文摘
肺癌的主要原因是世界上死于肿瘤疾病,甚至与政治动机戒烟运动在欧洲,这种疾病仍然是死亡的主要原因。分子流行病学的发展以人群为基础的研究早期肺癌检测,如利物浦肺项目(LLP),可能会提供一个前进的方向。这是第一个主要的分子流行病学研究早期肺癌的检测。
分子流行病学的使用前风险评估患者的临床诊断和临床前致癌作用的标志高患肺癌的风险会减少病变临床肺癌的发病率,给予适当的干预策略。
目标如下:1)准备一个分子遗传学和流行病学风险评估模型基于环境因素和遗传易感性;2)开发的存档相关标本个体和那些肺癌;3)基于分子重新定义肺癌病理使用领域的表达分析,遗传不稳定和分子细胞遗传学;4)识别和评估新的标记precarcinogenesis的高危人群;5)促进发展新的治疗策略(如。化学预防计划和有针对性的药物疗法)。
LLP)有两个组件:1)最近确诊肺癌病例的病例对照研究,将提供一个基线风险评估;和2)前瞻性队列研究在10年时间内,进行临床前致癌作用的识别标记。使用结构化和半结构化深度访谈进行调查问卷。痰液、血液和肿瘤标本收集和评估特定的分子标记(如。遗传不稳定,变异和表达分析和甲基化状况)。
结论从利物浦肺项目将基于molecular-epidemiological和基因分型的风险评估模型,以及重新定义这种疾病,并最终导致开发新的肺癌早期检测和治疗策略。
这个研究项目由罗伊城堡肺癌基础,英国利物浦。
肺癌是世界上死于肿瘤疾病的主要原因。欧洲目前受困于肺癌流行,甚至与政治动机戒烟活动,这种疾病仍然是死亡的主要原因。不幸的是,它现在清楚的是,新的吸烟人群出现在十几岁的孩子。当这些信息被认为是,与这样一个事实,大多数的美国人患肺癌是前吸烟者,这就产生了一个重大的社会问题。
>有38000新病例的肺癌每年在英国,这个发病率在欧洲最高。虽然发病率下降在某些男性人口,它是女性的稳步上升1,2。默西塞德郡的最高发病率在英国,没有明显下降的男性和女性增加了30%年龄< 75岁1992 - 1995之间3。在利物浦地区,累积率(0 - 74岁)在1994 - 1995年为男性7.2%,女性为11.6%,而全国平均7.2%的男性和3.1%的女性在1995年3,4。检测肺癌通常发生在疾病的后期,当超出有效治疗;因此,有一个高死亡率和5年总体生存率在默西塞德郡的6%5。
分子流行病学的发展以人群为基础的研究早期肺癌检测可以提供答案的一些主要问题在肺癌。正是因为这一原因,当前作者建立了利物浦肺项目(LLP)。结论LLP)将基于molecular-epidemiological和基因分型的风险评估模型,重新定义这种疾病,并最终导致新的治疗策略的发展(如。化学预防和靶向药物)。
这是第一个主要的分子流行病学研究早期肺癌的检测;然而,大量的作品发表在肺癌的流行病学6领域的协会吸烟7,职业暴露8,9、饮食10和社会地位11。最近,出现了戏剧性的增长领域的出版物的数量基因型研究和脱氧核糖核酸(DNA)修复12,13对肺癌。未来在于结合这样的数据分析14为了开发健壮的风险评估模型,可以为未来chemopreventive项目15。LLP)的目标是实现这些目标。目前,本作者注册> 3000人花费∼£100万年−1。本研究计划在10年的时间里为了招募500例肺癌的队列研究,将提供足够的统计能力。
肺癌的危险因素
吸烟与肺癌
使用烟草制品,特别是吸烟、负责大多数肺癌病例,据估计由于风险∼90%的男性和80%的女性16,17。这样的比例由特定和依赖于吸烟的流行和其他风险。重要的是要意识到疾病的比例之和归因于不同的风险因素可能超过100%,因为多个通路的致癌过程。事实上,90%的肺癌是由于吸烟并不意味着只有10%是由于其他原因。相互作用贡献的风险的概念以基因-环境交互作用的重要性和复杂混合物的致癌效果。不吸烟者的发病率在美国已报告14.7每100000人12.0每100000名男性和女性18,也说明其他风险因素可能是重要的。smoking-associated风险依赖的时代开始吸烟,吸烟的持续时间,吸烟的水平和模式。
很明显,患肺癌的风险可能会大幅减少,依赖于在停止吸烟的时间和年龄。也显现出来,许多exsmokers留在遗传损伤的风险很高,因为在支气管肺泡上皮细胞。在青春期吸烟可能导致DNA损伤积累的许多年以后19。
成人吸烟水平下降到1996年的28%,但这种下降是集中在更高的社会经济组织(凹陷)和特定组织。利率下降很少的人年龄< 24岁自1970年代以来,没有减少在这个时候女性年龄< 19岁。吸烟流行1998年最高为42%年龄在20 - 24岁之间20.15年岁,26%的烟民,而63%尝试过吸烟。吸烟是一个主要在“其他风险因素的评估,和准确的估计吸烟水平所需调整多元分析。
被动吸烟的作用也被调查了关于增加肺癌的风险与吸烟者不吸烟的成年人的生活。最近的一项荟萃分析21发现过量的风险24%,一生不吸烟与伴侣吸烟(相对危险度1.24,95%置信区间1.13 - -1.36)。此外,被发现有显著的剂量依赖关系。
职业暴露和肺癌
肺癌排名仅次于膀胱癌病例的比例被认为是由于职业暴露22估计,由于风险在该地区的15%23。某些风险之间的关联和显著增加患肺癌的风险在许多研究已报告。22个化学物质组的化学物质或混合物,用于工业或农业设置已经归类为建立人类致癌物在国际癌症研究机构(IARC)系列专著,其中14人行动的肺部组织24。进一步的22个化学物质已被列为可能致癌和91年可能致癌25。许多的当前估计由于职业暴露的风险在肺癌宽(4 - 40%)23,26并将不同时间和地点。吸烟的协同效应和接触特定的化学物质,在某种程度上,占肺癌的高发病率在特定产业工人。
空气污染和肺癌
戏剧性的增加发病率和死亡率发生由于高空气污染水平在1950年代在伦敦导演关注空气污染与健康之间的关系。除了明显的发病率和死亡率的人力成本,英国肺脏基金会的一份报告27把近似医疗费用因道路交通空气污染每年>£110亿。40岁以上的化合物被认为是致癌或可能致癌在空气污染。这些化合物在空气污染物的存在支持假设空气污染可能会增加肺癌的风险28。
先前的研究的一个主要缺点是空气污染暴露的描述不足29日。很少的研究一直在进行,提供详细的个人信息曝光,曝光interperson可变性和相关的风险与固定地点监控水平测量。空气污染包括大量的化合物,通常在相对较短的时间内相关,但排放长时间段的变化可能导致实质性的修改。
饮食和肺癌
饮食因素可能在肺癌的病因学是很重要的;然而,饮食和肺癌之间的联系的研究仍然是不确定的。吸烟和饮食水平与社会剥夺,吸烟者往往饮食低抗氧化剂和较少的蔬菜和水果30.- - - - - -32。对脂肪和胆固醇的证据病例对照和队列研究是复杂的。一些研究表明脂肪或胆固醇摄入量较高的风险增加33- - - - - -38,而其他人没有发现协会39- - - - - -41。高脂肪饮食的作用与生物可能增加肺癌的风险42。饮酒与吸烟密切相关,显著增加肺癌风险高的酒精摄入量,调整为吸烟,已被证明43- - - - - -47。酒精可以为致癌物质作为溶剂,特别是那些在香烟烟雾48可能存在,但残余混杂烟草并解释观察到的协会。
有很多水果和蔬菜摄入量的研究大多数是一致的保护作用38,44,49- - - - - -52。一些发现显著降低风险较高的类胡萝卜素的摄入量。
许多研究还发现维生素C的保护作用,虽然在很多情况下,协会是虚弱的33,44,53- - - - - -58。这是有可能的,然而,风险减少,实际上是由于一些其他化合物含有这些物质的食物,或生活方式的一个方面相关消费的食品。硒谷胱甘肽过氧化物酶的代谢中起着重要作用,一种酶,防止氧化变化。三大研究了硒的作用,发现了一个保护作用59- - - - - -62年,但最近饮食和肺癌的流行病学研究在过去的20年63年得出结论,他们没有提供充分的证据证明饮食低脂肪和高的水果、蔬菜和抗氧化剂可以降低肺癌风险。
社会阶层和肺癌
健康不平等是社会不平等的一个重要方面64年。健康不平等体现在很多方面如。缺乏医疗、缺乏健康教育,相应的意义缺乏理解症状,微分转诊模式癌症专家)。这些可以解释为什么降低凹陷与贫穷有关生存于肺癌。肺癌是一种疾病影响许多老年人,一个额外的可能是社会弱势群体的老年人,有低水平的诊断调查和治疗比年轻的同行。前一个地方学习65年证明治疗的年龄和地区住宅的变化。
这是一个不可否认的事实是一个逆社会阶层和肺癌之间的关系66年- - - - - -68年。本质上,患肺癌的风险更高更弱势的社会。最近的一项研究中,研究在苏格兰社会剥夺和癌症之间的关系69年,观察到的是三倍的差异之间的肺癌最和最贫困的地区。部分因素可以解释肺癌和较低的凹陷之间的关系包括吸烟、饮食、职业暴露和暴露于环境污染地区居住。最近的队列研究的结果显示额外的风险由于肺部健康不佳,剥夺和社会经济条件差的生活70年。
家族病史和肺癌
家庭研究显示增长两到三倍的风险不吸烟与肺癌有亲戚不吸烟者相比,没有家族病史71年,72年。很多研究表明可能存在遗传性肿瘤抑制基因或致癌基因与肺癌的发展,或者对致癌物的新陈代谢由基因决定的能力。一项研究表明,几乎所有肺癌发生在基因携带者73年,但目前的证据是相互矛盾的,许多研究缺乏能力检测小风险由于非吸烟因素。在一个共享的环境也可以解释家族聚集性,一些易感性的遗传标记已被提出。这些包括CYP1A1的多态性,负责苯并芘的代谢活化,CYP2D6、谷胱甘肽S-transferase(销售税)催化多环芳烃(PAH)的结合。
遗传易感性和肺癌
人类在日常生活中经常接触化学致癌物质,但只有一小部分的曝光(最高的即。吸烟者患肺癌。因为许多致癌物质需要代谢活化,使他们与细胞大分子反应,致癌物代谢的特征可能发挥重要作用的发展环境。
流行病学证据表明,基因控制致癌物的代谢和抗氧化或营养状况与肺癌风险,可能通过调节致癌物质,DNA损伤的能力。因为许多致癌物质需要代谢活化,使他们与细胞大分子反应,致癌物代谢的特征可能发挥重要作用的发展环境74年。
细胞色素p450氧化酶超家族,大多数参与外源性物质的新陈代谢75年。大多数外源性物质烟草烟雾中发现需要代谢激活之前施加致癌活性。例如,转换高α区域最终致癌物苯并芘应承担(BP)共氧化可能发生的各种脂肪酸的存在。可想而知,英国石油公司从烟草烟雾是很容易氧化的最终致癌物质由于高脂肪饮食42。CYP1A1、最广泛研究的p450上面并不表示任何人体组织的基础水平,除了吸烟者的肺1,但已被证明是高度诱导的多环芳烃77年。维生素状态的综合效应和遗传易感性在DNA损伤可以解释为什么个人暴露于PAH肺癌的风险比其他类似的风险78年。
芳香胺(芳基-和杂环)是一类致癌物质出现在饮食和吸烟79年。它们可以N量或O高乙酰化,多态的芳基胺N乙酰转移酶(NAT) 1或NAT2酶,导致激活,或者在某些情况下,解毒。NAT2被认为是许多恶性肿瘤的易感性因素。运营商的NAT2 * 4 / * 4基因型,尤其是高乙酰化能力,显著增加肺癌的风险80年。
个人的相对风险,两者的结合纯合子的稀有等位基因CYP1A1和空GST1“非常高”为5.8为鳞状细胞癌,肺癌和9.1与其他基因型的组合81年。遗传易感性的作用仍有些争议。布劳恩et al。82年不能用来预测认为,遗传因素在男性吸烟者肺癌风险> 50岁。这来自他们的分析15924对mono -和异卵双胞胎。没有更大的一致性在肺癌死亡之间的同卵双胞胎比异卵双胞胎,即使吸烟史是相同的。然而,有一个相当大的证据相反。
大多数研究的局限性进行迄今为止的情况下包括在内。在最近的一次审查17个研究中,平均只有137例(35 - 447)为GSTM1基因多态性进行分析83年。这些研究的异质性是不确定的结果,甚至荟萃分析的主要原因未能显示出真正的优势比的精确估计。研究设计和缺乏统计力量的失败在很多研究中被D 'Errico最近好et al。84年。
早期检测生物标记物
脱氧核糖核酸甲基化分析
异常的DNA甲基化在CpG岛是人类常见的恶性肿瘤导致废除或广泛的基因的超表达85年。异常甲基化也被证明发生在intronic CpG-rich监管元素和某些肿瘤的基因编码的部分86年。使用限制具有里程碑意义的基因组扫描,科斯特洛et al。87年能够表明,甲基化是肿瘤类型特定的模式。高度特征DNA甲基化模式也可以显示乳腺癌细胞系88年。全基因组甲基化状态的评估代表一个分子指纹的癌症组织和大规模的信使核糖核酸(RNA)表达式监控,因此应该允许肿瘤类预测和发现。
最近,甲基化的应用程序特定的聚合酶链反应(MSP)患者血清nonsmall-cell肺癌已经发表89年。假设是,肿瘤细胞可以释放DNA进入循环,这是富含血清和血浆。净化后,1毫升的血清收益率∼50 ng的DNA。在一系列的22名患者,检查四个基因甲基化CpG岛的存在。在68%(15 22)的肿瘤,在至少一个基因的异常甲基化,但不是在正常组织。在11个15(总额的50%),异常甲基化DNA在匹配的血清样本。在另一项研究中相同的基团,支气管肺泡灌洗(BAL)检查样本。在12例一个基因的甲基化(p16)被发现在BAL流体(19肿瘤与甲基化的共有50)。其他38 - MSP90年。最近,使用甲基化的可行性研究发现早期癌症已经证明,与痰MSP敏感网站的等位基因91年和检测P16和O6−癌症诊断之前methylguanine-DNA甲基转移酶启动子甲基化1 - 3年。的注意,p16INK4启动子甲基化和p53突变被发现在表皮剥脱的高频材料(即。痰,落下帷幕,刷牙)症状慢性吸烟者肺癌和马克的发展92年,93年。这些发现强调了早期肺癌的可能关联的甲基化检测。
基因组不稳定性
基因组不稳定性是最常见的分子异常在人类肿瘤细胞94年,95年。基因组不稳定性的一个形式是等位基因不平衡或杂合性丢失(LOH),这反映了非整倍性等表观遗传变化,多倍体,损失和染色体区域的放大。基因组不稳定性的另一种形式是微卫星不稳定性(分钟)或(MSI);也称为微卫星改变(MA)或复制错误(r),代表复制和DNA修复不忠。基因组不稳定性的高发病率在肺肿瘤96年- - - - - -One hundred.在某些情况下,它与预后有关101年- - - - - -103年。目前作者最近证明,基因改变在97.6%的肺肿瘤检查小组12个微卫星标记选择在特定的位置104年,并计算了LOH的阈值检测到评估interassay变异的23%。
肺癌是全世界neoplasia-related死亡最常见的原因。此外,它通常有一个非常不良预后≤6% 5年生存。这种低生存的原因之一是癌症是最常诊断时超出有效的治疗。因此,有一个不断增长的新需求早期肺癌检测工具105年,106年。通过多级肺癌发展过程的步骤与基因组不稳定性增加。基因改变已发现在肿瘤出现前的肺107年- - - - - -109年病变以及从吸烟者支气管组织没有肺恶性肿瘤的证据110年,111年。DNA畸变先于形态学变换112年,从而有利的标记和潜在工具识别高危的个体患肺癌。之前它已经表明,基因组不稳定性可以发现支气管灌洗(提单)和痰,这也许是一个向前的方式协助早期诊断肺癌113年- - - - - -116年。目前作者展示了基因组不稳定性在提单的患者没有肺癌的临床证据,构成问题独家发生癌症的基因组不稳定性。这个观察是由基因组不稳定性的报告也支持良性的疾病117年- - - - - -123年。
的技术优势荧光聚合酶链反应(PCR)的分析提供检测DNA的能力从微量复合反应的起始物料124年。此外,自动分析测序仪/遗传分析器不仅增加吞吐量,而且减少了运营商在分析错误。目前作者已经审查了65个微卫星标记的基因改变的发生率在肺癌标本和表明等位基因失衡似乎在某些染色体区域特定癌症,而另一些没有125年。这方面的研究的目的是识别特异的微卫星标记分析(s)应用到提单,痰和血浆/血清标本,以协助疾病的早期诊断。九十六肺肿瘤标本65已经筛选微卫星标记,和24信息最丰富的分析对癌症特异性选择通过检查100提单标本肺癌患者和100个良性的肺部疾病患者的标本。
肺癌全基因组表达分析:识别和调查与肺癌有关的基因表型
支气管上皮细胞的慢性接触致癌剂(如那些出现在烟草烟雾)似乎导致局灶性上皮变化(发育异常增生,癌原位分散在气管支气管的树)126年,127年。这些明显的细胞变化可能是之前的广泛扩散明显组织学正常但基因克隆的细胞受损,这可能是因为后天的生长优势。这种增长优势将通过基因突变和基因misregulation授予。因此在频繁的吸烟,肺部肿瘤可能源自,和反对,multiclonal的背景,转基因,癌变前的细胞。
目前作者和其他研究表明,基因损害和不恰当的基因表达可能是有用的预测因子的临床的早期或preneoplasia肺肿瘤的行为113年,128年- - - - - -131年。
最有前途的方法之一,肺癌的早期检测是基于癌变前的细胞脱落的观察病变发展,最有可能的结果组织水平的结构性障碍,和这些细胞可能发现痰的人也许在几年前公开的疾病可以被常规程序128年,132年。为了使用这种技术最有效,一个完整的图片在肿瘤细胞基因表达的本质是必需的,这样一个高度特异性抗体诊断小组(或逆转录酶聚合酶链反应(rt - PCR)检测)对关键目标可能是开发和测试。LLP-generated唾液和血液样本将构成一个极其宝贵的实验资源的验证新型诊断试剂。
因此,目的是进行全基因组表达的分析人类肺癌:重新定义这种疾病在分子水平上。这种方法的力量最近强调的一项研究中B细胞淋巴瘤133年。
肺肿瘤的细胞学分析
细胞学变化临床样本长期以来形成的癌症诊断的基础。最简单的方法筛查癌变的航空公司是分析在痰脱落细胞样本112年,134年。或者,当病人目前的评估可能的肺部肿瘤,由提单样本收集的细胞113年。
然而,几项研究已经表明,多个基因变化显然已经存在于正常支气管上皮的吸烟者110年,111年。一些生物标记已经评估了早期诊断肺癌的但尚未被发现足够健壮和可靠的常规筛查135年。很明显,更需要了解肺癌的发展在合适的标记可用于筛选。细胞研究的好处让很小的分析样品具有高敏感性和特异性。这些研究可以基于DNA的变化,或基因变化导致的下游效应改变细胞蛋白质,因为DNA和蛋白质在临床样本保持相对稳定。
肺肿瘤的分子细胞遗传学分析
分子细胞遗传学分析细胞学标本有可能检测单个细胞的变化,因此可能更敏感比pcr筛选的方法。染色体复制更改已报告在正常支气管上皮的肺癌患者136年- - - - - -138年,但大多数荧光原位杂交(鱼)研究使用着丝粒探针,这给好信号,但可能没有足够的信息对肿瘤特异变化139年- - - - - -141年。更特异的探针需要提供更好的歧视一般上皮之间的干扰和实际肿瘤发展。这意味着应该有一个全面的分析染色体改变肺肿瘤。
评价蛋白质标记在肺肿瘤
基因改变的下游效应细胞也可以通过比较分析RNA的分布或蛋白质在正常和肿瘤细胞。这些模式可以进行一系列在组织部分或组织细胞类型数组,使用原位杂交和免疫组织化学。染色可以正常模式的变化与疾病阶段,和潜在的候选人评估的临床意义。
风险评估研究
前进的道路改善管理和常见的癌症的预后取决于疾病的早期检测。经济学将决定,筛查肺癌将不会用于整个人口。因此,有一个主要需要能够识别这些疾病的风险最高的人将会受益于预防措施。常见的癌症的原因可能有遗传易感性的基础环境风险发生主机。它是至关重要的,因此,生活方式因素和易感基因之间的相互作用可以产生一个风险评估模型研究。的主要力量LLP在于开展这项工作的潜力。
利物浦肺项目的目标
使用molecular-epidemiological前风险评估患者的临床诊断和临床前致癌作用的标志高患肺癌的风险会减少临床检测肺癌的发病率,给予适当的干预策略。
的目标是
准备一个分子遗传学和流行病学风险评估模型的基础上,分析环境因素和遗传易感性,这将提供一个算法来衡量一个人的患肺癌的风险。
有五个LLP)的主要目的是:1)准备一个分子遗传学和流行病学风险评估模型的基础上,分析环境因素和遗传易感性,这将提供一个算法来衡量一个人的患肺癌的风险;2)开发的存档相关标本个体和那些肺癌;3)基于分子重新定义肺癌病理使用领域的表达分析,遗传不稳定和分子细胞遗传学;4)识别和评估新的标记precarcinogenesis的高危人群;5)促进发展新的治疗策略,即。化学预防计划和有针对性的药物疗法。
研究设计
如果结果是普遍适用的是很重要的,这项研究是基于人口。因此,律师事务所进行默西塞德郡的在某一特定地理区域,基于连续的选举与肺癌高发的病房。LLP)有两个组件。首先,新诊断病例的病例对照研究肺癌,这将提供一个基线风险评估。其次,前瞻性群组研究提供串行识别标记样本临床前致癌作用和同时代的生活方式的数据(图1所示⇓)。
病例对照研究
肺癌一千二百五十例新诊断病例将进入学习。每箱装两个控件,对年龄和性别匹配,将随机选择的研究区域人口。所有气管上皮肿瘤的情况下,将包括支气管和肺部。接近新诊断肺癌病例来邀请他们参加一个研究项目是很困难的。病例最初确定的,还可以从许多别的来源包括病理报告、专家肺癌护士姑息护理团队,在肺癌临床医生快速访问和肿瘤诊所。这项工作是由一个研究护士,与临床团队合作。
队列研究
所有居民,年龄在45 - 79在研究区(326000)将有资格获得进入学习。随机选择的7500人将选择从这个人口通过全科医生(GP)的列表。研究区域内的所有的GPs实践要求与项目协作和∼2%的样本将包含每个医生的病人。一个匿名注册的病人列表与GPs是合作研究中心举行。随机样本来自每个医生列表,个人被研究数字。邀请信发送队列和控制对象从中央操作小组办公室。
除外责任
排除所有被监控,分析偏差和记录。主要原因排除包括:拒绝,无法接触这个主题,主题研究区域外的居民,拒绝方法由临床医生和主题也生病或不适合面试。这个话题可能是不合适的,例如,他们拥有先进的老年性痴呆或者其他无法理解这个项目充分知情同意。
功率计算
队列研究
在一群7500人,随访10年,目前的作者希望看到500例,假设1000年发病率约为8。这将给的力量> 95%检测风险比率2.0在5%的显著性水平。初步研究表明,1000人可以招募到队列,提供样品并完成问卷调查,在一个研究诊所1年。
病例对照研究
大约有1000新发病例LLP肺癌诊断的研究区域,每年大约有350名女性和男性的650 < 80年。风险与控制患病率为5%,该研究能够发现1.75的相对风险5%显著性水平的95%,或1.5的相对风险80%的力量,招聘1250例。
分析
多元条件逻辑回归将用于病例对照和队列研究,后者主要是分析一个嵌套的研究。风险评估模型将基于数据的病例对照研究。这将稍后进行验证并可能精制队列研究的数据。变量选择和几种不同的方法将至关重要,相比,黑盒逐步选择不会单独使用。进一步的工作体现在米勒148年,这是一个正在进行的统计研究领域。考虑到数据收集的性质,目前作者还提出将卡罗尔和扩展的方法et al。149年允许测量误差。
一些简单的nonglobal,甚至单变量分析,也将提出了易于解释和比较。将会有一些关于时间的生存分析疾病发生的前兆标记后,基于队列研究。Subanalyses将由肿瘤细胞类型,和现在的作者将为环境构建风险评估模型,职业、生活方式、饮食、遗传风险隔离和子集。这将使目前的作者:1)研究总由于风险的贡献,和2)验证结果与其他研究全球模型没有是不可能的。由于多重假设检验所有子群分析的危险将看到适当的强有力的警告。没有临时分析的病例对照研究和队列研究。
伦理问题和知情同意
伦理批准LLP最初来自三个地方研究伦理委员会1997年10月至1998年2月。
进一步伦理批准2000年3月获得更详细的信息表和同意书进行DNA和组织样本草案已拟定符合新的医学研究委员会的指导方针150年。
流行病学数据
方法,对结构化面试和获取标本,本质上是相同的两个元素。将进行深入采访中使用结构化和半结构化问卷。这些受试者换取后续将完成短形式的问卷调查,旨在记录的任何变化区间自去年出席他们的生活方式。
生活方式问卷内部开发,包括主动和被动吸烟史等领域,住宅历史、病史、家族史和荷尔蒙历史(女性)。住宅历史与环境污染监测数据。这项工作包括生产每个污染物的详细地图,从当前和历史数据。
评估职业暴露的方法已经被Siemiatyki发达et al。151年在加拿大。这些方法都是基于专家判断应用于通过详细的职位描述和结构化面试。
职业暴露评估
最复杂的方面之一的以人群为基础的研究职业性癌症风险回顾暴露评估。新方法已经发展为了避免错误参与使用头衔作为曝光的代理人,或自我报告的风险敞口。这些方法都是基于专家判断应用于通过详细的职位描述和结构化面试151年- - - - - -154年。
这种方法采用了多中心病例对照研究职业、环境和肺癌在中欧和东欧国家协同研究。
膳食评估
饮食因素的角色将使用食物频率问卷评估,密切根据用于癌症的欧洲多中心前瞻性调查饮食和癌症,修改为当地的饮食。调查问卷将会验证一个5天的食物日记。
估计暴露在污染环境
评估一个人的长期暴露于空气污染不是一个简单的任务。可用的数据监测项目必须外推,或者至少插值,在时间和空间。然而,监控网络的密度不足以地图空气污染物浓度通过简单的数值插值由于空气污染物浓度的时空变化太大。科学家在国家环境技术中心,AEA技术,已经开发出替代空气污染物浓度映射方法基于发现污染测量和变量之间的关系,如人口密度、土地利用或道路交通密度的详细的空间数据是可用的。这些方法允许空气污染物的生产地图在1公里2决议。目前,地图可用于1994年至1996年期间,二氧化氮,二氧化硫、一氧化碳、苯和粒子切断空气动力学直径10µm 50%。
结论
必须考虑肺癌利用分子生物学方法的重新定义,因为典型的病理和临床方法是不准确的。目前作者正计划进行全基因组表达谱,所以在一个特别强势地位来承担这项任务。的重要性放在国际上螺旋计算机断层扫描(CT)早期肺癌检测试验已经考虑,螺旋CT将发挥重要作用的公众形象和临床早期肺癌检测方法。因此,目前的作者是一个特别强势地位提出未来研究项目可能运行在与这样的合作试验,即。螺旋CT早期肺癌试验。
LLP)研究项目的结果将做出重大贡献的人可能患肺癌的风险评估,以及提供的方法来识别基因畸变支气管细胞前疾病的临床诊断。目前作者现在能够作出重大贡献的临床和科学社区的能力进行重新定义的肺癌表达分析的基础上,这将导致提供特定的早期检测标记为未来提供目标疗法。
LLP的流程图(图2所示⇓)表示这个研究项目的贡献可以识别的人患肺癌的风险,以及疾病的分子/病理定义与这些研究方法的贡献未来的干预和治疗方法。
这是一个独特的项目和它的主要优势在于它的结合流行病学和分子遗传学及其成功完成应该有一个对肺癌的预防和管理产生重大影响。
附录
利物浦肺项目管理
队列研究的设计是基于随机选择人口样本信邀请参加。受试者同意参加然后给护士让研究诊所预约。这使得充分知情同意,得到完整的病史和一个基本的卫生进行检查。血液及唾液样本可以收集到一个安全的环境,根据研究协议和主题可以把时间花在一个医疗面试官完成调查问卷。
项目经理负责项目的日常运行。项目管理需要文书支持和人员配备齐全诊所设施,其中包括一个接待员,研究护士和医疗两个面试官。此外,实验室资源需要处理标本,进行细胞学筛查,其中包括一名技术人员日志和条形码所有样本,细胞学安检人员和技术人员准备血液和痰标本的DNA。除了全职研究护士也需要联系临床工作人员在整个六医院信托参与项目和招聘新的肺癌病例。律师事务所目前有两个研究诊所,心胸中心上的“Tockman诊所”国民医疗服务制度(NHS)信任网站,于1998年6月,移动单元1999年7月启动。
研究诊所
项目的组织是基于专用,护士让社区诊所。这些诊所是一个移动单位之一。许多研究的人口生活在社会和物质贫困地区和流动诊所使访问,提高项目的概要文件,给当地社区项目的所有权。
每周一个研究诊所可以处理∼50任命给最高年产量2400∼。最初的面试可能需要≤2小时,如果有复杂的职业的历史主题,而跟进这次约会通常是一半。
基本医疗的建议,在适当情况下,对象提供一个介绍信医生护士是否关心一个人的健康。最推荐与确诊高血压(收缩压> 160毫米汞柱,舒张压> 105毫米汞柱)。
痰诱导
这似乎是一个安全程序哮喘和慢性阻塞性肺疾病患者155年,156年,尽管没有证据表明其使用在一个人口样本。虽然技术生产小肺量测定法和动脉氧饱和度的变化这些变化一般无症状,不需要补充氧气。氧含量监测整个过程经皮的手持脉搏血氧计(NPB必经40;Nellcor英国清教徒的班尼特有限公司,斯特,英国)。基线进行肺量测定法包括在一秒用力呼气量(FEV1)。文章归纳FEV1也是衡量监测肺功能下降引起的痰诱导。FEV的过程通常被认为是安全的水平1的0.7 l或> 50%的预测价值。FEV下降1通常是7 - 10分钟后发现,痰诱导可能停止FEV如果有下降吗1> 20%。如果病人继续抱怨气短,bronchodilation 2.5毫克舒喘灵通过nebuliser被认为是。任何可逆的气道疾病史的患者应该接受舒喘灵2.5毫克通过为pre-induction nebuliser bronchodilation。
主题是建议不进行主动运动后立即痰诱导,因为无症状持久稀释的风险。
痰液样本获得的一部分保留常规细胞学筛查。复制细胞学报告被发送到主题的全科医生。几乎没有证据表明在当前文学的发展机制的发育异常的细胞克隆。协议一致的管理学科有轻度,中度或重度异型性。所有这些问题都回忆起痰归纳在一个6月基础上。持续的轻度异型性,或中度或重度异型性是指两个专家呼吸内科医生进行进一步的调查。后续协议包括年度CT扫描和支气管镜检查,结合痰诱导进行研究诊所。
信息技术安全
计算机系统是保护一个3级防火墙技术和安全标志。部分数据库的进一步保护,因此只有特定的员工可以访问病人标识符。这个级别的安全性符合NHS的连接代码。
管理研究的标本
实验室工作人员的成员在罗伊城堡国际肺癌研究中心支持研究诊所准备解决方案,用于痰诱导。他们还生产样品和相应的数据手册条形码,以确保有效的样本识别和跟踪。一旦收集到研究诊所血液及唾液样本运输中心,酒吧编码和登录到中心数据库的安全。
痰
痰细胞学上可以检查之前,肺内上皮细胞样本需要固定到载玻片。首先,样品处理di-thiothreitol去除上皮细胞的粘稠的粘液,然后离心机在使用cytospin幻灯片。生产四个幻灯片,其中两个是沾H & E和两个与宫颈脱落细胞。这些幻灯片放映任何异常细胞的医学实验室科学人员的监督下顾问细胞学者是在皇家利物浦大学医院。如果这个筛选过程的结果尚不清楚重复样本可能请求,,如果有细胞异常的个体将会称为一个胸部医生合作,为每一个特定的协议,进一步调查。这些问题将继续共同跟进。
细胞学幻灯片制作都存储在一个特别设计的房间,他们将被存档,直到项目结束。剩余的标本材料也存储供以后使用,与同意。任何新技术的发展来识别恶性或癌变前的细胞,必要性,比较当前疾病细胞学方法识别。细胞学报告进入数据库和未来的痰样本然后跟踪运动通过数据库。
当一批96个不同的样本被收集,DNA提取少量的痰使用试剂盒DNeasy 96工具包(试剂盒,克劳利,英国)。这个DNA由PCR检查质量,整除,条形码和储存在−85°C。存储位置的痰和合成DNA样本输入到数据库中;这个功能大大促进使用这些样本的研究项目。DNA准备这些样品,目前主要使用的遗传不稳定性研究小组。
血
血液样本由离心成等离子体,白细胞和红细胞;红色的细胞被丢弃。等离子体和白细胞都分为三个部分,储存在−85°C到要求,这些样本将被存储的持续时间。
与上述样品存储位置的全血和合成DNA被记录在LLP数据库。
支气管灌洗和肿瘤标本
同意后,一个员工为基础的合作医院,获得样品的肿瘤组织,血液和支气管灌洗。在所有情况下都是非常小心不妥协诊断/治疗过程。坚实的组织是在液氮快速冻结或固定在福尔马林和嵌入在蜡,然后分段常规H & E染色。支气管灌洗与Saccomannos固定剂混合,和常规细胞学检查。所有幻灯片准备从这些样本条形码,将存储,直到项目结束。提单样本编码并存储在一个特别设计的存储空间。血液样本和所有固体组织也编码和存储,血液样本和冷冻组织−85°C,嵌入材料在室温下。
Wax-embedded材料可用于研究项目,要么是削减部分,在微阵列,或作为一个来源的DNA。微阵列技术可以有效地利用宝贵的材料非常小的具体的样品可以和嵌入在一个新鲜的蜡块,因此,生产的“迷你档案”在每个蜡块固体材料。从使用上面的示例结果表明突变,LOH或染色体病变并将进入数据库与流行病学信息。
冰箱安全
血浆、白细胞、全血、DNA从白血细胞和血浆中提取条形编码,保持在−85°C。肿瘤块和它们相关的DNA和RNA酒吧内编码如果LLP)和存储在−85°C。支气管灌洗和痰标本DNA也条形编码并存储在−85°C。冰箱的房间开着空调和目的建造喷口维持房间温度≤21°C。冰柜不间断电源和发电机连接在电源故障时备用。发电机每月测试。冰柜也连接到液态二氧化碳在冰箱出现故障时备份。每个冰箱也是连接通过建筑管理系统计算机的远程报警连接将发送一个警报信号实验室经理办公室和员工呼叫列表
目前的作者认为,这是第一个欧洲早期肺癌检测研究中,基于护士让社区诊所,让积极的跟进和生产生活方式信息和标本存档更新。超过3000个人目前已经加入了这个项目。
确认
作者要感谢他们所有的科学和临床同事的发展作出了重要贡献和利物浦肺的成功项目。
脚注
↵本系列之前的文章:没有。1:钢E, Paesmans M, Berghmans T,et al。p53的角色作为生存在肺癌的预后因子:系统回顾和荟萃分析的文献。欧元和J2001;18:705 - 719。2号:范•克拉维伦RJ Habbema JDF,皮德森JH, de通力HJ Oudkerk M, Hoogsteden HC。肺癌筛查的低剂量螺旋ct。欧元和J2001;18:857 - 866。3号:Brambilla E,特拉维斯WD,科尔比电视,科林B: Shimosato y肺肿瘤的新的世界卫生组织分类。欧元和J2001;18:1059 - 1068。不。4:布洛克CS,李SM。抗血管生成策略和血管靶向治疗肺癌。欧元和J2002;19日:557 - 570。5号:赫希FR,梅里克DT,富兰克林佤邦。肺癌早期诊断的生物标志物和化学预防。欧元和J2002;19日:1151 - 1158。
- 收到了2001年10月29日。
- 接受2002年4月18日。
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