摘要
人鼻病毒(HRV)感染诱导上皮细胞的生产,可能有助于慢性阻塞性肺病(COPD)和哮喘的急性发作的发病趋化因子。吸烟是COPD的发展的主要危险因素,也加重哮喘症状。我们研究香烟烟雾提取物(CSE)是否通过改变HRV诱导上皮细胞趋化因子产生的轮廓调节病毒炎症。
用纯化的HRV-16和CSE检测人支气管上皮细胞和BEAS-2B上皮细胞系对CXC趋化配体(CXCL)8和CXCL10产生的影响。
CSE和HRV-16都诱导CXCL8的产生,当联合使用时,与单独的刺激相比,至少诱导CXCL8的添加剂产生。相比之下,CSE没有诱导CXCL10,并且明显抑制了hrv -16诱导的CXCL10的产生。CSE对hrv -16诱导的CXCL10的抑制作用至少部分是通过介导的,通过转录调控。CSE和HRV-16联合使用时,CXCL8的产生增加,这并不是因为转录调节,而是与CXCL8 mRNA的稳定有关。
因此,CSE差异调节hrv -16诱导的人气道上皮细胞趋化因子的产生,其方式可能有望改变炎症细胞的轮廓。
人鼻病毒(HRV)感染都是慢性阻塞性肺病(COPD)和哮喘加重的主要原因1。虽然HRV感染导致下气道疾病恶化的机制尚未完全阐明,但人们认为,气道上皮细胞的感染触发上皮反应,导致气道炎症的增加。支持这一观点的是,感染HRV的上皮细胞产生大量趋化因子、细胞因子和宿主防御分子2。几个这些趋化因子,包括CXCL8和CXCL10的,也都以增加的量过程中观察到的气道分泌物在活的有机体内HRV感染。在HRV感染与症状的严重程度都CXCL8和CXCL10互相关联水平3,4。CXCL8是嗜中性粒细胞的强效化学引诱物,并且在气道分泌物中性粒细胞数已显示与疾病严重程度相关的COPD和哮喘中的病毒发作五,6。CXCL10是活化的淋巴细胞和已连接到主机的抗病毒防御自然杀伤细胞的化学引诱物。
吸烟对气道生物学有深刻影响,是慢性阻塞性肺病发病的主要危险因素7。此外,约25%的哮喘患者吸烟8与不吸烟的哮喘患者相比,这些人的呼吸系统症状更严重,住院次数更多,生活质量下降9。此外,谁吸烟哮喘患者也比不吸烟的哮喘患者糖皮质激素治疗反应不足10。
有趣的是,已经报道的是,频率和病毒感染的严重程度是更大吸烟者与不吸烟者相比11,12。虽然一些研究调查了病毒和香烟烟雾的综合影响,迄今为止,还没有研究看着香烟烟雾到HRV感染上皮细胞反应的影响。进行了目前的研究,以确定是否,以及如何从人类呼吸道上皮细胞香烟烟雾调制HRV诱导趋化因子的生产。
材料和方法
物料
从指定的供应商购买以下试剂:支气管上皮细胞基础培养基(BEBM)和用于制作无血清支气管上皮细胞生长培养基的添加剂(BEGM;(美国马里兰州,沃克斯维尔,龙沙);汉克平衡盐溶液(HBSS), TRIzol试剂,胎牛血清(FBS;Invitrogen,伯灵顿,加拿大);DNase I (Ambion, Austin, TX, USA);TaqMan Master Mix, 20X甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH), RNase抑制剂和逆转录酶(Applied Biosystems, Foster City, CA, USA);萤火虫荧光素酶报告质粒pGL4碱性和被动裂解缓冲液(Promega, Madison, WI, USA);萤火虫荧光素酶检测试剂盒(Biotium Inc., Hayward, CA);选择性p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)抑制剂,SB203580(4-(4-氟苯基)-2-(4-甲基亚甲基苯基)-5-(4-吡啶基)1H-imadazole;美国新泽西州吉布斯敦Calbiochem公司; transIT-LT1 transfection reagent (Mirus, Madison, WI); antibodies against phospho-p38 and total-p38 (Cell Signalling Technology, Beverly, MA, USA). All other chemicals were purchased from Sigma-Aldrich (Oakville, ON, Canada).
病毒和细胞系
在BEAS-2B细胞系是从C·哈里斯(美国国家癌症研究所,贝塞斯达,MD,USA)的礼物。HRV 16型(HRV-16),HRV 1A型(HRV-1A),H1-HeLa细胞和WI-38细胞从美国典型培养物保藏中心(Manassas,VA,USA)购买。HRV-16病毒股WI-38细胞中增殖,而HRV-1A原液在H1-HeLa细胞繁殖。每个病毒原液纯化通过蔗糖密度离心以除去细胞传播的可溶性产物,如先前所描述13。如前所述,在接种WI-38或H1-HeLa细胞单分子层5天后,也测定病毒滴度13。
上皮细胞培养
从组织检索服务(国际研究所医学的进步,爱迪生,NJ,USA)获得了未用于移植正常人的肺。从卡尔加里大学(卡尔加里,加拿大)的两个交合健康研究伦理委员会和国际研究所的医学地位(爱迪生,NJ,USA)的内部伦理委员会获得伦理学批准接受组织。所有供体有负血清学为HIV-1/2,人嗜T淋巴细胞病毒(HTLV)-1/2,肝炎A,B和C,和梅毒。In the current study, lungs from 10 different donors (nine male, age range 18–56 yrs old) were used. Of these, six subjects died of cerebral vascular events and four from head trauma. Lungs were received within 24–36 h after surgical removal. Primary human bronchial epithelial (HBE) cells were obtained by protease digestion of dissected airways, as previously described14。HBE和BEAS-2B细胞在BEGM浸没培养在5%CO生长,并温育于37℃下2。原代细胞培养在2周内达到汇合,细胞的上皮性质用细胞角蛋白染色确认14。刺激前,将细胞在BEGM培养过夜从中除去氢化可的松,并用于所有实验这个平台。
制备香烟烟雾提取物
香烟烟雾提取物(CSE)中新鲜由以前发表的方法小的修改来制备15。In brief, crude CSE was generated by bubbling one research grade cigarette (3R4F, College of Agriculture Reference Cigarette Program, University of Kentucky, Lexington, KY, USA) per 4 mL of BEGM without hydrocortisone at a rate of 5 min per cigarette using a syringe apparatus. The crude CSE was filtered through a 0.22 μm filter and subsequently adjusted with medium to an absorbance of 0.15 at 320 nm. This solution was taken as 100% CSE. For experiments using aged CSE, the extract was prepared as described and left at 4°C for 24 h.
病毒感染和上皮细胞的刺激
感染BEAS-2B细胞用HRV-16在104.550%组织培养感染剂量(TCID50) U·mL-1(ph . 0.1的MOI), HBE感染了10个5.5TCID50 U·毫升-1(MOI∼1.0)。在HBE中使用更高的剂量以确保强有力的反应,因为已经表明,即使在高剂量的HRV下,不超过10%的HBE被感染16。感染是在存在或不存在CSE的情况下进行的。除非另有说明,所有实验均使用50% CSE进行。细胞在34℃5% CO中孵育2。同时使用3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基溴化四唑(MTT)和乳酸脱氢酶(LDH)测定法,测定暴露于HRV-16,CSE或组合细胞的活力。BEAS-2B cells were pre-incubated with the selective p38 mitogen-activated MAPK inhibitor, SB203580 (3 μM), or vehicle control (DMSO) for 1 h at 37°C before stimulation with HRV-16 and/or CSE.
多聚胞苷:多胞苷酸转染上皮细胞
Polyinosinic:polycytidylic acid (poly(I:C)) (0.1 μg) was transfected into cells in BEBM with no additives using TransIT. After 1 h, cells were washed with HBSS and cultured in medium with or without CSE for 24 h.
实时rt - pcr
real-time RT-PCR检测CXCL8和CXCL10 mRNA表达。对于每个样本,输入的400ng RNA被反向转录成互补DNA (cDNA),然后在特定引物和探针存在的情况下PCR扩增感兴趣的基因或管家基因GAPDH。前面已经描述了CXCL8和CXCL10的引物和探针序列4,17。在每种情况下,合成第一链cDNA的扩增子用于产生标准曲线,以允许mRNA的绝对定量。数据表示为校正在GAPDH水平的微小变化后,从标准曲线计算毫微微克或attograms。
CXCL8 mRNA稳定性研究
BEAS-2B细胞暴露于HRV-16, CSE或组合2 h和放线菌素D添加最后一个μg·10毫升的浓度-1。细胞RNA,然后在不同的时间对CXCL8 mRNA水平的分析分离。
酶联免疫吸附
CXCL8和CXCL10通过ELISA检测,使用符合制造商协议的匹配抗体对(R&D Systems, Minneapolis, MN, USA)。
CXCL8和CXCL10启动子结构
的972-bp的CXCL10启动子构建先前已经描述4。阿720-bp的CXCL8启动子构建体,对应于从-712的序列8(相对于转录起始位点)中的人基因CXCL8的5'侧翼区的,从基因组DNA使用正向生成5'-CGGGGTACCTATAGTCAGTCCTTACATTGC-3'和反向5'-CCCAAGCTTCTTATGGAGTGCTCCGGTGGC-3'结合的引物Kpn我和后III用于插入报告质粒的限制性位点(下划线)。这两个启动子都是在pGL4碱性荧光素酶基因上游克隆的。
瞬时转染和荧光素酶测定
CXCL8(0.2μg)或CXCL10启动子构建(1μg)转染到次级支流BEAS-2B细胞单层(40 - 50%),如前所述17。Cells were washed, stimulated with HRV-16, CSE or the combination for either 5 h (CXCL8) or 24 h (CXCL10) and luciferase activity was measured as described17。
Western blotting激活p38 MAPK
细胞提取、十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和使用phospho-p38 MAPK和total-p38 MAPK antibody (Ab)进行探针检测,如前所述17。
统计分析
正态分布数据分析使用配对t检验或与学生Newman-Keuls的单因素方差分析事后分析。对非正态分布的数据进行Kruskal-Wallis方差分析,并进行Wilcoxon配对符号秩和检验。为了确定HRV-16与CSE是否有协同作用,将单独使用HRV-16与单独使用CSE的总和与HRV-16+CSE进行比较。采用配对t检验或Wilcoxon配对符号秩检验来确定差异。有两个自变量的数据通过双向重复测量ANOVA和Bonferroni的多重比较进行分析事后分析。的p值<0.05被认为是显著。
结果
CSE不影响细胞活力或病毒滴度
单独或与HRV-16联合使用50%或更低浓度的CSE并不影响HBE或BEAS-2B细胞的生存能力(见补充材料中的图A)和LDH测定(数据未显示)。为了确定CSE对病毒复制的影响,将细胞单独暴露于HRV或HRV+CSE 1小时。细胞洗涤和新鲜的培养基,加入或不加入CSE。24 h后取上清液中病毒滴度,以Log TCID50表示,单独暴露于HRV-16(6.0±0.04)和HRV-16 + CSE(5.9±0.35)的细胞间差异无统计学意义。值是平均值±SEM的三个独立的实验(见在补充材料图B)。
CSE和HRV-16诱导CXCL8的产生
根据初步的时间过程研究(见补充材料中的图C),在刺激后5小时测量CXCL8 mRNA水平,而在刺激后24小时评估蛋白水平。单独的HRV-16和CSE分别诱导HBE的CXCL8 mRNA和蛋白(图1a和b)⇓)和BEAS-2B细胞(图1c和d⇓)。HRV-16和CSE联合诱导CXCL8 mRNA和蛋白水平明显高于单独刺激。在BEAS-2B细胞中,CSE和HRV-16联合诱导的CXCL8 mRNA和蛋白与单独的两种刺激相比具有协同作用(图1c和图d)⇓)。Synergistic induction of CXCL8 mRNA by HRV-16+CSE was also observed in HBE (fig. 1a⇓)。相比之下,CSE+HRV-16从HBE中产生的CXCL8蛋白并不显著大于对每个刺激单独反应的总和(图1b)⇓)。单独使用CSE或与HRV-16联合使用对CXCL8蛋白产生的影响是浓度依赖性的(见补充材料中的图D),但仅在50% CSE时才观察到协同诱导作用。
香烟烟雾提取物(CSE)和人鼻病毒(HRV)-16在气道上皮细胞中单独诱导CXC趋化配体(CXCL)8,至少联合诱导CXCL8增加。a)在人支气管上皮细胞(HBE)中5小时时测定CXCL8 mRNA水平;n = 10)细胞。b) HBE细胞24h时检测CXCL8蛋白水平(n = 9)。c)在BEAS-2B细胞中,5 h时测定CXCL8 mRNA水平(n = 6)。d) BEAS-2B细胞24h时检测CXCL8蛋白水平(n = 10)。#: HRV-16+CSE与单独各处理值之和有显著性差异。值是平均值±SEM。
CSE抑制HRV-16诱导的CXCL10表达
HRV-16诱导CXCL10 mRNA和蛋白在HBE和BEAS-2B细胞中的表达(图2⇓)。与此相反,单独CSE没有诱导生产CXCL10的从任一细胞类型,和CSE显着抑制HRV-16诱导的CXCL10 mRNA和蛋白表达。In HBE, both HRV-16-induced CXCL10 mRNA and protein were significantly inhibited (fig. 2a⇓在BEAS-2B细胞中,HRV-16诱导的CXCL10蛋白的产生也被显著抑制(图2d)⇓)。The CSE-mediated inhibition of HRV-16 induced CXCL10 mRNA expression in BEAS-2B cells (fig. 2c⇓),只是没有达到统计学意义(p = 0.054)。CSE对hrv -16诱导CXCL10的抑制呈浓度依赖性,CSE浓度低至0.005%仍能显著抑制hrv -16诱导CXCL10的产生(见补充材料中的图E)。
香烟烟雾提取物(CSE)抑制人鼻病毒(HRV)-16诱导的气道上皮细胞CXCL配体(CXCL)10。a) CXCL10 mRNA (n = 10)和b) CXCL10蛋白(n = 10)水平在人类支气管上皮细胞(HBE)中测定。c) BEAS-2B细胞24h时检测CXCL10 mRNA (n = 9)和d) CXCL10蛋白(n = 10)水平。#: HRV-16+CSE较单纯HRV-16有明显的抑制作用。值是平均值±SEM。
CSE还调制由HRV-1A诱导趋化因子生产
为了确定CSE对上皮趋化因子的病毒产生的影响是否在HRV-16中是唯一的,我们还使用了小群鼻病毒血清型,HRV-1A,作为BEAS-2B细胞的刺激因子。CSE还诱导CXCL8与HRV-1A联合诱导。与HRV-16一样,CSE抑制hrv - 1a诱导的CXCL10的产生(参见补充材料中的图F)。
CXCL8的诱导和CXCL10的抑制不受衰老CSE的影响
无论是新制备的CSE还是老化的CSE均可单独或与HRV-16联合诱导CXCL8蛋白的可比水平(图3a)⇓)。结合HRV-16协同诱导CXCL8使用时新鲜CSE或老化CSE。In addition, both freshly prepared CSE and aged CSE significantly inhibited HRV-16-induced CXCL10 to a comparable extent (fig. 3b⇓)。
![图3-](http://www.qdcxjkg.com/content/erj/35/6/1256/F3.medium.gif)
新鲜准备的效果与老化的香烟烟雾提取物(CSE)单独或与人鼻病毒(HRV)-16上CXC趋化因子配体(CXCL)8和CXCL10生产BEAS-2B细胞的组合。a) CXCL8 (n = 8) and b) CXCL10 (n = 8) protein levels were determined at 24 h.#: HRV-16+CSE或HRV-16+陈年CSE与单纯HRV-16有显著性差异。值是平均值±SEM。
CSE抑制HRV-16诱导的和聚(I:C)诱导的启动子CXCL10激活
为了确定CSE是否调节了hrv -16诱导的CXCL10转录,启动子-荧光素酶构建物进行了研究。正如预期,HRV-16诱导CXCL10启动子活性(图4a)⇓)。单独使用CSE并不能诱导启动子的激活,而且确实显著抑制了基础启动子的驱动。此外,CSE显著抑制HRV-16诱导的CXCL10启动子激活(图4a)⇓)。
香烟烟雾提取物(CSE)同时抑制人鼻病毒(HRV)-16诱导和聚肌苷:胞苷酸(聚(I:C)) - 诱导的CXC趋化因子配体(CXCL)10启动子的活化中BEAS-2B细胞。a) Cells stimulated with HRV-16, CSE or the combination (n = 14). b) Cells were transfected with poly(I:C) in the presence or absence of CSE (n = 6).#:与HRV-16 + CSE显著抑制与HRV-16单独或与聚相比(I:C)+ CSE与聚相比(I:C)单独。值是平均值±SEM。
我们之前已经证明,hrv诱导的CXCL10上皮细胞的产生依赖于病毒复制,以及合成的双链RNA (dsRNA;poly(I:C)是复制周期中产生的病毒dsRNA的仿制品,它也诱导CXCL10的产生4,18。聚(I:C)引起的严谨的生产CXCL10蛋白在两个HBE和BEAS-2B细胞,并在这两种细胞类型,CSE显著抑制这些响应(见图中的G补充材料)。CSE also significantly inhibited CXCL10 promoter activation induced by poly(I:C) (fig. 4b⇑)。
单独使用CSE不能诱导CXCL8启动子激活,也不能增强hrv -16诱导的CXCL8启动子激活
正如预期的那样,HRV-16单独激活了CXCL8启动子。令人惊讶的是,CSE不仅没有诱导CXCL8启动子激活,而且明显抑制了hrv -16诱导的启动子驱动(图5⇓)。
![图5-](http://www.qdcxjkg.com/content/erj/35/6/1256/F5.medium.gif)
与人鼻病毒(HRV)组合香烟烟雾提取物(CSE)-16不会增强CXC趋化因子配体(CXCL)8启动子活化的BEAS-2B细胞。将细胞用HRV-16,CSE或组合刺激。#: HRV-16+CSE较单纯HRV-16有明显的抑制作用。值是平均值±SEM(n = 6).
的CXCL8 mRNA的CSE和HRV-16的增加的稳定性的组合
初步数据显示,CXCL8稳态mRNA在刺激后2小时首次出现协同诱导(数据未显示)。因此,在添加放线菌素d之前,我们使用了2小时的暴露时间。在单独使用CSE或单独使用HRV-16的细胞中,CXCL8 mRNA衰减,在2 - 3小时内发生50%的损失(图6⇓)。However, in cells exposed to the combination of CSE and HRV-16, a significant stabilisation of CXCL8 mRNA was observed, such that there was no significant degradation of CXCL8 mRNA over the 3 h time period studied (fig. 6⇓)。
人鼻病毒(HRV)-16和香烟烟雾提取物(CSE)导致CXC趋化因子配体(CXCL)8 mRNA的BEAS-2B细胞的stabilsation的组合。Cells were stimulated for 2 h with HRV-16 (▴), CSE (○) or the combination (▪), and then actinomycin D (10 μg·mL-1)补充道。按所示时间提取细胞总RNA,并检测CXCL8 mRNA水平。数据在0时刻以CXCL8 mRNA在每个刺激中的百分比表示。#: HRV-16+CSE与单纯HRV有显著差异。值是平均值±SEM(n = 4)。
CSE单独或联合HRV-16对p38 MAPK通路的影响
抑制p38 MAPK通路可以减少HRV-16诱导的上皮细胞CXCL8的产生17和P38 MAPK通路已被链接到CXCL8 mRNA的稳定性19。与我们早期的研究一致,HRV-16诱导p38 MAPK的快速磷酸化17。与之前的报告一致20在BEAS-2B细胞中,CSE也适度地诱导了p38 MAPK的磷酸化。HRV-16和CSE联合诱导了p38 MAPK在30分钟的附加磷酸化(通过密度测量法评估),但是联合后的反应在后期的时间点上比附加的要小(图7a)⇓)。选择性p38 MAPK抑制剂SB203580在HRV-16和CSE联合作用下,显著抑制了CSE诱导的CXCL8蛋白的产生和CXCL8的产生(图7b)⇓)。
p38促分裂原活化蛋白激酶的活化(MAPK)途径和途径抑制上CXC趋化因子配体(CXCL)8在BEAS-2B细胞中产生的效应。一)将细胞暴露于培养基,香烟烟雾提取物(CSE),人鼻病毒(HRV)-16或用于次组合来表示,并使用特异性抗体来磷酸化p38 MAPK(代表三个独立的实验)进行探测。总p38蛋白进行测定,以确定相等的加载。b) Cells were incubated with stimulus alone (□) or in the presence of vehicle control (DMSO; ▒), or SB203580 (▪) for 1 h before stimulation with CSE, HRV-16 or the combination.#:显著抑制与刺激+ SB203580与单独的刺激相比较。值是平均值±SEM(n = 3)。
讨论
我们提供了明确的证据表明,CSE调节上皮细胞对HRV-16感染的反应。尽管之前有报道称CSE本身可以诱导上皮细胞产生CXCL821,我们的数据是第一次表明大于加诱导CSE和HRV感染的组合多。事实上,协同诱导被认为从HBE mRNA和从BEAS-2B细胞中的蛋白质的生产和mRNA。从呼包鄂蛋白释放未能实现协同效应显着,可能是由于个别初级HBE捐助者之间的可见范围广泛CXCL8蛋白的生产。相比之下,CSE不诱导从上皮细胞CXCL10的生产和显着抑制HRV诱导CXCL10生产。这些相互作用不是唯一用于HRV-16,作为CSE引起的由次要组血清型,HRV-1A感应趋化因子应答类似调制。如果类似的反应发生在活的有机体内, CXCL8的增加可能有利于气道中的嗜中性反应,并可能导致更糟的临床结果,因为气道嗜中性粒细胞数量与COPD和哮喘病毒加重期间疾病严重程度相关五,6。类似地,如果减少CXCL10的生产响应于香烟烟雾发生在活的有机体内,这也可能恶化临床结果。CXCL10是1型淋巴细胞和自然杀伤细胞的选择性趋化剂,在抗病毒防御中起作用,CXCL10水平在哮喘病毒加重时被诱导22,可能是由于主机抗病毒防御的一部分。虽然抗炎药物,如糖皮质激素23和宿主防御分子,诸如一氧化氮18,抑制HRV诱导上皮生产CXCL10的,这些处理还抑制了一系列其它细胞因子,包括CXCL8的。因此,CSE的差动作用是有点不寻常。它已经显示,CXCL10缺陷小鼠显示增加的病毒复制和死亡率响应于一些病毒24。在CXCL10因此,吸烟诱导的减少可能影响宿主的防御反对HRV。有趣的是,小鼠暴露于香烟烟雾和感染流感放映感染无烟雾暴露的动物相比,他们的肺部病毒增加滴度25。最近地表明CSE也减少脂多糖诱导上皮细胞生产的CXCL1026,提高,对细菌感染的宿主防御也可以通过香烟烟雾损害的可能性。
The ability of CSE to modulate HRV-16-induced epithelial chemokine production does not appear to be mediated by unstable, volatile components of CSE, as very comparable results were observed using CSE prepared 24 h prior to use. Interestingly, CSE was markedly more potent in suppressing viral induction of CXCL10 than in inducing or enhancing CXCL8 production, suggesting that different mechanisms may be involved. It is known that CXCL8 can be induced in epithelial cells by HRV-16 in a manner that does not require viral replication but involves direct signalling通过细胞内粘附分子(ICAM)-127。相比之下,hrv诱导的CXCL10的产生完全依赖于病毒复制4。然而,CSE抑制上皮细胞CXCL10的产生并不是通过对病毒复制的影响来介导的。CSE不仅不改变受感染细胞的病毒titres,而且合成dsRNA诱导CXCL10也被CSE抑制。CSE的作用至少部分是在转录水平上介导的,因为HRV-16感染和dsRNA暴露均可抑制CXCL10启动子的激活。有趣的是,在CSE存在的情况下,CXCL10启动子的基础激活也受到抑制。这表明,CSE要么诱导抑制基底层转录和hrv诱导转录的抑制因子,抑制由组成性激活转录因子触发的反应,要么直接影响基底层转录复合体。需要进一步的研究来阐明CSE对CXCL10的转录抑制机制。
虽然CSE增强二者CXCL8 mRNA和蛋白的表达上皮,它没有诱导启动子CXCL8活化,而且确实地抑制HRV-16诱导的启动子CXCL8驱动,尽管比稳态CXCL8 mRNA的添加剂感应越大。这表明,转录调控没有背后更比HRV-16和CSE协同诱导CXCL8的。这是公认,但是,CXCL8的表达也以mRNA稳定性的水平调节,并且它已被证明的是,p38蛋白激酶途径引线激活CXCL8 mRNA的稳定化19。我们证明了HRV-16和CSE联合治疗导致CXCL8 mRNA与单独刺激相比显著稳定。这两种刺激均诱导p38的磷酸化,并且在最早的时间点,这种结合刺激的诱导是附加的。HRV-16与CSE联合诱导在mRNA稳定后的后期作用减弱,这一事实提出了p38是否是调控mRNA稳定性的唯一机制的问题。但是,p38通路的选择性抑制降低了单独各刺激作用下CXCL8的产生,对CSE的影响显著,尤其是HRV与CSE联合作用下对CXCL8的产生影响显著,清楚地表明该通路在这些刺激作用下对CXCL8的协同诱导中发挥作用。
综上所述,我们首次证实CSE可以调节hrv诱导的气道上皮细胞趋化因子的产生。CSE与HRV-16结合至少可诱导CXCL8的添加性诱导,这种协同作用至少在一定程度上是在mRNA稳定水平上介导的,p38 MAPK通路也发挥了一定作用。CSE在抑制hrv -16诱导的CXCL10产生方面更有效,而且这种作用至少部分是在转录控制水平上介导的。还需要进一步的研究来进一步阐明CSE调节这些趋化因子的病毒诱导的机制。如果香烟以同样的方式调节病毒反应在活的有机体内,这将表明,患者谁抽烟会增加中性粒细胞和淋巴细胞减少人口的招募与不吸烟者相比。这种变化在炎性图案可能导致较低的气道疾病的恶化病情加重,如慢性阻塞性肺病和哮喘。
支持声明
(;渥太华,加拿大批准号43923),并从阿尔伯塔省和西北地区(埃德蒙顿,加拿大)的肺协会授予本研究由健康研究加拿大学院的资金支持。D.自豪的是一个加拿大研究主席的气道炎症性疾病的持有人。M. Hudy是阿尔伯塔省和西北地区的肺协会助学金的获得者。
利益声明
无声明。
脚注
这篇文章有补充材料可从www.www.qdcxjkg.com
- 收到了2009年8月13日。
- 公认2009年9月30日。
- ©ERS