文摘gydF4y2Ba
特发性肺动脉高压(IPAH)是一种致命的疾病的特点是高血压肺循环。最初的血管收缩,增加肺动脉平滑肌细胞(PASMC)和增加细胞外基质(ECM)的沉积导致病态改造IPAH肺小动脉。粘多糖(笑话),ECM组件,控制细胞的增殖和分化,但他们表达IPAH仍然遥遥无期。gydF4y2Ba
在目前的研究中,插科打诨表达了IPAH或控制患者的肺移植捐赠者,表达和本地化GAG-metabolising酶进行分析gydF4y2Ba在活的有机体内gydF4y2Ba和gydF4y2Ba在体外gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
显著增加透明质酸(HA)的表达中检测出IPAH肺,增加透明质酸合酶(gydF4y2Ba有gydF4y2Ba)gydF4y2Ba1gydF4y2Ba和减少hyaluronoglucosaminidase 1基因表达,所评估的定量rt - pcr和免疫印迹。HAS1蛋白质PASMC的本地化gydF4y2Ba在活的有机体内gydF4y2Ba和增加HA沉积在改建IPAH肺动脉。转变增长factor-β1 profibrotic生长因子,导致哈分泌增加和在初级PASMC HAS1表达式。gydF4y2Ba
结果显示增加透明质酸含量在特发性肺动脉高压的肺,增加透明质酸合酶1和减少hyaluronoglucosaminidase 1基因表达。协同监管glycosaminoglycan-metabolising酶的积累,因此,调节病理在特发性肺动脉高压肺血管重塑。gydF4y2Ba
特发性肺动脉高压(IPAH)是一种罕见但致命的疾病的特点是高血压肺循环由于肺小动脉血管阻力的增加gydF4y2Ba1gydF4y2Ba,gydF4y2Ba2gydF4y2Ba。如果未经治疗,IPAH导致右心室肥大和失败和随后的死亡。在疾病发病机制、早期内皮细胞功能障碍引发血管收缩,增加gydF4y2Ba原位gydF4y2Ba血栓形成。这是紧随其后的是病理性血管重塑,这一过程的特点是内层的纤维化和内侧和外膜层增厚,由于不受控制的扩散肺动脉平滑肌细胞(PASMC)和血管周的成纤维细胞gydF4y2Ba3gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba5gydF4y2Ba。PASMC的同时,增强细胞活化和成纤维细胞导致细胞外基质(ECM)过度沉积,而强化IPAH肺动脉刚度的增加gydF4y2Ba6gydF4y2Ba,gydF4y2Ba7gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
改变ECM营业额是一些肺部疾病的标志,包括成人呼吸窘迫综合征、哮喘、特发性肺纤维化,或慢性阻塞性肺病,这强调了ECM体内平衡的重要性,适当的肺功能gydF4y2Ba7gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba9gydF4y2Ba。在肺,ECM受到每日营业额∼ECM总量的10%,表明流动率积累产生细微变化大的总ECM成分随时间的变化gydF4y2Ba10gydF4y2Ba。ECM在很大程度上是由胶原、纤连蛋白,vitronectin、蛋白聚糖和粘多糖(笑话)gydF4y2Ba11gydF4y2Ba。重复是可变长度的线性酸性多糖和组成,分为四个主要类别:透明质酸(HA);肝素和硫酸乙酰肝素(HS);软骨素和dermatan硫酸盐(分别为c和d);和硫酸角质素gydF4y2Ba12gydF4y2Ba,gydF4y2Ba13gydF4y2Ba。石斑鱼以前控制肺部炎症,以及系统性血管平滑肌细胞的表型gydF4y2Ba14gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba16gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
HA是基底膜的主要成分,是∼10%的蛋白聚糖gydF4y2Ba17gydF4y2Ba。HA合成在等离子体的内表面膜由一个或多个透明质酸合成酶(已经)亚型(HAS1 2或3),而表现出不同的酶学性质和合成HA链各种平均链长gydF4y2Ba18gydF4y2Ba。合成后,HA链通过pore-like挤压结构到细胞外空间。另外,哈可以通过四种hyaluronoglucosaminidase退化(HYAL)亚型(HYAL1-4)。HYAL1,主要hyaluronoglucosaminidase展览透明质酸酶活性最高,因此,代表公顷退化的主要酶gydF4y2Ba19gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
HA在很多方面可以影响细胞反应。首先,HA与pericellular大分子之间的相互作用会导致ECM的软化,从而促进细胞形状变化所需的细胞分裂,迁移或可塑性gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba22gydF4y2Ba。因此,水平的提高HA与炎症,形态发生、再生,伤口愈合,肿瘤侵犯或癌症转移gydF4y2Ba21gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba23gydF4y2Ba。其次,HA可以直接与细胞表面受体CD44和受体hyaluronan-mediated运动性(RHAMM)直接转换细胞内的信号级联gydF4y2Ba通过gydF4y2Ba细胞外signal-regulated激酶1/2gydF4y2Ba12gydF4y2Ba,gydF4y2Ba24gydF4y2Ba,gydF4y2Ba25gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
CD44和HA表达增加引起的肺损伤后能损伤dna的化学治疗剂博来霉素和肺泡巨噬细胞介导炎性介质释放gydF4y2Ba26gydF4y2Ba。在动脉粥样硬化地区增加HA含量检测gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba,gydF4y2Ba27gydF4y2Ba,gydF4y2Ba28gydF4y2Ba和HA诱导平滑肌细胞迁移gydF4y2Ba29日gydF4y2Ba。总的来说,这表明HA的潜在参与改造的系统性血管,但对肺血管重塑IPAH仍然遥遥无期。在目前的研究中,插科打诨表达了IPAH患者的肺组织和控制移植捐赠者,和HA代谢酶的表达和定位在人类肺癌样本和PASMC进行分析gydF4y2Ba在活的有机体内gydF4y2Ba和gydF4y2Ba在体外gydF4y2Ba,分别。gydF4y2Ba
材料和方法gydF4y2Ba
肺组织和主要PASMCgydF4y2Ba
肺组织样本获得在肺移植患者从12 IPAH(意味着±gydF4y2BasdgydF4y2Ba年龄32±10岁,七个雌性,五个男性;表1gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba9)和对照组(器官捐赠者,年龄38±14岁,五个雌性,四个男性)。没有一个IPAH患者表现出骨形成受体II型(gydF4y2BaBMPR2gydF4y2Ba)突变。立即组织处理,所有样本放置在4% (w / v)多聚甲醛或移出后液态氮。研究伦理委员会批准的协议是Justus-Liebig-University医学院(吉森,德国;阿兹31/93)。知情同意是获得每个主题研究协议。主要从动脉中生成PASMC IPAH或移植供体肺来源于肺组织,表示,和准备PASMC的隔离,如前所述gydF4y2Ba30.gydF4y2Ba。在平滑肌细胞生长培养基培养细胞2 (PromoCell、海德堡、德国)37°C公司5%gydF4y2Ba2gydF4y2Ba,95%的人啊gydF4y2Ba2gydF4y2Ba的气氛。段落三到七被用于实验。gydF4y2Ba
GAG隔离和净化gydF4y2Ba
肺组织标本在4°C使用单一化Polytron匀浆器在25毫米Tris-HCl, pH值7.6 (10 mL / g的组织)。单一化组织delipidated在氯仿/甲醇(1:2 v / v)。有机溶剂被离心(3200×gydF4y2BaggydF4y2Ba20分钟在4°C)和颗粒与10毫升乙醇洗,离心机之前在40°C和干4 h。剩余的颗粒被resuspended 0.1 Tris-HCl, pH值8.0,1毫米CaClgydF4y2Ba2gydF4y2Ba,石斑鱼被分离和纯化与链霉蛋白酶消化后(从gydF4y2Ba链霉菌属将gydF4y2Ba;EMD化工有限公司、圣地亚哥、钙、美国),DNase我(EC 3.1.21.1;Calbiochem EMD化学品Inc .)和β-elimination NaBH在1米gydF4y2Ba4gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba。总笑话与四卷乙醇沉淀在0.1卷3 M醋酸钠在一夜之间在4°C,恢复与离心(2000×20分钟gydF4y2BaggydF4y2Ba),溶解在重蒸馏的HgydF4y2Ba2gydF4y2BaO和储存在4°C。比色测定糖羰酸如前所述gydF4y2Ba31日gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
醋酸纤维素电泳gydF4y2Ba
样品2μL插科打诨的解决方案,包含4μg糖羰酸,受到醋酸纤维素电泳在100毫米吡啶,470毫米甲酸,pH值3.0,使用7 mA恒流,在室温下为70分钟。商用GAG标准用作标记包括哈,HS, DS和CS(所有从Sigma-Aldrich,圣路易斯,密苏里州,美国)。电泳后,醋酸纤维素地带阿尔新蓝沾0.2% (w / v)在0.1%醋酸(v / v) 10分钟,用0.1%乙酸(v / v)为20分钟gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba。染色强度量化使用计算机辅助图像分析项目根据制造商的建议(美国伊士曼柯达公司,罗彻斯特,纽约)。gydF4y2Ba
GAG描述gydF4y2Ba
Speed-dried石斑鱼(5μg糖羰酸)在最后一卷15μL孵化与下面的酶。1)Heparinase:样品溶解在100毫米Tris-HCl缓冲区,CaCl pH值7.0,包含3毫米gydF4y2Ba2gydF4y2Ba和孵化4×10gydF4y2Ba−4gydF4y2Ba你肝素裂解酶(EC 4.2.2.7,gydF4y2Ba黄杆菌属肝素gydF4y2Ba;Seikagaku、东京、日本)15 h在30°C。2)Heparitinase:样本类似溶解和孵化4×10gydF4y2Ba−4gydF4y2BaU硫酸乙酰肝素裂解酶(heparitinase: EC 4.2.2.8,gydF4y2Ba黄杆菌属肝素gydF4y2Ba;Seikagaku) 16 h 43°C。3)Chondroitinase ABC:样品溶解在100毫米Tris-HCl缓冲区,pH值8.0,包含50毫米醋酸钠和孵化2×10gydF4y2Ba−4gydF4y2BaU软骨素ABC裂合酶(EC 4.2.2.4,gydF4y2Ba变形杆菌属寻常的gydF4y2Ba;Sigma-Aldrich) 16 h 37°C。4)Chondroitinase B:样品溶解在100毫米Tris-HCl缓冲区,pH值7.4,孵化为0.1 U软骨素B裂合酶(gydF4y2Ba黄杆菌属肝素gydF4y2Ba;Seikagaku) 16 h 37°C。5)Keratanase:样品溶解在50 mM Tris-HCl缓冲区,pH值7.4,和0.05 U硫酸角质素endo-β-孵化gydF4y2BadgydF4y2Ba牛乳糖(EC 3.2.10.3,假单胞菌的物种;Sigma-Aldrich) 16 h 37°C。6)透明质酸酶:样品溶解在20毫米醋酸钠,与醋酸缓冲,pH值5.0,4 U透明质酸盐裂合酶(EC 4.2.2.1,孵化gydF4y2Ba链霉菌属hyalurolyticusgydF4y2Ba;Seikagaku) 14 h 60°C。孵化时间和酶浓度是完全降解所需标准的基质,如前所述gydF4y2Ba32gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
HA测量gydF4y2Ba
分析哈,分泌主要PASMC种植subconfluence 24-well板块。细胞被刺激与转化生长因子(TGF) -β1 (0.2,2 - 10 ng·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba,表示)6、12或24小时。孵化时间,年底能整除的文化媒体被移除和HA含量以ELISA根据制造商的指示(Corgenix、威斯敏斯特有限公司、美国)。同样,HA含量肺标本和细胞溶解产物通过ELISA测定。来衡量gydF4y2Ba新创gydF4y2BaGAG合成、subconfluent主要PASMC被孵化24小时的存在与否TGF-β1(0.2或2 ng·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba表示),骨形成蛋白(BMP) 2 (ng 10或20毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba,表示)、I型TGF-β受体激酶抑制剂SB431542(10μM), p38抑制剂SB203580(10μM)或血小板源生长因子(PDGF) bb (10 ng·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba)。(gydF4y2Ba3gydF4y2BaμCi·H]氨基葡萄糖(0.5毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba;Amersham Corp .)、小都,英国)被添加到培养基为另一个24小时。培养基和细胞层与0.1 kU链霉蛋白酶被收集和消化。总笑话是沉淀通过添加乙醇的混合物(最终浓度80%)含有1.3% (w / v)醋酸钠。样本储存在10000×-20°C隔夜和离心机gydF4y2BaggydF4y2Ba,颗粒溶解在0.5 M氢氧化钠和总GAG合成被液体闪烁计数测量,如前所述gydF4y2Ba16gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
免疫组织化学gydF4y2Ba
人类肺标本石蜡包埋(3μm)从健康的捐赠者或IPAH患者沾生物素化的hyaluronan-binding蛋白质(HABP;Seigakaku),平滑肌α-actin(α-SMA;Sigma-Aldrich)、HYAL1(罗福斯生物制剂,利特尔顿有限公司美国)或HAS1(圣克鲁斯生物技术、圣克鲁斯、钙、美国)抗体,使用Histostain +工具包(美国旧金山病菌)如前所述gydF4y2Ba30.gydF4y2Ba。部分pre-incubated U·50毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba透明质酸盐裂合酶(EC 4.2.2.1gydF4y2Ba链霉菌属hyalurolyticusgydF4y2Ba;Seikagaku) 3 h在37°C担任HABP消极的控制,和部分孵化isotype-matched pre-immuneα-SMA血清作为消极的控制,HYAL1和HAS1疣状。gydF4y2Ba
定量rt - pcrgydF4y2Ba
使用试剂盒提取总RNA提取工具根据制造商的协议(试剂盒、希尔登,德国)和互补是由逆转录使用上标gydF4y2BaTMgydF4y2Ba二世(美国表达载体,卡尔斯巴德,CA)。定量(q) PCR进行使用fluorogenic SYBR绿色和序列检测系统7700 (PE应用生物系统公司,福斯特城、钙、美国)gydF4y2Ba30.gydF4y2Ba。人类hydroxymethylbilane合成酶,伪基因的无所不在地和同样基因表达的自由,被用作参考基因在所有存在的反应。使用引物pcr进行表2中列出gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba在最后一个200纳米的浓度。相对记录大量的基因表达作为阈值的变化周期(Ct)值(Ct - Ct为目标供参考),如前所述gydF4y2Ba30.gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
结果gydF4y2Ba
的表达在IPAH插科打诨gydF4y2Ba
电泳分析总插科打诨的分离和纯化肺组织标本IPAH患者或健康的捐赠者显示四个不同限制人口的存在(G1-G4)捐赠和IPAH肺(图1gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)。酶处理与特定GAG-degrading酶(表3所示gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba),以及与商用插科打诨的电泳淌度标准(图1gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba),确定G1哈,G2 HS, G3 DS和G4 CS。光密度分析这些笑料的阿尔新蓝染色显示HA含量显著增加,显著降低商品的内容,DS和CS IPAH组织标本,与捐助者(图1 bgydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)。为了进一步量化的增加哈,HA浓度测定在总GAG肺标本通过ELISA。如图1所示gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba的相对数量的HA在肺部IPAH病人明显增加,与肺组织移植捐赠者(意味着±gydF4y2Ba扫描电镜gydF4y2Ba78.6±7.83gydF4y2Ba与gydF4y2Ba43.175±6.87 ng /总糖羰酸的μg IPAH和供体肺,分别)。gydF4y2Ba
本地化IPAH插科打诨gydF4y2Ba
进一步本土化HA和其主要代谢酶HAS1和HYAL1 IPAH患者或肺的移植捐赠者,免疫组织化学染色。如图2所示gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba,HA表达式可以发现整个肺泡间质、血管周的和peribronchiolar动脉外膜和内皮。在IPAH改建病变,HA也经常局部皮下区域染色为阴性α-SMA(图2 igydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba和j),表明它是表达去分化PASMC的领域。相比之下,HAS1和HYAL1表达式在PASMC占主导地位,表明HA合成PASMC和随后对动脉外膜的分泌。尽管IPAH HYAL1表达减弱,重大HYAL1表达式是保留在支气管和肺泡上皮II型细胞(图2 hgydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)。使用组织染色部分浓缩版与透明质酸酶或species-matched同形像控制表现出没有阳性染色,表明使用的特异性抗体(数据没有显示)。gydF4y2Ba
IPAH GAG-metabolising酶的表达gydF4y2Ba在活的有机体内gydF4y2Ba和PASMCgydF4y2Ba在体外gydF4y2Ba
自从IPAH HA的表达增加,gydF4y2Ba有gydF4y2Ba和gydF4y2BaHyalgydF4y2Ba信使rna表达于肺组织标本和量化主要PASMC使用中存在。如图3所示gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba,gydF4y2BaHas1-3gydF4y2Ba,gydF4y2BaHyal1-3gydF4y2Ba,gydF4y2BaCD44gydF4y2Ba和gydF4y2BaRhammgydF4y2Ba都表达在人类肺癌、gydF4y2BaHyal4gydF4y2Ba信使rna表达只在非常低的水平。当比较表达水平在捐赠者和IPAH肺、显著的表达水平增加gydF4y2BaHas1gydF4y2Ba和gydF4y2BaCD44gydF4y2Ba但水平的下降gydF4y2BaHyal1gydF4y2Ba被发现在IPAH(图3gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)。增加HAS1蛋白表达在肺IPAH证实了免疫印迹分析(图3 bgydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
免疫组织化学数据(图。2gydF4y2Ba⇑gydF4y2Ba)表明,HAS1 HYAL1 PASMC的本地化gydF4y2Ba在活的有机体内gydF4y2Ba,PASMC代表IPAH的关键致病细胞类型,主要PASMC是从IPAH和捐助病人和孤立的gydF4y2BaHas1gydF4y2Ba和gydF4y2BaHyal1gydF4y2Ba信使rna表达评估中存在(图4所示gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)。虽然没有观察到的差异gydF4y2BaHas1gydF4y2Ba信使rna表达,gydF4y2BaHyal1gydF4y2Ba表达水平明显减毒在初级PASMC获得IPAH病人与捐赠者相比,从而反映出变化观察分析后肺匀浆(3比较无花果gydF4y2Ba⇑gydF4y2Ba和图4gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
分泌和沉积PASMC的插科打诨gydF4y2Ba
1)IPAH以来的特点是增加了PASMC的ECM沉积,2)TGF-β1 ECM沉积的主要监管机构,和3)增加HA染色观察血管的IPAH病人(图。2gydF4y2Ba⇑gydF4y2Ba),TGF-β1总咽分泌物和沉积的影响在初级PASMC研究使用(gydF4y2Ba3gydF4y2BaH]氨基葡萄糖结合研究。如图5所示gydF4y2Ba⇓gydF4y2BaPDGF-BB和TGF-β1显著增强分泌PASMC的总插科打诨。ng TGF-β1 2毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba呕吐也显著诱导沉积到临时ECM PASMC的沉积。相比之下,BMP-2并不影响GAG合成由PASMC(图5gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
为了进一步阐明TGF-β1-induced信号转导途径控制呕吐合成、PASMC与特定抑制剂的pre-incubated TGF-βI型受体(SB431542)或p38增殖作用的蛋白激酶(MAPK);SB203580)和TGF-β1-dependent [gydF4y2Ba3gydF4y2BaH]氨基葡萄糖结合评估(图5 bgydF4y2Ba⇑gydF4y2Ba)。预处理与SB431542或SB203580导致显著抑制基底和TGF-β1-induced咽分泌物。此外,SB431542或SB203580预处理抑制TGF-β1-induced但不是由PASMC基底GAG沉积(图5 bgydF4y2Ba⇑gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
分泌PASMC的哈gydF4y2Ba
为了进一步调查是否TGF-β1-dependent增加(gydF4y2Ba3gydF4y2BaH]葡萄糖胺掺入部分由于HA分泌增加,HA分泌由PASMC ELISA测定。如图6所示gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba基线条件下,PASMC分泌大量的哈,这分泌显著增强了TGF-β1时间的方式。而高TGF-β1浓度(10 ng·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba)导致显著增加HA分泌已经经过12 h,生理浓度的TGF-β1 (0.2 ng·2毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba)显著增加公顷分泌PASMC后24 h(图。6gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
PASMC GAG-metabolising酶的表达gydF4y2Ba
TGF-β1-induced公顷分泌表示的时间进程gydF4y2Ba新创gydF4y2Ba基因表达的gydF4y2BaHas1-3gydF4y2Ba或压迫的gydF4y2BaHyal1-3gydF4y2Ba可能需要增加的哈。因此,gydF4y2Ba有gydF4y2Ba和gydF4y2BaHyalgydF4y2BamRNA表达评估主要人类PASMC中刺激与TGF-β1≤6 h。使用中存在,显著增加gydF4y2BaHas1gydF4y2Ba基因表达检测早在2 h TGF-β1 PASMC的刺激后,甚至有一个进一步提高后6 h(图7所示gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)。相比之下,TGF-β1的表达无显著影响gydF4y2BaHas2gydF4y2Ba或gydF4y2Ba3gydF4y2Ba,gydF4y2BaHyal1-3gydF4y2Ba,gydF4y2BaCD44gydF4y2Ba或gydF4y2BaRhammgydF4y2Ba(图6gydF4y2Ba⇑gydF4y2Ba)。有趣的是,gydF4y2BaHyal4gydF4y2Ba不是PASMC中表达,因此,不包括在图7gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
讨论gydF4y2Ba
尽管主要的病理生理学的最新进展,IPAH的诊断和治疗,分子机制潜在的血管内皮和平滑肌细胞功能障碍疾病仍有待阐明gydF4y2Ba4gydF4y2Ba。最初的内皮功能障碍导致vasoregulation受损和伴随着特异表达可溶性介质的释放。后期IPAH由血管重塑和主导的特点是增强PASMC增殖和ECM合成,增加内皮细胞凋亡gydF4y2Ba4gydF4y2Ba,gydF4y2Ba5gydF4y2Ba。石斑鱼,肺基质的主要成分,最近检测不到发炎发挥重要作用在炎症和迹象显示肺部疾病,表现出对上皮细胞或间充质细胞类型时空不同的影响gydF4y2Ba8gydF4y2Ba,gydF4y2Ba9gydF4y2Ba。笑话调节水合作用和水体内平衡,保持细胞和组织结构和功能、调节炎症反应和影响组织修复和改造gydF4y2Ba8gydF4y2Ba,gydF4y2Ba13gydF4y2Ba。当前作者据此假设微分分泌的插科打诨IPAH PASMC与血管重塑。gydF4y2Ba
在目前的研究中,IPAH肺组织表现出HA含量显著增加,主要由PASMC产生呕吐。HA的相对数量显著增加时,硫酸化的水平石斑鱼类肝素,dermatan和硫酸软骨素下降,表明增加nonsulphated比硫酸化插科打诨。IPAH肺组织中HA含量的增加与增加和减少有关基因的表达gydF4y2BaHas1gydF4y2Ba和gydF4y2BaHyal1gydF4y2Ba,分别。虽然没有HA数量和严重程度之间的关系是寻求IPAH (gydF4y2Ba如。gydF4y2Ba评估肺动脉压力和肺血管阻力),当前作者相信哈施加一个病理生理作用,至少在年底和/或严重阶段的IPAH移植患者展览。gydF4y2Ba
相似的变化观察在人类PASMC主要培养IPAH肺的病人,而表现出显著的减少gydF4y2BaHyal1gydF4y2BamRNA水平相比PASMC获得移植供体肺。此外,与TGF-β1 PASMC的刺激生长因子参与IPAH的发病机制gydF4y2Ba3gydF4y2Ba,gydF4y2Ba4gydF4y2Ba,导致增加gydF4y2BaHas1gydF4y2Ba基因表达早在2 h后刺激。自公顷增加染色观察积极改建肺动脉,人们很容易推测,HA PASMC分泌的直接影响血管内皮和平滑肌细胞增殖,可能控制在IPAH vasoreactive反应。gydF4y2Ba
这是证实的选择性超表达的事实gydF4y2BaHas2gydF4y2Ba在转基因小鼠导致平滑肌细胞中模HA含量显著增加,增强机械刚度和强度,加速动脉粥样硬化的发展gydF4y2Ba28gydF4y2Ba。类似的效果被报道为HA受体CD44,使用CD44-null老鼠。CD44表达对动脉粥样硬化的易感性,招募巨噬细胞和平滑肌细胞的激活和增殖能力gydF4y2Ba27gydF4y2Ba。虽然没有肺血管变化调查在先前的研究中,很有可能,类似的HA和CD44含量的变化人类肺动脉,报道在目前的研究中,也会影响血管硬度和强度,从而进一步导致IPAH阻力增加观察。gydF4y2Ba
HA诱导的生物效应是如何?首先,众所周知结合自身重量1000倍的水,因此导致组织水合作用和水体内平衡gydF4y2Ba12gydF4y2Ba,gydF4y2Ba22gydF4y2Ba,gydF4y2Ba23gydF4y2Ba。其次,增加合成HA和营业额代表早期一般在肺部炎症反应和间充质细胞的激活gydF4y2Ba8gydF4y2Ba,gydF4y2Ba12gydF4y2Ba。HA调节细胞迁移、分化和增殖gydF4y2Ba通过gydF4y2Ba互动与特定的细胞表面受体(CD44或RHAMM)gydF4y2Ba12gydF4y2Ba,gydF4y2Ba22gydF4y2Ba,但也gydF4y2Ba通过gydF4y2Ba与toll样受体2和4gydF4y2Ba14gydF4y2Ba。HA和CD44的交互调节白细胞滚动和激活,以及肿瘤转移。此外,CD44-dependent间隙HA碎片是至关重要的在解决肺部炎症的博来霉素的肺损伤模型gydF4y2Ba26gydF4y2BaCD44,展示一个重要角色在该决议阶段的炎症。gydF4y2Ba
感兴趣的注意,HA的生物效应取决于其平均分子质量gydF4y2Ba12gydF4y2Ba,gydF4y2Ba23gydF4y2Ba。在生理条件下,哈是一个高平均分子质量聚合物(> 1000 kDa)。相比之下,HA的碎片低分子质量积累组织损伤后,清除gydF4y2Ba通过gydF4y2Ba绑定到细胞表面受体CD44。分子质量较低的公顷(300 - 500 kDa)据报道延长嗜酸性粒细胞的生存gydF4y2Ba在体外gydF4y2Ba33gydF4y2Ba。HA片段(< 200 kDa)诱导表达的细胞因子,趋化因子或诱导巨噬细胞一氧化氮合酶gydF4y2Ba34gydF4y2Ba在小鼠肺泡巨噬细胞,影响ECM营业额gydF4y2Ba34gydF4y2Ba和刺激TGF-β1合成gydF4y2Ba33gydF4y2Ba。它已经表明,分散公顷平均分子质量250 kDa诱发炎症基因的表达gydF4y2Ba35gydF4y2Ba,而哈高分子量表现出相反的效果和抑制趋化因子表达gydF4y2Ba23gydF4y2Ba。因此,它将在将来的研究中阐明是否感兴趣的HA表示控制供体肺标本血管系统的不同的平均分子量比IPAH标本。在这种背景下,失调gydF4y2Ba有gydF4y2Ba/gydF4y2BaHyalgydF4y2Ba表达和/或活动可能导致的哈代不同的分子质量,从而表现出不同的生物效应,gydF4y2Ba如。gydF4y2Ba促进PASMC迁移和扩散,有可能导致IPAH的发病机理。gydF4y2Ba
前面提到的gydF4y2Ba在活的有机体内gydF4y2Ba当前支持的实验观察PASMC的主要文化。发现TGF-β1,但不是BMP-2,大大刺激了总GAG合成和分泌,一个恰逢增加效果gydF4y2BaHas1gydF4y2Ba基因的表达。TGF-β1-dependent增加呕吐合成是介导gydF4y2Ba通过gydF4y2BaSmad和p38 MAPK通路。当前的结果与先前的研究在人类纤维母synoviocytes协议,这表明,TGF-β1是一个强有力的刺激gydF4y2BaHas1gydF4y2Ba表达式。此外,阻塞p38 MAPK抑制TGF-β1-inducedgydF4y2BaHas1gydF4y2Ba表达了90%gydF4y2Ba36gydF4y2Ba的重要性,这突显出p38 TGF-β1-regulated表达的信号通路gydF4y2Ba有gydF4y2Ba亚型。由于TGF-β1 PASMC迁移的强有力的刺激,gydF4y2BaHas1gydF4y2Ba介导HA合成可能代表PASMC活化和迁移的必要步骤。上述变化gydF4y2Ba有gydF4y2Ba/gydF4y2BaHyalgydF4y2Ba表情,连同IPAH HA合成和内容的变化,也可能导致组织缺氧IPAH中观察到。值得注意的是,它曾被报道,缺氧加强GAG合成主要TGF-β引起的肺成纤维细胞或PDGF-BBgydF4y2Ba16gydF4y2Ba,gydF4y2Ba37gydF4y2Ba,这表明缺氧的协同监管机构增加呕吐沉积IPAH中观察到。gydF4y2Ba
总之,本研究的结果证明透明质酸含量增加肺特发性肺动脉高血压患者,这是与增加透明质酸合酶1和减少hyaluronoglucosaminidase 1基因表达。协同监管glycosaminoglycan-metabolising酶的积累,因此,调节在特发性肺动脉高血压病理改造有利于肺动脉平滑肌细胞的激活状态。gydF4y2Ba
支持声明gydF4y2Ba
大肠Papakonstantinou接收者的欧洲呼吸学会短期奖学金(382号)。188bet官网地址这项工作是支持的德国研究基金会(DFG)合作研究中心547 o . Eickelberg(批准),DFG-sponsored国际研究生课程“肺生理和疾病的信号机制”(格兰特Kouri F.M.和o . Eickelberg),在“卓越集群心肺系统”(Justus-Liebig-University吉森,马普学会心肺研究,坏Nauheim,歌德大学,法兰克福,德国),和一般研究和技术秘书处,希腊雅典(格兰特03 eΔ950)。gydF4y2Ba
感兴趣的语句gydF4y2Ba
没有宣布。gydF4y2Ba
- 收到了gydF4y2Ba2007年11月26日。gydF4y2Ba
- 接受gydF4y2Ba2008年8月15日。gydF4y2Ba
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引用gydF4y2Ba
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