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雌性生殖道调制导致中性粒细胞表型的变化甚至在患者残余CFTR功能检测突变https://bit.ly/2EUk7xH
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囊性纤维化跨膜电导调节(雌性生殖道)调制器疗法(lumacaftor, ivacaftor tezacaftor)治疗囊肿性纤维化(CF)的基本缺陷通过增加雌性生殖道功能和改善肺功能和生活质量。CF肺部疾病的特点是慢性细菌殖民化,炎症和过度嗜中性(1]。雌性生殖道表达式的确认中性粒细胞(2)导致猜测免疫细胞功能障碍可能与CF肺部炎症。中性粒细胞的CF患者严重的雌性生殖道突变(如。F508del生存和G551D)长期嗜中性粒细胞(3)和吞噬作用下降和脱粒。剩余函数R117H突变导致通道电导下降25% (4),当出现在结合第二严重的突变(如。F508del)结果在雌性生殖道功能,是介于灌木丛生的控制和典型的CF。CF患者残余功能开发疾病后期,ivacaftor现在授权R117H突变的治疗在临床试验中被证明是有效的(5]。治疗患有G551D突变ivacaftor也具有显著的突变特异性影响骨髓细胞(6]。因此,我们评估的影响雌性生殖道调制器治疗在这组中性粒细胞表型和功能。
圣文森特的医疗道德和医学研究委员会,都柏林,爱尔兰,批准了这项研究。10临床稳定的CF科目R117H等位基因的一个副本,第二种疾病引起突变被招募。患者接受150毫克ivacaftor连续7天每天两次。全血是治疗之前收集并在第二天和7个治疗。中性粒细胞被聚蔗糖孤立Paque梯度在SepMate管低渗的红细胞裂解减少潜在的出土文物由葡聚糖激活沉积(7,8根据标准执行,流式细胞仪内部和细胞外染色协议(9]。收集的样本也从六个健康对照组和4人与CF类》突变(NRS生物,苏格兰东部研究伦理委员会15 / ES / 0094和AMREC 15 -高压- 013)。
6男4女CF(平均±sd40.5±7.21岁)招募了,至少有一个副本R117H基因结合另一种疾病造成突变(F508del七个主题,M156R两个科目,2622 + 1 g→一个主题)。三个受试者被殖民金黄色葡萄球菌,两个铜绿假单胞菌3的组合金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌,两个科目没有殖民生物。氯化汗水从77.5±4更易·L−1到52.1±5.61更易·L−1经过7天的治疗(p < 0.001,配对t检验)确认药效学反应治疗;用力呼气量在1 s (FEV1)也改善了7天,详细的研究在同一病人群(10]。
治疗ivacaftor总孤立粒细胞数没有显著影响(图1一个)或频率的循环在外周血中性粒细胞(图1 b)。令人惊讶的是,甚至在治疗之前,R117H中性粒细胞也有类似的存活率在24 h(健康对照组图1 c)。这与中性粒细胞从类》突变与CF科目,其中40%在24小时是可行的。此外,没有改变嗜中性粒细胞生存7天ivacaftor治疗后,进一步强调了稳定的外在表达细胞死亡受体CD95 (FASR) CD120a (TRAIL-receptor 2),和CD120b ivacaftor之前和之后(肿瘤坏死因子受体)治疗(图1 e)。
接下来,我们测量多个表面标记流式细胞术之前,ivacaftor治疗后7天。有统计上显著的增加CD88 (C5a受体),CD47(整合素相关蛋白),CD54(细胞粘附分子1)和CD62L ivacaftor (L-selectin)反应治疗图1 g),而CD35和CD87并未改变。我们也测量细胞内表达的关键发现中性粒细胞蛋白和胞质蛋白和损害相关的分子模式(潮湿)calprotectin和二次颗粒蛋白激活CD11b ivacaftor治疗下降(图1 h),而CD63 (tetraspanin),初级颗粒蛋白,没有显著变化。CD54的表达增加,CD88和CD47中性粒细胞与病人出汗减少氯,尽管只有CD88显著(图1我),暗示可能与雌性生殖道功能。只有CD54显示与肺功能(FEV的变化1)治疗后(图1 j)。
我们的数据表明雌性生殖道调制器治疗导致表型的变化从CFTR CF患者残留检测中性粒细胞的功能。有趣的是一个pro-survival中性粒细胞表型,描述在CF患者严重的突变(类》)会缺席剩余函数中性粒细胞,也许导致他们的温和的疾病表型(11]。然而,我们的数据表明,ivacaftor治疗并诱发有益的变化在激活的标志和附着力,与中性粒细胞激活变得不那么一致,和在某些情况下这些观察相关显著的汗水氯和肺功能的变化。
我们注意到一个二分响应内部和中性粒细胞激活和粘附的细胞外的标记。CD62L、CD54 CD88a和CD47被ivacaftor显著调节在细胞表面,而细胞内calprotectin和CD11b下降。CD62L和CD54洒在中性粒细胞活化和迁移(12),以及中性粒细胞增加表达表明池的激活和中性粒细胞迁移13]。CD88是C5a受体水平较低的重要疾病,如败血症,并增加在CD88符合吞噬作用(减少炎症和更大的潜力14]。CD47是绑定伙伴的信号调节蛋白,改善trans-epithelial迁移期间中性粒细胞炎症。总的来说这在细胞表面标记upregulation建议少循环嗜中性粒细胞激活池ivacaftor-treated患者保留了潜在的迁移和吞噬。证明钙卫蛋白(潮湿)CD11b并且治疗后显著降低。Calprotectin CF的主要生物标志物在早期和晚期疾病(15),和一个与雌性生殖道突变被描述在以前的遗传研究。可以推测,中性粒细胞包含少calprotectin将可能使炎症通过释放潮湿。CD11b表达减少可能代表单个蛋白质,减少或降低三级颗粒主要是发现。当我们考虑到主颗粒标记CD63没有减少治疗,这些结果显示特定的中性粒细胞在应对ivacaftor重组。
这些数据强调提高雌性生殖道的潜在好处在CF中性粒细胞功能,即使在CF患者残余功能突变。未来的工作需要评估如何与中性粒细胞从没有CF的人。我们的实验进行外周血中性粒细胞肺中性粒细胞,而是我们解释结果与一定程度的谨慎。我们的研究结果还推断,我们以前见过在CF中性粒细胞凋亡缺陷严重依赖于雌性生殖道功能障碍,因为它不在这个病人组与剩余函数。然而,我们显示中性粒细胞ivacaftor治疗后表型的变化表明炎性嗜中性粒细胞减少的人口的发展,这可能被认为是有益的。进一步对CF患者免疫细胞功能的研究,没有雌性生殖道修饰符疗法现在需要调查这些发现。
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脚注
作者的贡献:概念、设计、采集的数据,分析和解释:广义相对论Hardisty,克里法律,美国卡特,b .甘P.K.辛格E.F. McKone和r•格雷。起草文稿:广义相对论Hardisty,法律和r•克里灰色。
利益冲突:广义相对论Hardisty没有披露。
利益冲突:克里法律没有披露。
利益冲突:美国卡特没有披露。
利益冲突:甘没有披露。
利益冲突:P.K.辛格报告从顶点赠款,在进行这项研究的。
利益冲突:E.F. McKone报告从顶点赠款,在进行研究;个人费用从顶点药品顾问委员会的工作,在提交工作。
利益冲突:r•格雷报告个人从顶点医药费用,在提交工作。
支持声明:支持由一个从顶点医药研究者发起奖;广义相对论Hardisty和r•格雷是由苏格兰高级临床学术奖学金(SCAF / 16/02);r•格雷也由Wellcome Trust中间奖学金093767 / Z / 10 / Z。克里法律Wellcome培训研究员(201246 / Z / 16 / Z)。资金信息,本文已沉积的Crossref资助者注册表。
- 收到了2020年6月4日。
- 接受2020年7月30日。
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