节中性粒细胞反应的所有变量。而编码的mRNA CFTR已经报道了存在于由人嗜中性粒细胞的制剂的低拷贝数GydF4y2Ba12.GydF4y2Ba,目前尚不清楚该消息是否来自中性粒细胞本身或来自其他细胞,例如在常规中性粒细胞分离物中呈中存在的小但重要数量的单核细胞或淋巴细胞。同样,关于CFTR在蛋白质水平的中性粒细胞表达的情况下存在矛盾的报告GydF4y2Ba13.GydF4y2Ba那GydF4y2Ba14.GydF4y2Ba.GydF4y2Ba
动物模型和GydF4y2Ba体内GydF4y2Ba人类研究也表明了中性粒细胞在介导CF中的肺部损伤中的重要作用,但尚未确定这是否是初级或二次现象。在优雅的一系列实验中,TirouvanziamGydF4y2Baet al。GydF4y2Ba15.GydF4y2Ba结果显示,无菌人胎儿CF小气道移植物植入严重联合免疫缺陷小鼠后,发生中性粒细胞介导的炎症变化,导致进行性肺组织破坏:匹配的非CF移植物没有发生这种命运。汗GydF4y2Baet al。GydF4y2Ba16.GydF4y2BaCF婴儿(平均6个月大)的支气管肺泡灌洗液显示中性粒细胞炎症,即使在没有感染的情况下,同时IL-8水平升高,表明中性粒细胞的过度招募可能是继发于细胞因子的产生。GydF4y2Ba
我们已经解决了中性粒细胞NADPH氧化酶的表达,组织或功能存在的内在异常,其稳定(临床和炎症标记物评估)均匀(纯合ΔF508,殖民化GydF4y2Ba假单胞菌铜绿假单胞菌GydF4y2Ba)成人CF人口。在这种情况下,大环内德阿奇霉素具有临床疗效GydF4y2Ba17.GydF4y2Ba-GydF4y2Ba20.GydF4y2Ba但由于它在吞噬细胞中显着累积GydF4y2Ba21.GydF4y2Ba并已上报到影响呼吸爆发GydF4y2Ba体外GydF4y2Ba和GydF4y2Ba体内GydF4y2Ba22.GydF4y2Ba那GydF4y2Ba23.GydF4y2Ba,我们排除患者在服用我们研究这种抗生素。我们已经发现在受体或颗粒诱导的氧化爆发活性没有显著差异(由细胞色素C的减少来评价,并且两个luminol-和光泽精依赖性化学发光(LUM的DCL和Luc-DCL))CF和嗜中性粒细胞的控制之间,并且没有可检测到在正常(非CF)人嗜中性粒CFTR蛋白的表达。GydF4y2Ba
方法GydF4y2Ba
耐心GydF4y2Ba
CF患者均为临床稳定的ΔF508纯合子GydF4y2Ba假单胞菌铜绿假单胞菌GydF4y2Ba招募自英国剑桥市帕普沃斯医院成人CF中心。排除口服类固醇或大环内酯类抗生素(包括阿奇霉素)的患者。患者的年龄和性别与健康志愿者相匹配。该研究得到了当地研究伦理委员会的批准。GydF4y2Ba
中介粒细胞分离和ROS生成的测量GydF4y2Ba
中性粒细胞(10GydF4y2Ba7.GydF4y2Ba毫升GydF4y2Ba-1GydF4y2Ba在PBS中)从静脉血使用等离子体/梯度的Percoll分离GydF4y2Ba24.GydF4y2Ba用GM-CSF(100ng·mlGydF4y2Ba-1GydF4y2Ba那37.°C, 30 min) and stimulated with PBS, n-formyl-methionyl-leucyl-phenylalanine (fMLP; 100 nM), phorbol myristate acetate (PMA; 10 ng·mL-1GydF4y2Ba)、调理(热灭活的混合人血清;σ,普尔,英国;30分钟,37°C),酵素(每个中性粒细胞5-20个颗粒;1小时,37°C)或热灭GydF4y2Ba金黄色葡萄球菌GydF4y2Ba(12.5-50个中性粒细胞颗粒;在细胞色素C存在下(1.2mg·ml)存在1小时,37℃)GydF4y2Ba-1GydF4y2Ba),Lucigenin(0.25mm)或鲁米酚(1mm)。量化的超氧化物歧化酶抑制还原细胞色素CGydF4y2Ba25.GydF4y2Ba;使用Berthold Centrophago Luminometometer(Berthold Technologies Ltd,Harpenden,UK)从三份井中记录Luc-DCL和LUM-DCL。所有刺激都产生了最大或近最大的反应。基于流式细胞术的整个血液中性粒细胞形状的分析完全如上所述进行GydF4y2Ba26.GydF4y2Ba.为了评估吞噬作用,氧化酶测定完成后(在37℃下与吞噬猎物孵育1小时),吸取中性粒细胞,进行细胞纺丝和染色(Quick-Diff;Dade-Behring, Newark, NJ, USA);由对实验条件不知情的观察者定量(油浸下的光镜下)摄取颗粒的细胞百分比和吞噬指数,每一条件至少计数100个细胞(所有条件重复三次)。GydF4y2Ba
为了制备高度纯化的中性粒细胞,通过与人粒细胞浓缩鸡尾酒(Stemcell Technologies,Vancouver,BC,Canada)和葡聚糖涂覆的磁性胶体一起孵育,对上述血浆/绝经梯度分离的细胞进行阴性选择,然后进行磁性分离如上所述在洗脱和洗涤之前,在Secksep0.3μm阴性选择柱上。GydF4y2Ba
NADPH氧化酶成分的Western blot分析GydF4y2Ba
Control and CF neutrophils were treated with 7 μM di-isopropylfluorophosphate (DIFP; Sigma) and samples (5×106.GydF4y2Bacells) were pelleted and lysed (0.1% Triton X-100, 150 mM NaCl, 5 mM EDTA, 5 mM EGTA, 3 mM β-glycerophosphate, 30 mM NaF, 0.2% cholate and leupeptin, aprotitin and antipain all at 2.5 μg·mL-1GydF4y2Ba.样品(50μg蛋白质,BCA蛋白质测定; Pierce,Fisher Scientific,Loughborough,UK)在10%SDS-聚丙烯酰胺凝胶上分离,转移到聚偏二氟乙烯,使用以下一抗蛋白质对蛋白质印迹进行蛋白质印迹:小鼠单克隆抗-P47GydF4y2BaPhox.GydF4y2Ba小鼠单克隆抗p67GydF4y2BaPhox.GydF4y2Ba(1 in 2,000; BD转导实验室,牛津,英国),小鼠单克隆抗P40GydF4y2BaPhox.GydF4y2Ba(1,000; Upstate,纽约,纽约,美国),兔多克隆反GP91GydF4y2BaPhox.GydF4y2Ba(1 in 250; Upstate),兔多克隆抗P22GydF4y2BaPhox.GydF4y2Ba(1 in 750;圣克鲁斯,纽约,纽约,美国)和抗RAC2兔抗血清(1 in 7,500; Upstate)。使用小鼠单克隆抗体对β-涂层蛋白蛋白和甘油醛3-磷酸脱氢酶(Babraham Institute,Babraham,英国Babraham Institute)的天赋来确认等蛋白质载荷。马萝卜过氧化物酶 - 共轭山羊抗小鼠和山羊抗兔二抗(Biorad Laboratories,Hemel Hempstead,UK)在3,000中稀释1分,以及使用增强化学发光(Amersham Pharmacia,Little Chalfont,UK)检测到蛋白质。GydF4y2Ba
CFTR mRNA的RT-PCRGydF4y2Ba
中性粒细胞通过上述血浆/Percoll梯度分离。确保任何产品没有发现由于小数量的污染单核细胞在这些准备,我们也使用额外获得中性粒细胞单核细胞耗竭一步纯度> 99.9%,因为即使低水平的单核细胞污染已被证明是生理有关GydF4y2Ba27.GydF4y2Ba.使用RNeasy自旋柱(Qiagen, Sussex, UK)分离的RNA,使用oligo(dT)引物和逆转录酶(Stratagene, La Jolla, CA, USA)进行转录。采用CFTR特异性引物(意义:CAA GGA GGA ACG CTC TAT CCG;反义:GCC TTC CGA GTC AGT TTC AG;558 bp产物)和ampliTaq DNA聚合酶(Bioline,伦敦,英国)。GydF4y2Ba
CFTR蛋白表达的测定GydF4y2Ba
中性粒细胞(6×10GydF4y2Ba7.GydF4y2Ba)被裂解(50mM Tris / HCl,pH 7.5,150mM NaCl,5mM EDTA,1%NP40,0.5%CHAPS,加上蛋白酶抑制剂(完整片剂,每50毫升1%; Roche,Welwyn Garden City,UK;加上DIFP7μm; sigma)),在冰上孵育(30分钟),超声处理和旋转(5分钟,15,000×GydF4y2BaGGydF4y2Ba).将上清液用蛋白质A-Sepharose和抗人CFTR C-末端单克隆抗体(MAB25031,1:250; R&D系统)在4℃下用蛋白质A-琼脂糖和抗人CFTR C-末端(MAB25031,1:250; R&D系统)免疫沉淀。通过SDS-PAGE分析样品。对于分馏实验,裂解细胞(10mM Tris / HCl,pH 7.5,5mM MgClGydF4y2Ba2GydF4y2Ba,1mM二硫代噻唑醇,1mM苯基甲磺酰氟加蛋白抑制剂),在冰上孵育(30分钟),超声处理和纺(5分钟,15,000×GydF4y2BaGGydF4y2Ba).上清液超速离心(100,000×GydF4y2BaGGydF4y2Ba,30分钟)和颗粒在膜裂解缓冲液中重新悬浮(50mM Tris / HCl,pH 7.5,50mM NaCl,5mM MgClGydF4y2Ba2GydF4y2Ba,0.5%乳液,1mM二硫代噻钛醇,1mM苯基甲磺酰氟加蛋白酶抑制剂)。膜级分是免疫沉淀和Western Blotted如上所述。另外,蛋白质由新鲜分离的嗜中性粒细胞制备(3×10GydF4y2Ba7.GydF4y2Ba),经三氯乙酸(TCA)沉淀GydF4y2Ba14.GydF4y2Ba.使用裂解物,免疫沉淀物或与TCA沉淀物与与T84结肠癌上皮细胞(ATCC,Middlesex,UK)平行制备的裂解物,免疫沉淀物或TCA沉淀物证实了CFTR抗体的特异性。GydF4y2Ba
统计分析GydF4y2Ba
值显示为平均值±GydF4y2BaSEM.GydF4y2Ba从(n)独立实验。当生物学参数不遵循高斯分布时,配对结果通过非参数(Mann-Whitney)显著性计算进行分析(StatView 4.5;Abacus概念公司,Berkley, CA, USA)。当p<0.05时,认为差异显著。GydF4y2Ba
结果GydF4y2Ba
耐心GydF4y2Ba
CF患者均为临床稳定的ΔF508纯合子GydF4y2Ba假单胞菌铜绿假单胞菌GydF4y2Ba(预测67.7%的平均强制呼气量;平均体重指数21.8千克·mGydF4y2Ba-2GydF4y2Ba);除了服用口腔类固醇或大环内酯的人被排除在外。学习的23名患者中有四种也增长了GydF4y2Ba金黄色葡萄球菌GydF4y2Ba在参与年份的至少一个场合。患者是年龄和性别与健康志愿者匹配(表1GydF4y2Ba⇓GydF4y2Ba).所有受试者全血计数、血清电解质和肾功能正常;平均血清碱性磷酸酶在154 U·L略升高GydF4y2Ba-1GydF4y2Ba在CF受试者中,平均(范围)C-反应蛋白(CRP)值为2.2(2-3)mg·lGydF4y2Ba-1GydF4y2Ba在对照中,6.0(2-21)mg·lGydF4y2Ba-1GydF4y2Ba表2GydF4y2Ba⇓GydF4y2Ba).GydF4y2Ba
氧化酶组分的表达与定位GydF4y2Ba
CF患者和慢性肉芽肿病都易于感染GydF4y2Ba金黄色葡萄球菌GydF4y2Ba和GydF4y2Ba洋葱伯克霍尔德菌GydF4y2Ba28.GydF4y2Ba.这一点,加上已知的这种生物体对氧化杀死的敏感性,表明在CF中也可能存在NADPH氧化酶的异常。然而,Western blotting证实了胞质表达相同(p47)GydF4y2BaPhox.GydF4y2Ba, p67GydF4y2BaPhox.GydF4y2Ba,p40GydF4y2BaPhox.GydF4y2Ba和rac2)和膜(p22GydF4y2BaPhox.GydF4y2Ba和gp91GydF4y2BaPhox.GydF4y2Ba)CF和非CF中性粒细胞中氧化酶的组分(图1GydF4y2Ba⇓GydF4y2Ba).此外,免疫荧光表现出p47的相同招募GydF4y2BaPhox.GydF4y2Ba在CF和非CF细胞中吞噬蛋白膜(数据未显示)。GydF4y2Ba
ROS生成GydF4y2Ba
通过细胞色素C减少测量ROS(细胞外超氧化物阴离子);图2AGydF4y2Ba⇓GydF4y2Ba)、um- dcl(细胞内和细胞外ROS;图2b和cGydF4y2Ba⇓GydF4y2Ba)和lucc - dcl(细胞外ROS;数据未显示)与健康对照组相比,CF个体的中性粒细胞显示了相同的fmlp刺激的氧化功能。通过fMLP单独对ROS的最小反应和未受刺激的中性粒细胞基本形态的缺乏改变,证实了基线中性粒细胞启动的缺乏(图2e)GydF4y2Ba⇓GydF4y2Ba);这可能解释了为什么我们没有重现Witko-Sarsat报道的fmlp刺激的lm - dcl呼吸爆发反应GydF4y2Baet al。GydF4y2Ba11.GydF4y2Ba.用GM-CSF引发加强增强中性粒细胞的响应性,随后用FMLP刺激,如预期,并且再次对照细胞与来自CF患者的响应之间的响应的大小没有差异。通过PMA引发的细胞外ROS产生在CF和对照细胞之间没有差异(图2AGydF4y2Ba⇓GydF4y2Ba),同样在PMA产生的LUM-DCL响应中没有统计学差异(曲线下的区域,Mann-Whitney测试;图2DGydF4y2Ba⇓GydF4y2Ba).同样,尽管CF中性粒细胞对颗粒刺激的反应性有增加的趋势(特别是在颗粒/中性粒细胞比率较高的情况下),但这并没有达到统计学意义(Mann-Whitney检验;图3a和bGydF4y2Ba⇓GydF4y2Ba).用于唑胺颗粒的CF中性粒细胞的吞噬能力和GydF4y2Ba金黄色葡萄球菌GydF4y2Ba相当于来自健康志愿者的细胞(图3C和D.GydF4y2Ba⇓GydF4y2Ba).GydF4y2Ba
CFTR mRNA但不是CFTR蛋白可检测在人中性粒细胞中GydF4y2Ba
RT-PCR显示T84结肠上皮细胞中CFTR mRNA表达丰富;CFTR mRNA(序列分析证实)可从正常的人中性粒细胞和单核细胞耗尽的高纯度中性粒细胞中扩增GydF4y2Ba27.GydF4y2Ba,但仅在50 PCR循环后,表明CFTR mRNA的非常低水平表达(图4A和B.GydF4y2Ba⇓GydF4y2Ba).使用实时PCR,我们可以再次在正常和单核细胞耗尽的人中性粒细胞制剂中鉴定CFTR mRNA,仅在非常高(> 45)循环编号中的健康志愿者;T84细胞中的消息比中性粒细胞(数据未显示)更高50,000-100,000倍。CFTR蛋白已在上皮内的细胞中发现GydF4y2Ba12.GydF4y2Ba,包括淋巴细胞GydF4y2Ba29.GydF4y2Ba和红细胞GydF4y2Ba30.GydF4y2Ba,但中性粒细胞中功能性CFTR蛋白的表达是不确定的GydF4y2Ba13.GydF4y2Ba那GydF4y2Ba14.GydF4y2Ba.尽管鉴定了低水平CFTR mRNA,我们无法在中性粒细胞裂解物中或通过全细胞或富含细胞的免疫沉淀来检测CFTR蛋白(富含膜富集的级分(源自健康的非CF个体的样品;图4C-EGydF4y2Ba⇓GydF4y2Ba).同样,我们无法识别由TCA沉淀的样品中的样品中的CFTR,从多达5×10GydF4y2Ba7.GydF4y2Ba正常人中性粒细胞(数据未显示)。从T84细胞制备的上述馏分中均可检测到CFTR。值得注意的是,T84细胞中的CFTR蛋白加入到中性粒细胞裂解液中,在实验条件下未被分解(图4e)GydF4y2Ba⇓GydF4y2Ba),表明蛋白水解不解释在这些条件下鉴定CFTR蛋白的未解释。因此,CFTR蛋白不能在正常的人中性粒细胞中表达,或者以低于检测阈值的水平存在于使用的方法。GydF4y2Ba
讨论GydF4y2Ba
在CF的患者中,慢性感染细菌和非分泌病原体结合了深度气道炎症导致进行的肺病,呼吸损害和过早死亡。看到了病原体的特征“3月”,初始隔离GydF4y2Ba嗜血杆菌流感GydF4y2Ba和GydF4y2Ba金黄色葡萄球菌GydF4y2Ba,进步到GydF4y2Ba假单胞菌铜绿假单胞菌GydF4y2Ba在某些情况下,GydF4y2Ba洋葱伯克霍尔德菌GydF4y2Ba,非典型分枝杆菌和曲霉。矛盾的是,尽管存在丰富的中性培养物,但这些病原体在CF肺部内存活性并繁殖,表明在这种环境中运行的正常杀菌机制存在显着损害。无论是否杀死病原体是由CF中性粒细胞功能的主要异常导致的,目前尚不清楚与CF肺部微环境,无关源性因子或来自组合效应相关的次要中性粒细胞缺陷。GydF4y2Ba
据报道,从CF患者分离的细胞中,中性粒细胞呼吸破裂导致潜在的有害氧自由基的产生GydF4y2Ba10.GydF4y2Ba;在其他研究中的反应已经表明根据感染病原体,以改变GydF4y2Ba31.GydF4y2Ba或用于检测呼吸爆发活动的方法GydF4y2Ba11.GydF4y2Ba,和分泌产物GydF4y2Ba假单胞菌铜绿假单胞菌GydF4y2Ba据报道抑制中性粒细胞呼吸爆发活动GydF4y2Ba32.GydF4y2Ba.在这项研究中,我们采用了三种方法(细胞色素C还原,lum-DCL和lucc - dcl)来量化分离的中性粒细胞的呼吸爆发活性(通过一种被证明对中性粒细胞功能造成最小干扰的方法)GydF4y2Ba24.GydF4y2Ba)来自大环内德 - 甲状腺均匀患者组(Δf508纯合子殖民殖民GydF4y2Ba假单胞菌铜绿假单胞菌GydF4y2Ba),并明确证明,在对可溶性配体刺激的反应中,氧化剂的输出与健康志愿者中性粒细胞的输出相同。由于CF患者临床表现稳定,炎症指数正常或接近正常,这可能反映了循环中促炎介质的缺乏,与CF中性粒细胞完全没有基底形态变化完全一致。此外,NADPH氧化酶的膜和胞质组分的表达,以及胞质组分向吞噬体膜的募集,在正常和CF中性粒细胞中完全相同,再次反对CF中中性粒细胞功能的原发性异常。虽然颗粒刺激有增加细胞内氧化剂生成的趋势,但这没有达到统计学意义,且在较低(更与临床相关)的颗粒/中性粒细胞比率时不太明显。与莫里斯报告的数据一致GydF4y2Baet al。GydF4y2Ba13.GydF4y2Ba,我们发现从正常和CF受试者的外周血中分离的中性粒细胞的吞噬能力没有差异。GydF4y2Ba
同样在文献中与以前的数据保持一致GydF4y2Ba12.GydF4y2Ba,我们能够在低拷贝数下证明CFTR的mRNA,甚至在高度纯化(单核细胞耗尽)的中性粒细胞制剂中。尽管有了这一发现,但经过勤奋的研究,未能在取自正常人类中性粒细胞的样本中发现CFTR蛋白。CFTR不能通过直接Western免疫印迹或免疫沉淀的全细胞裂解液,或富集的膜或胞质部分检测到;在相同条件下,T84结肠癌细胞可检测到CFTR。本研究中使用的抗体用于上述研究,能够识别新合成的、非糖基化的(约130 kD)、内质网糖基化的(约150 kD)和成熟的(完全糖基化;在T84裂解液(未显示)中检测到CFTR(约180kd),此外,我们无法使用一系列其他市售CFTR抗体(未显示)在人中性粒细胞裂解液中检测到CFTR。中性粒细胞具有广泛的强大的蛋白水解酶;为了排除蛋白水解是我们未能从中性粒细胞裂解液中检测到CFTR的原因,我们使用了一种有效的抗蛋白酶鸡尾酒,改变了免疫沉淀条件(4°C下1-14小时),并比较了各种裂解缓冲液(数据未显示),并证明中性粒细胞裂解液在这些条件下不能分解“添加”到样品中的CFTR蛋白。正如Painter所描述的,我们也无法在中性粒细胞TCA沉淀中证明CFTR蛋白GydF4y2Baet al。GydF4y2Ba14.GydF4y2Ba.我们的结果与Morris的一致GydF4y2Baet al。GydF4y2Ba13.GydF4y2Ba和DiGydF4y2Baet al。GydF4y2Ba33.GydF4y2Ba,但不是画家GydF4y2Baet al。GydF4y2Ba14.GydF4y2Ba;后者群报告了TCA中的CFTR蛋白在HL60细胞和人中性粒细胞的沉淀物中检测,目前我们无法解释这种差异,尽管中性粒细胞成熟度或制备技术的差异可能是相关的。GydF4y2Ba
如果在CF嗜中性粒细胞NADPH氧化酶没有主缺陷,还有哪些因素可以解释CF肺中嗜中性粒细胞未能杀灭致病微生物?杀死细菌是一个复杂的过程,都全身性炎症和CF肺微环境可能会影响细菌的生长和调制的先天免疫。全身性炎症可能由吸如上所述突发氧化修改CF循环嗜中性粒细胞,两者的功能,并且通过上调或下调细胞表面受体的表达。模式辨识受体的减少的表达Toll样受体(TLR)2已经报道来自CF患者的外周血嗜中性粒细胞,这与增加的全身性肿瘤坏死因子α相关,但对TLR表达更戏剧效果上看到transmigrated CF嗜中性粒细胞GydF4y2Ba34.GydF4y2Ba,提示继发于肺微环境中的因素的重要获取的效果。不同的研究小组报道无论是正常的GydF4y2Ba35.GydF4y2Ba或者有所减少GydF4y2Ba36.GydF4y2Ba分离外周血的能力CF中性粒细胞杀死GydF4y2Ba假单胞菌铜绿假单胞菌GydF4y2Ba体外GydF4y2Ba;重要的是,哈尔尔GydF4y2Baet al。GydF4y2Ba35.GydF4y2Ba还发现,从痰或支气管肺泡灌洗获得的CF中性粒细胞相对于来自健康受试者或外周血CF细胞的可比较细胞具有显着减弱的杀菌能力,强烈地暗示获得的而不是内在缺陷。GydF4y2Ba
气道表面液体(ASL)的组成在CF中深入地改变,具有改变的离子丝量和流体运输,有助于气道粘液脱水和粘蛋白转运受损。ASL中内源性抗微生物因子的活性受高离子强度抑制GydF4y2Ba37.GydF4y2Ba并且,CF ASL的抗菌活性也独立于离子强度的影响而受到损害GydF4y2Ba38.GydF4y2Ba.异常ASL /粘液组合物也可能损害中性粒细胞功能;报告了吞噬能力降低GydF4y2Ba13.GydF4y2Ba,也许与集中粘液施加的物理限制有关GydF4y2Ba39.GydF4y2Ba.GydF4y2Ba假单胞菌铜绿假单胞菌GydF4y2Ba(也许其他病原体)存在于CF气道中的生物膜GydF4y2Ba40.GydF4y2Ba而生物膜内的生物对抗生素和中性粒细胞的杀灭都具有抗性GydF4y2Ba41.GydF4y2Ba.据报道,rhamnolipid的核心感测控制释放诱导中性粒细胞坏死GydF4y2Ba42.GydF4y2Ba并且从坏死中性粒细胞释放的因素可能促进生物膜形成GydF4y2Ba43.GydF4y2Ba那GydF4y2Ba44.GydF4y2Ba建立一个有利于细菌持久性的恶性循环。令人沮丧或坏死中性粒细胞释放的其他因素也可能对其功能产生负面调节;已显示CF痰中的中性粒细胞衍生的蛋白酶,用于切割中性粒细胞CXC趋化因子受体1,致残TLR5介导的效应途径并损害杀伤GydF4y2Ba假单胞菌铜绿假单胞菌GydF4y2Ba35.GydF4y2Ba;最近人中性粒细胞肽以高浓度存在于CF痰液已被证明可以减少中性粒细胞的吞噬能力,肌动蛋白重塑和脱粒GydF4y2Ba45.GydF4y2Ba.重要的是,小鼠中钠通道ENAC的气道特异性过表达导致CF样肺病(包括粘液堵塞,中性粒细胞炎症和对细菌感染的易感性),表明这些变化可以通过加速NA产生GydF4y2Ba+GydF4y2Ba仅靠呼吸道运输GydF4y2Ba46.GydF4y2Ba.GydF4y2Ba
总之,我们已经证明,从临床稳定的CF患者中分离的循环中性粒细胞没有与匹配的健康对照的细胞不同,在其安装氧化爆发至可溶性或颗粒刺激的能力方面没有匹配的健康对照。肺部微环境中的全身炎症和因子可以调节中性粒细胞功能和先天免疫的其他方面,以损害宿主防御。靶向肺部微环境的治疗策略,如抗蛋白酶GydF4y2Ba47.GydF4y2Ba或调制Quorum感测的代理商GydF4y2Ba48.GydF4y2Ba那GydF4y2Ba49.GydF4y2Ba或生物膜形成GydF4y2Ba50.GydF4y2Ba,可能会增加促进天生免疫功能的处理GydF4y2Ba51.GydF4y2Ba.GydF4y2Ba
支持声明GydF4y2Ba
这项工作得到了CF Trust(英国),英国肺基金会,英国哮喘,剑桥NIHR生物医学研究中心和Papworth NHS信托研究和开发中心(英国剑桥)。GydF4y2Ba
兴趣表GydF4y2Ba
没有宣布。GydF4y2Ba
致谢GydF4y2Ba
作者谨此感谢R. HICKS(剑桥大学医学院,剑桥,英国)进行免疫荧光显微镜和FACS分析,J. Elliott(成人囊性纤维化中心,Papworth医院,剑桥,英国)数据库管理和N.Ktistakis(Babraham Institute,英国Babraham,Babraham,Babraham,英国)用于甘油醛3-磷酸脱氢酶和β-涂层蛋白抗体。GydF4y2Ba
- 收到了GydF4y2Ba2009年6月6日。GydF4y2Ba
- 公认GydF4y2Ba2009年10月7日。GydF4y2Ba
- ©ERSGydF4y2Ba
参考GydF4y2Ba
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