文摘gydF4y2Ba
嗜酸性粒细胞是多功能细胞的先天免疫系统与过敏性炎症。哮喘病患者更有可能住院,但不太可能遭受严重的发病率和死亡率在2009年的流感大流行。这些流行病学发现戒律在哮喘中真菌感染的小鼠模型高度过敏炎症是预防甲型流感病毒(IAV)感染和疾病。我们的目标是描述一种机制(s)的过敏性哮喘可能缓解流感疾病的结果,关注与过敏性呼吸道疾病的假设的肺嗜酸细胞增多症能够促进抗病毒药物对流感病毒的宿主防御。嗜酸性粒细胞的转移从肺部乙酰甲和挑战小鼠流感病毒感染小鼠导致发病率和减少病毒负担,改善肺的依从性,和CD8增加gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞数量的航空公司。在体外实验中主要或骨骨髓来源的嗜酸性粒细胞被用来确定使用实验室的病毒株嗜酸性粒细胞反应(/公关/ 08/1934)或大流行毒株(IAV的/ CA / 04/2009)。嗜酸性粒细胞是容易感染IAV和回应激活,零碎的脱粒,upregulation Ag)表示标记。病毒或病毒peptide-exposed嗜酸性粒细胞诱导CD8gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞增殖、活化和效应功能。我们的数据表明,嗜酸性粒细胞促进宿主细胞免疫降低流感病毒复制在肺部,从而提供一个新颖的机制主机与过敏性哮喘可能免受流感的发病率。gydF4y2Ba
介绍gydF4y2Ba
流感病毒感染是全球发病率和死亡率的主要原因,在3 - 5年流行导致严重疾病百万个人和∼500000人死亡(gydF4y2Ba1gydF4y2Ba)。慢性肺病(包括哮喘)患者,心脏病,糖尿病和肥胖是最常见的住院期间2009年流感大流行(gydF4y2Ba2gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba4gydF4y2Ba),强调的重要性理解流感潜在慢性病患者的发病机理。矛盾的是,2009年流感大流行回顾性研究调查表明,尽管哮喘病患者更可能被住院,他们不太可能有并发症或死于流感而non-asthmatics (gydF4y2Ba5gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba9gydF4y2Ba)。虽然糖皮质激素的使用提出了让人混淆的原因之一(gydF4y2Ba10gydF4y2Ba),类固醇治疗的信息不是所有可用的报告围绕2009年流感大流行,也没有发现类固醇有效对抗流感感染(gydF4y2Ba11gydF4y2Ba,gydF4y2Ba12gydF4y2Ba)。因此,进一步调查哮喘和流感之间的复杂的相互作用是必要的。gydF4y2Ba
哮喘是一种异构的疾病与多方面的和经常在肺不同免疫反应同时发生。这种混淆分析为什么有些哮喘患者免受influenza-induced并发症而其他人没有。我们开发了一个新颖的啮齿动物模型,哮喘和流感疾病更好的理解疾病之间的关系。甲型流感病毒(IAV)感染就没有引起嗜酸性粒细胞招募到航空公司(gydF4y2Ba13gydF4y2Ba)。然而,使用这个模型,我们表明,小鼠感染期间IAV加剧气道炎症(包括嗜酸性粒细胞)降低了发病率,增强病毒清除,和抗病毒防御,减少肺损伤与非过敏性小鼠相比gydF4y2Ba13gydF4y2Ba)。总的来说,这些数据表明,嗜酸性粒细胞的作用在调节预防流感。gydF4y2Ba
主要的迹象表明,嗜酸性粒细胞可能导致抗病毒免疫识别的出现在呼吸道病毒感染嗜酸性粒细胞(gydF4y2Ba14gydF4y2Ba)。随后,嗜酸性粒细胞被证明由呼吸道合胞体病毒被激活(gydF4y2Ba15gydF4y2Ba)在病毒性传染性降低了核糖核酸酶释放(gydF4y2Ba16gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba18gydF4y2Ba)。类似的减少病毒负担发生在嗜酸性粒细胞的存在在副流感病毒感染病毒和肺炎病毒的老鼠(PVM) (gydF4y2Ba19gydF4y2Ba,gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba)。尽管有强有力的证据表明,嗜酸性粒细胞增强抗病毒免疫,具体机制解释我们之前研究结果缺乏。病毒滴度的减少过敏小鼠嗜酸性粒细胞后才激活的T细胞反应(gydF4y2Ba13gydF4y2Ba让我们假设嗜酸性粒细胞增强CD8gydF4y2Ba+gydF4y2Ba针对IAV T细胞反应。gydF4y2Ba
在这项研究中,我们表明,嗜酸性粒细胞是容易感染IAV上调分子参与CD8和回应gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞激活和监管。我们发现过继转移的嗜酸性粒细胞足以概括减少病毒特异性CD8的负担和增强gydF4y2Ba+gydF4y2Ba肺部的T细胞反应。利用缺乏一个immunodominant病毒表位和CD8探测gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞特定的抗原决定基,我们表明,嗜酸性粒细胞似乎促进新创T细胞反应。我们的研究表明一个特定角色的嗜酸性粒细胞中介通过促进CD8抗病毒预防流感gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞反应,这可以解释为什么有些哮喘患者票价比non-asthmatics时感染了流感病毒。gydF4y2Ba
材料和方法gydF4y2Ba
道德声明gydF4y2Ba
所有机构批准的实验动物使用和护理委员会和机构生物安全委员会在圣裘德儿童研究医院(SJCRH),和田纳西州大学健康科学中心。gydF4y2Ba
动物gydF4y2Ba
女性C57BL / 6 j OT-1 BALB / cJ,ΔdblGATA1老鼠在6周的年龄从杰克逊实验室购买(巴尔港,我),放置在microisolator笼子α-dri床上用品与自由地获取食物和水在动物生物安全级别2设施SJCRH和田纳西大学健康科学中心1周。动物的住房设施在12 h明暗周期和所有工作与动物是在光周期中完成的。gydF4y2Ba
病毒gydF4y2Ba
大流行性流感A / CA / 04/2009 (pH1N1;博士r·威比SJCRH)传播Madin-Darby犬肾脏。2(MDCK。2) cells (American Type Culture Collection, Manassas, VA) was used in most experiments. Mouse-adapted wild-type A/PR/08/1934 influenza virus (PR8) and its mutant with deletions in CD8 immunodominant epitope (PA224 - 233gydF4y2Ba)(P.G.托马斯博士)是用于实验要求专用试剂。gydF4y2Ba
代的老鼠骨骨髓来源的嗜酸性粒细胞gydF4y2Ba
骨骨髓来源的嗜酸性粒细胞(BMdEos)生成的描述(gydF4y2Ba21gydF4y2Ba)的胫骨和股骨的女性C57BL / 6 j小鼠。Eosinophil-like形态被染色显微镜下确认(见cytospin准备gydF4y2Ba图2一个gydF4y2Ba图2 bgydF4y2Ba)在使用后14 d的文化。gydF4y2Ba
透射电子显微镜法gydF4y2Ba
BMdEos刺激有或没有2毫克/毫升gydF4y2Ba来自烟曲霉属真菌gydF4y2Ba过敏原(爱格里尔实验室,NC),仅大流行性H1N1 (p),或过敏原+ pH1N1颗粒状,逐渐resuspended刚做好的固定剂(2.5%戊二醛、2%多聚甲醛,0.1 NaCaCOgydF4y2Ba4gydF4y2Ba)1 h。细胞被嵌入在琼脂和加工常规透射电子显微镜(TEM) SJCRH核心设施。随机获得电子显微图显示整个单元概要和细胞核的细胞部分在最后的观点分析了11500×16500×量化分泌颗粒的形态变化。完整的数量,不成熟(冷凝过程中),为每个细胞融合,清空颗粒数部分。106电子显微图进行了分析和2730颗粒数。gydF4y2Ba
共焦显微镜流感核蛋白本地化gydF4y2Ba
Allergen-exposed BMdEos脉冲与PR8[感染复数(MOI) = 10]后被洗1 h和孵化24 h。细胞转移到# 1.5聚合物盖玻片(Ibidi;Martinsried、德国),使用Cell-Tak(康宁,康宁,纽约)1 h, v / v多聚甲醛和固定为4%。非特异性Ab绑定是预防与孵化TBS 2% BSA和沾染了Abs鼠标eosinophil-associated核糖核酸酶(1:20 00)和流感核蛋白(NP) (1:1000;AbD Serotec,牛津大学,英国)在一夜之间。细胞被冲洗和孵化驴anti-mouse CF568 (Biotium,海沃德,CA)或驴anti-rat AF647(杰克逊ImmunoResearch西树林,PA) 1:1000稀释和核沾染了赫斯特33258 (1:1000;生命技术、大岛,纽约)。三维旋转式圆盘共焦图像获得的步长0.3μm,和分析使用SlideBook 6.0.3软件(智能成像创新)。四个独立的实验研究和10与至少30细胞图像分析每个实验的研究者盲治疗组。gydF4y2Ba
决心在BMdEos病毒暴露的影响gydF4y2Ba
BMdEos刺激(或不)gydF4y2Ba答:来自烟gydF4y2BaAg)暴露在pH1N1病毒(MOI = 0.1) 1 h,洗,37°C和5%孵化有限公司gydF4y2Ba2gydF4y2Ba补充图1gydF4y2Ba)。确认病毒Ags的表达在细胞表面造成感染,我们暴露pH1N1 32250 J紫外线辐射和验证失去传染性使用人类肺上皮细胞系(A549;美式文化集合),UV-inactivated病毒用于确定细胞表面标记嗜酸性粒细胞的变化。gydF4y2Ba
CD8gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞活化试验gydF4y2Ba
BMdEos与1μM肽脉冲对应已知IAV抗原表位(PB1gydF4y2Ba703 - 711gydF4y2BaSSYRRPVGI;巴勒斯坦权力机构gydF4y2Ba224 - 233gydF4y2BaPSLENFRAYV;NPgydF4y2Ba366 - 374gydF4y2BaASNENVETM) 1 h在37°C和细胞清洗以去除多余的肽。Peptide-pulsed嗜酸性粒细胞与CD8培养gydF4y2Ba+gydF4y2Ba从肺脏和脾脏T细胞纯化pH1N1-infected老鼠的负选择(干细胞技术,温哥华BC) 1:1比例在10%的边后卫RPMI 1640 Golgiplug (BD) 5 h。cocultured对CD8细胞被沾染了Abs, IFN-γ,TNF-α和分析使用FACSCalibur (BD)和FlowJo软件。BMdEos脉冲与炒聚合酶酸性蛋白(PA)肽(FARYSVSENL)作为一个额外的消极的控制。在平行实验中,纯化脾CD8gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞是cocultured刺激(pH1N1 0.1 MOI)或者如果BMdEos 72 h IFN-γ之前通过流式细胞术分析。这些实验中所示的控制策略gydF4y2Ba补充图1gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
CD8的刺激gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞反应与PR8 peptide-pulsed BMdEosgydF4y2Ba
二百万BMdEos BMd树突状细胞(BMdDCs)脉冲1μM肽(肽OT-1卵子无关gydF4y2Ba257 - 264gydF4y2Ba(SIINFEKL) immunodominant PR8肽(PAgydF4y2Ba224 - 233gydF4y2Ba),或炒PA肽)TCID ip注入小鼠感染了1000人gydF4y2Ba50gydF4y2Ba突变PR8(ΔPAgydF4y2Ba224年gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba233年gydF4y2Ba在2 d postinfection (dpi)。肺和脾CD8gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞筛选与PA-tetramer dpi(10点gydF4y2Ba22gydF4y2Ba)或CMV-tetramer (P.G.博士Thomas)染色确定PA peptide-specific CD8的存在gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞,目前只有BMdDCs所呈现的序列或BMdEos。gydF4y2Ba
CD8gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞增殖试验gydF4y2Ba
OVA-specific脾脏T细胞被孤立的不能按(杰克逊实验室)和CD8细胞转基因老鼠gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞被负选择净化。BMdEos和CD11cgydF4y2Ba+gydF4y2Ba细胞脉冲与连续稀释(1×10gydF4y2Ba−9gydF4y2Ba1μM) OT-1肽对CD8比较的影响gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞增殖。BMdEos与1μM脉冲不能肽1 h在37°C和清洗。Peptide-pulsed与纯化不能CD8细胞培养gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞在不同的比率为72 h。T细胞增殖是由(gydF4y2Ba3gydF4y2BaH]胸腺嘧啶核苷掺入(1 Ci /最后8 H)和样本读MicroBeta (PerkinElmer沃尔瑟姆,MA)。OT-1 CD8gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞是孵化与BMdEos脉冲炒OT-1卵子肽(FILKSINE)显示出缺乏增殖在缺乏适当的肽(gydF4y2Ba补充图1gydF4y2Ba)。扩散被报告为每个重复的平均cpm±SD纠正。gydF4y2Ba
流感NP-specific CD8gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞杂种细胞试验gydF4y2Ba
进行了化验与少量修改(如前所述gydF4y2Ba23gydF4y2Ba)。杂种细胞(H 8 z - 50.4)与特异性的流感病毒NP肽(ASNENMETM)的上下文中提出了MHC 2 DgydF4y2BabgydF4y2Ba已经准备好了(gydF4y2Ba24gydF4y2Ba,gydF4y2Ba25gydF4y2Ba)。杂种细胞的父母是BWZ.36,携带一个gydF4y2BalacZgydF4y2Ba为测量ligand-induced激活报告基因。细胞克隆通过限制稀释和先前筛查肽特异性用NP peptide-pulsed和unpulsed C57BL / 6 j脾细胞或L细胞表达MHC 2 DgydF4y2BabgydF4y2Ba 2gydF4y2Ba。细胞被清洗和孵化一夜之间在媒体补充20%的边后卫。杂种细胞细胞被播种在每个变量1.5×10一式三份gydF4y2Ba5gydF4y2Ba细胞每口井。PR8-exposed或未曝光的嗜酸性粒细胞和脾细胞(或没有额外的细胞)清洗三次,添加2.5×10gydF4y2Ba5gydF4y2Ba细胞每口井。NP肽(1μg /毫升)或PR8直接添加杂种瘤细胞分别作为积极的和消极的控制(这类MHC我(MHCI)阳性杂交瘤细胞可以将肽本身)。一夜之间,文化被孵化在37°C, 5%的公司gydF4y2Ba2。gydF4y2Ba盘子洗和冷2%甲醛固定,0.2%的戊二醛溶液5分钟在冰上。在37°C细胞被清洗和孵化20毫克/毫升半乳糖苷gydF4y2BaNgydF4y2Ba,gydF4y2BaNgydF4y2Ba二甲基甲酰胺稀释1毫克/毫升在5毫米铁氰化钾/亚铁氰化钾/ 5毫米MgCl 2毫米gydF4y2Ba2gydF4y2Ba。后8 - 12 h,盘子被光学显微镜检查和蓝色细胞被枚举获取激活细胞的平均数量/治疗。嗜酸性粒细胞仅产生了少量的背景点。使用一个HIV-specific杂种细胞同样是一种消极控制PR8-infected嗜酸性粒细胞或文化的NP肽。此外,一个NP肽(NPgydF4y2Ba324 - 332gydF4y2BaFAPGNYPAL)从仙台病毒(股票)作为负控制代替IAV NP肽IAV-specific和HIV-specific杂种细胞。gydF4y2Ba
共焦显微镜嗜酸性粒细胞和CD8之间的互动gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞gydF4y2Ba
OVA-specific淋巴结T细胞分离得到的不能识别转基因小鼠和CD8gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞纯化由消极的选择。BMdEos脉冲有1μM OT-1卵子在37°C肽1 h, 5%的公司gydF4y2Ba2gydF4y2Ba,洗净。Peptide-pulsed BMdEos涨跌互现与纯化不能CD8比率是1:5gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞,颗粒状的短暂离心,孵化为5分钟37°C。细胞转移到# 1.5聚合物盖玻片(Ibidi)使用Cell-Tak孵化1 h在37°C, 5%的公司gydF4y2Ba2gydF4y2Ba,v / v和固定4%多聚甲醛。非特异性Ab绑定与孵化与2% BSA TBS,阻止和沾染了Abs鼠标CD11a-biotin(摘要;圣地亚哥eBioscience CA)和α-tubulin (1:50 0;一夜之间σ,圣路易斯,密苏里州)。细胞被冲洗和孵化CF488链霉亲和素和goat-anti-mouse CF568 (Biotium) 1:1000稀释。f -肌动蛋白和核染色使用AF647 phalloidin 1:50稀释和赫斯特33258年1:1000稀释(技术)。BMdEos没有肽脉冲和脉冲与炒OT-1卵子被用于实验来确定基线特异性的相互作用。三维旋转式圆盘共焦图像获得的步长0.3μm,和分析使用SlideBook 6.0.3软件。gydF4y2Ba
动物模型gydF4y2Ba
流感模型。gydF4y2Ba
1000 TCID Weight-matched老鼠感染gydF4y2Ba50gydF4y2BapH1N1病毒在50μl异氟烷麻醉下经鼻。单个重量记录立即之前病毒感染之后,每24小时。这组被表示为流行性感冒(流感)。gydF4y2Ba
哮喘和流感并发症。gydF4y2Ba
疾病模型最近开发的人使用(gydF4y2Ba13gydF4y2Ba)。简单地说,老鼠敏化和挑战gydF4y2Ba答:来自烟gydF4y2BaAg)所示gydF4y2Ba无花果。gydF4y2Ba和gydF4y2Ba6gydF4y2Ba,1000 TCID感染gydF4y2Ba50gydF4y2BapH1N1期间急性过敏性炎症[1周后真菌挑战;急性哮喘和流感(AA +流感))或在过敏性哮喘的气道重塑阶段(4周后真菌挑战;慢性哮喘和流感(CA +流感)]。gydF4y2Ba
肺嗜酸性粒细胞收获和过继转移gydF4y2Ba
从过敏性哮喘模型肺收获动物消化1毫克/毫升胶原酶(卫氏生化药剂,莱克伍德,新泽西)解决方案解放细胞。细胞在哈佛商学院resuspended 2毫米EDTA和分层Percoll Ficoll-Paque (gydF4y2BaρgydF4y2Ba= 1.077克/毫升;通用电气医疗集团生命科学,宾夕法尼亚州匹兹堡)。粒细胞层被,在无菌PBS溶液洗了三次,放置在一个T75瓶血压得到较好的控制在一个孵化器1 h去除污染附着的细胞。嗜酸性粒细胞(∼97%纯度,主要污染物是巨噬细胞和淋巴细胞的形态学分析)停牌1.4×10gydF4y2Ba7gydF4y2Ba细胞/毫升无菌PBS和50μl气管内的注入小鼠感染pH1N1 4 h 700000嗜酸性粒细胞/交付之前鼠标(基于我们之前发现的嗜酸性粒细胞生活在老鼠AA +流感的航空公司(gydF4y2Ba13gydF4y2Ba)]。所有控制小鼠气管内的注射50μl PBS占可能14日免疫学变化。收件人老鼠,表示流感+ Eos或CA +流感+ Eos组、监控和体重每天只和CA +流感老鼠,每个研究作为控制。gydF4y2Ba
小鼠组织收获gydF4y2Ba
小鼠麻醉,气管插管气道生理测量如前所述(gydF4y2Ba13gydF4y2Ba)。醋甲胆碱剂量反应曲线的呼吸系统阻力和合规进行SCIREQ flexiVent FX1(加拿大魁北克)(gydF4y2Ba补充图2gydF4y2Ba)。确保测量值没有由于累加效应,可以发生在活性航空的剂量反应曲线,我们测量呼吸系统合规雾化后25毫克/毫升acetyl-β-methacholine氯(σ)。计算均值和SD为每个鼠标,然后计算和记录。gydF4y2Ba
支气管肺泡灌洗(BAL)上执行的每个老鼠安乐死后,细胞分离和染色流式细胞术和CD3ε-PE-Cy-7 CD8α-FITC (BD生物科学,圣何塞,CA)和PB1-tetramer-PE (P.G.托马斯博士)。左肺叶和纵隔淋巴结(mln)]在10%中性缓冲福尔马林固定的体外,分段μm 5点在冠状面和染色)进行组织学分析。大功率的10个领域里的嗜酸性粒细胞是计算每个MLN和40大功率领域计算每个肺部分由调查员盲研究条件。全肺收获和snap-frozen在液氮和存储−80°C到使用。肺在冰解冻,均质1毫升的冷无菌PBS用蛋白酶抑制剂混合物(罗氏,印第安纳波利斯),离心机600×gydF4y2BaggydF4y2Ba10分钟,上层清液储存在整除−80°C的病毒滴定。gydF4y2Ba
流仪结果gydF4y2Ba
补充图1gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
病毒负担量化gydF4y2Ba
肺匀浆或上层清液在体外实验中在冰解冻,连续在1:10稀释,并添加到汇合的MDCK细胞生长在96 -孔板1 h。细胞与PBS洗两次,和媒体包含1μg /毫升gydF4y2BaNgydF4y2Ba甲苯磺酰基)- - -gydF4y2BalgydF4y2Ba苯丙氨酸chloromethyl ketone-trypsin(卫氏生化药剂)添加和孵化96 h。病毒效价与鸡红细胞表面由红细胞凝集试验。gydF4y2Ba
Virus-pulsed嗜酸性粒细胞转移实验gydF4y2Ba
从动物的肺嗜酸性粒细胞通过哮喘和流感模型在3 dpi收获和纯化。一百万主肺嗜酸性粒细胞是ip注入天真的老鼠和Flu-specific CD8gydF4y2Ba+gydF4y2BaNP-dextramer T细胞识别的肺、脾脏和mln (gydF4y2Ba补充图3gydF4y2Ba)。老鼠感染1000 TCIDgydF4y2Ba50gydF4y2Ba突变PR8(ΔPAgydF4y2Ba224 - 233gydF4y2Ba)病毒和2×10gydF4y2Ba6gydF4y2Ba与野生型PR8 BMdEos脉冲(MOI = 5)在2 dpi注入ip。细胞被收割落下帷幕,从肺、mln和脾脏CD3ε10 dpi和染色,CD8α,PA-tetramer病毒特异性CD8的分析gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞,这只会出现如果BMdEos呈现Ags细胞刺激的野生型病毒。小鼠感染1000 TCIDgydF4y2Ba50gydF4y2Ba突变PR8(ΔPAgydF4y2Ba224 - 233gydF4y2Ba)注射1.7×10gydF4y2Ba6gydF4y2BaBMdEos,脉冲与PR8 (MOI = 5)和与福尔马林固定(或没有),以确定是否直接参与BMdEos刺激CD8gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞反应。gydF4y2Ba
统计分析gydF4y2Ba
实验组,每组有三个或三个以上(gydF4y2Ba3gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba16gydF4y2Ba)小鼠动物工作和至少5每组在体外复制在每个实验工作。独立实验重复以确保再现性。数据被表示为均值和SD或中位数和四分位范围(差)为每个组。意义决定了非参数测试中,邓恩单向方差分析和多重比较和Sidak多个双向方差分析比较测试,或双尾Mann-WhitneygydF4y2BaUgydF4y2Ba测试使用GraphPad棱镜软件6.01 v(拉霍亚,CA)。的意义gydF4y2BapgydF4y2Ba< 0.05由星号(*)标记或散列(#)符号。gydF4y2Ba
结果gydF4y2Ba
嗜酸性粒细胞进行零碎的脱粒IAV的存在gydF4y2Ba
研究嗜酸性粒细胞是否可以直接回复IAV脱粒,是否这是修改过敏原的存在,我们使用TEM表征BMdEos刺激分泌事件有或没有模型过敏原(gydF4y2Ba答:来自烟gydF4y2BaAg)、pH1N1单独或过敏原+ pH1N1。控制细胞的超微结构分析显示,与典型的成熟的嗜酸性粒细胞,成熟的核心所特定的颗粒(gydF4y2Ba图1一个gydF4y2Ba)。嗜酸性中幼粒细胞与典型的成熟细胞的细胞核和不成熟的特殊颗粒,充满电子致密的内容或在冷凝过程中,也指出文化(gydF4y2Ba图1 bgydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
形态学的证据脱粒与零碎的脱粒(PMD)中观察到的过敏原,pH1N1或过敏原+ pH1N1-stimulated嗜酸性粒细胞(gydF4y2Ba图1汉英gydF4y2Ba)。大颗粒,电子密度降低,矩阵粗化电子密度降低,拆卸核心,或损失矩阵或核心刺激(后被指出gydF4y2Ba图1汉英gydF4y2Ba)。此外,大型vesiculotubular结构,另一个特点表明PMD (gydF4y2Ba26gydF4y2Ba),也看到了在特定的颗粒。颗粒的形态变化的量化显示显著增加PMD pH1N1-stimulated嗜酸性粒细胞(gydF4y2Ba图1 fgydF4y2Ba)。因此,完整的颗粒的数量显著降低pH1N1组相比,如果控件(gydF4y2Ba图1 fgydF4y2Ba)。过敏原刺激没有进一步提高脱粒占据。gydF4y2Ba
Granule-granule或granule-plasma膜融合事件被发现在小数字和不不同组(gydF4y2Ba图1 fgydF4y2Ba),这表明经典胞外分泌不是一个重要的分泌活动潜在的嗜酸性粒细胞分泌。增加数量的排空颗粒特性的PMD观察细胞暴露于过敏原和/或pH1N1 (gydF4y2Ba图1 fgydF4y2Ba)。我们的数据表明,pH1N1促进脱粒的老鼠嗜酸性粒细胞与vesicle-mediated分泌有关。这表明特定的释放pH1N1 granule-derived产品发生反应。gydF4y2Ba
嗜酸性粒细胞被IAV感染和移植Ag)表示分子的反应gydF4y2Ba
Allergen-pulsed BMdEos接触病毒后被成像荧光标记来确定IAV感染嗜酸性粒细胞。IAV NP是位于嗜伊红核在24 h postinfection表明感染∼75%的细胞(gydF4y2Ba图2一个gydF4y2Ba)。细胞没有pre-exposed过敏原也感染了IAV (gydF4y2Ba补充图1gydF4y2Ba),因此过敏原接触没有改变IAV感染的易感性。我们还发现,嗜酸性粒细胞支持病毒复制,尽管在低水平(日志gydF4y2Ba10gydF4y2Ba2.40±0.26 TCIDgydF4y2Ba50gydF4y2Ba/毫升10000细胞感染的莫伊0.01)相比,在MDCK细胞(日志gydF4y2Ba10gydF4y2Ba5.63±0.38 TCIDgydF4y2Ba50gydF4y2Ba/毫升10000细胞感染的莫伊0.01)。表面标记的表达通常用来识别嗜酸性粒细胞(Siglec-F和CCR3)并没有改变由于IAV或过敏原接触(gydF4y2Ba图2 bgydF4y2Ba,gydF4y2Ba补充图1gydF4y2Ba)。已报告IAV的内部蛋白质在细胞表面标记的病毒感染(gydF4y2Ba27gydF4y2Ba)。因此,我们调查是否IAV暴露导致内部的表面表达蛋白质,发现病毒NP和表面PB1嗜酸性粒细胞(gydF4y2Ba图2 cgydF4y2Ba),提供病毒感染的进一步证据。病毒暴露诱导upregulation Ag-presenting分子MHCI和CD86 BMdEos (gydF4y2Ba图2 dgydF4y2Ba),而MHCII和CD80表达未加(数据没有显示)。在每种情况下,早期接触过敏原不影响表面的表达NP, PB1 MHCI、CD86 (gydF4y2Ba图2 cgydF4y2Ba,gydF4y2Ba二维gydF4y2Ba)。这些变化在细胞表面标记没有发生在BMdEos暴露UV-inactivated IAV (gydF4y2Ba补充图1gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
嗜酸性粒细胞能够激活CD8gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞对IAVgydF4y2Ba
我们调查是否嗜酸性粒细胞能够刺激CD8gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞激活和扩张的结果显示病毒Ags和增加MHCI表达式。CD8gydF4y2Ba+gydF4y2Ba从pH1N1-infected小鼠肺脏和脾脏T细胞纯化与BMdEos cocultured mock-pulsed或脉冲与病毒多肽调查是否virus-stimulated BMdEos可以激活CD8gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞反应(gydF4y2Ba图3gydF4y2Ba)。炒肽没有诱导T细胞反应(数据没有显示)。而如果对CD8 BMdEos没有影响gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞的器官,与病毒多肽激活CD8 BMdEos脉冲gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞产生IFN-γ和TNF-α(gydF4y2Ba图3 bgydF4y2BaCD8的),提供证据gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞调节嗜酸性粒细胞。脾CD8gydF4y2Ba+gydF4y2Ba从pH1N1-infected小鼠T细胞纯化生产IFN-γ独自嗜酸性粒细胞和pH1N1-pulsed BMdEos (gydF4y2Ba图3 cgydF4y2Ba)。因为IFN-γCD8产生的gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞在coculture如果嗜酸性粒细胞,可能eosinophil-secreted产品可能通过细胞毒性T细胞抗病毒细胞因子刺激生产。gydF4y2Ba
因为virus-pulsed嗜酸性粒细胞诱导CD8gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞反应,我们旨在确定嗜酸性粒细胞诱导CD8gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞增殖。嗜酸性粒细胞与炒卵子肽没有诱导CD8脉冲gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞增殖(gydF4y2Ba补充图1gydF4y2Ba),而连续稀释SIINFEKL peptide-pulsed BMdEos培养与CD8 1:2的比例gydF4y2Ba+gydF4y2Ba从OT-1小鼠T细胞,尽管需要更高浓度的卵子肽与CD11c相比gydF4y2Ba+gydF4y2Ba脾细胞(gydF4y2Ba图3 dgydF4y2Ba)。1:1 CD8的嗜酸性粒细胞gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞诱导的扩散效应(gydF4y2Ba图3 egydF4y2Ba),表明嗜酸性粒细胞需要以更高的比例而专业的APC。gydF4y2Ba
嗜酸性粒细胞是否可以调节CD8gydF4y2Ba+gydF4y2Ba体内T细胞反应,BMdDCs或BMdEos脉冲与病毒多肽(或卵子肽)被转移到老鼠感染突变PR8(删除immunodominant流感PA抗原决定基)来分析具体的CD8gydF4y2Ba+gydF4y2Ba对PA T细胞反应(gydF4y2Ba图4gydF4y2Ba)。病毒的转移peptide-pulsed BMdEos导致CD8的生成gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞识别PA BMdDCs类似,而两种细胞类型脉冲与无关(SIINFEKL)肽没有诱导响应(gydF4y2Ba图4 bgydF4y2Ba),证明BMdEos能够激活病毒特异性CD8gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞。的转移细胞脉冲炒PA-peptide没有导致pa CD8的生成gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞与细胞相比,脉冲与PA-peptide (gydF4y2Ba补充图1gydF4y2Ba)。总之,这些数据表明,嗜酸性粒细胞有能力调节CD8gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞可能参与克隆选择和CD8的扩张gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞在过敏性主机。gydF4y2Ba
嗜酸性粒细胞转移导致减少病毒负担和增加肺合规IAV后感染gydF4y2Ba
肺嗜酸性粒细胞是从小鼠过敏性哮喘的直接转移到IAV-infected老鼠的航空公司(gydF4y2Ba图5gydF4y2Ba嗜酸性粒细胞)来测试假设增强抗病毒对IAV宿主免疫力。感染pH1N1导致了两组小鼠体重,没有生物有关重量的变化曲线(gydF4y2Ba图5 bgydF4y2Ba)。重要的是,嗜酸性粒细胞受体小鼠肺部大大减少病毒(gydF4y2Ba图5度gydF4y2Ba,gydF4y2Ba补充图2gydF4y2Ba)和肺更好的遵从性(gydF4y2Ba图5 dgydF4y2Ba,gydF4y2Ba补充图2gydF4y2Ba)。尽管嗜酸性粒细胞转移并未改变肺白细胞的总数gydF4y2Ba图5 egydF4y2Ba),IAV-specific CD8的数量gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞浸润的航空公司也显著大于老鼠(gydF4y2Ba图5 fgydF4y2Ba)。CD8的增加gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞与肺病毒载量下降。BMdEos被转移到Flu-infected老鼠,以确保我们的发现并不是由于一小部分污染lung-purified嗜酸性粒细胞巨噬细胞。类似于肺嗜酸性粒细胞,BMdEos转移也导致减少病毒载量和CD8增加gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞(gydF4y2Ba补充图2gydF4y2Ba)。(PBV)病毒感染导致支气管血管周围炎症,这类似于嗜酸性粒细胞接受者(gydF4y2Ba图5克gydF4y2Ba)。嗜酸性粒细胞缺乏的老鼠(ΔdblGATA1)受到AA +流感模型增加了病毒载量和减少Flu-specific CD8的数量gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞与野生型相比控件(gydF4y2Ba补充图2gydF4y2Ba)。这些数据表明,减少流感发病率可能是由于增强病毒数量的增加抗病毒CD8间隙gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞浸润气道嗜酸性粒细胞转移的反应。gydF4y2Ba
嗜酸性粒细胞促进抗病毒免疫小鼠与CA和流感gydF4y2Ba
我们之前的数据表明,气道过敏性炎症消退后28 d第二真菌吸入和架构更改包括纤维化,平滑肌细胞增生,透明质酸沉积发生在牙龈地区的航空公司(gydF4y2Ba28gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba30.gydF4y2Ba)。老鼠在我们的模型中CA +流感发病率(嗜酸性粒细胞明显减少)容易发病率明显占据了减肥和肺上皮损伤,与AA +流感组相比,并没有屈服于流感(gydF4y2Ba13gydF4y2Ba)。因此,我们假设增加嗜酸性粒细胞在CA +流感老鼠的数量将增加抗病毒免疫反应在哮喘肺。实际上,当嗜酸性粒细胞被转移到航空IAV-infected小鼠与CA (CA +流感+ Eos) (gydF4y2Ba图6gydF4y2Ba)、受体小鼠体重反弹早于控制虽然这种变化可能没有一个重要的生物相关性(gydF4y2Ba图6 bgydF4y2Ba)和显示显著减少病毒负担(gydF4y2Ba图6 cgydF4y2Ba,gydF4y2Ba补充图2gydF4y2Ba),在协议与我们的发现流感+ Eos老鼠(gydF4y2Ba图5gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
小鼠肺合规也改善了CA +流感而只控制但嗜酸性粒细胞转移没有进一步改善遵从性(gydF4y2Ba图6 dgydF4y2Ba,gydF4y2Ba补充图2gydF4y2Ba)。虽然降低了总BAL细胞在CA +流感有或没有嗜酸性粒细胞补充与Flu-controls (gydF4y2Ba图6 egydF4y2Ba),Flu-specific CD8的数量gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞浸润气道嗜酸性粒细胞后明显高于传输(gydF4y2Ba图6 fgydF4y2Ba与减少病毒负担(相关的),gydF4y2Ba图6 cgydF4y2Ba)。PBV炎症增加CA +流感+ Eos组与定性更多的细胞在这些领域,大多数形态确定为淋巴细胞(gydF4y2Ba图6克gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
嗜酸性粒细胞存在MLN和PBV地区的肺gydF4y2Ba
肽的转移——或者virus-pulsed嗜酸性粒细胞诱导更健壮的CD8gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞反应(gydF4y2Ba无花果。gydF4y2Ba,gydF4y2Ba4gydF4y2Ba)和嗜酸性粒细胞的直接转移到航空公司在IAV感染导致肺病毒减少负担(gydF4y2Ba无花果。gydF4y2Ba,gydF4y2Ba6gydF4y2Ba)在不影响病毒生长动力学(gydF4y2Ba补充图2gydF4y2Ba)。减少病毒滴度与CD8的增加gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞激活和病毒特异性CD8gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞渗透到航空公司。主要发生在淋巴结T细胞激活和扩张,并由专业的装甲运兵车而重新激活发生在感染的网站。嗜酸性粒细胞灌输进入肺部可以迁移到mln和本地化的副皮质接触过敏原后T细胞区(gydF4y2Ba31日gydF4y2Ba)。然而,嗜酸性粒细胞的存在还没有调查mln的流感感染。尽管嗜酸性粒细胞的存在在每一个领域不存在或很少在基线,他们出现在IAV-infected鼠标mln过继转移后,增加了(gydF4y2Ba图7gydF4y2Ba,gydF4y2Ba7 bgydF4y2Ba)。肺嗜酸性粒细胞的PBV IAV-infected也增加了由于过继转移(gydF4y2Ba图7gydF4y2Ba,gydF4y2Ba7 cgydF4y2Ba)。平行观测在CA +流感模型(gydF4y2Ba图7 d-fgydF4y2Ba),嗜酸性粒细胞是位于区域,使它们相互作用,并可能出现Ag, CD8gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞。gydF4y2Ba
嗜酸性粒细胞与CD8沟通gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞在体外Ag-specific方式gydF4y2Ba
激活CD8gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞依赖Ag)识别的识别和二次刺激costimulatory分子。累积在体外和体内数据表明,嗜酸性粒细胞和CD8之间的通信的可能角色gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞在一个Ag-specific方式。此外,我们发现,嗜酸性粒细胞调节MHCI和CD86 IAV (gydF4y2Ba图2gydF4y2Ba)。确定角色嗜酸性粒细胞CD8 Ag)表示gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞,我们使用了一个流感NP-specific MHCIgydF4y2Ba+gydF4y2Ba,CD8gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞杂种细胞,表达β-galactosidase在识别病毒NP肽包裹着MHCI。这个杂种细胞是由IAV-infected BMdEos以及IAV-infected脾细胞,和能够合成IAV NP肽本身(gydF4y2Ba图8gydF4y2Ba)。负控制NP肽从塞无法激活这个IAV NP-specific杂种细胞(gydF4y2Ba图8gydF4y2Ba)。的IAV-infected BMdEos无法刺激HIV-specific杂种细胞(数据未显示),这表明IAV-infected BMdEos CD8的激活gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞是特定于Ag)。可视化细胞间直接交互,卵子peptide-pulsed嗜酸性粒细胞与CD8 coculturedgydF4y2Ba+gydF4y2Ba从OT-1小鼠T细胞纯化。在这项研究中,CD8gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞与嗜酸性粒细胞是可见的目标定位LFA-1(黄色)和T细胞的膜相互作用肌动蛋白重组(蓝色)在两个细胞(gydF4y2Ba图8 bgydF4y2Ba)。这些变化仅仅是特定SIINFEKL为嗜酸性粒细胞和嗜酸性粒细胞脉冲炒肽没有导致肌动蛋白的定位或LFA-1 (gydF4y2Ba图8 bgydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
嗜酸性粒细胞可能函数作为介质在IAV感染的细胞免疫gydF4y2Ba
纯化的转移从AA +流感老鼠的肺嗜酸性粒细胞幼稚动物导致Flu-specific CD8的发展gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞(gydF4y2Ba补充图3gydF4y2Ba),表示可能在T细胞嗜酸性粒细胞启动作用。我们的体外和体内数据与肽和病毒表明,嗜酸性粒细胞增强抗病毒反应细胞的适应性免疫反应。因此,我们测试了假说,嗜酸性粒细胞辅助介质与突变PR8感染小鼠的细胞免疫和转移野生型PR8-pulsed BMdEos测量细胞免疫(gydF4y2Ba图9gydF4y2Ba)。CD8gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞特定的病毒gydF4y2Ba224 - 233gydF4y2Ba(删除突变PR8)被发现在落下帷幕,肺部、脾脏的老鼠接受野生型PR8-pulsed BMdEos而那些收到如果BMdEos没有这些特定CD8gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞(gydF4y2Ba图9 bgydF4y2Ba),这表明嗜酸性粒细胞可能从事CD8的激活gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞。PR8-pulsed BMdEos,福尔马林固定前转移到老鼠感染变异病毒有显著减少PAgydF4y2Ba+gydF4y2BaCD8gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞(gydF4y2Ba补充图4gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
讨论gydF4y2Ba
嗜酸性粒细胞是传统上被认为是终末分化细胞重要的宿主反应中TgydF4y2BaHgydF4y2Ba2型疾病,包括哮喘。嗜酸性粒细胞在癌症小说功能(gydF4y2Ba32gydF4y2Ba)、心脏疾病(gydF4y2Ba33gydF4y2Ba)、糖尿病(gydF4y2Ba34gydF4y2Ba),其中,表明嗜酸性粒细胞及其在免疫作用是复杂的,超越的过敏性疾病。最近的报告围绕2009年流感大流行提供证据表明,哮喘患者不太可能遭受严重的发病率与non-asthmatics (gydF4y2Ba4gydF4y2Ba,gydF4y2Ba5gydF4y2Ba,gydF4y2Ba7gydF4y2Ba,gydF4y2Ba35gydF4y2Ba)。小鼠致敏和挑战gydF4y2Ba答:来自烟gydF4y2Ba在高峰气道炎症和感染是防止流感,没有减肥,增强病毒清除,增加病毒特异性CD8的渗透gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞到航空公司(gydF4y2Ba13gydF4y2Ba)。这些报告,连同新兴嗜酸性粒细胞抗病毒和抗菌作用的证据,让我们假设在流感嗜酸性粒细胞导致宿主免疫。我们显示在这项研究中,嗜酸性粒细胞是容易感染IAV,进行PMD,和移植Ag)表示标记(MHCI和CD86) IAV, IAV-stimulated嗜酸性粒细胞可以增强CD8gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞反应导致病毒负担和发病率的减少。gydF4y2Ba
抗病毒效应嗜酸性粒细胞的功能在其他病毒感染中病毒负担和死亡率减少hypereosinophilic老鼠(gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba,gydF4y2Ba36gydF4y2Ba,gydF4y2Ba37gydF4y2Ba),颗粒蛋白减少呼吸道合胞体病毒的传染性和PVM (gydF4y2Ba17gydF4y2Ba,gydF4y2Ba18gydF4y2Ba),但不是塞夫(gydF4y2Ba37gydF4y2Ba)。尽管嗜酸性粒细胞占据PMD先前被认为需要接触过敏原(gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba),我们表明,PMD会发生仅在应对IAV,表明嗜酸性粒细胞有能力应对IAV动态的过敏原。然而,在这个时候,我们不确定如何IAV触发PMD在嗜酸性粒细胞,在应对IAV颗粒蛋白被释放,或如何与流感发病机制中的过敏主机。嗜酸性粒细胞rna已发现在PVM感染(gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba)这意味着当地嗜酸性粒细胞激活可能减轻病毒感染。因为嗜酸性粒细胞颗粒蛋白促进树突状细胞(DC)成熟(gydF4y2Ba38gydF4y2Ba),以及DCs内化颗粒蛋白(gydF4y2Ba39gydF4y2Ba),IAV-induced嗜酸性粒细胞PMD可能有一个角色在调制直流功能早期感染。嗜酸性粒细胞表面内部病毒Ag)表达式可能会增加额外的免疫反应等Ab-mediated吸收感染细胞促进DC和巨噬细胞激活在肺部。因此,嗜酸性粒细胞招募到航空公司针对过敏原或病毒可能经历类似的激活和感染的网站,参与免疫调节和影响周围的白细胞,通过PMD (gydF4y2Ba图9 cgydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
嗜酸性粒细胞与减少病毒负担与股票和PVM (allergen-induced动物模型gydF4y2Ba19gydF4y2Ba,gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba,gydF4y2Ba37gydF4y2Ba)。过敏原接触的必要性,而嗜酸性粒细胞颗粒释放蛋白质,减轻这些病毒和其他介质是重要的,一个可能的嗜酸性粒细胞的作用在调节细胞免疫不考虑,也许是因为小鼠嗜酸性粒细胞升高之前清除这些病毒的有效激活适应性免疫反应。因为累积主机响应基于病毒的类型不同,也有可能,嗜酸性粒细胞反应是根据不同的病毒。在对比研究与其他呼吸道病毒(gydF4y2Ba18gydF4y2Ba,gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba,gydF4y2Ba37gydF4y2Ba),与真菌感染IAV哮喘小鼠相当于肺病毒载量在早期的时间点,对CD8病毒负担迅速下降gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞招聘(gydF4y2Ba13gydF4y2Ba)。因为病毒特异性CD8gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞是至关重要的宿主防御流感(gydF4y2Ba40gydF4y2Ba,gydF4y2Ba41gydF4y2Ba),IAV-infected嗜酸性粒细胞收件人显示病毒负担的减少与增加CD8的涌入gydF4y2Ba+gydF4y2BaCD8 T细胞,我们假设嗜酸性粒细胞可能支持gydF4y2Ba+gydF4y2BaIAV T细胞免疫反应。的强度和持续时间Ag)可用性与CD8的速度有关gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞分化(gydF4y2Ba42gydF4y2Ba)。与他们的富足在AA +流感老鼠的航空公司(gydF4y2Ba13gydF4y2Ba)、抵抗传染性高剂量和' CD8的能力gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞,嗜酸性粒细胞可能提供一个辅助支持功能通过增加Ags的种类和可用性,导致更有效的细胞免疫。嗜酸性粒细胞IAV的低复制的能力表明,IAV感染可能是流产的嗜酸性粒细胞类似专业装甲运兵车DCs和巨噬细胞(gydF4y2Ba43gydF4y2Ba)。类似于apc (gydF4y2Ba44gydF4y2Ba感染),嗜酸性粒细胞也可能依靠收集病毒多肽展示。因此,在微环境,建立了港口,如过敏性肺部,嗜酸性粒细胞可能发挥辅助作用等专业的装甲运兵车DCs调解有效的细胞免疫。gydF4y2Ba
专业装甲运兵车更有效地展示Ags活跃IAV感染CD4期间获得的gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞的上下文中MHCII比Ags获得体内通过内吞作用(gydF4y2Ba44gydF4y2Ba)。发现MHCII (gydF4y2Ba45gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba48gydF4y2Ba)和costimulatory分子(gydF4y2Ba49gydF4y2Ba,gydF4y2Ba50gydF4y2Ba嗜酸性粒细胞),以及演示的能力产生细胞因子(gydF4y2Ba51gydF4y2Ba),迁移到淋巴结(gydF4y2Ba31日gydF4y2Ba,gydF4y2Ba52gydF4y2Ba)和现在的Ags CD4细胞gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞(gydF4y2Ba53gydF4y2Ba,gydF4y2Ba54gydF4y2Ba),嗜酸性粒细胞分类为假定的附加装甲运兵车的免疫系统。然而,IAV没有调节MHCII的表达在我们的研究嗜酸性粒细胞(数据未显示),CD4和我们没有观察到显著变化gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞在IAV感染模型之间有或没有嗜酸性粒细胞(gydF4y2Ba13gydF4y2Ba)。然而,嗜酸性粒细胞可以提高DCs和CD4的数量gydF4y2Ba+gydF4y2Ba在淋巴结T细胞(gydF4y2Ba55gydF4y2Ba),连同他们的存在在胸腺(gydF4y2Ba56gydF4y2Ba),建议一个沟通能力与专业的装甲运兵车和调节T细胞反应。嗜酸性粒细胞已经证明了迁移到mln过敏原模型(gydF4y2Ba57gydF4y2Ba,gydF4y2Ba58gydF4y2Ba),但他们的存在在mln呼吸道病毒感染还没有被证明。虽然我们没有直接测量迁移,基于数量的增加嗜酸性粒细胞过继转移后的mln之前Flu-specific CD8的渗透gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞的肺,我们假定嗜酸性粒细胞感染或捕获病毒Ag)在肺部和迁移的T细胞区肺淋巴结调节T细胞反应(gydF4y2Ba图9gydF4y2Ba)。选择的手段病毒Ags嗜酸性粒细胞和它们是如何加载到MHCI分子需要进一步调查。gydF4y2Ba
中性粒细胞(相关粒细胞)促进抗病毒免疫,所到之处皆CXCL12-loaded指导抗病毒CD8细胞颗粒gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞IAV-infected肺(gydF4y2Ba59gydF4y2Ba)。中性粒细胞促进CD8的进一步证据gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞招聘在IAV (gydF4y2Ba60gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba62年gydF4y2Ba)展示粒细胞在病毒感染的免疫调节功能和描述的机制的重要性。虽然我们的研究结果表明在启动和调节CD8嗜酸性粒细胞的作用gydF4y2Ba+gydF4y2Ba在IAV感染T细胞反应,另一种解释可能是嗜酸性粒细胞病毒Ags转移到专业的装甲运兵车cross-presentation增强细胞免疫的调节辅助T细胞反应。虽然cross-presentation DCs触发抗病毒CD8很重要gydF4y2Ba+gydF4y2Ba对IAV的T细胞反应,病毒防御已知阻碍有效的直流响应从而延迟或削弱T细胞反应(gydF4y2Ba63年gydF4y2Ba,gydF4y2Ba64年gydF4y2Ba)。因为过敏的嗜酸性粒细胞数量航空主机超过大多数其他细胞类型,额外的细胞免疫效应功能的嗜酸性粒细胞监管机构可能是一个防御机制,有利于宿主感染过敏fast-replicating IAV等呼吸道病原体。gydF4y2Ba
嗜酸性粒细胞也增强抗肿瘤免疫力他们的存在会导致增加激活CD8的招聘gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞、肿瘤大小的减少和改善肿瘤脉管系统(gydF4y2Ba32gydF4y2Ba)。这些数据非常类似于IAV感染我们的发现。数据提出了研究划定一个机制,嗜酸性粒细胞可能有助于增强细胞免疫在主机与过敏性哮喘(IAVgydF4y2Ba图9 cgydF4y2Ba)。我们建议肺嗜酸性粒细胞allergen-provoked老鼠已做好准备,来应对新病原体和IAV接受PMD被激活,从而增加细胞因子负荷微环境和原位激活宿主细胞功能。病毒通过模式识别受体识别可能发生TLR3 (IAV模型发现升高)除了其他受体感染嗜酸性粒细胞。嗜酸性粒细胞激活迁移到mln可能出现病毒直接向CD8 Ag)gydF4y2Ba+gydF4y2Ba感染T细胞,进而迁移到网站,导致减少病毒负担通过效应器功能(granzyme和细胞因子释放)。丰富的嗜酸性粒细胞的肺部过敏小鼠重新刺激激活CD8的可能性增加了gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞在感染的网站。第三信号提供的嗜酸性粒细胞的MLN eosinophil-activated CD8和功能的影响gydF4y2Ba+gydF4y2Ba在IAV感染T细胞是由我们小组目前正在接受调查。因为嗜酸性粒细胞可以调节直流响应(gydF4y2Ba39gydF4y2Ba,gydF4y2Ba65年gydF4y2Ba),有可能IAV-activated嗜酸性粒细胞调节直流功能mln或促进CD8的肺部gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞。gydF4y2Ba
嗜酸性粒细胞是多功能细胞长期被认为是介质的哮喘严重程度。然而,当地免疫和/或法规/修复假说提出,嗜酸性粒细胞招聘产生的反应细胞营业额在组织和嗜酸性粒细胞导致免疫反应的微环境,试图重新组织内稳态(gydF4y2Ba66年gydF4y2Ba)。在这项研究中提出的数据支持这一假设的嗜酸性粒细胞中占主导地位的呼吸道过敏导致抗病毒免疫防御通过支持CD8 IAV感染gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞反应。这种改进的理解嗜酸性粒细胞抗病毒宿主防御功能因此不仅生物很有趣,但医学上重要的上下文中理解最好的治疗哮喘患者在流感病毒感染。gydF4y2Ba
披露的信息gydF4y2Ba
作者没有利益上的冲突。gydF4y2Ba
确认gydF4y2Ba
我们感谢以下个人SJCRH:斯泰西伍拉德博士(流式细胞术),谢尔比帕特里克(动物资源中心)、沙龙Frase(电子显微镜的核心),绿色(免疫学)和道格拉斯博士。我们真诚感谢博士的实验室南希和詹姆斯·j·李(梅奥诊所,AZ)小鼠嗜酸性粒细胞抗体相关的rna,和海琳罗森博格博士(国家卫生研究院国家过敏症和传染病研究所)分享无限eosinophil-related智慧。A.E.S.博士由于己Cormier和克里斯托弗医生水域通过职业顾问委员会的建议,和水域博士和克里斯蒂娜Stoeckle评论的手稿。萨米博士说这项研究致力于末(纽约石溪)和“Choksey”坚定的承诺和支持。gydF4y2Ba
脚注gydF4y2Ba
这项工作得到了国家过敏症和传染病研究所合同HHSN2662007000005C,卓越中心流感研究和监测格兰特N 01 7005 c (J.A.M.), Le Bonheur儿童基金会青年教师格兰特,Bea戈贝尔奖,和一个年轻调查员奖(A.E.S.),美国肺脏协会生物医学研究格兰特(A.E.S.),国家心、肺、血液研究所授予HL065228 (J.J.L.),慰问Nacional de Desenvolvimento Cientifico e学府(巴西),和Fundacao de帕罗尽管做Estado de米纳斯吉拉斯(巴西)(R.C.N.M.)。gydF4y2Ba
本文包含的在线版本gydF4y2Ba补充材料gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
本文中使用的缩写:gydF4y2Ba
- AAgydF4y2Ba
- 急性哮喘gydF4y2Ba
- 落下帷幕gydF4y2Ba
- 支气管肺泡灌洗gydF4y2Ba
- BMdDCgydF4y2Ba
- BMd树突细胞gydF4y2Ba
- BMdEogydF4y2Ba
- 骨骨髓来源的嗜酸性粒细胞gydF4y2Ba
- CAgydF4y2Ba
- 慢性哮喘gydF4y2Ba
- 直流gydF4y2Ba
- 树突细胞gydF4y2Ba
- dpigydF4y2Ba
- 天postinfectiongydF4y2Ba
- 流感gydF4y2Ba
- 流感gydF4y2Ba
- IAVgydF4y2Ba
- 甲型流感病毒gydF4y2Ba
- 位差gydF4y2Ba
- 四分位范围gydF4y2Ba
- MDCKgydF4y2Ba
- Madin-Darby犬肾gydF4y2Ba
- MHCIgydF4y2Ba
- MHC类我gydF4y2Ba
- MLNgydF4y2Ba
- 纵隔淋巴结gydF4y2Ba
- 莫伊gydF4y2Ba
- 感染复数gydF4y2Ba
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- 核蛋白质gydF4y2Ba
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