抽象的gydF4y2Ba
病毒感染可导致哮喘加重。宿主对病毒感染的最早反应之一是产生先天细胞因子,包括I型干扰素(IFN),如IFN-β,它可能会改变气道炎症。本研究的目的是研究IFN-β是否改变内皮细胞的嗜酸性粒细胞黏附诱导活性。gydF4y2Ba
在存在或不存在肿瘤坏死因子(TNF)-α的情况下,用IFN-β刺激人脐静脉内皮细胞(HUVECS)24小时。从健康志愿者的外周血中分离出嗜酸性粒细胞。根据嗜酸性粒细胞过氧化物酶测定评估IFN-β刺激的HUVEC单层诱导嗜酸性粒细胞粘附的能力。gydF4y2Ba
在TNF-α存在下,IFN-β对Huvecs的嗜铬粒细胞粘附显着增强,但不在其不存在。通过抗-α抑制增强的粘附性gydF4y2Ba4gydF4y2Ba整联素单克隆抗体(MAB)或抗βgydF4y2Ba2gydF4y2Ba整合素马伯,IFN-β显著增强TNF-α存在下HUVECs血管细胞粘附分子-1和细胞间粘附分子-1的表达。gydF4y2Ba
干扰素-β主要通过表达血管细胞粘附分子-1和细胞间粘附分子-1来增强内皮细胞对嗜酸性粒细胞的粘附性。干扰素-β的这种作用可能有助于哮喘气道炎症的加剧,而气道炎症与病毒感染引起的急性加重有关。gydF4y2Ba
急性呼吸道感染通常在儿童和成人中患上哮喘恶化gydF4y2Ba1gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba3.gydF4y2Ba.哮喘的大多数哮喘发出的恶化是由病毒呼吸道感染诱导的,特别是鼻病毒感染诱导gydF4y2Ba4gydF4y2Ba.病毒性呼吸道感染加剧哮喘的机制是一种复杂的方法,可以通过增强的细胞因子,趋化因子和其他炎症分子产生调节gydF4y2Ba4gydF4y2Ba,gydF4y2Ba5gydF4y2Ba.有效的抗病毒免疫反应需要早期的病毒清除和其适当的终止,以尽量减少伴随的免疫病理学和组织损伤。最早的病毒感染的宿主反应之一是初始先天细胞因子的生产。这些细胞因子包括I型干扰素(IFNS),例如IFN-βgydF4y2Ba6gydF4y2Ba,gydF4y2Ba7gydF4y2Ba.wgydF4y2Ba等等。gydF4y2Ba7gydF4y2Ba最近报道,来自哮喘学的呼吸上皮细胞具有较低的IFN-β-产生能力,其与降低的透明病毒能力有关。由于IFNs对炎性细胞具有各种促炎动作,包括嗜酸性粒细胞,上皮细胞和内皮细胞gydF4y2Ba8gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba12gydF4y2Ba,理论上可以想象,这些细胞因子可以修饰和加剧气道疾病的炎症状态,包括病毒感染期间或之后的哮喘。gydF4y2Ba
嗜酸性粒细胞是哮喘患者气道中的炎性细胞,并且可能通过生产各种介质,该介导剂量是哮喘的发病机制,包括半胱氨酸(Cys)白酮(LT)和转化生长因子-βgydF4y2Ba11gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba14gydF4y2Ba.虽然中性粒细胞在病毒呼吸道感染诱导的哮喘发育中起中央作用,但临床数据支持嗜酸性粒细胞在病毒诱导的恶化和哮喘患者中增加的气道高响应性gydF4y2Ba15gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba17gydF4y2Ba.例如,在特应性哮喘患者中,鼻病毒(RV)16的实验感染增加了上皮嗜酸性粒细胞计数;这种增长似乎一直持续到康复期gydF4y2Ba15gydF4y2Ba.在确诊病毒感染的哮喘患者中,痰液嗜酸性阳离子蛋白(ECP)水平较高gydF4y2Ba16gydF4y2Ba.在Atopic轻度哮喘学中,随着ECP水平的增加,MESAMINE的增加的气道高反应性与MENP水平的增加以及鼻窦施用后RV16后诱导痰液中的嗜酸性粒细胞水平的变化gydF4y2Ba17gydF4y2Ba.嗜酸性粒细胞参与哮喘气道炎症的第一步是循环嗜酸性粒细胞粘附血管内皮细胞。一般认为,这一过程主要是由嗜酸性粒细胞整合素粘附分子(包括α)之间的相互作用介导的gydF4y2Ba4gydF4y2Ba整合素,如αgydF4y2Ba4gydF4y2BaβgydF4y2Ba1gydF4y2Ba(也称为CD49D,CD29或非常晚期激活抗原-4),和βgydF4y2Ba2gydF4y2Ba整合素,如αgydF4y2BalgydF4y2BaβgydF4y2Ba2gydF4y2Ba(CD11A / CD18 /淋巴细胞功能相关抗原-1)和αgydF4y2Ba米gydF4y2BaβgydF4y2Ba2gydF4y2Ba(CD11b / cd18 / macrophage-1抗原))及其反辅助配体(血管细胞粘附分子(Vcam)-1和细胞间粘附分子(ICAM)-1)在内皮细胞上gydF4y2Ba18gydF4y2Ba,gydF4y2Ba19gydF4y2Ba.gydF4y2Ba
本研究的目的是评估IFN-β是否改变嗜酸性粒细胞和内皮细胞之间的粘合剂相互作用。gydF4y2Ba
材料和方法gydF4y2Ba
试剂gydF4y2Ba
Percoll®是从Pharmacia(乌普萨拉,瑞典)获得的。抗CD16抗体涂层磁珠购自Miltenyl Biotec(Auburn,Ca,USA)。人脐静脉内皮细胞(HUVECS)和HUMEDIA例如购自Kurabo Industries Ltd(大阪,日本)。内皮细胞生长培养基购自克隆公司(Palo Alto,CA,USA)。Hanks'平衡盐溶液(HBSS),PBS和新生小牛血清(NCS)是从生命技术(纽约州,NY,USA)获得的。胎牛血清购自ICN Biomedicals Inc.(Aurora,哦,美国)。重组人(RH-)IFN-α,IFN-β,IFN-γ和肿瘤坏死因子(TNF)-α购自R&D Systems(Minneapolis,Mn,USA)。抗α.gydF4y2Ba4gydF4y2Ba- integrin单克隆抗体(mAb;克隆HP2 / 1)购自Cosmo Bio Co. Ltd(日本东京)。抗β.gydF4y2Ba2gydF4y2Ba-Integrin mab(克隆L130)购自Becton Dickinson(美国NJ,美国富兰克林湖)。鼠免疫球蛋白(Ig)G1购自ICN Biomedicals,Inc.抗p-Selectin糖蛋白配体(PSGL)-1(CD162)MAB(CLONE PL-1)购自Immunotech,Coulter公司(法国马赛马赛尔)。除非另有说明,否则其他试剂购自Sigma-Aldrich Co.(ST路易斯,莫,Mo,USA)。gydF4y2Ba
制备Huvecs.gydF4y2Ba
如前所述制备HUVECSgydF4y2Ba20.gydF4y2Ba.简而言之,将HUVECS孵育在IV型胶原蛋白涂覆的组织培养瓶上,直至汇合,转移到胶原蛋白涂覆的96孔组织培养板中,然后用IFN-β(30-1,000mP)和TNF-α的组合刺激10 PM)或IFN-β(30-1,000 pM)单独在5%CO中gydF4y2Ba2gydF4y2Ba在37℃下24小时。温育后,将孵育的混合物滗析,用HBSS洗涤HUVEC三次。在所选实验中,Huvecs在室温下在PBS中以100μl1%多聚甲醛固定15分钟,以阻断介质的合成。在HBSS中洗涤三次后,加入200μLHBS中的1%甘氨酸,并在环境温度下孵育1小时,以淬灭任何残留的多聚甲醛。然后将板倾析并在使用前在HBS中洗涤三次。gydF4y2Ba
嗜酸性粒细胞孤立gydF4y2Ba
按照阴性免疫磁珠选择法进行嗜酸性粒细胞分离,如前所述gydF4y2Ba21gydF4y2Ba.为了完成所有实验,嗜酸性粒细胞与42岁的健康志愿者的外周血中分离出来,年龄20-29岁,性分布平等。简而言之,用没有Ca的HBSS稀释肝素化血液gydF4y2Ba2+gydF4y2Ba然后用Percoll®(1.090 g·mL)离心gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba;700×gydF4y2BaggydF4y2Ba20分钟)。移除血浆,单核细胞带和Percoll®,通过低渗休克裂解颗粒中的红细胞。将得到的粒细胞在4℃的HBS中洗涤,其补充有2%NCs,然后在4℃下与抗CD16抗体涂覆的磁珠温育40分钟。将细胞通过磁场(Miltenyl Biotec)中的钢羊毛柱过滤,以除去与磁珠结合的中性粒细胞。收集CD16阴性嗜酸性粒细胞(> 98%纯度和> 99%的活力),洗涤,然后重悬于补充有0.1%明胶(HBSS / 0.1%明胶)的HBS中。gydF4y2Ba
嗜酸性粒细胞粘附gydF4y2Ba
如前所述,通过粘附的嗜酸性粒细胞的残余嗜酸性过氧化物酶活性来评估嗜酸性粒细胞对HUVECs的粘附gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba23gydF4y2Ba.简而言之,嗜酸性粒细胞(100μl1×10gydF4y2Ba5gydF4y2Ba细胞·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba在HBSS/0.1%明胶中)置于HUVEC单层膜上,37℃孵育30分钟。37℃HBSS洗涤5次后,在反应孔中加入100 μL HBSS/0.1%明胶。以100 μL连续稀释的细胞悬浮液(1×10gydF4y2Ba3.gydF4y2Ba,3×10gydF4y2Ba3.gydF4y2Ba1×10gydF4y2Ba4gydF4y2Ba,3×10gydF4y2Ba4gydF4y2Ba和1×10gydF4y2Ba5gydF4y2Ba细胞·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba)加入空洞中。这gydF4y2BaO.gydF4y2Ba-苯二胺(OPD)底物(1 mM OPD, 1 mM HgydF4y2Ba2gydF4y2BaOgydF4y2Ba2gydF4y2Ba然后将Tris缓冲液中的0.1%Triton X-100加入到所有孔中。在室温下孵育30分钟后,50μl4mhgydF4y2Ba2gydF4y2Ba所以gydF4y2Ba4gydF4y2Ba加入终止反应,测定490 nm处的吸光度。从对数剂量-反应曲线计算嗜酸性粒细胞粘附的百分比。通过排除台盼蓝染料测定,培养后嗜酸性粒细胞活力超过98%。gydF4y2Ba
VCAM-1和ICAM-1在HUVECs中的表达测定gydF4y2Ba
如前所述,通过细胞ELISA测定VCAM-1和ICAM-1的表达gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba,gydF4y2Ba24gydF4y2Ba.简而言之,将Huvec单层在96孔组织培养板中温育,然后用IFN-β(30-1,000mP)和TNF-α(10μm)或IFN-β(30-1,000μm)的组合刺激)在37℃下单独24小时gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba,gydF4y2Ba24gydF4y2Ba.在评估之前,HUVECs被清洗并在37°C中用阻断缓冲液(含5% NCS和3%脱脂奶粉的PBS)孵育30分钟。一抗(从R&D Systems获得)gydF4y2Ba即。gydF4y2Ba将抗icam -1 mAb(克隆BBIG-I1)、抗vcam -1 mAb(克隆BBIG-V1)和同型匹配的对照小鼠IgG1加入孔中,37℃继续孵育2 h。将HUVECs在阻断缓冲液中洗涤三次,并在孔中加入二抗(过氧化物酶偶联绵羊抗小鼠IgG)。孵育2小时后,用PBS清洗细胞三次。使用OPD底物在柠檬酸-尿素缓冲液中检测过氧化物酶结合物,检测程序与在嗜酸性粒细胞粘附试验中使用的程序类似。细胞中的VCAM-1或ICAM-1浓度以490 nm处的吸光度表示,并以实际值减去同型匹配对照小鼠IgG1的吸光度报告。gydF4y2Ba
统计分析gydF4y2Ba
值表示为平均值±gydF4y2Ba扫描电镜gydF4y2Ba.进行配对的T检验以进行两组,使用Scheffé常量的重复测量Anova进行比较超过两组。p值<0.05被认为是统计学上的显着性。gydF4y2Ba
结果gydF4y2Ba
IFN-β对嗜酸性粒细胞与内皮细胞黏附作用的影响gydF4y2Ba
我们进行了一系列初步实验,以确定IFN-β是否直接改变嗜酸性粒细胞的粘附性。用rh-IFN-β (30 - 1000 pM)刺激嗜酸性粒细胞,并检测其对HUVECs的粘附性。IFN-β没有改变粘附性(n = 5,数据未显示)。随后,在TNF-α存在或不存在的情况下,评估IFN-β改变内皮细胞与嗜酸性粒细胞黏附性的能力。在5% CO中单独使用IFN-β (30-1,000 pM)或IFN-β (30-1,000 pM)和TNF-α (10 pM)联合刺激HUVECsgydF4y2Ba2gydF4y2Ba在37℃下24小时,然后检查对Huvecs的嗜酸性粒细胞粘附。嗜酸性粒细胞粘附到休息和TNF-α(10 PM)的百分比分别为28±1.2和6.6±1.8分别为2.8±1.2和6.6±1.8;如预期的那样,通过TNF-α刺激增强对HUVEC的嗜酸性粒细胞粘附(P <0.01,n = 8)。单独的IFN-β(30-1,000 pM)刺激并未将Huvecs的粘合性修饰为嗜酸性粒细胞(n = 8;图1AgydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba).然而,IFN-β(300-1,000 PM)刺激显着上调了Huvecs在TNF-α存在下的嗜酸性粒细胞粘附能力(嗜酸性粒细胞的粘附:6.6±1.8%)gydF4y2Ba相对gydF4y2Ba14.7±3.5%〜300 pm(p <0.01)和14.8±3.1%(p <0.001);n = 8;无花果。 1b⇓gydF4y2Ba).在抗IFN-βmab的存在下未观察到TNF-α(下午300μm)的IFN-β(300μm)的粘合性,在抗IFN-βmab的存在下未观察到(在同种型匹配的对照小鼠IgG1存在下的嗜酸性粒细胞的粘附性:通过控制7.2±2.5%gydF4y2Ba相对gydF4y2Ba11.4±3.5%由300 pM IFN-β (p<0.01);抗IFN-β单抗组:对照组为7.8±3.1%gydF4y2Ba相对gydF4y2Ba8.6±3.2% by 300 pM IFN-β (p =无显著性差异(gydF4y2Bans.gydF4y2Ba));n = 5)。嗜酸性粒细胞对静息或TNF-α (10pm)刺激的HUVECs的粘附没有被抗ifn -β单抗修饰(数据未显示)。gydF4y2Ba
![图。1-gydF4y2Ba](http://www.qdcxjkg.com/content/erj/32/6/1540/F1.medium.gif)
干扰素(IFN)-β对a)缺失或b)肿瘤坏死因子-α(10μm)的嗜酸性静脉内皮细胞的嗜酸性粒细胞(EOS)粘附诱导能力的影响。对于每个条,平均值±gydF4y2Ba扫描电镜gydF4y2Ba8个使用不同捐赠者EOS的实验。* *: p < 0.01;* * *: p < 0.001。gydF4y2Ba
然后评估IFN-β培养时间对TNF-α (10 pM)刺激的HUVECs增强黏附性的影响。TNF-α (10 pM)刺激的HUVEC在IFN-β (300 pM)存在或不存在的条件下孵育一系列时间(1-24小时),然后清洗,评估HUVEC对嗜酸性粒细胞的粘附性。本研究发现,IFN-β (300 pM)增强的HUVECs对嗜酸性粒细胞的粘附作用出现在4 h,并持续到24 h(各时间点与前一个时间点比较p<0.05;n = 5;图2gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba).gydF4y2Ba
![图2-gydF4y2Ba](http://www.qdcxjkg.com/content/erj/32/6/1540/F2.medium.gif)
在有(烧嘴)或没有(300 pM)干扰素-β (300 pM)的情况下,肿瘤坏死因子-α (10 pM)孵卵时间(1-24小时)对人脐静脉内皮细胞诱导嗜酸性粒细胞(EOS)粘附能力的影响对于每个条,平均值±gydF4y2Ba扫描电镜gydF4y2Ba显示了五个使用不同捐赠者EOS的实验。*:与之前时间点比较p<0.05。gydF4y2Ba
为了检测HUVECs是否自行产生IFN-β,将HUVECs在TNF-α (10 pM)存在或不存在的情况下培养24小时,然后用ELISA检测上清液。这些HUVECs上清中未检测到IFN-β蛋白。gydF4y2Ba
抗粘附分子抗体对IFN-β增强嗜酸性粒细胞粘附的影响gydF4y2Ba
为了识别参与IFN-β增强嗜酸性粒细胞对HUVECs粘附的嗜酸性粒细胞粘附分子,嗜酸性粒细胞被抗β预处理gydF4y2Ba2gydF4y2Ba整合素MAB(克隆L130,小鼠IgG1,3μg·mLgydF4y2Ba−1gydF4y2Ba),抗αgydF4y2Ba4gydF4y2Ba整合素单抗(克隆HP2/1,小鼠IgG1, 3 μg·mLgydF4y2Ba−1gydF4y2Ba),抗PSGL-1(CD162)MAB(克隆PL-1,小鼠IgG1,3μg·mLgydF4y2Ba−1gydF4y2Ba)或同种型匹配的控制鼠IgG1(3μg·mlgydF4y2Ba−1gydF4y2Ba)在环境温度下15分钟。随后,用IFN-β(300mP)加TNF-α(10mM)或单独使用TNF-α(10 PM),刺激对Huvecs的嗜酸性粒细胞粘附。IFN-β(300μm)刺激在用鼠IgG1或抗PSGL-1 mAb预处理嗜酸性粒细胞时,Huvecs对嗜酸性粒细胞的刺激显着增加(P <0.01; n = 5;图3gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba).相反,IFN-β(300mP)对Huvecs的增强粘附对Huvecs的影响的影响受到抗β的显着抑制gydF4y2Ba2gydF4y2Ba整合素mab或抗αgydF4y2Ba4gydF4y2Ba整合素mab(图3gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba),建议这些整体素的计数器配体的角色,即ICAM-1和VCAM-1。抗βgydF4y2Ba2gydF4y2BaInfn-β(300μm)刺激的Ifn-β(300mP)刺激的嗜酸性粒细胞粘附增强嗜酸性粒细胞粘附是适度的,但仍然显着(通过TNF-α(10 PM)仅占效力(1.8±0.5%)gydF4y2Ba相对gydF4y2BaTNF-α(10 PM)加3.6±0.8%加IFN-β(300 PM);p = 0.03;n = 7;无花果。 3⇓gydF4y2Ba).相反,当用抗-α预处理嗜酸性粒细胞,IFN-β(300mP)刺激的Huvecs对嗜酸性粒细胞的增强粘合性并不重要gydF4y2Ba4gydF4y2BaInteglein MAB(4.4±1.1%由TNF-α(下午10点)gydF4y2Ba相对gydF4y2BaTNF-α (10pm) + IFN-β (300pm)组5.9±1.4%;p > 0.05;n = 7)。gydF4y2Ba
![图3-gydF4y2Ba](http://www.qdcxjkg.com/content/erj/32/6/1540/F3.medium.gif)
在干扰素(IFN)-β (300 pM)存在或不存在(□)的情况下,抗粘附分子抗体对肿瘤坏死因子-α (10 pM)刺激的人脐静脉内皮细胞的嗜酸性粒细胞(EOS)粘附的影响。对于每个条,平均值±gydF4y2Ba扫描电镜gydF4y2Ba显示了使用来自不同供体的EOS的七个实验。Ig:免疫球蛋白;psgl:p-selectin糖蛋白配体。*:P <0.05gydF4y2Ba相对gydF4y2Ba没有干扰素-β;gydF4y2Ba#gydF4y2Ba:P <0.05gydF4y2Ba相对gydF4y2Ba鼠IgG1。gydF4y2Ba
IFN-β对内皮细胞粘附分子表达的影响gydF4y2Ba
IFN-β无论是修改ICAM-1和VCAM-1对HUVEC的表达。Huvecs在存在或不存在TNF-α(10 PM)的情况下用IFN-β(30-1,000 pm)刺激24小时;然后通过细胞ELISA测定ICAM-1和VCAM-1的表达。在没有TNF-α的情况下,IFN-β(30-1,000 PM)修改了既不下VCAM-1的表达(图4AgydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)或ICAM-1(图4BgydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba).相反,IFN-β(300-1,000 PM)显着上调了VCAM-1对用TNF-α(10 PM)刺激的HUVEC的表达(吸光光密度(OD):单独的TNF-α0.026±0.003:0.026±0.003gydF4y2Ba相对gydF4y2Ba0.072±0.012 TNF-α + IFN-β (300 pM);p = 0.03;n = 6;图4gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba).类似地,IFN-β(30-1,000 PM)显着上调了ICAM-1对用TNF-α刺激的HUVEC的表达(OD:0.492±0.023单独的TNF-αgydF4y2Ba相对gydF4y2BaTNF-α(10 PM)加0.614±0.019加IFN-β(30 PM);P <0.01;n = 6;图4 bgydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba).最后,通过流式细胞术分析还确认了IFN-β对TNF-α刺激的Huvecs表达的IFN-β对TNF-α-刺激的HUVEC的影响。随后刺激300μm-β进行24小时,提高了VCAM-1和ICAM-1对用TNF-α刺激的HUVEC的表达(平均荧光指数为VCAM-1:24.4±8.5次控制gydF4y2Ba相对gydF4y2BaIFN-β22.7±16.5(P <0.01);通过中等控制ICAM-1:708.7±108.2gydF4y2Ba相对gydF4y2Ba1,450.7±144.5通过IFN-β(P <0.01);n = 4)。gydF4y2Ba
![图4-gydF4y2Ba](http://www.qdcxjkg.com/content/erj/32/6/1540/F4.medium.gif)
干扰素(IFN)-β对缺乏人脐静脉内皮细胞的血管细胞粘附分子(VCAM)-1(A和B)和细胞间粘附分子(ICAM)-1(C和D)表达的影响(A和C)或肿瘤坏死因子-α(10 PM)的存在(B和D)。对于每个条,平均值±gydF4y2Ba扫描电镜gydF4y2Ba展示了六个不同的实验。OD:光密度。* *: p < 0.01;gydF4y2Ba#gydF4y2Ba: p = 0.03。gydF4y2Ba
IFN-β-增强嗜酸性粒细胞对内皮细胞的粘附性的机制gydF4y2Ba
IFN-β可以触发来自内皮细胞的促炎介质的产生,因此可以增加嗜酸性粒细胞粘附性。为了证实这种假设,在TNF-α(10μm)存在下,用24小时的IFN-β(300μm)刺激Huvecs,然后用1%多聚甲醛固定。洗涤后,Huvecs用于评估嗜酸性粒细胞粘附性。即使在固定后,通过添加IFN-β增强的嗜酸性粒细胞的Huvec粘合性是显着的(单独的TNF-α的10.3±5.1%)gydF4y2Ba相对gydF4y2BaTNF-α加IFN-β14.2±5.3%;P <0.05;n = 6)。嗜酸性粒细胞可以通过与IFN-β刺激的HUVECS对VCAM-1或ICAM-1的相互作用来激活,因此可以以自分泌/旁静脉时尚增强它们的粘附性。例如,嗜酸性粒细胞能够产生CySLT,其可以增强嗜酸性粒细胞本身的粘合性。为了评估这种可能性,用Cyslt受体拮抗剂,蒙特洛斯特(1μm)预处理嗜酸性粒细胞,并评估在TNF-α存在下用或不刺激的HUVECS的嗜酸性粒细胞粘合性。Cyslt拮抗剂在TNF-α存在下没有衰减用或没有IFN-β刺激的HUVECs(没有IFN-β(单独的TNF-α):6.6±2.1gydF4y2Ba相对gydF4y2Ba对照7.5±1.5%gydF4y2Ba相对gydF4y2Bamontelukast(p = ns.gydF4y2Ba);使用IFN-β:10.5±1.5gydF4y2Ba相对gydF4y2Ba控制的11.9±2.1%gydF4y2Ba相对gydF4y2Bamontelukast(p = ns.gydF4y2Ba);n = 4;数据未显示)。gydF4y2Ba
各种IFN对嗜酸性粒细胞的内皮细胞粘合性的影响gydF4y2Ba
为了评价内皮细胞对嗜酸性粒细胞的粘合性是由其他类别的IFNS修饰的,用IFN-α,I型IFN或IFN-γ,II IIFN,在存在或不存在TNF的情况下处理HUVEC。α(10 pm)在37℃下24小时。因此检查了诱导的嗜酸性嗜酸性粒细胞粘附的能力。在没有TNF-α(10μm)的情况下,在300μm的IFNS(α,β或γ)中没有200μM改性Huvec粘合性。然而,IFN-α,IFN-β和IFN-γ(全300μm)显着增强了Huvecs在TNF-α(10PM的情况下的嗜酸性粒细胞粘附诱导能力(通过控制5.2±0.3%gydF4y2Ba相对gydF4y2BaIFN-α(P <0.05)的12.7±2.5%,IFN-β(P <0.05)和IFN-γ的12.1±2.1%(P <0.05);n = 4;无花果。 5b⇓gydF4y2Ba).三个IFN治疗组之间没有显着差异。最后,IFN-α,IFN-β和IFN-γ(所有300μm)在TNF-α(10 PM)存在下显着增加了VCAM-1和ICAM-1对HUVEC的表达,并且之间没有显着差异三组(P <0.01; n = 4;图5C-F.gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba).gydF4y2Ba
干扰素(IFN)-α,IFN-β和IFN-γ(全300μm)对嗜酸性粒细胞(EOS)粘附诱导能力(A和B)的影响及血管细胞粘附分子(VCAM)-1的表达(在肿瘤坏死因子-α的不存在(a,c和e)或(b,d和f)中的人脐静脉内皮细胞中的C和d)和细胞间粘附分子(ICAM)-1(e和f)(10 pM). For each bar, the mean±扫描电镜gydF4y2Ba四个不同的实验。OD:光密度。*: p < 0.05;* *: p < 0.01。gydF4y2Ba
讨论gydF4y2Ba
在本研究中,有证据表明IFN家族,包括IFN-β,增加了内皮细胞对嗜酸性粒细胞的粘附,这可能是哮喘患者气道嗜酸性粒细胞炎症的一种新的调节机制。虽然IFN-β本身并不能直接改变嗜酸性粒细胞的粘附性,但我们观察到IFN-β刺激内皮细胞可以增强TNF-α存在下HUVECs诱导嗜酸性粒细胞粘附的能力。单克隆抗体对IFN-β的中和作用表明内皮细胞对嗜酸性粒细胞的粘附增强是由这种细胞因子介导的。IFN-β的作用似乎涉及内皮细胞粘附分子的表达,这一结论可以从以下结果中得出。首先,抗α阻断了IFN-β刺激增强的嗜酸性粒细胞的粘附gydF4y2Ba4gydF4y2Ba整合素或反βgydF4y2Ba2gydF4y2Ba整合素抗体。其次,IFN-β显著增加了VCAM-1和ICAM-1的表达。虽然内皮细胞和嗜酸性粒细胞都可以产生改变嗜酸性粒细胞粘附性的介质,但IFN-β的作用在固定的HUVECs或嗜酸性粒细胞中被代表性的嗜酸性粒细胞衍生介质抑制剂处理。因此,目前的作者推测IFN-β主要增强了VCAM-1和ICAM-1的表达,并且这种作用也增强了嗜酸性粒细胞的粘附性。最后,本研究提供的证据表明,不仅IFN-β,而且IFN-α和IFN-γ也能增强内皮细胞对嗜酸性粒细胞的粘附。总的来说,当前的结果表明,当IFNs和TNF-α在气道中过量产生时,IFNs在嗜酸性粒细胞和内皮细胞之间黏附相互作用的发展中具有潜在的重要生物学作用。gydF4y2Ba
IFN家族的细胞因子具有免疫的重要作用。有证据表明IFN系列改变了粘附分子的表达或内皮细胞的增殖。本研究是第一个验证IFNS实际增加内皮细胞对嗜酸性粒细胞的粘附性的旨在验证。这种观察结果与先前关于IFN-β和人血管内皮细胞之间的相互作用的研究一致。例如,米勒gydF4y2Ba等等。gydF4y2Ba25gydF4y2Ba报道,IFN-β,但不是IFN-γ,适度增强了ICAM-1的表达。同样,Lechleitner.gydF4y2Ba等等。gydF4y2Ba11gydF4y2Ba报道,IFN-α和IFN-γ增强了转录水平的人类内皮细胞中的TNF-α诱导的转录和人类内皮细胞中的蛋白质表达gydF4y2Ba通过gydF4y2Ba核IFN相关因子-1依赖性途径。Kitayama.gydF4y2Ba等等。gydF4y2Ba26gydF4y2Ba据报道,用TNF-α和IFN-γ诱导嗜酸性粒细胞趋于嗜酸性粒细胞趋于嗜酸性粒细胞和嗜酸性粒细胞粘附的培养上清液主要是ICAM-1和VCAM-1的gydF4y2Ba通过gydF4y2Ba生成CCR3配体。最近,戈麦斯和莱科gydF4y2Ba27gydF4y2Ba提供证据表明IFNs可以刺激原代人内皮细胞的增殖,其作用可能归因于信号传感器和转录激活因子(STAT)3和STAT5的激活。这些报告和目前的观察表明,IFN家族增强内皮细胞的激活状态或黏附性,反过来,有助于过敏性疾病(如哮喘)患者气道中嗜酸性炎症的发展。gydF4y2Ba
对于嗜酸性粒细胞粘附,然后在内皮细胞上迁移,需要内皮细胞粘附分子。在本研究中,观察到通过抗-α抑制TNF-α存在下HUVECs对嗜酸性粒细胞的IFN-β-β-增强粘合性gydF4y2Ba4gydF4y2Ba整合素mAb或抗-βgydF4y2Ba2gydF4y2Baintegrin mAb(分别针对VCAM-1和ICAM-1的反配体的mAb)。虽然在TNF-α存在的情况下,IFN-β增强了VCAM-1和ICAM-1的表达,但IFN-β (300 - 1000 pM)对VCAM-1的影响与其对HUVEC嗜酸性粒细胞粘附性的影响一致(图1)gydF4y2Ba⇑gydF4y2Ba4,gydF4y2Ba⇑gydF4y2Ba).同时,低浓度IFN-β(≥30 pM;图4 bgydF4y2Ba⇑gydF4y2Ba).与ICAM-1相比,VCAM-1诱导嗜酸性粒细胞自发粘附的能力更强gydF4y2Ba28gydF4y2Ba.从这个角度来看,目前的结果表明,在用抗β处理后仍观察到嗜酸性粒细胞对Huvecs的IFN-β-β-增强粘附性gydF4y2Ba2gydF4y2Ba整合素马伯,相反,通过抗-α消除了嗜酸性粒细胞的增强粘附gydF4y2Ba4gydF4y2Ba整合素马伯,因此,可以推测VCAM-1优先于该系统中诱导增强的嗜酸性粒细胞粘附。gydF4y2Ba
病毒性呼吸道感染会导致支气管高反应性和加剧哮喘。一般来说,中性粒细胞在病毒感染诱导的哮喘恶化中起主要作用。然而,在某些条件下也可以增强嗜酸性炎症。临床数据支持嗜酸性粒细胞在病毒诱导的恶化和哮喘患者中增加的气道高反应性:具有RV16的实验性感染导致嗜酸性粒细胞和Acthmatics中的嗜酸性粒细胞和ECP水平增加。gydF4y2Ba15gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba17gydF4y2Ba.在患有呼吸道合胞病毒(RSV)支气管炎,ECP和LTC的婴儿gydF4y2Ba4gydF4y2Ba上气道分泌物中的水平显着相关gydF4y2Ba29gydF4y2Ba.在哮喘豚鼠模型中,副流感-3病毒呼吸道感染后气道反应性和气道嗜酸性粒细胞积累均增加gydF4y2Ba30.gydF4y2Ba.在小鼠中,RSV感染,它诱导由IFN-γ主导的免疫应答,导致气道高反应性和嗜酸性粒细胞流入气道gydF4y2Ba31gydF4y2Ba.gydF4y2Ba
wgydF4y2Ba等等。gydF4y2Ba7gydF4y2Ba哮喘患者的呼吸上皮细胞产生较低水平的IFN-β。他们证明,受感染哮喘细胞中受损的凋亡和增加的病毒复制均可通过外源性IFN-β恢复,这表明I型IFN可能用于治疗病毒诱导的哮喘加重。奥沙利文gydF4y2Ba等等。gydF4y2Ba32gydF4y2Ba据报道,厌氧皮质类固醇治疗减少了从轻度哮喘学中获得的支气管活检标本的层胶中表达IFN-β的细胞数。这些发现表明,哮喘患者气道中的内皮细胞可能暴露于哮喘中的IFN-β的相对较低浓度。然而,在本研究中,作者的重点是IFN-β的促炎症方面以及这种细胞因子在哮喘恶化中的可能作用。尽管其在抗病毒免疫中作用重要,但IFN-β可以增强气道炎症gydF4y2Ba通过gydF4y2Ba增强嗜酸性粒细胞粘附到内皮细胞。IFN-β对具有哮喘观察的各种临床病症可能是重要的。例如,在吸烟的情况下,增强了来自皮质类固醇治疗的哮喘学的气道白细胞的IFN-β的产生gydF4y2Ba33gydF4y2Ba.rödel.gydF4y2Ba等等。gydF4y2Ba34gydF4y2Ba证明了gydF4y2BaChlamydia肺炎gydF4y2Ba诱导支气管和血管平滑肌细胞在TNF-α存在下产生IFN-β。在这方面,TlibagydF4y2Ba等等。gydF4y2Ba35gydF4y2Ba报道TNF-α和IFN-β联合作用协同诱导人平滑肌细胞中CD38 mRNA和蛋白的表达。这两项研究与目前关于IFN-β和TNF-α相互作用的研究一致。目前尚无足够的临床证据表明IFN-β确实参与哮喘加重。然而,目前的作者推测,IFN-β对内皮细胞和嗜酸性粒细胞相互作用的影响可能是哮喘加重时气道炎症增强的一种机制。gydF4y2Ba
目前的研究结果为哮喘患者气道嗜酸性炎症的调控机制提供了新的见解,尤其是那些有病毒感染的患者。当被激活时,各种细胞,包括辅助t - 1细胞、上皮细胞和自然杀伤细胞,都能够在气道炎症部位产生干扰素。因此,内皮细胞很可能暴露在IFNs中,IFNs通过增强VCAM-1或ICAM-1的表达,至少部分地增强了其与嗜酸性粒细胞的相互作用。与VCAM-1或ICAM-1的相互作用可能增强嗜酸性粒细胞的效应功能,gydF4y2Ba例如gydF4y2Ba自由基氧气种类和Cyslts的生产gydF4y2Ba25gydF4y2Ba,gydF4y2Ba27gydF4y2Ba.嗜酸性粒细胞以自分泌和/或旁分泌的方式暴露于这些产品可能改变其功能。例如,新产生的囊性淋巴细胞增强了ICAM-1和嗜酸性粒细胞之间的趋化反应和相互作用gydF4y2Ba21gydF4y2Ba.氧代谢物,过氧化氢,进一步增强了嗜酸性粒细胞粘附性与ICAM-1gydF4y2Ba22gydF4y2Ba.因此,本研究证明IFN-β和其他IFN可以增强嗜酸性粒细胞和内皮细胞之间的粘合剂相互作用,通过它们与VCAM-1或ICAM-1的相互作用得到嗜酸性粒细胞的其它粘附依赖性效应器功能的所得到的。这些变化可能导致哮喘患者在气道炎症的最终表现。了解IFN-β介导的疗效的临床相关性可能对设计病毒性呼吸道感染诱导的恶化的哮喘患者的治疗策略具有重要意义。gydF4y2Ba
结论gydF4y2Ba
干扰素-β可以增加肿瘤坏死因子-α存在内皮细胞的嗜酸性粒细胞粘附活性,主要是通过增强血管细胞粘附分子-1或细胞间粘附分子-1表达。干扰素-β的这种作用又可以导致哮喘患者在与病毒感染诱导的恶化相关的哮喘患者中加剧气道炎症。gydF4y2Ba
感兴趣的语句gydF4y2Ba
没有宣布。gydF4y2Ba
- 已收到gydF4y2Ba2007年5月16日。gydF4y2Ba
- 接受gydF4y2Ba2008年6月12日。gydF4y2Ba
- ©ers Journals LtdgydF4y2Ba
参考文献gydF4y2Ba
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