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小说结核分枝杆菌抗原QuantiFERON-TB从感染巨噬细胞模型提高性能http://ow.ly/TaqTO
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最重要的发展之一的诊断结核病(TB)感染已被引入遗传基础interferon-γ释放化验(干扰素释放)1- - - - - -3]。干扰素释放,商用QuantiFERON-TB黄金管测试(QFT)(试剂盒,日耳曼敦,医学博士,美国)和T-SPOT。TB (Oxford Immunotec Ltd, Abingdon, UK), are based on the detection of a T-cell immune response towards RD1 antigens (ESAT-6 and CFP-10), with the addition of the TB7.7 antigen for the QFT only [1]。干扰素释放被赋予伟大的特异性,所表达的是几乎完全使用的抗原结核分枝杆菌(MTB)复杂,但不是牛结核分枝杆菌卡介苗(BCG) (1- - - - - -3]。然而,干扰素释放的诊断灵敏度可以提高艾滋病毒阴性活动性结核病患者(75 - 85%)特别是在结核病高发的国家(3]。
改善干扰素释放的性能,添加MTB抗原TB7.7, Rv3425 EsxV当前抗原鸡尾酒已经尝试(4,5]。类似的战略后,我们评估的6个新肽QFT抗原鸡尾酒改善诊断性能的精度和动态范围的干扰素(IFN)活动性结核病患者-γ水平。
为此,进行一项多中心研究在不同临床设置。研究小组发表在特征表1。活动性结核病患者(n = 85)在三个不同的临床中心登记入学的时候被疑似结核病和诊断根据疾病控制和预防中心/美国胸腔学会标准(6]。对照组(n = 290)没有任何潜伏结核感染的危险因素是参加两个结核病低风险国家(澳大利亚和意大利)和结核病等风险国家(保加利亚)。该研究机构审查委员会批准所有参与临床机构。知情同意之前从每项研究课题获得血液样本收集。
这部小说肽来自MTB-specific基因过表达的在体外感染巨噬细胞模型和验证体外在活动性结核病患者的肺7- - - - - -9]。结核分枝杆菌四种蛋白(Rv0724A、Rv1251c Rv1478和Rv3479)被选为进一步调查表达谱,抗原性和大。主要,人类白细胞抗原(HLA)二类蛋白质序列的滥交肽肽结合主题分析(8]。六肽(Rv0724A: GEIIFISGRLNGAA;Rv1251c: ELMARAAVLGSAH AVIVRSELLTQYL;Rv1478: TAWITAVVPGLMV;Rv3479:由Fmoc RPVRRVLLFVVPSSGPAP和GSVRQLPSVLKPPLITLRTLTLSG)是设计、合成化学(美国肽公司公司,桑尼维尔,美国),得到纯度> 90%。
量子场论分析是根据制造商的指示执行。同时,QFT +六个小说肽(以下称为QFT-Six)是由增加一个QFT抗原管汇集小说肽最终μg·1毫升的浓度−1每一个。然后QFT-Six管一样的QFT管化验。IFN-γ水平测定使用QFT ELISA和结果解释根据制造商的指示。
IFN-γ在CD4细胞内表达+和CD8+早期肠在刺激的池6小说肽是评估使用流式细胞仪(如前所述)(10]。数据表示为中位数(四分位范围)或百分比。对比组是使用配对或不成对非参数测试或雪的测试,是适当的。变异后的QFT MTB抗原测试除了小说的结核分枝杆菌肽与正常相比计算QFT抗原测试。偏离正常的变异系数QFT决心根据QFT再现性的数据(11]。所有使用GraphPad Prism 5.0分析软件(GraphPad、圣地亚哥、钙、美国)。
表1显示了不同的研究中获得的结果数量与量子场论和QFT-Six测试。正如所料,QFT显示高灵敏度(范围:阴性75 - 87%;感染艾滋病毒的67 - 100%)和特异性(范围:96 - 100%)的总量作为分母,nonvaccinated这控制人口。的六个新肽抗原特异性的QFT没有改变测试在总量作为分母或正常控制人口(这表1),尽管结核分枝杆菌抗原来自蛋白质BCG菌株的基因组中。小说的六肽抗原QFT没有确定测试灵敏度显著增加,可能已经由于高性能量子场论的研究人群(3]。然而,少量的限制,除了六个小说肽显示转换为一个积极的结果在三个(30%)的阴性和四分之一(25%)的艾滋病毒感染活动性结核病患者仅在QFT负面结果。
的六个新抗原肽QFT确定总体显著增加IFN-γ释放仅对量子场论,无论是阴性(量子场论:3.88 (0.88 -10)IFN-γIU·毫升−1;QFT-Six: 5.01 (1.20 -10) IFN-γIU·毫升−1;p < 0.01 Wilcoxon配对测试)和艾滋病毒感染(量子场论:0.82 (0.22 - -2.10)IFN-γIU·毫升−1;QFT-Six: 0.99 (0.39 - -2.26) IFN-γIU·毫升−1;p < 0.03 Wilcoxon配对测试)活动性结核病患者。
这个观察证实了分析的变异系数IFN-γ释放后的量子场论的小说六肽抗原。考虑到IFN-γ释放inter-test再现性的量子场论(14% (11]),大量的艾滋病患者(24(51%)的47)和艾滋病毒感染(5(56%)9)活动性结核病患者提出增加IFN-γ释放大于正常范围的可变性IFN-γ释放的QFT (p < 0.001,所有比较)。
以证实这些数据,CD4的贡献+和CD8+抗原反应池中的六个小说肽子群的流式细胞术测定12活动性结核病患者和9 QFT-negative控制。活动性结核病患者,与控制相比,更高的频率peptide-specific IFN-γ+/ CD69+/ CD4+(活动性结核病:0.08% (0.02 - -0.14%);控制:0.01% (0 - 0.02%);p < 0.02 Mann-Whitney测试)和IFN-γ+/ CD69+/ CD8+(活动性结核病:0.07% (0.02 - -0.12%);控制:0.01% (0 - 0.02%);p < 0.02),淋巴细胞)。因此,尽管设计呈现HLA二类绑定功能,这部小说肽也包含HLA抗原表位,为评估免疫抗原决定基数据库分析(12),支持CD4细胞+和CD8+响应。
快速的发展和敏感的诊断方法对活动性结核病,潜伏结核感染结核分枝杆菌和最近感染结核病控制策略的一个关键方面1- - - - - -3]。小说的添加肽的QFT导致显著增加IFN-γ释放在活动性结核病,在不改变特异性,也总量作为分母控制人口这。这符合先前的数据在文献中表明添加其他non-RD1蛋白质QFT可能导致增加的测试性能4,5),也观察到在变化中实现量子场论测试版本(1]。
IFN-γ释放后添加小说的显著增加肽抗原在感染艾滋病毒的QFT结核病患者尤为重要的性能降低干扰素释放在免疫功能低下的患者被报道2]。这增加可能是由于CD8的贡献+t细胞反应针对小说肽,比CD4更好的保存在感染艾滋病毒的主题+反应(13,14]。
此外,显著增加IFN-γ释放在活动性结核病,因此动态范围后,除了小说的多肽抗原的QFT测定可能有助于解释IFN-γ轻微波动反应观察串行测试期间的QFT [15),在减少干扰素释放反应的变化常常获得不同设置下和/或主机背景。这是均匀一致的性能获得了在不同设置在这项研究中使用的量子场论和小说的添加肽抗原。
添加其他抗原QFT可能认为有潜在的负面影响分析特异性,尤其是当这些抗原存在于BCG菌株的基因组。然而,结核分枝杆菌抗原表达的优先的使用在其活跃的复制阶段(7- - - - - -9),在目前的研究中,并没有改变的特异性QFT化验,包括总量作为分母控制,这支持这种抗原选择策略的效用。
总之,尽管需要较大的验证性研究,特别是在感染艾滋病毒的主题,该研究表明,添加新抗原的QFT化验强烈可以帮助新一代的干扰素释放的发展,规避的一些挑战目前的试验在特定的人群和维护当前的高特异性QFT化验与结核菌素皮肤试验。
确认
我们感谢朱塞佩·利奥塔(罗马大学生物医学和预防部门“Tor Vergata”,罗马,意大利)支持的数据和研究结果的统计分析,和格雷厄姆主(实验免疫生物学部门,国王学院,伦敦,英国)批判性阅读和编辑的手稿。
脚注
利益冲突:披露可以找到与本文的在线版本www.qdcxjkg.com
- 收到了2015年6月26日。
- 接受2015年9月17日。
- 版权©2016人队