抽象
聚免疫球蛋白受体(的pIgR)表达下调在肺癌,但其在肺肿瘤发生的影响仍是未知的。我们假设的pIgR表达的损失发生早,并与细胞增殖和预后较差。
的pIgR表达通过在患者的正常气道粘膜免疫组织化学评估,侵袭前病变和浸润性病变,和与临床结果相关。16 HBE和A549细胞的pIgR稳定转染的增殖,细胞凋亡和细胞周期进展进行了测试。
免疫染色强于正常的上皮细胞,但在浸润前病变和大多数肺癌严重降低。持续表达与低龄腺癌亚型,但不是生存相关。的pIgR表达减少显著A549和16 HBE增殖。生长抑制不是由于细胞周期停滞,提高细胞凋亡或内质网应激,但我们观察到编码的膜蛋白,包括NOTCH3基因的改变的表达。有趣的是,NOTCH3表达呈负在细胞系和组织的pIgR表达相关。
的pIgR表达丢失在大多数肺癌和侵袭前支气管病变,这表明的pIgR下调是在肺肿瘤发生的早期事件。的pIgR表达在A549和16-HBE细胞抑制增殖。未来的研究需要确定通过的pIgR有助于细胞增殖的机制。
跨膜受体细胞信号传导的关键和调节增殖,宿主防御机制和细胞内环境稳定。聚合免疫球蛋白(Ig)受体(的pIgR)是在表达的跨膜糖蛋白粘膜表面,从基底外侧极到上皮细胞的顶端表面[介导多聚IgA(皮加)胞转1克ÿdF4y2Ba,2]。在细胞的腔表面,的pIgR被裂解及其胞外配体结合区,被称为分泌成分(SC),被释放的游离或结合到皮加在复杂称为分泌型IgA(SIgA)。的sIgA是针对环境抗原免疫防御到粘膜表面被暴露的第一行[3,4]。
在正常条件下,的pIgR被高度在上呼吸道(主要是浆液性,而且粘液和纤毛细胞)的上皮细胞中表达,而表达在肺泡细胞[缺席五]。的pIgR表达已经报道了各种肺疾病,包括慢性阻塞性肺病中下调[五],纤维化6],结节病[6]和癌症[7-13]。几项研究已经表明,表达的pIgR在肺腺癌(ADC)的低分化的肿瘤减小,具有低表达,而在其它肺癌类型不存在表达的[7-13]。下降的pIgR表达也已在其它癌症[描述14-18]。在结肠直肠癌,在癌性和侵袭前病变中观察到的pIgR下调,具有较低的表达在低分化病变[16,18]。另外,在大肠癌中的pIgR表达与预后相关联,并提出了作为一个预后生物标记[14,16-18]。
机制导致的pIgR下调肺癌知之甚少。的pIgR mRNA水平已与组成型转录因子上游调控因子1/2的表达和激活蛋白2α[相关19]。
在肺肿瘤形成的pIgR下调的时间性是未知的,我们不知道的pIgR下调是否携带预后价值。此外,尚未见报道在肺癌发展/进展的pIgR下调的生物学意义。因此,我们提出了下列三个假设:下调的pIgR 1)是在肺肿瘤发生)中的早期事件,2与不良预后和3)相关联的具有在肺癌发展/进展生物学含义。为了验证这些假设,我们确定的pIgR表达通过在肺预侵入性和侵入肿瘤免疫组织化学(IHC),相关的pIgR染色临床结果,并评价对增殖的pIgR表达,细胞周期进程和细胞凋亡的影响。解决这些假设可以提高我们的分子步骤导致肺癌和参与细胞运输和分化调控的关键细胞受体的作用的认识。
材料与方法
组织和细胞系
非小细胞肺癌(NSCLC)从175例无事先医疗样品组装成从在Vanderbilt大学医学中心和纳什维尔VA医学中心(田纳西州纳什维尔从病理科的档案获得的石蜡块制备组织微阵列(TMA中), 美国)。肺癌诊断用肺癌病理学家(A.L.冈萨雷斯)证实和样品注有临床数据元素。
这项研究是由机构审查委员会。来自11例肺ADC和六个与鳞状细胞癌(SCC)快速冷冻组织中通过在肺研究卓越范德比尔特专业化计划(纳什维尔)获得。BEAS-2B,NCI-H1299,NCI-H460,NCI-H226,NCI-H520,NCI-A549,将Calu-3,NCI-:下列细胞系购自美国典型培养物保藏中心(Manassas,VA,USA)购得H23,NCIH2009,NCI-H1650,NCI-H1819和NCI-H1993。16 HBE来自特区Gruenert(儿童医院奥克兰研究所,奥克兰,CA,USA)惠赠。H157,HCC15,HCC95,H549和HCC78来自J.D.明娜(德克萨斯大学达拉斯西南医学中心,达拉斯,德克萨斯州,美国)实物礼品。所有细胞推荐的条件下培养。
免疫组化
的TMA染色以下与先前报导的协议[五]。简而言之,将载玻片过夜,在4℃用抗人孵育的pIgR / SC多克隆山羊IgG(1/500稀释;在Y. SIBILLE,15-9 Universitaires蒙特-Godinne,鲁汶天主教大学,Yvoir的实验室制备的山羊606,比利时)。二级抗体,从VECTASTAIN ABC精英系统生物素化的兔抗山羊IgG(1/50稀释; Vector Laboratories公司,Burlingame的,CA,USA),在室温下施加30分钟。染色强度通过为0(无染色)两个独立的观察者(A.L. Gonzalez和S. Ocak),1(弱染色),2(中度染色)或3(强染色)来评价。染色强度乘以染色的肿瘤细胞的百分比,以获得用于与临床结果的关联的最终染色得分(刻度0-300)。
Western印迹
将裂解物从以下的标准协议细胞/组织中获得的[20]。印迹用针对人的pIgR / SC(1微克抗体探测·毫升-1;多克隆兔IgG 877,在Y. SIBILLE的实验室)中制备,钙网蛋白(1 / 1,000稀释;细胞信号传导,丹弗斯,MA,USA),BIP(1 / 1,000; Santa Cruz Biotechnology公司,Santa Cruz公司,CA,USA),NOTCH3(1 / 1,000稀释; Orbigen,圣地亚哥,CA,USA)或肌动蛋白(1/5000; Sigma公司,圣路易斯,MO,USA)。
稳定转染的pIgR或空的pcDNA3.1( - )载体
A549或16 HBE细胞在6-cm培养皿以2×10接种五和12×10五每皿的细胞,分别。第二天,人的pIgR基因(来自C.S. Kaetzel,肯塔基大学,列克星敦,KY,USA样的礼物)的转染[21]到pcDNA3.1( - )(Invitrogen公司,卡尔斯巴德,CA,USA)或空的pcDNA3.1 - 根据制造商的说明书,使用PolyFect转染试剂(Qiagen公司,瓦伦西亚,CA,USA)进行()。在2天后,将细胞分裂和培养基补充了遗传(600微克·毫升-1对于A549和100μg·mL的-116-HBE;GIBCO,卡尔斯巴德,CA,USA)。2周后,遗传霉素抗性克隆挑取和的pIgR表达测试。
增殖试验
稳定转染的A549和16-HBE细胞接种在96孔板中接种0.5×103和5×103每孔分别细胞。它们在含10%胎牛血清(FBS)6天的培养基中培养。每天,WST-1试剂(Roche,曼海姆,德国)根据制造商的说明书用于细胞增殖的分光光度法定量。
凋亡分析
稳定转染的A549细胞接种在6-cm培养皿以2×10接种五每皿的细胞。在2天后,将细胞用100μL的膜联蛋白V缓冲液中含有1μLAlexaFluor®-488缀合的膜联蛋白V(Invitrogen)和1微升碘化丙啶(PI)(100微克·毫升结合染色-1;Sigma公司)。染色通过荧光激活细胞分选(FACS)分析进行定量。数据采集和分析用的CellQuest临(BD生物科学公司,圣何塞,CA,USA)进行。
细胞周期分析
稳定转染的A549细胞接种在6-cm培养皿以2×10接种五每皿的细胞。第二天,在10%FBS培养基用无血清培养基(同步)代替。细胞沉淀并固定在不同的时间点(0,4,8,12,20,22,24和26小时)乙醇。将细胞用1毫升PI(100微克·毫升培养-1)和RNase A(100微克·毫升-1;Qiagen公司)。总共10000个染色的细胞核进行流式细胞术。数据收集于Becton Dickinson公司的FACSCalibur流式细胞仪使用CellQuest Pro的。与MODFIT LT软件(Verity的软件楼,托普瑟姆,ME,USA)进行细胞周期分析。
基因表达微阵列分析
总RNA从稳定转染的A549后培养3天后使用TRIzol®(Invitrogen)分离,根据制造商的协议。的RNA杂交到GeneChip®人类基因组U133加2.0阵列(Affymetrix公司,Santa Clara的,CA,USA)。由Vanderbilt大学DNA微阵列核心设施(纳什维尔,TN,USA)进行图像分析。与表达控制台(Affymetrix公司)分析数据。实验进行3次。
统计分析
免疫组化
Wilcoxon秩和或秩和检验测试,用于关联平均的pIgR染色的得分与分类的临床/病理结果,并用于连续结果Spearman秩检验。总生存期从诊断到死亡或那些活着的接触最后日期的日期之日起,分析的时间来计算。复发/无进展生存期是从诊断日期到复发/进展或对那些无复发/进展在分析的时间接触的最后日期的日期计算的。用于生存分析评分测试。计算的Kaplan-Meier存活曲线,根据的pIgR表达(染色得分0与> 0且<20与≥20),比较使用log-rank检验。描述性统计,包括中值和四分位范围为连续的,百分比或分类变量的频率进行了报道,。用Cox比例风险模型对年龄,包-年,肺癌组织学和阶段进行多变量分析。所有的测试都是双侧的,t检验未配对和p值<0.05被认为是统计学显著。分析是,使用R 2.9.2(维也纳,奥地利维也纳大学)进行。
基因表达微阵列
使用强大的多芯片平均法归一化数据。基于基因表达的在A549细胞中过表达的pIgR和非配对t检验的p值<0.05的两倍的变化被选择的候选基因。
结果
的pIgR表达下调肺肿瘤发生早期
的pIgR表达支气管肿瘤发展过程中通过IHC在气道评估。结果总结在表格1和有代表性的图像示于图1a-f的。的pIgR表达细胞溶质和膜,按照其作为一个胞转膜受体的作用。的pIgR在10的11正常支气管和肺泡组织中表达,与在表面和腺上皮,弱强度在纤毛和预期不存在于肺泡细胞染色的粘液和浆液性细胞强染色强度。在所有测试肺侵袭前病变(四个低和六个高级),我们观察到不存在的pIgR表达的,这表明的pIgR下调是肺肿瘤发生过程中的早期事件。染色肺癌的TMA的,包括从175名患者的样品,证实在所有未分化的非小细胞肺癌不存在的pIgR表达的,60个,67个SCC和47出来的98级的ADC。
通过免疫组织化学(IHC)评估在正常支气管上皮聚免疫球蛋白受体(的pIgR)表达,侵袭前的肺损伤和肺癌。一个)上IHC正常肺组织显示在表面和腺上皮,在纤毛细胞的弱染色粘膜和浆膜细胞的pIgR一个强染色,并且预期在不存在肺泡细胞染色的。B,C)有在预侵入肺损伤没有的pIgR表达:B)鳞状上皮化生;C)重度不典型增生。的pIgR表达也是在d不存在)90%鳞状细胞癌和E,F)的腺癌(ADC的52%)的:E)ADC,具有不存在的pIgR的染色和f)ADC,具有强的pIgR染色。比例尺=20μm以下。的Kaplan-Meier克的分析)总生存率(P = 0.66)和h)的复发(R) - 或进展(P)-free生存率(P = 0.67)未显示肺癌患者之间的生存差异有或无的pIgR表达。
的pIgR表达然后通过从同一患者在肺癌和正常肺组织的免疫印迹(评价图。2A)。的pIgR表达在六个六个的SCC下调。在ADC中,在五个观察到的11下调,而有四个出11个组织的两个无表达差异,在11和过表达。这些结果与那些通过IHC观察是一致的。的pIgR表达低两个出两种永生化的正常bronchioepithelial,1进1出非小细胞肺癌,1进1个大细胞癌,五了5 SCC的和十分之七的9个ADC细胞系。表达在HCC78中等和强的Calu-3细胞,这两条线是所述ADC亚型(图。2B)。
在肺组织和细胞系聚免疫球蛋白受体(的pIgR)表达通过免疫印迹评价。整个组织或细胞裂解物通过十二烷基硫酸钠 - 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离并印迹用抗的pIgR抗体一起温育。的pIgR表达水平标准化成肌动蛋白。一)肺癌组织(T)进行比较,以从同一患者的正常肺组织(N)。结果表明的pIgR表达的下调在六个六个鳞状细胞癌(SCC中),并在5的11个腺癌器(ADC),而的pIgR在4过表达的11个ADC和无表达差异,在2指出的11ADC的。b)中的pIgR表达低在三分之二的两个经变换的正常的支气管上皮细胞系,1进1个未分化非小细胞肺癌(NSCLC)细胞系,1进1个大细胞癌(LCC)细胞系的,五出五SCC细胞系和七名九个ADC细胞系。的pIgR表达中度到强烈的两个出九个ADC细胞系。SC:分泌成分。
的pIgR表达与年龄和组织学相关联的
结合临床和病理变量的pIgR染色评分呈正相关。病人的特点和染色这些临床变量的pIgR之间的相关性和统计意义总结在表2。染色为连续变量处理分数在年轻患者(P = 0.041)和那些显著高于ADC(P <0.0001)。染色得分也被视为分类变量(0与> 0且<20与≥20),并且该显示相似的结果(数据未显示)。染色评分没有显著与其他变量,尤其是疾病的阶段,以及整体(相关图。1克)和复发/无进展生存(图。1H)。这些观察结果也确实在ADC子组。
的pIgR表达抑制肺癌细胞的增殖
虽然在的pIgR肺癌下调,其在肿瘤发生寓意仍是未知。因此,我们测试的pIgR是否有助于癌症发展/进展的重要细胞功能。我们稳定转染的pIgR cDNA插入两种细胞系具有低基础表达的pIgR:所述永生化的正常bronchioepithelial细胞系16 HBE和肺ADC细胞系A549(图。3A)。为了进一步功能性研究中,我们选择具有最强稳定的pIgR表达(16-HBE-pIgR1和A549-pIgR29)克隆并且还一个克隆具有中等稳定的pIgR表达(A549-pIgR32)。用空载体转染的所有克隆显示低基础表达的pIgR;因此,我们随机选择的对照克隆(16-HBE-EV1和A549-EV11)。然后,我们评估了6天的细胞生长的pIgR影响。通过WST-1法观察在两个16-HBE-pIgR1细胞增殖的抑制(图。3B)和A549-pIgR29(图。3C)(P <0.001)。此外,当与A549-EV11(低基础的pIgR表达),A549-pIgR32(中度的pIgR表达)和A549-pIgR29(强的pIgR表达)的细胞进行WST-1测定法中观察到的pIgR的对细胞生长的剂量依赖性效果(图。3D)。
聚免疫球蛋白受体(的pIgR)表达的影响在16 HBE和A549的增殖。一)全细胞裂解物通过十二烷基硫酸钠 - 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离并印迹用抗的pIgR抗体一起温育。的pIgR表达水平标准化成肌动蛋白。( - )(16-HBE-pIgR1,A549-pIgR29和A549-pIgR32)作为的pIgR的更高的表达通过在永生化正常的支气管上皮细胞系16 HBE和肺腺癌细胞系A549具有的pIgR的pcDNA3.1稳定转染的免疫印迹证实与那些用空载体(16-HBE-EV1和A549-EV11)转染的比较。的pIgR表达在A549-pIgR29(克隆具有最强的pIgR表达)比在A549-pIgR32(克隆具有中等的pIgR表达)更高。SC:分泌成分。b)中,通过WST-1测定中观察到的细胞生长的抑制在16 HBE-pIgR1生长6天与16 HBE-EV1进行比较。在光密度(OD)ÿ轴反映代谢活性的细胞的比例。c)中,通过WST-1测定中观察到的A549-pIgR29细胞生长的抑制生长6天,与A549-EV11进行比较。在A549细胞中对细胞生长抑制d)剂量依赖性作用。细胞生长的抑制是在较少A549-pIgR32(克隆用的pIgR的中度表达)比在A549-pIgR29(克隆用的pIgR的更高表达)显着。误差棒代表标准偏差(n = 5)。所有图形代表具有类似结果的三次独立实验之一。
细胞死亡的pIgR表达效果
为了理解了的pIgR降低细胞增殖的机制,我们质疑它是否诱导细胞周期停滞和/或增加细胞凋亡。在我们的实验中,转染的pIgR没有对细胞周期的A549-pIgR29为≤26氢原子碰撞,独立血清饥饿(图。4)。细胞凋亡率A549-pIgR29的基线并不比A549-EV11的显著不同,但在A549-pIgR29增加细胞凋亡和坏死的倾向(图。五),可能导致细胞增殖能力下降。接下来,我们质疑生长抑制是否与内质网(ER)应激有关,这是由内质网中的pIgR隔离引起的。两种内质网应激标记calreticulin和BIP的表达在A549-pIgR29和16- hbi - pigr1中未被修饰(图。6),表明不存在ER应激。
![图4-](http://www.qdcxjkg.com/content/erj/39/5/1171/F4.medium.gif)
聚免疫球蛋白受体的作用(的pIgR)过表达对A549细胞周期由与核碘化丙啶染色流式细胞术进行评价。在预G1(凋亡),G1,G2和S期细胞的比例并不在A549-EV11和A549-pIgR29统计学差异。给出了三个独立实验的平均值。误差棒代表标准偏差(n = 3)。原始数据显示在图S1。
聚免疫球蛋白受体的作用(的pIgR)过表达对A549细胞凋亡通过膜联蛋白V的凋亡测定法来评估。稳定转染的细胞用膜联蛋白V和碘化丙啶(PI)染色,染色是通过荧光激活细胞分选分析定量。象限点的印迹分析)A549-EV11和b)A549-pIgR29细胞中使用沿磷脂酰丝氨酸表达的膜联蛋白V染色检测凋亡X轴,与PI复染以检测晚期凋亡或沿着坏死细胞ÿ设在。左下象限,可行nonapoptotic细胞发现,右下象限,凋亡细胞结合膜联蛋白V在右上角是晚期凋亡细胞结合膜联蛋白V和π,左上角是坏死细胞占用π但不绑定膜联蛋白V .这些数字是代表三个独立的实验。c)过表达pIgR (A549-pIgR29)细胞的早期凋亡、晚期凋亡和坏死自发水平有增高趋势,但差异无统计学意义。给出了三个独立实验的平均值。误差棒代表标准偏差(n = 3)。
上内质网稳定聚免疫球蛋白受体(的pIgR)过量表达的作用(ER)应激标记物通过免疫印迹评价。全细胞裂解物通过十二烷基硫酸钠 - 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,并印迹用抗的pIgR,钙网蛋白,BIP和NOTCH3抗体一起孵育。这些蛋白的表达水平标准化成肌动蛋白。的pIgR表达并不影响ER应力标记钙网蛋白和BIP的表达,但下降NOTCH3表达。FL:全长;ICD:胞内结构域。
的pIgR过表达与NOTCH3下调有关
在搜索的机构说明的pIgR的对细胞生长的抑制效果的,我们研究了下游靶基因的表达是否被修改。我们使用在Affymetrix基因表达阵列,并比较A549-pIgR29和A549-EV11的基因表达谱。中16830个基因的阵列上表示的,46被显著上调(多于两个倍)(表S1)和40均显著下调(超过两倍)在A549-pIgR29(表S2)。我们确定差异表达的基因编码的膜和分泌蛋白。虽然膜蛋白表示只有20-30%的总细胞蛋白的[22],20(43%)出在A549-pIgR29的上调46和18(45%)选自下调的基因的编码40的膜蛋白。此外,五上调和下调10个基因编码的分泌型蛋白质。总体而言,25(54%)的出46的40组下调的基因编码的膜蛋白或分泌蛋白上调和28(70%)进行。其中上调基因,我们发现的pIgR和8个基因参与诱导分化(EGR1,GATA3,IL24,NDN,PLCB4,RAB3B,SPARC和TLE4)。也有通过细胞粘附和细胞 - 细胞/细胞 - 基质相互作用与肿瘤抑制六种基因(COL13A1,CYR61,FRMD3,PPAP2B,SPARC和TFPI2)。其中下调的基因,我们发现参与代谢反应的基因促进肿瘤生长(AQP3和CA12),抑制分化(NOTCH3),以及迁移和侵袭(CNTN1,CSPG2,FN1和VAV3)。
我们观察到NOTCH3的表达在A549-pIgR29和16- hbi - pigr1中显著降低(图。6),验证,在蛋白质水平上,观察我们提出通过基因表达阵列。我们还先前针对的pIgR表达测试肺癌和正常组织测试NOTCH3表达式(图。2A)。我们发现,NOTCH3和中的pIgR五分之三的肺ADC和五分之三的SCC(图S2)呈负相关(上调的pIgR与NOTCH3下调有关,并下调的pIgR与NOTCH3上调相关)。
讨论
这项研究的主要目的是测试在肺浸润前病变的pIgR表达是否被下调,在患者预后的影响肺癌患者和起着癌症发展/进展的重要细胞功能的作用。
为了解决第一个假设,我们在10肺浸润前病变分析的pIgR表达的IHC。我们发现的pIgR表达在所有测试的组织中消失,这表明其下调肺肿瘤发生的早期出现。这是的pIgR表达的侵袭前支气管病变第一份报告。我们的结果与结直肠癌的发展提出了意见一致的[16,18]并建议在肿瘤形成这种蛋白质的更广泛的作用。
为了测试是否的pIgR染色与临床结果相关联,我们在从175例肺癌组织分析的pIgR表达的IHC,和相关染色评分与临床和病理特征。的pIgR表达在未分化的所有非小细胞肺癌,90%SCC的和ADC的52%不存在。总体而言,表达的pIgR在ADC亚型,这与先前的观察一致[的肺癌是显著更高7,9,13]。的pIgR表达的年轻患者也显著较高。降低的pIgR表达随着衰老报道在大鼠肝[23],和小鼠肾和肠[24],但从未在人的肺。这个年龄依赖性下调的机制尚不清楚,即使转录后修饰已经在老鼠被建议[23]。在我们的研究中,的pIgR表达与疾病分期或生存相关。是否分析了所有175例执行,或者限定于98例肺ADC结果相似。这是与其他癌症的观察对比。在胃食管的ADC,而不的pIgR表达肿瘤具有更频繁的淋巴结转移,这表明的pIgR下调标识更具侵袭性的表型[25]。在结直肠癌,一些研究提出的pIgR作为预后生物标记[14,16-18,26]。在其中三个,的pIgR表达与组织学分级相关联14,16,18]。在另一项研究中,低的pIgR表达的肿瘤有较高的病期,较短的无复发生存率和肿瘤相关死亡人数增加[17]。在我们的大多数表达的pIgR肺癌组织中,染色不均匀的,这可以解释没有关联的与阶段或存活和限制的pIgR的预后价值。
最后,以确定是否的pIgR在起着作用于癌症发展/发展中起重要的作用,我们测试的pIgR过表达对稳定转染A549细胞增殖的作用。我们发现,过度的pIgR减少显著的增殖随着时间的推移和以剂量依赖的方式。这表明的pIgR表达有助于对肺肿瘤发生的损失,并且,据我们所知,中的pIgR对细胞增殖作用的第一份报告。
我们进一步推行我们的调查了解,通过该降低的pIgR细胞增殖的机制。我们的研究表明,细胞周期停滞或过度的pIgR诱导内质网应激的证据。然而,我们观察到在A549-pIgR29增加细胞凋亡和坏死的倾向,这可能有助于生长抑制。我们还通过转录组分析分析A549-pIgR29和A549-EV11的基因表达图谱。之间差异表达的基因,我们发现编码膜基因和分泌蛋白的比例高,与涉及分化诱导几个上调基因和下调基因(NOTCH3)参与A549-pIgR29分化的抑制。此外,几个基因在A549-pIgR29上调参与细胞粘附和细胞 - 细胞/细胞 - 基质相互作用,从而调节细胞分化。基于这样的观察结果的pIgR在上皮细胞中[高度极化的方式表达1克ÿdF4y2Ba]及细胞极性的该中断干扰的pIgR贩卖[27],它被预先假设,的pIgR表达的损失可以具有通过细胞的体系结构或生理学[破坏在肿瘤进展中起作用28]。总之,我们的研究结果还表明增殖的A549-pIgR29的抑制可能与增加细胞分化。正常分化的破坏被认为是人类癌症的标志[29],并且在许多细胞类型的研究表明,增殖和分化的负相关的过程,依赖于细胞周期的〔三十]。因此,的pIgR可以具有通过维持细胞完整性和分化中细胞增殖的抑制的间接作用。
为了检验这一假设,我们在稳定转染的A549和16-HBE细胞中评价NOTCH3蛋白质表达。NOTCH3是在几个上皮恶性肿瘤,包括肺癌[过表达的细胞表面受体31]和肿瘤发生过程中[防止正常终端分化32]。我们发现,过度的pIgR在A549和16-HBE诱导NOTCH3下调,验证通过基因表达分析提出的意见。然而,所有这些分析用nonpolarising条件下生长的细胞系,这使得难以支持这一假设增加分化是通过的pIgR抑制细胞增殖的机制来执行。我们还测试了NOTCH3表达在原代人类肺癌和,有趣的是,我们发现,NOTCH3和的pIgR在六个呈负相关出10个肺癌组织。进一步的研究,以确定细胞分化的pIgR和NOTCH3之间的相互作用。
综上所述,肺浸润前病变中pIgR表达的缺失提示pIgR下调是肺肿瘤发生的早期事件,与生存无关。肺ADC细胞系A549中过表达pIgR可抑制细胞增殖,上调细胞分化相关基因,下调细胞分化相关基因,NOTCH3[32],提示的pIgR可以通过保持细胞分化发挥肺肿瘤发生的作用。
致谢
我们感谢C.S. Kaetzel(肯塔基大学,列克星敦,KY,USA)在亲切的pcDNA3.1提供人类基因的pIgR( - )。我们感谢美国范德比尔特大学DNA微阵列核心设施(田纳西州纳什维尔,USA)进行的Affymetrix基因表达微阵列分析。
脚注
这篇文章有提供补充材料www.www.qdcxjkg.com
支持声明
这项工作是部分由范德比尔特大学(纳什维尔,TN,USA)和卓越的研究肺癌的范德比尔特专业课程(CA90949)发现资助。S. Ocak通过从鲁汶天主教大学(布鲁塞尔,比利时)的授权(交易所Clinicien-Chercheur)的支持。
利益声明
没有宣布。
- 收到2010年11月30日。
- 公认2011年8月22日。
- ©ERS 2012