文摘
炎性表型是认可的成人哮喘的稳定,但不建立在童年和急性哮喘。此外,Chlamydophila肺炎感染是noneosinophilic哮喘的一个原因是有争议的。本研究调查了炎性表型的患病率和电流的存在c .肺炎与稳定和急性感染成人和儿童哮喘。
成人稳定(n = 29)或急性(n = 22)哮喘,健康成人(n = 11),儿童稳定(n = 49)或急性(n = 28)哮喘,和健康的儿童(n = 9)进行临床评估和痰诱导。痰是评估炎性细胞,DNA提取痰细胞悬浮液和上层清液c .肺炎使用实时PCR检测。
哮喘表型的主要群体是儿童嗜酸性急性哮喘(50%),但中性成人急性哮喘(82%)。Paucigranulocytic哮喘是最常见的表型与稳定两个成人和儿童哮喘。c .肺炎没有检测到99%的样本。
炎性表型不同的模式在成人和儿童之间,嗜酸性粒细胞的炎症反应是儿童哮喘急性和稳定,更普遍和中性粒细胞炎症在成人急性哮喘的主要模式。中性粒细胞哮喘的病因学是未知的,而不是解释为当前活动的存在c .肺炎感染。
哮喘是一种慢性气道炎症性疾病的特点是情景性发作。有异质性在哮喘气道炎症反应相关,可以曝光,过敏原和感染等治疗(1]。我们以前稳定的成人哮喘分成了四个炎性表型基于诱导痰炎性细胞计数(2]。这些包括嗜酸性、中性粒细胞和paucigranulocytic哮喘、定义的存在和/或缺乏气道eosinophilis和中性粒细胞。这些表型的发生和相对频率在急性哮喘和儿童哮喘是未知的。同样,对传染性触发特定表型的关系并没有得到充分的研究。
暴露于过敏原在一个敏感的个体可以引起嗜酸性粒细胞反应,引发noneosinophilic表型的研究更少。慢性感染是一个可能的原因,因为感染通常引起中性粒细胞反应类似于观察中性粒细胞哮喘(NA)。这个反应是介导通过先天免疫激活和先天免疫失调的证据成人NA曾被报道(3]。在这项研究,有重要的upregulation toll样受体(TLR) 2基因表达和相应增加科学家配体8(白介素(IL) 8) NA。尽管病毒感染是一种常见的原因急性哮喘和呼吸道嗜中性,这通常是由TLR3或TLR7激活和不能解释的中性反应在哮喘的稳定。这些数据表明,其他有机体能够慢性和急性感染,诱发TLR2介导反应,可能是相关noneosinophilic哮喘(NEA)。
Chlamydophila肺炎恩颐投资的是一个潜在的原因,因为它会导致急性感染和慢性持续性感染状态复活(4]。c .肺炎感染肺组织和抒发的先天免疫反应介导通过TLR2 [5),导致中性粒细胞炎症(4]。c .肺炎也被报道恶化哮喘严重程度(6和哮喘恶化的原因7]。NA通常发生在老年人,有证据表明c .肺炎感染可能会先于成人哮喘的发作,以及坚持稳定的慢性哮喘患者(8]。此外,noneosinophilic严重哮喘的表型是提高了大环内酯物抗生素类的药物,是活跃的c .肺炎(9]。c .肺炎检测儿童可能更高或在哮喘急性加重,也有异质性的炎症反应。因此,c .肺炎可能发挥潜在的作用在调节不同炎性表型的哮喘,尤其是和NA。包括慢性持续的潜在机制c .肺炎恩颐投资,或急性感染生物体的间隙,但持久的免疫重组导致的免疫病理NEA (4,10]。后者生物机制是合理的和哮喘模型的支持系统4,10]。实时PCR检测是一种有效的方法c .肺炎使用诱导痰液(11]。主要外膜蛋白(MOMP)基因曾被证明是一个不错的遗传标记c .肺炎在其他实时pcr研究[12,13]。
本研究的目的是检查炎性表型的差异与稳定的成年人哮喘哮喘(研究),成人急性哮喘(AAAs),稳定的哮喘患儿(辅导)和儿童急性哮喘(CAAs),并调查慢性的角色c .肺炎感染NEA表型。我们提出,会有炎性表型差异成人和儿童哮喘,尤其是在儿童和成人急性哮喘相似,表现出一种中性表型,而在稳定的哮喘嗜酸性哮喘(EA)表型与成人相比,儿童会更普遍。我们还提出,c .肺炎感染可能与NEA表型。评估这些假设,我们选择了那些参加了之前的研究(3,14,15)和评估炎性表型的诱导痰细胞计数和c .肺炎使用从痰中提取DNA样本。
材料和方法
参与者
有四组的哮喘患者和健康对照组两组选择的研究。不吸烟的研究(n = 29)和AAAs (n = 22)哮喘使用美国胸科学会定义标准,和每个医生的诊断哮喘症状。辅导(n = 49)和中国农科院的(n = 28)呼吸道儿科医生根据临床确诊的哮喘和肺功能标准。急性哮喘的受试者招募演讲后不久,约翰亨特医院急诊科(新蓝白屯、新南威尔士、澳大利亚)的急性加重哮喘,像前面描述的那样3,14,15]。参与者被招募在4 h(出勤和他们都是预处理的吸入β2受体激动剂在痰诱导。稳定的科目没有最近(过去4周)呼吸道感染、哮喘恶化或药物改变。比较两组选择包括不吸烟的健康成人(n = 11)和健康儿童(n = 9)无呼吸道症状和肺功能正常。受试者从实验室中选择数据库基于上面的选择标准,并诱导痰细胞数量和存储的可用性痰样本进行分析。这些受试者参加之前的研究(3,14]。所有参与者给予知情同意包含的研究之前,猎人新英格兰地区卫生服务人类研究伦理委员会(新蓝白屯,新南威尔士州)批准了这项研究。
痰归纳和分析
肺量测定法(可可PD仪表,路易斯维尔有限公司美国)和痰诱导进行了使用高渗盐水(4.5%哮喘和稳定控制;急性哮喘)为0.9%通过超声波nebuliser,如前所述16]。诱导痰收集,mucocellular选择部分,分开整个痰样本和分散使用二硫苏糖醇(17]。暂停然后过滤和细胞总数用台盼蓝排斥了。剩余的样本离心机和细胞上清液储存在-80°C。细胞颗粒与PBS稀释1×106细胞每毫升。Cytospins准备,沾May-Grunwald染色和微分细胞计数是400年获得nonsquamous细胞。剩余的细胞悬液在PBS储存在-80°C。
哮喘表型分类
基于先前的研究[2,16痰液嗜酸性粒细胞> 3%),受试者分为EA和> 61%痰中性粒细胞,嗜酸性粒细胞被归类为NA < 3%。主题> 61%痰痰中性粒细胞和嗜酸性粒细胞> 3%列为混合粒细胞哮喘,和那些有痰中性粒细胞和嗜酸性粒细胞< 3% < 61%列为paucigranulocytic哮喘。
c .肺炎检测
基因组DNA分离细胞悬浊液和诱导痰细胞上清液使用QIAamp DNA迷你包(试剂盒Inc .)、瓦伦西亚、钙、美国),根据制造商的说明隔离细菌的DNA。DNA是筛选了100年μL缓冲AE和储存在-20°C。中提取DNA的质量和数量是由NanoDrop 2000(热费希尔科学Inc .威尔明顿,美国)。实时PCR进行7500实时PCR系统(美国应用生物系统公司,培育城市,CA)。c .肺炎检测使用的量化Chlamydophila肺炎主要外膜蛋白基因先进装备(PrimerDesign™,南安普顿,英国),根据制造商的指示。pathogen-specific底漆/探针组合(carboxyfluorescein贴上),病原体积极控制模板和内源性β-actin (ACTB)底漆/探针内混合工具被用来检测c .肺炎MOMP基因和内生ACTB基因。
的验证c .肺炎检测痰
痰液处理的适用性和DNA提取方法恢复c .肺炎DNA是评估在一个单独的实验(见结果部分)。短暂,诱导痰液样本分为若干整除(200μL)和每一个整除与不同数量的总和c .肺炎艾滋病患者DNA (PrimerDesign™有限公司)。然后,整除处理,细胞悬浮液和上层清液。1天处理样本储存的-80°C模拟实验室样品储存条件之前提取DNA进行。DNA是量化和定量PCR在相同的条件下。
统计分析
所有的数据分析使用占据9(美国StataCorp,大学城,TX)。结果报告为中位数和四分位范围(差),和两个示例Wilcoxon等级测试或克鲁斯卡尔-沃利斯和测试是用来分析数据。确切概率法或卡方测试被用来分析分类数据。Wilcoxon符号秩检验被用于分析成对数据,如DNA浓度在痰细胞悬浊液和痰液细胞上清液。意义p < 0.05时接受了。事后在假定值< 0.017分析意义被接受。
结果
人口统计学和临床特点
研究对象的临床和人口特征所示表1。与健康对照组相比,成人哮喘表现出更多的特异反应性(90%的研究和69%的美国科学促进会与18%的控制;p < 0.001),显著较低的更大的气道阻塞在1 s (FEV用力呼气量1比健康对照组(71.4%和73.0%)值与分别为100.8%;p < 0.008)。急性哮喘组受试者稍微年轻比稳定的哮喘组,但两组哮喘没有对不同性别或维护皮质类固醇治疗。孩子们7岁至17岁,还有的人更“盛行”得比健康对照组(56%特异反应性与86%;p = 0.056)。中国农科院的有更高的气流阻塞,FEV较低1%比稳定哮喘组(53%的预测值与91%;p = 0.006)。与研究相比,辅导显示更好的肺功能,FEV更高1% pred值(p < 0.001)。然而,中国农科院的肺功能障碍比美国科学促进会。有更少的烟AAA组(18%),与研究(38%)和健康对照组(p = 0.012)。有类似比例的吸入激素(ICS)用户在AAAs,辅导(中国农科院研究,表1)。ICS剂量也类似,> 1000天μg·−1(倍氯米松当量)在成年人和480年左右μg·−1在孩子。
比较炎性表型之间的急性和稳定在成人和儿童哮喘
所有炎性表型观察与稳定和成人和儿童急性哮喘,和详细的结果所示表3。之间的表型相似的分布研究和辅导;然而,有不同的相对频率之间的表型AAAs和农科院(图2)。在研究中,最常见的炎性表型paucigranulocytic中性紧随其后。同样,在CSA,最常见的炎性表型paucigranulocytic嗜酸性紧随其后。在AAAs,炎性表型以中性粒细胞为主,其余粒细胞混在一起喝。在农科院,主要表型是嗜酸性粒细胞混合紧随其后。炎性表型的模式在中国农科院的不同AAAs,更高频率的嗜酸性亚型与辅导。
实时聚合酶链反应c .肺炎MOMP基因
AAAs之间炎性表型的差异和中国农科院的显示不同的炎症过程或病原学的代理。因此,我们研究了c .肺炎感染在这些科目,假设增加患病率在急性哮喘和NA。11个样本含痰细胞悬浊液和痰液细胞上清液从成人健康对照组,9个样本含痰细胞悬浮液从健康的儿童,26个样本含痰细胞悬浊液和痰液细胞从研究浮在表面的,49痰细胞上清液样本辅导,22日痰细胞AAAs的上层清液样本和28痰细胞上层的中国农科院的测试样本的存在c .肺炎。
DNA是有效地提取样本类型。DNA痰细胞上清液的浓度中位数是14.2 ng·μL (IQR 6.6 - -26.6)−1有一个无意义的趋势更多的DNA提取痰细胞悬浮液(25.2 ng·μL (13.2 - -48.9)−1;p = 0.062)。放大图显示一个典型的积极的控制曲线(数据未显示),和夷为平地baseline-bound曲线为消极的控制,以及对负样本c .肺炎。的s形的曲线ACTB对于每一个样本都预计周期阈值(Ct)范围内(Ct中值25.12,差21.38 - -34.24),确认输入DNA的质量。为了验证我们的方法,诱导痰与系列稀释飙升c .肺炎DNA阳性,处理和分析c .肺炎MOMP DNA聚合酶链反应。检测能够检测到c .肺炎灵敏度的MOMP DNA诱导痰2×105每μL副本,证明我们的方法的适用性(图3 b)。然而,使用这种敏感和验证试验,c .肺炎是只有一个样本中发现:创新艺人经纪公司。
讨论
本研究已确定增加急性哮喘的气道炎症在大多数情况下,但也表明,AAAs还有之间的炎性表型不同。这些结果产生影响的可能机制和触发急性哮喘的成人和儿童,也可以对治疗反应的影响。我们还发现,在稳定的哮喘,paucigranulocytic模式是最常见,其次是EA在儿童和成人NA。尽管高频率的noneosinophilic表型(中性和paucigranulocytic),我们无法确认当前的角色c .肺炎NEA感染,尽管使用一个敏感和特定pcr分析。这表明,潜在的作用c .肺炎感染可能是调节免疫反应的感染,也有可能产生持久影响哮喘的表达。
本研究的主要发现是AAAs之间的表型差异和中国农科院的。急性哮喘是一种强烈的炎症状态,因为paucigranulocytic表型被认为不(成人)或很少(儿童;2%)在此设置。主要炎性表型在AAAs NA(81.8%),而在中国农科院的EA。这显然表明有不同的炎症通路参与了疾病的发病机理,AAAs和农科院之间。嗜酸性粒细胞反应出现在中国农科院的可能的解释包括过敏原接触,少维护皮质类固醇治疗或一个不同的回应引发急性哮喘。中国农科院的ICS使用较少,但尽管如此,68%的人使用维护ICS,所以这是一个不完整的解释这些影响。病毒性呼吸道感染是最常见的急性哮喘的原因在成人和儿童18]。急性发作也经常发生在孩子们敏感高空过敏症(19]。在农科院混合eosinophil-neutrophil反应表明,并发接触多个触发器(如。过敏原和病毒感染)可能是一种解释观察到的炎症反应。这是符合流行病学观察过敏性敏化作用、过敏原暴露和病毒感染需要沉淀急性哮喘儿童(20.]。
成年人展览il - 10的增加急性哮喘,这是一种细胞因子与已知antieosinophilic效应(21];这也许可以解释之间的不同反应组。这些差异在炎性表型伴随着临床疗效的差异,在中国农科院的肺功能是低于美国科学促进会。有趣的是推测,治疗组之间的反应可能会不同。EA是典型的皮质类固醇敏感,而急性反应迟钝或类固醇缺席在恩颐投资(22]。这些观察哮喘稳定,但是如果他们也适用于急性哮喘,那么它将预测一个较小的响应在AAAs皮质类固醇和其他疗法的必要性活动对中性反应(23]。
稳定的哮喘的临床模式成人和儿童之间的差异。成人哮喘更有可能表现出持久的模式,而情景哮喘是典型的儿童(24]。尽管这些差异在临床模式中,成年人和CSA之间的炎症性模式是相似的。在我们的研究中,NEA在稳定的哮喘是常见。吉布森et al。(25]发现炎症的noneosinophilic模式被报道在59%的56个成年人持续性哮喘。我们的研究结果是Ronchi的类似et al。(26)发现,28%的受试者在研究显示痰中性粒细胞增加。辅导的比例要低得多(20.4%)。然而,在目前的研究中,EA的患病率比研究辅导(30.6%)高(20.7%),这是类似于Cai的结果et al。(27]。此外,本研究的具体发现,受试者paucigranulocytic哮喘患者的比例在研究最大(51.0%),和一个类似的趋势在辅导。paucigranulocytic表型可能代表控制气道炎症,这表明它可能与疾病预后更好。
我们也试图检查是否c .肺炎感染可能会发现NEA表型。为了做到这一点,我们使用和验证一个敏感的pcr检测和检查各种临床哮喘组。c .肺炎与成人哮喘有关(28],儿童哮喘[29日和成人哮喘严重程度6]。假设,恩颐投资可能代表一种慢性感染状态,因为许多特性模拟反应引起的感染,如嗜中性,引发释放和激活的通常3]。感染c .肺炎恩颐投资的也被认为是一个可能的原因(9]。我们收集痰液细胞上清液和悬浮液的完整细胞为了检测细胞内和细胞外的机会最大化c .肺炎(11]。我们在分析,包括适当的控制,积极控制和结果ACTB控制表明,我们使用的方法是有效的。不同临床检测结果大多是负面的数量目前的研究中,除了一个样本从创新艺人经纪公司。我们解释我们的结果表明,当前活跃在我们的人口急性或慢性感染是罕见。这与其他人群相比,特别是在欧洲,c .肺炎感染更为普遍。基于的研究c .肺炎感染新生儿,我们不能排除这种可能性,immunodeviation后解决c .肺炎感染早期生活可能是一个机制,调节恩颐投资。
潜在的当前研究的局限性与样本大小和对象的选择方法。有良好的权力分析涉及NA在成人和儿童,儿童和EA(急性和稳定);然而,小样本大小意味着权力有限评估嗜酸性表型在AAAs(功率40%)。同样,使用对象从数据库选择可能引入选择性偏差。然而,同样的数据收集方法被用于所有的参与者,一个工作人员参加了急诊科招收成人和儿童急性哮喘。成人和儿科急诊室共存,没有偏见,可能源于微分招聘。这种方法的主要限制的时间,员工可以花在急诊室(即。在工作时间)。不同的FEV1结果在AAAs和农科院β-agonist剂量后可能反映了测量时间。尽管所有受试者FEV1测量后β-agonist预处理,额外的剂量诱导前没有控制和可能影响对比组。
总之,目前的研究结果提供的证据患病率的差异在AAAs炎性表型和农科院。这些差异与临床肺功能的显著变化,表明不同机械的参与途径在儿童和成人急性哮喘。中国农科院的显示高嗜酸性炎症反应,而中性反应在AAAs最常见。paucigranulocytic表型是主要模式观察研究和辅导,虽然在炎性表型异质性是哮喘的一个共同特点,就是稳定。当前的c .肺炎感染似乎没有一个共同的理由解释NEA在哮喘的表型,或增加呼吸道急性恶化。
确认
我们感谢h·鲍威尔她统计援助和n . Fibbens数据收集(约翰亨特医院、纽卡斯尔、新南威尔士、澳大利亚)。
脚注
感兴趣的语句
一份声明中可以找到感兴趣的P.G.吉布森www.www.qdcxjkg.com/site/misc/statements.xhtml
- 收到了2010年的11月2日。
- 接受2010年12月16日。
- ©2011人队