文摘
我们假设患有囊性纤维化(CF)表达雌性生殖道(囊性纤维化跨膜电导调节)基因突变与剩余函数可能受益于g蛋白偶联受体(GPCR)靶向药物,可以激活和增强雌性生殖道功能。
我们使用肠道瀑样屏幕GPCR-modulating化合物库和确定β2肾上腺素能受体受体激动剂的最有效的诱导雌性生殖道功能。
β2-Agonist-induced瀑样肿胀与雌性生殖道在纯合基因型,可以诱导CFTR-F508del瀑样和高度分化主要CF气道上皮细胞后救援雌性生殖道贩卖的小分子。的在活的有机体内对治疗的反应与口服或吸入β2受体激动剂(舒喘灵)的CF患者残余雌性生殖道功能评估试点研究。10个科目R117H或A455E突变包括测量和显示鼻腔电位差的变化与口服舒喘灵治疗后,包括基线的显著改善鼻粘膜的电位差(+ 6.35 mV, p < 0.05),表明这种治疗可能有效在活的有机体内。此外,等离子体,收集后口服舒喘灵治疗诱导雌性生殖道管理时激活体外瀑样。
这个概念验证研究表明瀑样可以用来识别药物激活雌性生殖道功能在活的有机体内和选择给药途径。
文摘
β2肾上腺素能受体受体激动剂与雌性生殖道受试者的雌性生殖道激活药物残留的功能http://ow.ly/Dm44300wjuw
介绍
的雌性生殖道(囊性纤维化跨膜电导调节)基因编码一个顶端阴离子通道和突变与囊性纤维化(CF)[主题1]。主题与CF许多粘膜表面液体成分的改变,导致胃肠功能障碍和肺系统以及其他器官。最常见的突变是苯丙氨酸的删除位置508 (p.Phe508del;F508del)和存在与CF∼90%的受试者,其中∼65% F508del该(www.genet.sickkids.on.ca)。CF疾病表达式是高度可变的主题之间由于复杂的关系雌性生殖道基因型,修饰基因和环境因素,这对于每个人是独一无二的(2- - - - - -6]。
大约有2000雌性生殖道突变被描述,分为不同类别根据其影响雌性生殖道表达式和函数(7]。简单地说,类我没有突变导致功能的蛋白质(如。停止密码子和转移),二类突变严重影响顶端贩卖(如。F508del),第三类突变干扰通道调节或控制(如。p.Gly551Asp;G551D),四级突变降低通道电导(如。p.Arg334Trp;R334W),第五类突变导致减少正常的雌性生殖道的顶端表达(如。p.Ala455Glu;A455E)和类VI CFTR突变加快检测营业额在质膜上。而第六类》和突变通常没有或非常有限的剩余函数有关,一些剩余函数与类IV和V突变和温和的疾病表型如CFTR-A455E CFTR-R117H (p.Arg117His;共享类III和IV) (www.cftr2.org)。
新型药物正在开发针对CFTR突变特异检测的缺陷。电位器的vx - 770 (ivacaftor)增强顶端雌性生殖道的活动和展示了为患者提供临床效益雌性生殖道浇注突变(8- - - - - -10]。药理修复CFTR-F508del证明更加困难,尽管鼓励三期临床试验结果报告CFTR-F508del纯合子的受试者接受ivacaftor和校正lumacaftor (vx - 809) [11),这在一定程度上恢复贩卖CFTR-F508del顶端膜(12]。然而,这些治疗方法的疗效变量之间的主题,并保持不足以全面恢复CF和CFTR-related疾病标记,表明更有效的治疗仍然是必需的。
个别的雌性生殖道功能依赖于内源性信号通路,控制它的通道功能。各种内源性配体已确定在一个营地/蛋白激酶激活雌性生殖道依赖时尚。这些配体(如。——血管活性肠肽、前列腺素和β-adrenergic刺激)信号绑定到g蛋白耦合的受体(GPCRs),释放胞质g,激活腺苷酸环化酶生成营(13- - - - - -15]。而众所周知,雌性生殖道的组织活动是由不同的配体,雌性生殖道功能的程度受限于营地生产还不清楚。
我们提出cAMP-dependent信号是雌性生殖道的病原反应步骤激活在活的有机体内,CF个人表达与剩余函数相关的等位基因可能受益于现有的药物刺激营地。因此,我们筛选了一个小的化合物库GPCR调节器刺激CFTR(突变)检测活动的能力在初级直肠瀑样从健康控制和CF科目。直肠瀑样从肠道干细胞和self-organise成多细胞组成的三维结构单一的上皮细胞层,顶端膜面临一个封闭的腔中部[16- - - - - -18]。添加forskolin提出了营地,刺激CFTR-dependent液体分泌到瀑样腔和诱发快速瀑样肿胀(19,20.]。在这里,我们提供概念,肠道瀑样可以作为工具来识别潜在的药物和给药途径为特定CF子组。
材料和方法
人类参与者
本研究经伦理委员会批准的乌得勒支大学医学中心和鹿特丹的伊拉斯谟医学中心。知情同意是获得所有科目。瀑样从健康对照组和CF受试者直肠活检后肠道产生电流测量获得1)在CF护理标准,2)用于诊断或3)在自愿参与研究。
材料
GPCR的化合物库,vx - 809和vx - 770从SelleckChem购买(美国休斯顿,德克萨斯州)。卡维地洛、forskolin舒喘灵、氟替卡松加沙美特罗、特布他林、肾上腺素、羟苄羟麻黄碱,二甲亚砜(DMSO),N乙酰半胱氨酸、烟酰胺、SB202190买来σ(圣路易斯,密苏里州,美国)。Formoterol购买从圣克鲁斯生物技术(美国达拉斯,TX)。雌性生殖道异烟肼-172年获得CFF疗法(美国芝加哥,IL)。基底膜基质是购自BD(美国新泽西富兰克林湖)。补充钙黄绿素点,n和B-27 Glutamax,先进的杜尔贝科的修改鹰介质/火腿F-12 (DMEM / F-12)、青霉素、链霉素、玫瑰和鼠表皮生长因子(mEGF)从生活购买技术(Bleiswijk、荷兰)。从Tocris A83-01购买(英国阿宾顿)。TOPflash和FOPflash购买从微孔(阿姆斯特丹,荷兰)。
人类瀑样的文化
直肠地穴隔离和瀑样扩张进行一些适应性先前描述的方法(20.,21]。短暂,直肠活检被彻底清洗PBS和孵化10毫米EDTA在4°C 90分钟。隐窝是由离心收集和悬浮在50%人工基底膜和50%完成培养基(先进DMEM / F-12媒体补充与青霉素、链霉素、玫瑰,GlutaMax,营养补充剂n - B-27,N乙酰半胱氨酸、烟酰胺、mEGF A83-01、SB202190 Rspo-1 Wnt3a 50%, 20%和10%的大脑条件媒体)被允许固化在37°C在三滴20分钟10µL / 24-well板。水滴被沉浸在预热完成培养基和文化扩张至少3周之前CFTR分析检测功能。每周完成培养基刷新三次每周和瀑样通道。条件媒体质量评估点的屁股,ELISA和荧光素酶记者构造(TOPflash和FOPflash) (22,23]。
GPCR的化合物库
GPCR的小分子化合物库包括61受体激动剂和拮抗剂,目标范围广泛的GPCR的家庭,包括肾上腺素、多巴胺,阿片类药物,5 -羟色胺、组胺和乙酰胆碱受体。化学物质的完整列表中给出了在图书馆在线补充表S1。
雌性生殖道功能测量瀑样
瀑样之前受移植者1天96 -孔板如前面所描述的功能分析(20.]。CFTR-F508del瀑样和vx - 809(3μM)孵化24 h,显示在文本和数字的传说。瀑样都沾染了钙黄绿素绿点(2.5μM) 1 h之前的化合物和每个化合物在四个不同的浓度进行了测试(10 2μM 0.4和0.08)。Forskolin(5μM)和DMSO作为积极的和消极的控制,分别。瀑样肿胀是监测1 h使用蔡司LSM 710共焦显微镜(蔡司,耶拿,德国)。相对增加的表面积计算使用Volocity(但是;PerkinElmer沃尔瑟姆,妈,美国)。曲线下的面积计算(如前所述20.]。卡维地洛(10μM)是孵化前30分钟刺激和瀑样与雌性生殖道预处理异烟肼-172(150μM) 4 h抑制CFTR-dependent反应。
Halide-sensitive YFP淬火CFBE41o -细胞
CFBE41o -细胞系overexpressing CFTR-F508del或CFTR-WT heat-inactivated生长在α-minimal重要介质含有8%胎牛血清,青霉素和链霉素37°C湿润有限公司5%2孵化器所描述(24,25]。CFBE41o——细胞转导比率计halide-sensitive pHAGFE2-YFP (46 l - 148 q - 152 l) -mKate CFTR传感器测量的检测活动如前所述[26]。简单地说,细胞被孵化24 h和vx - 809(10μM)。20分钟刺激后chloride-containing缓冲区,这些细胞被洗与碘化缓冲和降低荧光监控使用蔡司LSM 710 60年代的显微镜。YFP率(黄色荧光蛋白)/ mKate淬火计算使用棱镜6(美国GraphPad拉霍亚,CA)。
我们室的测量在初级气道上皮细胞
主F508del / F508del人类支气管上皮细胞从主气道细胞生物CF转化研究中心的麦吉尔大学在培养3周的空气/液体界面和预处理的24 h和vx - 809(1µM)。控制层相同的患者采用类似的处理方式,但暴露于车辆(0.1% DMSO)在预处理期间。对于电生理测试,膜被安装在我们室(EasyMount;生理仪器、圣地亚哥、钙、美国),用VCCMC6 voltage-clamped多通道电流电压钳(生理仪器、圣地亚哥、钙、美国)。电压钳是连接到一个PowerLab / 8 sp接口数据收集(美国科罗拉多斯普林斯,ADInstruments有限公司)和分析了使用电脑如前所述[27]。解决方案不断加油,激起了O为95%2/ 5%股份有限公司2并保持在37°C循环水浴。Ag / AgCl参考电极被用来衡量transepithelial电压和通过电流。脉冲持续时间(1 mV振幅,1 s)是90年代每个监控电阻。一个basolateral-to-apical Cl- - - - - -梯度是实施和阿米洛利(100µM)添加顶端一侧抑制上皮钠通道电流(钠)。单层膜受到强烈到10µM forskolin舒喘灵或车辆0.1% DMSO溶液。在短路电流(我sc)到达了一个高原,电位器(50µM染料木黄酮或100海里vx - 770表示)补充说,雌性生殖道紧随其后异烟肼-172年确认当前的反应依赖于雌性生殖道。舒喘灵也化验预处理后与对手卡维地洛(10µM) 30分钟作为受体特异性的进一步测试。
试点研究吸入和口服舒喘灵
在这个开放二期试点研究,10位病人被随机分配接受每天四次200µg舒喘灵每吸入或每天四次4毫克舒喘灵口服,连续3天(www.trialregister.nl trialreg / admin / rctview.asp ? TC = 4513)。本事至少4天时间后,病人接受相反的治疗。我们包括病人年龄≥18岁CFTR-A455E或CFTR-R117H在其中至少一个等位基因突变直肠活检和瀑样文化显示剩余雌性生殖道功能在先前的研究20.]。患者被排除在外,如果他们有一个急性肺恶化或舒喘灵增加副作用的风险。主要结果措施汗水氯浓度变化(SCC)和鼻电位差的变化(NPD)测量,这都是在活的有机体内CFTR生物标志物的检测功能。NPD和鳞状细胞癌的测量进行的最新版本的标准操作程序,欧洲社会囊性纤维化临床试验网络(www.ecfs.eu卡通)。这些测量的结果与舒喘灵治疗前后比较使用Wilcoxon符号秩检验。第二个结果测量指标是CFTR-activating瀑样病人的等离子体的能力。因此,整个血液收集sodium-heparin管治疗之前和之后的最后剂量舒喘灵,当血液中舒喘灵的最大浓度预计(吸入沙丁胺醇30分钟后,2 h后口服舒喘灵;www.fk.cvz.nl)。等离子体是孤立如前所述28]。
病人plasma-induced瀑样肿胀
舒喘灵治疗前后患者血浆收集和等离子体(20%和40%)孵化瀑样来自受试者与CF CFTR高残留检测功能(R117H / F508del)。瀑样肿胀是监控如上所述。测量所产生的参考价值飙升舒喘灵在0%,20%和40%的等离子体。
结果
屏幕GPCR调节器的瀑样肿胀
确定化合物可以激活雌性生殖道,我们评估CFTR-dependent肿胀瀑样61年应对GPCR-modulating化合物(图1)[20.]。正如前面观察,forskolin诱导迅速肿胀CFTR-WT瀑样,在较小程度上,vx - 809治疗纯合子CFTR-F508del瀑样。正如所料,DMSO没有引起肿胀(图1一个)。肿胀是表示为曲线下的面积为每一个特定的条件(图1一个和b)。测试的61个化合物,多巴胺、肾上腺素羟苄羟麻黄碱和舒喘灵存在剂量依赖的相关性引起的肿胀CFTR-WT瀑样,与最高效力羟苄羟麻黄碱和舒喘灵和最低效力多巴胺(图1 c和d)。肾上腺素、羟苄羟麻黄碱和舒喘灵是β的配体2肾上腺素能受体,对多巴胺受体和多巴胺。在最高剂量,这四个化合物的反应是类似forskolin-induced肿胀(图1 d)。在vx - 809纠正F508del纯合子瀑样,肾上腺素引起的肿胀是剂量依赖性,舒喘灵和羟苄羟麻黄碱,但不是由多巴胺(图1 c和e)。舒喘灵效力最高和最低羟苄羟麻黄碱。高水平的类似程度舒喘灵诱导肿胀forskolin (图1 d)。总之,β2肾上腺素能受体刺激可以强有力地激活CFTR-WT drug-corrected CFTR-F508del瀑样。
β2受体激动剂诱导瀑样肿胀
接下来,我们评估β2肾上腺素能受体刺激短期和长效受体激动剂在与各种瀑样雌性生殖道突变(图2)。首先,舒喘灵,ritodrine-induced肿胀在瀑样确认来自三个个人F508del纯合子患者(图2一个)。正如所料,健壮的瀑样肿胀只是观察治疗后的雌性生殖道调节器vx - 770或vx - 809,和最高vx - 770和vx - 809联合治疗。符合图1羟苄羟麻黄碱有点少的舒喘灵forskolin,特别是对于vx - 809孵化瀑样。短效(羟苄羟麻黄碱、特布他林和舒喘灵)和长效β(formoterol,氟替卡松加沙美特罗和异丙肾上腺素)2受体激动剂诱导液分泌。抑制雌性生殖道-异烟肼172或卡维地洛雌性生殖道或β-adrenergic受体特异性的支持,分别为(图2 b)。Forskolin -β2肾上腺素能receptor-induced肿胀瀑样之间有明显不同雌性生殖道基因型:我们观察到没有肿胀瀑样表达两种CFTR-null等位基因(p。Glu60Ter and p.Ile1295fs; E60X and 4015delATTT), some swelling in CFTR-A455E or VX-809-corrected homozygous CFTR-F508del organoids and high swelling in CFTR-R117H expressing organoids (图2 c)。Dose-dependencies的β2-agonist-induced肿胀是独立的雌性生殖道基因型或vx - 809 F508del获救,表明长效β2受体激动剂是最强大的,而forskolin至少有效(图2 d)。代表agonist-induced肿胀的例子所示图2 e。在一起,这些数据表明,不同的β2受体激动剂诱导雌性生殖道功能雌性生殖道mutation-dependent方式。
CFTR Salbutamol-mediated检测支气管上皮细胞的激活
确认肠道瀑样反应可能与气道上皮细胞相关,雌性生殖道激活β2受体激动剂研究了舒喘灵在CF气道细胞系CFBE41o——(CFBE)和初级CF人类支气管上皮细胞。首先,我们研究了碘化CFTR-dependent淬火利率CFBE41o -细胞内生表达CFTR-F508del和以前转导CFTR-F508del(CFBE-F508del)或CFTR-WT(CFBE-CFTR-WT)互补脱氧核糖核酸(24]。碘化测量CFTR-dependent涌入,稳定细胞转导YFP / mKate传感器,如前所述[26]。碘化淬火的YFP信号(CFTR指示检测活动)诱导forskolin和舒喘灵在vx - 809 + vx - 770治疗CFTR-F508del和CFTR-WT CFBE41o -细胞(图3一)。此外,我们室实验表明,舒喘灵和forskolin诱导CFTR-dependent短路电流在F508del纯合人类支气管上皮细胞治疗24 h和vx - 809和vx - 770,但不是在初级文化没有CFTR-repairing治疗(图3 b- - - - - -d)。正如预期的那样,急性forskolin和舒喘灵被雌性生殖道废除异烟肼-172年,由卡维地洛(salbutamol-induced反应被抑制图3 c和d)。最后,激活modulator-repaired CFTR-F508delβ2受体激动剂在呼吸道细胞系和戒律主要气道的文化。
试点研究吸入和口服舒喘灵
评估如果毒品被屏幕在直肠瀑样可以用来调节雌性生殖道功能在活的有机体内,10 CF患者参加一项研究,并与口腔吸入舒喘灵治疗。一个病人只有口服舒喘灵治疗由于哮喘症状增加冲洗期间之间的沙丁胺醇气雾剂治疗。研究人群的基线特征所示表1。
分析沙丁胺醇吸入或口服的系统性交付应用程序,我们刺激F508del / R117H和F508del / A455E瀑样与等离子体收集之前和之后在活的有机体内治疗。等离子体收集口服舒喘灵治疗后显著诱导F508del / R117H瀑样肿胀与等离子体相比之前收集治疗或气溶胶舒喘灵管理后,表明等离子体舒喘灵浓度最高的口服治疗后(图4一和b)。飙升的纯舒喘宁在治疗前池等离子的主题表示,活跃舒喘宁含量低于检测水平在气雾剂治疗和检测结果显示低口服治疗后,总计∼5纳米(图4 c)。修正后为40%血浆样本,循环舒喘灵口服治疗后平均水平达到12.5∼纳米水平。
监控在活的有机体内雌性生殖道的调制函数,鳞状细胞癌和NPD测量之前和之后进行3天舒喘灵治疗。SCC的变化的概述和NPD值给出表2和3。沙丁胺醇生物测定的结果一致显示低(口服治疗)或检测不到(气雾剂治疗)水平的舒喘宁血浆(摩尔范围),NPD是唯一重要的变化在口服治疗(但不是气溶胶),即。平均基线潜在变化显著(6.4 mV)的方向减少钠的吸收,表明改进的雌性生殖道功能(表2)。然而,我们没有观察到任何重大变化在其他NPD参数还是在水平的汗水氯(表2和3和在线补充表S2和S3)。
不良事件的报道与舒喘灵治疗期间出现高口服舒喘灵和总结表4。这个试点研究的数据初步表明,口服,但不吸入治疗β2受体激动剂可能在鼻腔上皮略有改善CFTR残留检测功能在活的有机体内,但未能进一步提高雌性生殖道汗管的功能。
讨论
本研究的目的是生成organoid-based测量的概念可以用来识别批准药物可能调节雌性生殖道功能在活的有机体内。在这项研究中,雌性生殖道功能测量瀑样被应用于多个候选人1)优先考虑潜在的药物,2)识别和验证对象与潜在响应雌性生殖道变体,和3)研究药物的最佳给药途径。作为一个整体,临床前和临床研究的结果表明,organoid-based测量有助于与CF为主题设计的临床研究。
我们选择β2受体激动剂从61种化合物,可以调节GPCR信号、已知的雌性生殖道催化剂和离子运输。令人惊讶的是,β的效力2受体激动剂刺激雌性生殖道功能是等于或大于forskolin,下游GPCR的直接刺激腺苷酸环化酶,如观察原发性肠道和呼吸道细胞(图2和3)[13,29日]。β之间的大分子复合物的形成2肾上腺素能受体和雌性生殖道可能启用这个来自β信号的有效耦合2肾上腺素能受体雌性生殖道(30.]。缺乏雌性生殖道激活其他化合物在这个图书馆最有可能反映了它们的同源受体的缺失或无法产生足够的CFTR-activating信号或耦合这些雌性生殖道。
测量在活的有机体内雌性生殖道功能增强外源β等催化剂2受体激动剂CFTR需要不同的方法比直接检测蛋白恢复药物如vx - 770和vx - 809。它依赖于外源β的能力2受体激动剂使磷酸化和刺激雌性生殖道活动超出水平与内生条件有关。我们预期,NPD可以提供最有前途的读出雌性生殖道的改进功能,与pan-β-agonist鼻内输注异丙肾上腺素已被证明进一步hyperpolarise鼻腔上皮在健康对照组在活的有机体内平均6.9 mV氯化低腔的条件下(31日,32),这表明雌性生殖道活动组织是由内生阵营信号的态势。而直接用于诊断和雌性生殖道protein-restoring药物,NPD的组合变化后的零氯溶液,添加异丙肾上腺素最丰富,与舒喘灵治疗的患者我们期待找到一个增强应对低氯降低应对鼻内应用异丙肾上腺素和没有区别的结合反应低氯+异丙肾上腺素作为化合物激活内源性阵营。虽然有一个倾向于一个增强hyperpolarising氯化反应为零(−1.4→−5.6 mV)和减少对异丙肾上腺素(−1.4→−0.1 mV)在口腔(但不是吸入)治疗,这种差异没有达到统计学意义。基本的电位差,这显然是CF-like A455E和R117H病人(范围41.6 - 55.2−−mV;表2和3)显示一个重要但有限的增加对non-CF基线电位差值(6.4 mV;表2)口服治疗病人,但这种变化并不是平行的,减少对阿米洛利,抑制剂钠(表2)。基线的潜力似乎林隙ENaC-dependent Na+吸收,增强在CF和调制CFTR通过直接检测protein-targeting药物(33- - - - - -35]。缺乏相关性似乎反对舒喘灵治疗即活动的抑制作用,尽管试点研究的相对较低的功率和大电位差的变化响应能力即不完全排除这种效果。后者的解释将符合上述初步增加零氯化反应和雌性生殖道的抑制效应(通过电致或更复杂的耦合机制)ENaC航空活动。另外,我们的数据不排除这种可能性,舒喘灵抑制其他电致离子运输通路在鼻腔上皮,如顶端与钠阳离子通道不同,如。acid-sensitive离子通道(36)或质子通道(37]。综上所述,NPD测量的结果表明,口服舒喘灵治疗稍微修改的电气性能,鼻CF的上皮向non-CF鼻上皮和因此可能(有限的)好处的CF患者。
缺乏强劲的雌性生殖道激活在活的有机体内,在明确与瀑样肿胀的强有力的刺激submicromolar舒喘宁的水平在体外(图2 d),最可能是由于低水平的循环β2受体激动剂观察到在在活的有机体内治疗。符合NPD测量的结果,我们只发现了一种检测CFTR-activating血液样本的能力,收集与口服治疗后,但不与吸入舒喘灵。后者是由β符合一个高度受限的系统交付2受体激动剂吸入(38)(图4一)。然而,即使与口服舒喘灵治疗后,等离子体CFTR-activating水平较低(图4一和b),相应的纯舒喘灵的摩尔浓度范围,只能略微刺激瀑样(比较图4 c和2 d)。因此,只有有限的效果在活的有机体内预期,我们观察到的NPD的只有一个参数。虽然等离子体水平不相似的组织水平,这些数据表明,高剂量可能会进一步提高治疗效果,尽管系统性治疗的副作用可能会限制增加剂量的可行性。
缺乏响应鳞状细胞癌也表明有限的治疗反应,尽管这个参数需要小心解释。鳞状细胞癌是一个高度敏感的雌性生殖道函数参数,能够区分pancreas-sufficient和不足组和预处理鳞状细胞癌在我们的病人队列清楚地表明,这些患者有显著的CFTR残留检测活动(表3)。此外,G551D患者这种生物标志物也积极响应雌性生殖道电位器治疗(10]。然而,孤立的受试者的汗腺也表明,外生β-adrenergic刺激只能刺激∼40%的汗水导管和后来的研究证实高本构cAMP-dependent激活雌性生殖道的组织(39,40]。这意味着只有一个有限的外源β窗口2受体激动剂刺激可能存在在活的有机体内在这个组织。缺乏治疗反应在鳞状细胞癌,我们观察到在这个审判是因此不完全意想不到的考虑到高本构雌性生殖道激活在这个组织结合非常低水平的循环β2受体激动剂。
需要额外的临床研究来进一步验证长期治疗的效果与口服β2受体激动剂在临床结果参数(如。比例预测用力呼气量在1 s,气道阻力,身体质量指数,CF患者生活质量),这个概念验证研究显示一个小但治疗鼻腔粘膜产生重大影响,但对Cl无显著影响- - - - - -汗水管道运输。
正如所料,β2受体激动剂刺激肿胀的瀑样雌性生殖道mutation-dependent方式,基于剩余所赋予的功能雌性生殖道基因型或CFTR-modulating药物(图2)。大多数科目包括在研究A455E复合杂合的,和他们的CFTR瀑样证明残留检测功能水平之间的值与F508del和R117H / F508del复合杂合的(20.]。这似乎符合鳞状细胞癌参数测量在这项研究中,数据从CFTR2数据库(www.cftr2.org)。我们的NPD数据(表2和3和在线补充表S2和S3:“和异丙肾上腺素)也显示证据A455E CFTR残留检测功能的患者,与倾向于口服舒喘灵治疗后略有增加但不显著。vx - 770 + vx - 809纠正CFTR-F508del函数瀑样高于剩余函数的水平与CFTR-A455E [20.),β2受体激动剂也可能添加值F508del纯合子的科目用CFTR-repairing药物治疗。在这种背景下,cotreatmentsβ2受体激动剂可能占一些肺患者中观察到的响应之间的异质性雌性生殖道调制器治疗(9,11]。此外,进一步分层雌性生殖道基因型与高剩余函数(如。CFTR-R117H)也会加强与β的治疗效果2受体激动剂。
总之,雌性生殖道功能测量肠道瀑样被用来屏幕CFTR-activating药物和科目应对这些药物的雌性生殖道变异在体外被选为在活的有机体内治疗。口服舒喘灵治疗改善一些CF鼻腔粘膜的特点,但由于无效的剂量治疗功效可能是有限的,从等离子体测量水平明显的舒喘灵organoid-based生物测定。肠道瀑样的研究支持这个概念是一个有价值的工具,用于为CF选择药物和给药途径的临床试验。
确认
我们感谢M.C.J. Olling-de角(小儿肺学部门,威廉敏娜儿童医院,大学医学中心,乌得勒支荷兰),E.M. Nieuwhof-Stoppelenburg和。van der由(小儿肺学部门,伊拉斯姆斯大学医学中心/索菲娅儿童医院,鹿特丹,荷兰),n奥斯塔(呼吸医学部门、学术医疗中心,阿姆斯特丹,荷兰),和m . Smink(部门肺学和囊性纤维化,混合教学医院,海牙,荷兰)提供肠活检。
脚注
可以从本文的补充材料www.qdcxjkg.com
支持声明:大肠matthe说道和J.W.汉拉罕被加拿大卫生研究院的研究支持。这项工作是荷兰囊性纤维化基金会赠款支持(NCFS)作为HIT-CF计划的一部分,威廉敏娜儿童医院(WKZ)基金会和荷兰卫生组织ZonMW,荷兰。为这篇文章一直存放在资助信息FundRef。
利益冲突:披露可以找到与这篇文章www.qdcxjkg.com
- 收到了2015年10月8日。
- 接受5月11日,2016年。
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