文摘gydF4y2Ba
囊性纤维化(CF)是由于CF跨膜电导调节基因的突变gydF4y2Ba雌性生殖道gydF4y2Ba。CF的特点是粘液脱水、慢性细菌感染和炎症,增加水平的胞质磷脂酶A2α(cPLA2α)产品在航空公司。gydF4y2Ba
我们旨在考察的角色cPLA2α调制的粘液生产和炎症CFTR-deficient老鼠和上皮细胞。粘液生产使用组织学分析,评估immuno-histochemistry和MUC5AC ELISA。cPLA2α激活测量使用酶试验和肺部炎症由组织学分析和多形核中性粒细胞计数支气管肺泡灌洗。gydF4y2Ba
在肺gydF4y2Ba雌性生殖道gydF4y2Ba- / -gydF4y2Ba老鼠,脂多糖诱导粘液生产过剩和MUC5AC表达增加cPLA2α活动。粘液生产过剩是模仿的滴剂cPLA2α产品花生四烯酸,和废除cPLA2αnull突变或药物抑制。增加cPLA2α活动观察支气管外植体的CF患者。雌性生殖道沉默诱导cPLA2α激活和MUC5AC表达在人类支气管上皮细胞。这个表达式由花生四烯酸增强,减少cPLA2α抑制。然而,抑制雌性生殖道氯运输功能没有影响MUC5AC表达。gydF4y2Ba
减少雌性生殖道表达式cPLA2α活动增加。这导致了一个增强的粘液在气道上皮细胞独立于生产雌性生殖道氯运输功能。cPLA2α代表一个适合治疗干预CF的新目标。gydF4y2Ba
囊性纤维化(CF)是一种常见的隐性遗传疾病在高加索人群由于CF跨膜电导调节基因的突变gydF4y2Ba雌性生殖道gydF4y2Ba。最常见的突变导致的缺失在氨基酸苯丙氨酸残基位置508 (F508del)gydF4y2Ba1gydF4y2Ba。突变的gydF4y2Ba雌性生殖道gydF4y2Ba导致功能障碍的氯和钠离子通道导致气道粘液异常,CF的重要病理生理特征gydF4y2Ba2gydF4y2Ba。这导致气道阻塞,慢性细菌感染,尤其是通过gydF4y2Ba铜绿假单胞菌gydF4y2Ba和炎症,导致一个戏剧性的呼吸衰竭,CF患者死亡率的主要原因gydF4y2Ba3gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba5gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
通常,开展航空的上皮覆盖着一层薄薄的粘液,扮演着重要的角色在吸入气道防御病原体通过促进他们的间隙gydF4y2Ba通过gydF4y2Ba对上呼吸道黏膜纤毛的清除gydF4y2Ba6gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba8gydF4y2Ba。黏蛋白大量分泌的糖蛋白在气道腔上皮和粘膜下腺体细胞。黏蛋白MUC5AC和MUC5B已经被确认为正常人气道粘液的重要组成部分gydF4y2Ba9gydF4y2Ba。CF患者气道疾病的特点是由粘液分泌物进步的气道阻塞gydF4y2Ba10gydF4y2Ba。黏蛋白的研究在CF航空切除移植时表明:1)在CF MUC5AC mRNA表达增加上皮细胞相比,对照组的上皮细胞gydF4y2Ba11gydF4y2Ba,2)免疫染色在CF MUC5AC蛋白质增加上皮细胞与对照组相比gydF4y2Ba12gydF4y2Ba,gydF4y2Ba13gydF4y2Ba3)MUC5AC蛋白质存在气道腔的CF主题,导致气道堵塞gydF4y2Ba12gydF4y2Ba,gydF4y2Ba13gydF4y2Ba4)MUC5B也增加了CF气道上皮细胞和内腔gydF4y2Ba12gydF4y2Ba,gydF4y2Ba13gydF4y2Ba。总之,这些数据表明,生产过剩和MUC5AC的分泌和MUC5B黏蛋白发生在CF航空和可能导致他们进步的堵塞。加西亚最近的一篇论文gydF4y2Baet al。gydF4y2Ba14gydF4y2Ba显示,雌性生殖道活动所需正常水化和肠道分泌粘蛋白在小鼠模型的CF。推断,一个类似的机制可能在CF航空公司中发挥作用gydF4y2Ba14gydF4y2Ba。这并不排除粘液分泌过多,杯状细胞增生的因素。gydF4y2Ba
许多研究研究机制诱导的肺粘液分泌过多和粘蛋白表达在不同的哮喘动物模型gydF4y2Ba15gydF4y2Ba,gydF4y2Ba16gydF4y2Ba和慢性阻塞性肺疾病gydF4y2Ba17gydF4y2Ba。虽然雌性生殖道突变引起粘液脱水和积累,这些突变在粘蛋白表达的影响尚不清楚。这个表达式可以是一个直接后果的雌性生殖道改变或二级加剧了雌性生殖道改变引起的肺部炎症。虽然增加了生产各种花生四烯酸代谢物,包括白三烯BgydF4y2Ba4gydF4y2Ba已报道,在航空公司的CF患者gydF4y2Ba18gydF4y2Ba半胱氨酰白三烯等的水平,引起粘液生产gydF4y2Ba16gydF4y2Ba,gydF4y2Ba19gydF4y2Ba不明。我们最近发现,一种关键酶参与花生四烯酸的释放,胞质磷脂酶(cPLA) A2α,与雌性生殖道形成复合物,因此可能CF的发病机制中发挥重要作用gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba。sn-2 cPLA2α水解磷脂膜的位置导致选择性花生四烯酸的释放gydF4y2Ba21gydF4y2Ba,gydF4y2Ba22gydF4y2Ba。后者进一步把环氧酶和脂氧合酶转化为前列腺素(PG)和白细胞三烯(LT),分别gydF4y2Ba23gydF4y2Ba,gydF4y2Ba24gydF4y2Ba等介质。的含义cPLA2α肺部炎症的发展已经在各种动物模型的广泛研究肺部炎性疾病gydF4y2Ba25gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba27gydF4y2Ba但其参与CF,特别是在气道粘液分泌尚未解决。本研究旨在调查cPLA2α在脂多糖(LPS)全身肺粘液生产CF的小鼠模型(gydF4y2Ba雌性生殖道gydF4y2Ba- / -gydF4y2Ba老鼠)和CFTR-deficient人类支气管上皮细胞。gydF4y2Ba
材料和方法gydF4y2Ba
老鼠gydF4y2Ba
雌性生殖道gydF4y2Ba- / -gydF4y2Ba(C57BL / 6 jgydF4y2Ba雌性生殖道gydF4y2Bam1UNCgydF4y2Ba),建立了基因打靶gydF4y2Ba28gydF4y2Ba,获得“中心分布,de Typage et d 'Archivage动物”(法国奥尔良)。断奶后,商业渗透泻药(Movicol®;Norgine,英国米德尔塞克斯)提供的饮用水增加的生存gydF4y2Ba雌性生殖道gydF4y2Ba- / -gydF4y2Ba老鼠。建立C57BL / 6 j / cPLA2α-null老鼠之前报道gydF4y2Ba27gydF4y2Ba和美联储一个标准实验室饮食和水。实验进行8-12-week-old老鼠,每组至少有六只老鼠。老鼠照顾根据巴斯德研究所,法国巴黎方针符合欧盟动物福利法规。gydF4y2Ba
有限合伙人和arachidonyl trifluoromethyl酮灌注物gydF4y2Ba
老鼠anesthetised甲苯噻嗪2% (8 mg·公斤gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba普托)(Rompum,拜耳医疗、法国),克他命1000 (40 mg·公斤gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba)(Imalgene1000梅里亚,法国里昂)和治疗cPLA2α抑制剂,arachidonyl trifluoromethyl酮(ATK公司)(σ,圣路易斯,密苏里州,美国)如前所述gydF4y2Ba29日gydF4y2Ba。短暂,老鼠收到腹腔滴注法·ATK公司(20毫克公斤gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba)在20%的乙醇溶液,或者同样体积的这个解决方案。1小时后,老鼠接受气管内的滴注法gydF4y2Ba铜绿假单胞菌gydF4y2Ba有限合伙人(330μg·公斤gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba在20μL PBS)(血清型10;σ)。老鼠收到第二腹腔滴注法·ATK公司(20毫克公斤gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba)24 h后。支气管肺泡灌洗(巴尔斯)和PBS进行24小时或4天后有限合伙人滴注法。介绍了PBS慢慢超过1分钟减少创伤,因此血红细胞污染。炎症的程度是由多形核中性粒细胞(中性粒细胞)计数测量评估表现如前所述gydF4y2Ba30.gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
组织固定和组织学染色的组织部分gydF4y2Ba
肺被刷新到删除血液,在4%甲醛浸泡48小时在4°C和加工石蜡包容。分析细胞存在于上皮细胞衬的小型和大型肺内的支气管进行如前所述gydF4y2Ba31日gydF4y2Ba。纵向和横向部分主要的肺内的支气管5-μm厚度的准备与苏木精和伊红染色()),周期性acid-Schiff (PAS)或阿尔新蓝(AB);pH值2.4)。部分(每个鼠标5个部分)是由想象大型和小型航空公司在所有实验小组。粘液分数双盲的方式建立了由两个独立观察员的监督下病理学家AB-positive细胞计数,每只老鼠400×30领域放大,正如前面报道gydF4y2Ba31日gydF4y2Ba,gydF4y2Ba32gydF4y2Ba。分数分析(表1所示的在线补充材料)及其统计分析表明部分执行“统计分析”。gydF4y2Ba
免疫组织化学gydF4y2Ba
MUC5AC immunohistochemistygydF4y2Ba
石蜡切片(5μm)的小鼠肺沾特定单克隆抗体针对MUC5AC(克隆45 M1;Neomarkers Fermont、钙、美国)。2 h后在室温下,部分用PBS含有2%牛血清白蛋白(BSA) 30分钟和孵化免疫球蛋白G (Ig)结合辣根过氧化物酶anti-mouse (Dako Cytomation设想系统,Carpinteria, CA,美国)。部分被清洗和沾氨基乙基carbazol(σ)。gydF4y2Ba
cPLA2α免疫组织化学gydF4y2Ba
5-μm部分人类支气管外植体孵化与特定的兔多克隆抗体对phospho-cPLA2α(1:50稀释;美国细胞信号,波士顿,MA)在室温下1 h。与PBS洗涤后,部分与生物素化的马孵化anti-rabbit抗体(1:200稀释;向量的实验室,伯林盖姆,CA,美国)。结果显示avidin-biotin-peroxidase复杂方法(精英ABC设备;向量的实验室)。gydF4y2Ba
上皮细胞孵化项目gydF4y2Ba
NCI-H292细胞生长在rpmi - 1640中如前所述gydF4y2Ba33gydF4y2Ba,pre-incubated cPLA2α抑制剂甲基arachidonyl fluorophosphonate (MAFP)或Pyrrolidine-1 1 h与LPS刺激前,transformin生长因子(TGF) -α十四烷酸或佛波醇酯(PMA)。这些化合物的浓度是采用基于以前的出版物。在其他的研究中,细胞转染和小干扰rna(σ)和相应的核控制使用雌性生殖道TransIT-siQUEST®转染试剂按照制造商的指示(WI Mirus,麦迪逊,美国)。细胞培养1 h和MAFP 24 h与PMA刺激紧随其后。gydF4y2Ba
测量cPLA2α活动和免费花生四烯酸gydF4y2Ba
肺组织和根据Filgueiras和Possmayer NCI-H292细胞细胞溶解gydF4y2Ba34gydF4y2Ba在1000 x和离心5分钟gydF4y2BaggydF4y2Ba移除碎片。蛋白质浓度颗粒从皮尔斯被使用测量工具(美国热科学,罗克福德,IL)。蛋白质提取与等效内容是孵化为30分钟1毫升囊泡含有6 nmol 1-palmitoyl-2 [gydF4y2Ba14gydF4y2BaC] arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphorylcholine (> 53 mCi·更易gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba)(美国优秀的,波士顿,MA)和4 nmol甘油二酯(σ),在5毫米CaCl的存在gydF4y2Ba2gydF4y2Ba和1毫米2-mercaptoethanolgydF4y2Ba35gydF4y2Ba。这个试验检测选择性cPLA2α活动iPLA2(钙独立磷脂酶A2)活动不需要钙,和2-mercaptoethanol抑制sPLA2(分泌磷脂酶A2)但不是cPLA2α活动gydF4y2Ba35gydF4y2Ba。然后,测量和计算的cPLA2α活动测量gydF4y2Ba35gydF4y2Ba。免费花生四烯酸的水平在矿山测量流体(BALF)气相色谱/质谱作为之前报道gydF4y2Ba36gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
MUC5AC ELISAgydF4y2Ba
整除的细胞溶解产物或细胞培养与bicarbonate-carbonate孵化缓冲区(50μL)在40°C 96孔板(Nalge Nunc国际,罗切斯特,纽约,美国),直到干。MUC5AC水平衡量ELISA使用鼠标单克隆抗体针对MUC5AC(克隆45 M1, Neomarkers)如前所报道gydF4y2Ba37gydF4y2Ba。这对于MUC5AC抗体是特定的。gydF4y2Ba
Interleukin-8和PGE2的测量gydF4y2Ba
白介素8 (IL)在细胞培养和PGE2水平测定使用商业ELISA和EIA试剂盒研发系统(明尼阿波利斯,美国)和开曼群岛(美国安阿伯市MI)的化学物质。gydF4y2Ba
免疫印迹分析gydF4y2Ba
肺组织和NCI-H292细胞细胞溶解在裂解缓冲(缓冲RLT从试剂盒、Courtaboeuf法国)和丽珀•缓冲区,分别。等量的蛋白质样品被加载到7.5%三羟甲基氨基甲烷/甘氨酸/ SDS-polyacrylamide凝胶液。墨迹是在室温下培养1 h面色稀释的山羊抗体特定人类cPLA2α(sc - 454,圣克鲁斯生物技术有限公司,圣克鲁斯,CA,美国)或1:1000稀释的鼠单克隆抗体特定人类雌性生殖道(ab2784;Abcam、剑桥、马、美国)。gydF4y2Ba
支气管外植体的CF和non-CF病人gydF4y2Ba
支气管外植体在移植获得来自10个成年人与CF F508del突变和七个non-CF肺癌患者在网上补充材料(表2),如前所报道gydF4y2Ba12gydF4y2Ba。这些病人需要侵入性机械通气肺移植手术。研究符合赫尔辛基宣言和人类研究委员会的规则式科钦,巴黎,法国。gydF4y2Ba
统计分析gydF4y2Ba
我们使用方差分析进行比较在所有组,两个学科组之间的双尾使用SPSS软件学习。列文的测试用于测试方差的同质性。数据表示为±手段gydF4y2Ba扫描电镜gydF4y2Ba和p值< 0.05被认为是显著的。gydF4y2Ba
结果gydF4y2Ba
雌性生殖道gydF4y2Ba- / -gydF4y2Ba老鼠表现出增加肺粘液生产和MUC5AC表达gydF4y2Ba
组织学分析肺部分显示正常结构,没有炎症细胞和mucus-positive细胞gydF4y2Ba雌性生殖道gydF4y2Ba+ / +gydF4y2Ba老鼠。然而,在gydF4y2Ba雌性生殖道gydF4y2Ba- / -gydF4y2Ba老鼠,mucus-positive细胞的数量增加(gydF4y2Ba图1 lgydF4y2Ba)发现与之相比gydF4y2Ba雌性生殖道gydF4y2Ba+ / +gydF4y2Ba老鼠(参见粘液分数gydF4y2Ba图1gydF4y2Ba,p < 0.05)。气管内的盒子gydF4y2Ba铜绿假单胞菌gydF4y2Ba有限合伙人(330μg·公斤gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba)诱导强烈的支气管肺炎(特点是积累支气管腔内的炎症细胞和薄壁组织)在一个类似的程度上在两个鼠标菌株(gydF4y2Ba图1 lgydF4y2Ba)。这个剂量的有限合伙人(330μg·公斤gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba)已被证明诱导一个最佳的肺部炎症gydF4y2Ba30.gydF4y2Ba。中性粒细胞计数无显著差异(gydF4y2Ba图1一个gydF4y2Ba在网上补充材料)和巨噬细胞炎性protein-2浓度(数据未显示)观察落下帷幕的液体从两个菌株。然而,有限合伙人mucus-positive细胞的数量增加(gydF4y2Ba图1 lgydF4y2Ba)gydF4y2Ba雌性生殖道gydF4y2Ba- / -gydF4y2Ba相比之下,gydF4y2Ba雌性生殖道gydF4y2Ba+ / +gydF4y2Ba老鼠(见粘液分数gydF4y2Ba图1gydF4y2Ba,p < 0.01)。增强粘液生产gydF4y2Ba雌性生殖道gydF4y2Ba- / -gydF4y2Ba老鼠比PAS染色与AB更明显。Immuno-histochemical分析揭示出更多的MUC5AC-positive细胞在肺部gydF4y2Ba雌性生殖道gydF4y2Ba- / -gydF4y2Ba相比gydF4y2Ba雌性生殖道gydF4y2Ba+ / +gydF4y2Ba老鼠(gydF4y2Ba图1先生gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
雌性生殖道gydF4y2Ba- / -gydF4y2Ba老鼠显示增加肺cPLA2α活动和花生四烯酸释放gydF4y2Ba
增加cPLA2α活动中观察到肺匀浆gydF4y2Ba雌性生殖道gydF4y2Ba- / -gydF4y2Ba相比之下,gydF4y2Ba雌性生殖道gydF4y2Ba+ / +gydF4y2Ba老鼠,在基础条件(p < 0.05)或对有限合伙人的挑战(p < 0.01) (gydF4y2Ba图2一个gydF4y2Ba在网上补充材料)。这是伴随着增加免费花生四烯酸的水平gydF4y2Ba雌性生殖道gydF4y2Ba- / -gydF4y2Ba相比之下,gydF4y2Ba雌性生殖道gydF4y2Ba+ / +gydF4y2Ba小鼠(p < 0.05) (gydF4y2Ba图2 bgydF4y2Ba在网上补充材料)。类似水平的cPLA2α蛋白(gydF4y2Ba图2 cgydF4y2Ba在网上补充材料)被观察到肺gydF4y2Ba雌性生殖道gydF4y2Ba- / -gydF4y2Ba和gydF4y2Ba雌性生殖道gydF4y2Ba+ / +gydF4y2Ba老鼠,有限合伙人之前和之后的挑战。具体cPLA2α抑制剂ATK公司gydF4y2Ba29日gydF4y2Ba降低肺匀浆cPLA2α活动> 80% (p < 0.01) (gydF4y2Ba图2 dgydF4y2Ba在网上补充材料)。因此,观察到的PLA2活性增加可能是由于(很大程度上)一个增强cPLA2α活动的刺激。gydF4y2Ba
在雌性生殖道cPLA2α调节支气管粘液生产gydF4y2Ba- / -gydF4y2Ba老鼠gydF4y2Ba
ATK公司在气管内的腹腔注射LPS滴注法减少了AB染色(gydF4y2Ba图2 lgydF4y2Ba与gydF4y2Ba图1 lgydF4y2Ba)在两个gydF4y2Ba雌性生殖道gydF4y2Ba- / -gydF4y2Ba和正常小鼠同窝出生仔畜(见粘液分数gydF4y2Ba图1gydF4y2Ba;p < 0.01)。ATK公司还废除MUC5AC阳性细胞的数量(gydF4y2Ba图2 mpgydF4y2Ba)。然而,ATK公司没有影响炎症状态如图所示的组织学分析(gydF4y2Ba图2 lgydF4y2Ba在矿山)和中性粒细胞计数(gydF4y2Ba图1 bgydF4y2Ba在网上补充材料)。相比cPLA2αgydF4y2Ba+ / +gydF4y2Ba老鼠,没有检测到mucus-positive cPLA2α细胞被观察到gydF4y2Ba- / -gydF4y2Ba老鼠,在基底条件下和在有限合伙人滴剂(gydF4y2Ba图3 lgydF4y2Ba和gydF4y2Ba图3年代gydF4y2Ba;p < 0.01)。气管内的滴剂LPS诱导强烈的支气管肺炎(gydF4y2Ba图3 lgydF4y2Ba)。这是伴随着增加中性粒细胞计数BAL (gydF4y2Ba图3gydF4y2Ba在网上补充材料)。这些过程在野生型和cPLA2α观察到类似的强度gydF4y2Ba- / -gydF4y2Ba老鼠。气管内的滴剂的花生四烯酸C57 / Bl6野生型老鼠mucus-positive细胞的数量增加(gydF4y2Ba图3先生gydF4y2Ba和t;p < 0.01)。然而,花生四烯酸没有影响中性粒细胞浸润在肺组织中所示)染色(gydF4y2Ba图3先生gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
CF患者表现出增加支气管cPLA2α活动gydF4y2Ba
明显immuno-staining cPLA2α磷酸化(主动)形式的观察在所有部分CF与non-CF患者相比。积极的染色观察气道上皮细胞的细胞核和等离子体膜。浸润炎症细胞(gydF4y2Ba如。gydF4y2Ba中性粒细胞)也积极染色(gydF4y2Ba图4 a - cgydF4y2Ba)。更高水平的cPLA2α活动的支气管移植组织匀浆中发现了CF与non-CF患者相比(gydF4y2Ba图4 dgydF4y2Ba;p < 0.01)。这个活动被治疗显著降低匀浆从CF患者ATK公司(8422±300gydF4y2Ba与gydF4y2Ba2415±187 dpm·毫克gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba,意味着±gydF4y2Ba扫描电镜gydF4y2Ban = 6,在控制和ATK-treated匀浆,分别;p < 0.01)。gydF4y2Ba
雌性生殖道调节MUC5AC表达NCI-H292细胞gydF4y2Ba通过gydF4y2Ba一个cPLA2α−依赖机制gydF4y2Ba
我们检查了cPLA2α和雌性生殖道的作用MUC5AC表达在人类肺上皮细胞系NCI-H292,既表达了雌性生殖道和cPLA2α(gydF4y2Ba图4gydF4y2Ba和b在网上补充材料)。有限合伙人,TGF-α和PMA诱导增加MU5AC水平细胞溶解产物(gydF4y2Ba图5gydF4y2Ba和b) (p < 0.01)。众所周知,PMA诱导MUC5AC表达NCI-H292细胞gydF4y2Ba通过gydF4y2Ba矩阵metalloprotease-mediated TGF-α的释放gydF4y2Ba38gydF4y2Ba。MUC5AC水平减少cPLA2α抑制剂MAFP和Pyrrolydine-1 (gydF4y2Ba图5 bgydF4y2Ba)(p < 0.01),提高了花生四烯酸(gydF4y2Ba图5度gydF4y2Ba)(p < 0.01)。cPLA2α抑制剂和花生四烯酸干扰引发分泌(数据没有显示)。gydF4y2Ba
沉默的雌性生殖道表达式siRNA雌性生殖道蛋白质的水平减少了72±7.5% (p < 0.01)和62±5.5% (p < 0.05)与负siRNA-treated和未经处理的细胞相比,分别为(gydF4y2Ba图4gydF4y2Ba在网上补充材料b和c)。这导致增加cPLA2活动(gydF4y2Ba图6gydF4y2Ba)(p < 0.01)和PGE2释放(gydF4y2Ba图5gydF4y2Ba在网上补充材料)。这是伴随着增加MUC5AC水平细胞提取物(gydF4y2Ba图6 bgydF4y2Ba)(p < 0.01)和文化传媒(gydF4y2Ba图5 bgydF4y2Ba在网上补充材料),这两个被MAFP减少。相比之下,预处理细胞特定的雌性生殖道CFTR功能抑制剂检测gydF4y2Ba异烟肼gydF4y2Ba-172年gydF4y2Ba39gydF4y2Ba未能MUC5AC表达增加,甚至减少(gydF4y2Ba图6 cgydF4y2Ba)。作为一个积极的控制,我们表明,雌性生殖道gydF4y2Ba异烟肼gydF4y2Ba-172诱导引发分泌增加有限合伙人(p < 0.05)和PMA刺激(p < 0.01) (gydF4y2Ba图6 dgydF4y2Ba),这被认为是有效抑制雌性生殖道功能由雌性生殖道的证据gydF4y2Ba异烟肼gydF4y2Ba-172年。在这个浓度雌性生殖道gydF4y2Ba异烟肼gydF4y2Ba-172可以抑制特别是雌性生殖道Cl-function不干扰其他Cl -通道的活性gydF4y2Ba39gydF4y2Ba。我们得出结论,雌性生殖道的蛋白质表达水平,而不是雌性生殖道运输活动,调节cPLA2α活动,随后MUC5AC表达。gydF4y2Ba
讨论gydF4y2Ba
目前的研究表明gydF4y2Ba雌性生殖道gydF4y2Ba- / -gydF4y2Ba老鼠表现出增强支气管粘液生产加剧了gydF4y2Ba铜绿假单胞菌gydF4y2Ba有限合伙人。这发生在一个涉及过程,至少在某种程度上,一个老年病cPLA2α活动。支持这一点,我们表明,粘液生产被废除cPLA2αnull突变或特定的cPLA2α抑制剂。CF患者气道外植体也显示增强cPLA2α活动主要位于上皮细胞已被证明展览MUC5AC表达增加gydF4y2Ba12gydF4y2Ba。在细胞模型中,我们表明,cPLA2α活动和MUC5AC表达增加后减少雌性生殖道的表达式。这MUC5AC表达被cPLA2α抑制废除。然而,cPLA2α似乎LPS-induced炎症中扮演次要角色在我们的实验模型。事实上,无论是cPLA2α淘汰赛还是其药理抑制中性粒细胞有任何影响航空公司的涌入,或引发上皮细胞中表达。虽然我们的研究清楚地表明,cPLA2α粘液生产中扮演着重要角色,在这一过程中其他PLA2的含义不能排除在外。事实上,它已经表明,PLA2刺激分泌粘液分泌在雪貂气管gydF4y2Ba40gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
我们的研究表明一个雌性生殖道功能障碍的影响在气道上皮细胞、粘液生产gydF4y2Ba在体外gydF4y2Ba和gydF4y2Ba在活的有机体内gydF4y2Ba使用三种不同的方法(Immuno-histochemistry组织学染色法和ELISA)。我们的研究结果显示,gydF4y2Ba雌性生殖道gydF4y2Ba- / -gydF4y2Ba老鼠表现出恶化支气管粘液生产协议与以前的报告gydF4y2Ba41gydF4y2Ba虽然这是另一个有争议的gydF4y2Ba42gydF4y2Ba。畜牧业的差异,实验协议或遗传背景可能解释这个明显的差异。gydF4y2Ba
增强的cPLA2α活动gydF4y2Ba雌性生殖道gydF4y2Ba- / -gydF4y2Ba小鼠肺和人类CF支气管外植体中观察到现在的工作与之前的研究结果相一致的人类细胞系轴承F508del突变gydF4y2Ba43gydF4y2Ba,gydF4y2Ba44gydF4y2Ba。在这些细胞中,异常cPLA2α活动被认为是一个直接后果的雌性生殖道改变。合理的场景之一是雌性生殖道作为抑制剂cPLA2α活动通过annexin-1域高同源性gydF4y2Ba45gydF4y2Ba,cPLA2α抑制蛋白质gydF4y2Ba46gydF4y2Ba,gydF4y2Ba47gydF4y2Ba。因此,条件,降低雌性生殖道水平将提高cPLA2α活动。它建立了F508del突变导致内质网保留和雌性生殖道的快速退化gydF4y2Ba48gydF4y2Ba,gydF4y2Ba49gydF4y2Ba。目前的研究显示,雌性生殖道沉默cPLA2α活动增加上皮细胞。在最近的一份工作gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba,我们提出证据表明cPLA2α和雌性生殖道形成一个复杂的,通过互动与S100A10 / annexin-1显然,这种复杂的完整性可能影响cPLA2α活动。这与先前的报道是一致的证明雌性生殖道的能力,形成一个复杂的膜联蛋白IIgydF4y2Ba50gydF4y2Ba和VgydF4y2Ba51gydF4y2Ba。减少annexin-1水平已报告在哮喘小鼠模型gydF4y2Ba52gydF4y2Ba与一个平行cPLA2α活动的刺激。annexin-1强烈的表达减弱鼻细胞的CF患者,以及肺的gydF4y2Ba雌性生殖道gydF4y2Ba- / -gydF4y2Ba老鼠gydF4y2Ba53gydF4y2Ba。根据这些报告,我们发现cPLA2α活动增加肺的gydF4y2Ba雌性生殖道gydF4y2Ba- / -gydF4y2Ba老鼠和CF患者,我们假设变更级别的组件形成的这个假定的复杂可能会影响cPLA2α活动。这个活动是否增加CF上皮细胞由于变更级别的雌性生殖道或annexin-1,或者两者兼有,仍有待阐明。gydF4y2Ba
我们还表明,雌性生殖道功能抑制剂(雌性生殖道gydF4y2Ba异烟肼gydF4y2Ba-172)未能诱导MUC5AC表达NCI-H292细胞,表明雌性生殖道传递函数可能不发挥重要作用在MUC5AC表达在细胞模型。我们建议除了雌性生殖道氯传递函数对粘液的影响特性gydF4y2Ba14gydF4y2Ba,减少雌性生殖道的水平可能调节MUC5AC表达gydF4y2Ba通过gydF4y2BacPLA2α-dependent机制。这一事实cPLA2α抑制废除PMA和TGF-α-induced MUC5AC表达表明,表皮生长因子受体(EGFR)介导的粘液生产发生,至少部分通过cPLA2α激活。的确,众所周知,PMA诱导MUC5AC表达NCI-H292细胞gydF4y2Ba通过gydF4y2Ba矩阵metalloprotease-mediated释放TGF-α和表皮生长因子受体激活gydF4y2Ba38gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
雌性生殖道的刺激影响转录沉默cPLA2α活动和MUC5AC表达在上皮细胞表明MUC5AC表达gydF4y2Ba雌性生殖道gydF4y2Ba- / -gydF4y2Ba老鼠可能发生在上皮细胞通过自分泌cPLA2α调制。另外,MUC5AC感应可以发生在杯状细胞通过旁分泌刺激aracgidonic酸释放其他上皮细胞。我们假设cPLA2α可能发挥作用在粘液生产过剩的gydF4y2Ba铜绿假单胞菌gydF4y2BaCF患者的感染。的确,我们发现:1)cPLA2α调和gydF4y2Ba铜绿假单胞菌gydF4y2BaLPS-induced粘液生产过剩的gydF4y2Ba雌性生殖道gydF4y2Ba- / -gydF4y2Ba小鼠肺、2)这种酶发挥作用在CFTR-deficient MUC5AC表达人类支气管上皮细胞和3)cPLA2α活动增加支气管外植体的CF患者。应该强调,研究健康人低气道组织从生活CF主题仍然是一个重大挑战,因为大多数患者有慢性呼吸道感染/殖民过程中疾病。因此,尽管支气管外植体不能反映基底的这些航空公司,它准确地反映了gydF4y2Ba在活的有机体内gydF4y2Ba航空公司在慢性感染/炎症状态CF航空公司。因此,虽然我们的研究结果表明角色cPLA2αCF患者增加粘液生产,这也可以增加一个二级反应炎症。gydF4y2Ba
我们得出结论,减少雌性生殖道表达式在CF肺cPLA2α导致一个增强的激活,进而诱发粘液生产过剩。感应的粘液生产cPLA2α可能导致mucus-related病理学CF。药理方法基于cPLA2α抑制剂的使用减毒在人类上皮细胞和粘液生产过剩gydF4y2Ba雌性生殖道gydF4y2Ba- / -gydF4y2Ba老鼠。我们提出一个潜在的治疗作用cPLA2α抑制剂减少粘液积聚在CF。gydF4y2Ba
确认gydF4y2Ba
作者要感谢诉Balloy(团结起来INSERM de国防Innee等炎症,874年,巴斯德研究所,巴黎,法国)动物灌注物对她有用的帮助。我们感谢m . Huerre(团结de矫揉造作的et d 'Expertise Histotechnologie Pathologie,巴斯德研究所)专家意见和批评和p .大街美国Bergere(团结de矫揉造作的et d 'Expertise Histotechnologie Pathologie,巴斯德研究所)为帮助组织学分析。m . Wilke(伊拉斯谟MC、生物化学部门,鹿特丹,荷兰)和r . Buijs-Offerman(伊拉斯谟MC细胞生物学部门)承认协助准备肺组织和BALF样本。gydF4y2Ba
脚注gydF4y2Ba
社论评论看到页面gydF4y2Ba991年gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
可以从本文的补充材料gydF4y2Bawww.www.qdcxjkg.comgydF4y2Ba
支持声明gydF4y2Ba
这项工作是支持的部分gydF4y2BaContrat de矫揉造作的gydF4y2Ba法国协会”gydF4y2BaVaincre la MucoviscidosegydF4y2Ba“和DARRI,巴斯德研究所。f . Dif是支持“gydF4y2BaVaincre la MucoviscidosegydF4y2Ba”。j . Aarbiou和r . Buijs-Offerman(鹿特丹伊拉斯谟MC细胞生物学部门,荷兰)STW赠款支持6565和欧盟FP6IMPROVED精密lshb - ct - 2004 - 005213。gydF4y2Ba
感兴趣的语句gydF4y2Ba
没有宣布。gydF4y2Ba
- 收到了gydF4y2Ba2009年11月18日。gydF4y2Ba
- 接受gydF4y2Ba2010年3月31日。gydF4y2Ba
- ©2010人队gydF4y2Ba
引用gydF4y2Ba
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