摘要
内部钙的被动消耗2 +在气管平滑肌(ASM)中储存的钙激活非选择性阳离子通道(NSCCs),从而介导电容性钙2 +条目。然而,这些阳离子通道的单通道性质以及它们受到胞质钙的调控仍有待研究2 +水平([Ca2 +]我)仍然不清楚。
NSCC电流和[Ca2 +]我在被动消耗内部钙的过程中2 +在分离的牛气管肌细胞中监测储存。
带有1,2-bis(o-aminophenoxy)乙烷-N, N, N ', N '-四乙酸乙酰甲酯(BAPTA-AM)来还原[Ca2 +]我从而耗尽储存,增加基础Gd3 +-和La3 +敏感,2 +-渗透性NSCC电流。这种电流模拟了利用肌浆网钙引起的储存耗尽所引起的电流2 +泵抑制剂环吡胂酸(同时和短暂地提高[Ca2 +]我).两种干预都能激活约25 ps的NSCC,其性质与自发(基础)和bapta - am诱发的单通道电流相同。
总之,本研究提供了新的证据,表明在气道平滑肌中,镧敏感的25-pS非选择性阳离子通道是基础和存储耗尽诱发的膜电流的基础,并且这种电导可能有助于调节静息[Ca2 +]我和容性钙2 +条目。
激动剂介导的支气管收缩包括Ca的释放2 +来自肌浆网(SR)1- - - - - -4.负责存储再填充的机制尚不清楚,但似乎包括电压门控钙2 +渠道5,非选择性阳离子通道(NSCCs)1,6,7和/或反向态Na+/ Ca2 +交换8,9.由瞬时受体电位(TRP)家族的蛋白质形成的NSCCs已经得到了大量的关注,特别是那些“典型”或“经典”亚型(TRPC)的NSCCs。10- - - - - -12.
在气道平滑肌(ASM)中,有证据表明TRPC表达与Ca增强之间存在功能联系2 +涌入(即。容性Ca2 +entry (CCE))仍然很少。最近,白色et al。10研究表明,人ASM中内源性TRPC3表达的中断降低了静息细胞质Ca2 +浓度([Ca2 +]我)及CCE;间接药理学数据提示涉及非小细胞肺癌,但膜电流没有直接测量。事实上,只有少数研究直接检查了ASM中存储耗尽引起的膜电流1,7,13.因此,它们的单通道属性尚未得到解决也就不足为奇了。此外,以前的许多研究都是在释放储存钙的药剂存在的情况下进行的2 +(如。三磷酸肌醇,咖啡因)和/或抑制钙2 +被SR Ca再摄取2 +腺苷三磷酸酶(SERCA的;如。环匹二酸(CPA)7,14- - - - - -17.然而,这些方法提高了[Ca2 +]我4,14,这引发了一个问题,即这些电流是存储耗尽激活的,还是仅仅是Ca2 +由于已知ASM表达由升高的[Ca2 +]我2,6,18;事实上,CPA在离体牛气管平滑肌(TSM)细胞中激活全细胞NSCC电流的时间过程与[Ca2 +]我7.
为了更好地了解存储耗尽、NSCCs激活与[Ca]调控之间的关系2 +]我在ASM中,通过向细胞加载Ca,在sr消耗过程中激活NSCC电流2 +螯合剂,以(o-aminophenoxy)乙烷-N, N, N ', N '-四乙酸乙酰甲酯(BAPTA-AM)与CPA抑制SERCA比较。探讨了该电导的单通道特性,以及该Ca和其他Ca的贡献2 +-渗透性通道的中介钙2 +根据SR Ca进入2 +损耗。在这里,作者报道了SR Ca的耗竭2 +在存在或不存在胞质钙的情况下储存2 +瞬态激活一个~ 25-pS的NSCC,有助于静息[Ca2 +]我, CCE和可能的功能补充内部Ca2 +存储在ASM。
材料与方法
组织
所有实验程序均由麦克马斯特大学动物保护委员会(麦克马斯特大学,汉密尔顿,ON,加拿大)批准,并符合加拿大动物保护委员会(渥太华,ON,加拿大)制定的指导方针。
来自商业牛(136-454公斤)的气管从当地屠宰场获得,并在含有116 mM NaCl, 4.6 mM KCl, 2.5 mM氯化钠的冰冷克雷布斯溶液中运输2, 1.3 mM NaH2阿宝4, 1.2 mM MgSO4, 23毫米NaHCO3., 11 mM葡萄糖和0.01 mM吲哚美辛,用95% O起泡2/ 5%股份有限公司2以维持pH值7.4。ASM剥离上皮细胞和结缔组织,在4°C的Krebs溶液中维持48小时。
细胞隔离
牛TSM条在改良的Hank’s平衡盐溶液(含NaHCO)中轻轻搅拌20分钟3.,不需要acl2和MgSO4),含2 mg·mL−1胶原酶(Sigma blend type-F;Sigma-Aldrich, Oakville, ON, Canada), 250 μg·mL−1弹性蛋白酶(iv型)在室温(21-23°C),然后在37°C下额外20-40分钟。用宽口径移液管温和研磨分散细胞,离心并重悬于含130 mM NaCl, 5 mM KCl, 1 mM氯化钙的标准林格溶液中2, 1mm MgCl2, 20毫米HEPES, 10毫米葡萄糖和0.1毫米尼氟灭酸(Ca省略)2 +成像),并调整到pH 7.4与NaOH。
电生理学
将单个细胞粘附在记录室底部(1.5 ml体积),然后在室温(21-23°C)下灌注标准林格氏溶液。电生理反应在相密集和看起来放松的细胞中进行测试。平均电池电容为59±5pf (n = 13)。
使用标准膜片钳技术的制霉菌素穿孔膜片结构研究全细胞电流。尖端电阻为3-5 MΩ的移液器由硼硅酸盐玻璃制成。一旦串联电阻下降到30以下MΩ,尖端电位为零,电生理记录开始;70-80%的薪酬是常规的。用0 mV的保持电位灭活电压门控Ca2 +频道。全电池电流在1 kHz下低通滤波,在2.5 kHz下采样和数字化(DigiData 1200 A/D转换器;Axon Instruments,福斯特城,CA,美国)。
标准林格氏和钠电极与溶液之间的液结电位分别为3.5±0.3 mV (n = 6)和11±0.3 mV (n = 4)+分别为自由林格氏溶液;反转电位(Er)中所显示的数据未作校正,而在其他地方则按先前所述进行校正7.
尖端电阻为7-13 Mohm的移液管用于记录细胞上贴片的单通道电流。这些电流以5千赫滤波,采样并数字化(20千赫),并直接存储在本地硬盘上。通过将细胞灌注高摩尔KCl溶液(参见溶液和化学品部分),将膜电位设置为0 mV。为了离线分析和图形制作,单通道电流在500 Hz下进行滤波。为了评估单通道电流-电压(I-V)特性,将膜电位从-120 mV手动步进到60 mV。跨膜电位(V米)由方程描述:
V米= V细胞- v吸管(1)
在V细胞是细胞的膜电位和V吸管是记录移液管施加的电位。假设V细胞已被外部KCl溶液设置为0mv, V米V是负的吗吸管.向内的通道电流显示为向下的偏转,而向外的电流显示为向上的偏转。
(Ca2 +]我荧光测定法
单细胞用fluo-4 AM (2 μM;含有0.1% pluronic F-127)在37°C下浸泡30分钟,然后放置在有机玻璃®记录室中,用林格氏溶液灌注30分钟,以允许染料去酯化。如前所述,在室温(21-23°C)下进行共聚焦显微镜检查7.视频图像(600×400像素;Video Savant 4.0;IO Industries, London, ON, Canada)以1帧·秒生成−1对于咖啡因反应和0.1帧·s−1对于所有其他的回答。计算每一帧细胞中央非核区域中定义的感兴趣区域(30×30像素)的平均荧光强度,并随时间绘制。[Ca。2 +]我用荧光变化(ΔF)比初始/基线荧光(F0)在1.8 mM细胞外Ca的存在下观察2 +.咖啡因直接作用于细胞通过由压力喷射系统(Picospritzer)驱动的移液器TM二世;通用阀门,费尔菲尔德,新泽西州,美国)。
溶液和化学品
所有药物和试剂均来自Sigma-Aldrich (Oakville, ON, Canada)。Ca2 +含130mm NaCl, 5mm KCl, 1mm MgCl2, 20毫米HEPES, 10毫米葡萄糖,0.01毫米EGTA和0.1毫米尼氟灭酸(Ca省略)2 +-imaging),用NaOH调整到pH 7.4。Na+游离林格氏溶液为140mmN甲基-d-葡萄糖胺(NMDG), 5毫米氯化钾,1毫米氯化钙2, 1mm MgCl210毫米HEPES(用氢氧化钠调至pH 7.4), 10毫米葡萄糖和0.1毫米尼氟灭酸,用盐酸调至pH 7.4。高摩尔氯化钾溶液含126mm氯化钾,1.5 mM氯化钙2, 1mm MgCl210毫米HEPES, 10毫米葡萄糖和0.1毫米尼氟灭酸调整到pH 7.4与氢氧化钠。
用于测量全细胞电流的细胞内电极溶液中含有130 mM CsCl, 5 mM MgCl2, 1mm CaCl2, 10毫米HEPES和5毫米EGTA,调整pH值7.2与CsOH。这些药理学和离子条件消除了通过Ca的电流2 +端依赖Cl-和K+频道。细胞内记录的标准电极溶液为126 mM NaCl, 1.5 mM氯化钙2, 10毫米HEPES和10毫米葡萄糖,用NaOH调整到pH 7.4。对于high-Ca2 +电极溶液中,NaCl被70 mM的CaCl取代2.在所有电池电极溶液中分别添加10 mM四乙基氯化铵、5 mM 4-氨基吡啶、100 μM尼氟灭酸和1 μM硝苯地平抑制钾+- Cl--和电压门控Ca2 +频道。
用于全细胞记录的制霉菌素在二甲基亚砜(DMSO;30毫克·毫升−1)保存5天,稀释至最终浓度为300 μg·mL−1每天在电极溶液中。试剂溶解在水介质中(用于Gd3 +拉3 +,咖啡因)或DMSO(用于CPA, BAPTA-AM, fluo- 4am,硝苯地平);所有情况下,浴液中DMSO的终浓度均≤0.001%。
数据分析
全细胞电流记录在用药前和用药期间立即获得,每个细胞作为自己的对照。在使用通道抑制剂的研究中,报告的数据为在基线电流减去之前BAPTA-AM诱发电流的抑制百分比。
从原始迹线的0.5 - 2秒剖面构建单个斑块的单位电流振幅直方图。在至少三种不同的膜电位下测量单个斑块的单位通道电流幅值,绘制了I-V关系,并绘制了单位电导和Er然后使用线性回归(最小二乘方法)计算单个斑块。平均单位电导和Er由各个斑块的平均值确定。
所有数据均以均数±表示扫描电镜, n值表示试验动物数量;采用配对或非配对t检验或单因素方差分析进行比较,p值<0.05为显著性。
结果
存储耗尽协议对[Ca2 +]我和SR Ca2 +内容
(Ca2 +]我使用10秒的10 mM咖啡因引起的反应作为SR Ca的指标2 +内容。在1.8 mM细胞外Ca存在的情况下2 +每隔5分钟,重复的咖啡因刺激会引起可重复的瞬态[Ca2 +]我标高(图1a-d⇓).相反,Ca2 +游离林格氏溶液10分钟,降低基线[Ca2 +]我(ΔF / F0= -15±3,n = 35;P <0.001),并使咖啡因诱发的瞬变强度降低52±13% (n = 9;p = 0.027)2 +进入是维持休息所必需的[Ca2 +]我和SR Ca2 +装载。l型钙2 +钙通道不介导基底钙2 +由于1 μM硝苯地平没有显著降低基线荧光(ΔF/F0= 0.6±0.6,n = 10,数据未显示)。
贮藏耗竭对胞质钙的影响2 +肌浆网钙2 +浓度。a-d)说明细胞外Ca去除效果的代表性荧光痕迹2 +(0 Ca2 +;░),同时添加或不添加:c) 10 μM BAPTA-AM(▒)或d) 10 μM cyclopiazonic acid (CPA)作用于胞质Ca2 +10 mM咖啡因引起的浓度瞬变(10 s的应用;▓)。咖啡因(caff)反应平均数据表示为:e)荧光变化(ΔF)/基线荧光(F0)对咖啡因的初始反应(C最初的;░;#在a-d)和最终响应(C最后;▒;¶a) d)和f) C最后/ C最初的对于对照细胞(n = 10), 0 Ca2 +(n = 9), 0 Ca2 ++ BAPTA-AM (n = 10)和0 Ca2 ++ CPA (n = 8)。····:0。*: p<0.05与同组初始反应,配对双尾t检验;# #: p<0.05为单因素方差分析与控制。§: p = 0.028;ƒ: p = 0.03。
CPA和BAPTA-AM (10 μM)均能进一步还原SR Ca2 +咖啡因诱发[Ca2 +]我与去除细胞外钙相比,反应减少的程度要大得多2 +单独(图1a-d)⇑).在细胞外钙缺乏的情况下2 +, CPA的应用引起了短暂的荧光上升,随后在10分钟内持续下降到药物前的水平(图2⇓);的上升2 +]我可能反映Ca2 +SR泄漏通过ryanodine受体,而回归基线涉及Ca2 +挤压通过质胚Ca2 +泵4,5,14,19.相比之下,去除外部Ca后用BAPTA-AM处理细胞2 +导致[Ca .]的进一步下降2 +]我在10-15分钟内稳定(图2)⇓).
![图2 -](http://www.qdcxjkg.com/content/erj/32/6/1529/F2.medium.gif)
胞质钙变化的代表性痕迹2 +浓度(Ca2 +]我去除细胞外Ca2 +(0 Ca2 +;░),然后抑制肌浆网钙2 +ATPase与10 μM环piazonic acid (CPA)或10 μM BAPTA-AM被动加载。c) [Ca2 +]我(n = 12-35)。····:0。*: p<0.05, [Ca .2 +]我从基线开始(F0).#: p<0.05与0 Ca2 +,单向方差分析。
加载BAPTA-AM激活牛TSM细胞中的NSCC
在电压钳下的细胞中,在-60 mV时观察到一个小的膜电流,平均振幅为-82±19 pA。BAPTA-AM显著增加了该电流的振幅,在>30分钟内保持稳定(图3⇓).从- 80mv到60mv的电压阶跃(10mv的增量,200ms的持续时间,从0 mV的保持电位)所引起的电流,除了极负的电位外,几乎没有时间依赖性的激活,并且在电压阶跃的200ms周期内没有失活(图3)⇓).基线膜电流和bapta - am诱发电流的稳态I-V关系均与E呈线性关系r分别为5.4±2.2 mV和-1.5±1.5 mV (n = 14;图3⇓).使用斜坡电压命令获得的瞬时i - v(-100到80 mV,持续2秒,从0 mV的保持电位)是相同的(cf.图4 d⇓).
BAPTA-AM的存储损耗增加了基础非选择性阳离子通道电流。在(a)和(b)应用10µM BAPTA-AM之前和之后,由电压阶跃脉冲(200 ms持续时间,10 mV增量,如图d所示)从0 mV的保持电位中产生的膜电流的代表性痕迹;电流的差异也显示在(c)。e)在(•)之前和应用BAPTA-AM期间获得的平均电流(〇;n = 13)。f)应用BAPTA-AM前和应用期间的差异(□)。····:0。
去除外源钠的效果+基础和bapta - am诱发的非选择性阳离子通道电流。a) bapta - am诱发的全细胞电流时间过程(▒)。当电压步进电池从0 mV的保持电位升至-60 mV时观察到的平均电流(持续时间为200 ms,间隔时间为10 s)。细胞外钠+(流量为~ 3ml·min−1)被等摩尔取代N甲基-d-glucamine (NMDG;░)。B) a所示的电池在时间点上的电流轨迹#,¶,+而且§.c)平均基础(□,n = 5)和bapta - am诱发(▒,n=4)在(-)和(+)替换细胞外Na之前和之后的-60 mV电流+(0 Na+).D)基础的;ƒ)和bapta - am在Na存在时诱发膜电流+(¶¶)或以“NMDG”代替(# #)从单个电池中获得,在2秒内使用从-100 mV到80 mV的电压斜坡进行研究。····:0;------:基础电流。*:去除Na后p<0.05+;#: p<0.05,单因素方差分析与控制。
细胞外钠的置换+NMDG显著降低了依赖于bapta - am电流的内向部分(图4⇑),因此I-V关系最好用二次方程和Er从-3.8±2.4 mV位移到-21±1.2 mV (n = 4),位移为-17 mV(95%置信区间(CI)为-13 - -21 mV)+是这种电导的主要载流子。
接下来,通过在沐浴介质中添加阻滞剂来检测bapta - am激活电流在这些细胞中的药理学(结果汇总在表1中)⇓).拉3 +在几种ASM制剂中抑制CCE10,16,20.,减少了bapta - am引起的膜电流,但没有改变Er(图5⇓);这种效应是浓度依赖性的,而且不可逆。或者,10µM Gd3 +(它已被广泛用于几种平滑肌细胞类型的NSCCs和CCE的抑制剂21- - - - - -23)对bapta - am诱发电流的影响很小,尽管100µM引起了明显的不可逆抑制(图5)⇓).
La阻断bapta - am诱发的全细胞电流3 +和Gd3 +.a) La抑制bapta - am诱发(▒)膜电流的时间过程3 +或b) Gd3 +在两个独立的牢房里。由电压步进单元在10秒间隔内引起的-60 mV的向内膜电流振幅如图所示(•)。在两个独立的细胞中使用电压斜坡研究了膜电流的代表性痕迹。c)拉3 +d) Gd3 +经10 μ M BAPTA-AM膜电流激活后,加入到浴液中。
细胞附着的斑块显示自发的单通道活动
为了更好地理解在牛TSM细胞中介导静置和存储耗尽引起的全细胞膜电流的通道的性质,研究了从细胞附着斑块记录的单通道事件。使用high-K+钳V的菱格解米大约0 mV和含有126 mM NaCl和1.5 mM Ca的移液管溶液2 +,在正跨膜电位和负跨膜电位时记录离散单通道开口(图6a)⇓).在18个被检查的细胞中,有8个细胞的自发事件足够频繁,可以分析单位电流振幅;自发单通道电流的I-V关系与E的斜率电导关系为26±0.3 pSr= -2±3 mV (n = 4;图6 e⇓).当用含有70毫米氯化钙的贴片移液管研究时2边坡电导基本不变(24±2 pS)r左移-14 mV (p = 0.024, n = 4;图6 e⇓),表明其对Na的渗透性较高+.
自发单一性非选择性阳离子通道事件的性质。a)在细胞附着的斑块(126 mM NaCl)中观察到自发单通道电流的代表性痕迹2电极)在不同的电位。——:通道关闭状态;- - -:预测打开状态。(a)中b) 60 mV, c) -60 mV和d) -100 mV所示数据的所有点直方图。e)用含有126 mM NaCl的移液器研究的自发单通道电流的平均电流-电压图(•;n = 4)或70 mM CaCl2(○;n = 4)。····:0。
CPA和BAPTA-AM在先前静止的斑块中唤起单通道活动
在表现出很少自发单通道活性的膜补丁中,10µM CPA或10µM BAPTA-AM处理显著增加了单通道事件的数量(图7和图8)⇓).这些单一事件的I-V关系本质上是线性的,斜率-电导分别为23±1和26±1 pS, ErCPA (n = 7)和BAPTA-AM (n = 3)分别发生在-5±3和-6±1 mV (126 mM NaCl电极和140 mM KCl浸泡液;图8⇓).当用70毫米的氯化钙研究时2移液管溶液,斜率电导和Erpa诱发的单通道电流分别为20±1 pS和-10±5 mV (n = 3)。自发的、CPA-和bapta - am诱发的单通道电流性质的相似性,以及它们的I-V关系与整个细胞电流的相似性,表明相同的NSCC构成了这三者的基础。
环piazonic acid (CPA)和bapta - am诱发单通道电流的性质.在跨膜电位为-60 mV时,10µM浴液(箭头)诱导的单通道膜电流的代表性痕迹a) CPA或c) BAPTA-AM。500毫秒的部分(#,¶)的记录分别在b)和d)中展开,用于CPA和BAPTA-AM。——:通道关闭状态;- - -:预测开路状态。移液管含有70毫米氯化钙2(a, b)和126 mM NaCl (c, d)。
用含有126 mM NaCl的移液管测量a)环丙酸(CPA)和b) bapta - am诱发的单通道电流的平均电流-电压图(•;对于CPA和BAPTA-AM, n = 7和n = 4)或70 mM CaCl2(○;n = 3)。
讨论
在许多平滑肌细胞类型中,激动剂释放Ca2 +从细胞内Ca2 +商店6,16,23.随后恢复[Ca .2 +]我包括SERCA的再摄取以及质质Ca从细胞中挤出2 +泵和/或Na+/ Ca2 +换热器。因此,必须有适当的机制来补偿细胞钙的净损失2 +以避免库存完全耗尽。在ASM中,似乎由NSCCs介导的CCE可能涉及1,5,7,13;然而,关于这些通道的电生理特性、调控和生理作用仍有许多尚未解决的问题。本研究考察了通过细胞内钙螯合或存储耗尽激活的膜电导的性质2 +与BAPTA或抑制SERCA合并CPA。此外,该通道在调节[Ca2 +]我还检查了CCE,目的是更好地了解ASM中CCE的离子机制。值得注意的是,提出了关于这种电导的单通道特性的新数据。
许多分离的牛TSM细胞在静止时显示NSCC电流(即。,在储存耗尽之前);这已经在前面描述过了7.ASM中的NSCCs,是否被g蛋白偶联受体刺激激活6或SR Ca的被动消耗2 +(目前的研究及7),对Na具有高渗透性+,传导显著的向内钠+通过一系列生理相关膜电位的电流(如。-60至-30 mV)。在本研究中,大部分基线和bapta - am诱发的NSCC电流也依赖于细胞外钠+(图4⇑).这些通道也已知传导钙2 +.尽管一项估计发现这只占总电流的14%,但足以维持[Ca2 +]我2,6.其他人已经证明了组成活性,硝苯地平不敏感Ca2 +牛TSM的内流通路,推测这可能与牛TSM的静息[Ca2 +]我约100-150 nM14,20..CPA增强Ca2 +可能是通过激活Ca进入其他几种ASM制剂2 +透水NSCCs10,15,16,24.从兔门静脉分离的平滑肌细胞中也描述了基础NSCC电流25耳动脉26还有冠状动脉22以及大鼠肺动脉27.
存储操作的NSCC电流激活的信号通路尚不清楚。在本研究中,g蛋白偶联受体信号通路对NSCC激活不是必需的,因为单独用BAPTA-AM或CPA治疗就足够了,尽管这种电流可能通过血管平滑肌中二酰基甘油-蛋白激酶c依赖机制调节28不能排除。而且,尽管Ca2 +已在马身上描述了NSCC电流的依赖性促进作用2,6和猪18TSM,该通道仅受Ca监管的可能性2 +或Ca2 +-依赖机制是不太可能的,因为CPA引起了[Ca2 +]我7而BAPTA-AM抑制[Ca2 +]我.
在兔门静脉肌细胞中,自发的和存储耗尽激活的单通道事件表现出相同的性质,包括单位电导,Er也意味着开放时间,这表明两种洋流都有相似的通道25.为了确定ASM中是否存在类似的机制,在CPA或BAPTA-AM被动存储耗尽之前和期间都进行了单通道电流的单元测量。在所有检查的细胞附着斑块中,都有自发的单通道活性的证据(约44%表现出强烈的活性),这归因于NSCC,因为电导可渗透到Na+和Ca2 +这个膜通过Ca2 +监管Cl-通道,电压操作K+渠道,2 +监管K+通道和电压操作Ca2 +通过实验设计消除了通道。CPA或BAPTA-AM的应用极大地增加了观测到的单一信道事件的频率和数量;单通道分析表明,这是由一个约25 pS的单位电导介导的。镧系元素Gd3 +和洛杉矶3 +在一些组织中抑制cpa激活的膜电流和/或CCE16,21,27.在本研究中,应用10 μ M和100 μ M La3 +以剂量依赖的方式可逆地抑制bapta - am诱发电流。该电流也被发现在很大程度上抵抗10µM Gd3 +,虽然100µM Gd3 +导致了80%的显著减少。与La相比3 +,抑制作用需要几分钟才能充分发挥,并且是不可逆的。类似地,细胞外Gd3 +不可逆地阻断中国仓鼠卵巢细胞的TRP3电流29;该研究的作者推测Gd的抑制动力学3 +在完整的细胞中依赖于该阳离子的摄取和挤压速率,因为中位有效浓度(EC50)较低,抑制速率较快3 +应用于通道的胞质面。
而另一些研究表明,具有类似性质的25 pS NSCC (即。,单位电导,灵敏度为1mm La3 +, Gd3 +和100 μ M SKF 96365)在分离的人BSM中被白三烯激活,其在介导CCE中的作用未被特别研究3..因此,目前在牛tms中发现一个~ 25ps通道是CPA-和bapta - am诱发的NSCC电流的新发现。本文所描述的电导的大小比报道的血管平滑肌细胞中存储耗尽激活的NSCCs大10倍25,30.,31;不能排除小电导NSCCs隐藏在录音中固有噪声中的可能性。NSCC的参与解释了为什么Ca2 +CPA诱导的侵入对硝苯地平具有耐药性(图6⇑).Bazan-Perkinset al。20.发现Ca2 +SR Ca耗尽后进入牛TSM细胞2 +耐D600。同样,在豚鼠TSM中,SR Ca耗竭2 +SERCA抑制剂thapsigargin诱导[Ca2 +]我以及依赖于细胞外钙的收缩2 +,被倪所抑制2 +和SKF 96365,而不是硝苯地平15,在乙酰胆碱敏感储存耗尽时,在大鼠基底外侧膜也观察到类似的结果1.
综上所述,本研究作者认为,在牛气管平滑肌细胞中加载BAPTA-AM(以减少胞浆Ca2 +浓度,从而耗尽储存)增加基础,Ca2 +-渗透性非选择性阳离子电导,均为Gd3 +-和La3 +敏感。此外,目前的研究结果表明,在该组织中,约25ps的非选择性阳离子通道是基础的、环piazonic acid-和bapta - am诱发的膜电流的基础。此外,这些数据表明,非选择性阳离子通道有助于调节胞质钙2 +钙离子的浓度和肌浆网的再填满可能与钙离子的容量性有关2 +观察到气道平滑肌进入。
支持声明
这些研究得到了加拿大卫生研究院(MOP 15561)和安大略胸科学会的运营拨款和职业奖(L.J. Janssen)的支持。
权益声明书
两位作者的兴趣声明可以在www.www.qdcxjkg.com/misc/statements.shtml
- 收到了2008年4月9日。
- 接受2008年6月26日。
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