文摘
虽然慢性血栓栓塞肺动脉高压(CTEPH)的特点是有组织的血栓的持久性,很少有pro-thrombotic风险因素中确定主题与疾病。本研究的目的是比较流行的八个功能相关的止血剂CTEPH主题和健康对照组之间的多态性。
基因组DNA分离从214年CTEPH主题和200名健康对照,并分析因子V莱顿,凝血酶原鸟嘌呤(G)腺嘌呤(A)在20210核苷酸替换(20210 G > A)、纤溶酶原激活物inhibitor-1 4 G / 5 G,组织纤溶酶原激活物7351胞嘧啶(C) >胸苷(T)因素十三世100 G > T,纤维蛋白原Aα替代苏氨酸和丙氨酸在312位置(Thr312Ala),纤维蛋白原Bβ替代448年精氨酸和赖氨酸的位置(Arg448Lys)和纤维蛋白原Bβ455 G > A多态性。
一个重要的区别是在纤维蛋白原AαThr312Ala CTEPH主题之间基因型和等位基因频率和控制。丙氨酸等位基因的存在显著增加CTEPH的风险。
纤维蛋白原Aα丙氨酸312等位基因改变纤维蛋白原α-α链交联,曾被与embolisation风险增加和增加抗血栓溶解。这种多态性与慢性血栓栓塞肺动脉高压,因此,支持栓子对该疾病的病因学,可以提供一种机制,通过这种机制血栓急性事件后依然存在。
慢性血栓栓塞肺动脉高压(CTEPH)越来越被认为是肺动脉高压的一个重要原因,而且通常被认为代表一个不常见的急性肺栓塞(PE)的疾病的结果1。CTEPH据报道发生在∼4%的急性PE2前,而回顾性研究已经描述了一个深静脉血栓形成(DVT)在大约三分之一的情况下3,4。因此,据推测,急性栓塞事件后,血栓持续和组织,导致慢性阻塞肺动脉血流。
鉴于CTEPH血栓形成的重要作用,它直观地将预计有一些止血的畸变,在局部或系统性水平。然而,尽管遗传thrombophilic条件通常与急性PE和深静脉血栓形成有关5,6,没有这样的条件与CTEPH密切相关7。血清水平升高antiphospholipids和VIII因子前面描述的8,9,但目前尚不清楚这些代表主要或次要的现象。因此,没有清楚地显示pro-thrombotic致病机制使CTEPH。然而,这是有可能的,其他步骤在止血剂过程中,如纤维蛋白稳定或纤维蛋白溶解,可能参与了疾病的病理生理学10。的单核苷酸多态性(snp)描述,使动脉和静脉血栓性疾病,通过影响这些更多的全球方面的止血11- - - - - -20.。这个病例对照研究,因此,使用一个候选基因的方法来确定潜在的这些snp CTEPH相关性。
方法
主题
所有连续的高加索患者参加特医院(特埃弗拉德,英国)诊断提供的1999 - 2006年期间CTEPH进入本研究。CTEPH是通过临床诊断评估,对心脏catheterisation和适当的成像(胸片,通气/灌注闪烁扫描法,计算层析肺血管造影术、磁共振肺血管造影术和catheter-directed造影),标准化的协议描述的其他地方4,21。CTEPH科目(n = 214)包括那些(n = 169)近端和远端疾病(n = 45)。健康对照组(100男性和100女性)是从一个国家血液服务网站招募在西伦敦(英国)和由白种人年龄在18 - 65岁。
研究亨廷顿研究伦理委员会批准的协议(英国)。书面知情同意之前获得每个主体进入学习。
基因分型
从全血中提取基因组DNA(核子提取设备;Amersham生物科学,小都,英国)和单核苷酸多态性分析使用商用引物(Taqman®SNP基因分型检测;美国应用生物系统公司,培育城市,CA)使用ABI棱镜®7900 ht序列检测系统(应用生物系统公司)。合同基础研究服务提供的Geneservice(英国剑桥)。八个snp研究基因组的变化是很常见的止血剂因素:因素V (V莱顿突变因素或鸟嘌呤(G)腺嘌呤(A)在1691核苷酸替换(1691 G > A);国家生物技术信息中心(美国马里兰州贝塞斯达)SNP数据库加入代码rs6025)11;凝血酶原(20210 g > A;rs 1799963)11;纤溶酶原激活物inhibitor-1 (4 g / 5 g;rs1799768)11;组织纤溶酶原激活物(胞嘧啶(C)胸苷(T)在7351核苷酸替换(7351 C > T;rs2020918))17;因素十三世(100 g > T;rs5985)15;纤维蛋白原AαThr312Ala(替代苏氨酸与丙氨酸(刺)在312位置(Ala);rs6050);和纤维蛋白原BβArg448Lys(替换精氨酸和赖氨酸(Arg)(赖氨酸)在448位置;rs4220);和纤维蛋白原BβG455A (rs1800790)22。
统计数据
为每个位点的基因型和等位基因频率计算。观察到的频率控制与预测的哈迪温伯格平衡方程使用卡方测试。单核苷酸多态性之间的连锁不平衡(LD)从最大似然计算单体型频率估计使用期望最大化算法23。
基因型和等位基因频率比较CTEPH和对照组之间使用卡方测试,或确切概率法在低的数字。与每个基因型相关疾病的风险(基因型模型)被逻辑回归分析估计,SNP基因型是三级的方式编码,即。稀有的纯合基因型、杂合的基因型和常见的纯合基因型,后者作为参考类别。为单核苷酸多态性没有罕见的纯合子的学科,基因型编码为杂合的,而最常见的纯合基因型。每个SNP和风险之间关系的性质的疾病也使用模型检查的显性和隐性遗传(基因模型)。在占主导地位的情况下,有一个或多个副本的稀有等位基因与没有副本。在隐性的情况下,有两个副本的稀有等位基因与一个或没有副本。多个逻辑回归模型对单核苷酸多态性的影响被用来评估是否有协同效应的两个单核苷酸多态性。针对性别差异在两组之间,所有的分析都还重复使用多个逻辑回归模型,对性调整。
调整多个测试没有进行SNP分析,因为每个曾被证明是独立与血栓的风险增加有关,本研究旨在re-address这些假设CTEPH的上下文中。因此,计算每个SNP构成一个单独的和不同的分析。
结果
主题和样品
CTEPH对象的基线人口统计学特征如表1所示⇓。唯一的性信息是可用的200名健康控制,虽然知道他们是白种人,年龄在18 - 65岁,满足标准要求献血。
SNP分析的平均收益率为96.3%。单核苷酸多态性在哈迪温伯格平衡,除了纤维蛋白原BβArg448Lys (p = 0.045)。只有纤维蛋白原BβArg448Lys和455 g >展示了LD (r2= 0.91)。
单核苷酸多态性的基因型和等位基因频率在两组如表2所示⇓。
多态性频率
一个显著差异是在纤维蛋白原AαThr312Ala基因型(p = 0.03)和CTEPH之间等位基因频率(p = 0.01)和对照组(表2⇑)。三级基因型模型显示一个协会之间的纤维蛋白原AαThr312Ala SNP CTEPH,尽管这没有达到意义该(比值比(或)1.65,95%置信区间为杂合子(CI) 1.13 - -2.49, p = 0.02;比如或1.82,95%可信区间0.92 - -3.61,p = 0.09)。阿拉巴马州的主导模式的继承等位基因(即。一个或Ala等位基因的两个副本与none)显示增加的几率CTEPH(或1.68,95%可信区间1.13 - -2.49,p = 0.01)。没有证据表明混杂的纤维蛋白原的关系AαThr312Ala SNP和CTEPH性(显性模型(雌性与男性):1.06,95% CI 0.72 - -1.57, p = 0.77;三级基因型模型(雌性与男性);或1.06,95%可信区间0.72 - -1.57,p = 0.78)
有差异因素V莱顿基因型频率在两组之间,虽然这没有达到意义(p = 0.051)。因子V莱顿突变与风险增加有关CTEPH(基因型模型(没有罕见的比如):2.54,95% CI 0.97 - -6.68, p = 0.06),尽管如此,这并不重要。
没有其他两组之间的显著差异和SNP对之间没有合作的证据。
没有显示两者有联系的六个snp CTEPH也用作基因控制的一种形式,为人口分层测试。卡方统计数据的拟合优度检验Kolmogorov-Smirnov每个SNP和疾病之间的关系表明,这些跟着一个分布没有明显不同于卡方分布(p = 0.35)。这些结果表明缺乏分层。
讨论
目前的研究表明,纤维蛋白原的存在Aα链Ala312等位基因与增加的几率被诊断出患有CTEPH。此外,一个重要的关联因子V莱顿突变也会被记录下来。这是第一个能够止血的多态性是在一个大型系列报道CTEPH主题,从而可能会增加对这种神秘疾病背后的病理生理机制的理解。
尽管CTEPH被广泛认为是急性PE疾病的结果1,24,主要都是间接证据支持这一信念。一个担心的争论火上浇油这种疾病的病因学是thrombophilic概要文件之间存在的差异相比CTEPH患者深静脉血栓形成的患者25。然而,而不是观看这CTEPH的插子的理论障碍,值得考虑什么区分少数CTEPH遵循一个简单的深静脉血栓形成患者的绝大多数。在这种情况下,重要的是要考虑不仅止血剂致使血栓形成的因素,而且那些确定血栓随后被处理。在这个过程中一个关键因素显然是纤维蛋白原的分子,它提供了必要的构建模块的纤维蛋白凝块的形成。异常在这个分子不仅可以促进血栓形成也推迟其退化,从而鼓励从血栓分辨率切换到血栓组织。
纤维蛋白原分子由三对多肽链(AαBβ和γ),由二硫化物与债券和安排分为三个区域:一个中心(E)地区,含血纤维蛋白肽a和B,所有六个链的氨基酸末端;和两个远端(D)地区,每一个未配对形成的羧基末端的AαBβ和γ链26。D区域还包括一个球状Cα域,由终端α-chain的三分之二。在一个给定的纤维蛋白原分子,这两个Cα域在靠近E地区拴在一起27。激活凝血级联后,凝血酶裂解纤维蛋白原血纤维蛋白肽A和B,生产纤维蛋白单体和引发血栓的形成。凝血酶同时激活因子十三世,促进新形成的纤维蛋白寡聚物之间的交联。作为这个过程的一部分,Cα域,现在脱离E地区后血纤维蛋白肽B的乳沟,鼓励结合Cα域从邻近纤维蛋白分子28。结果α-α连杆之间加强联系邻近的原纤丝和稳定发展中纤维蛋白结构。这允许形成纤维蛋白结构强,更多的刚性和抗血栓溶解29日。
Cα域的关键作用在纤维蛋白聚合曾被一个突出显示在体外研究表明,单克隆抗体针对该域抑制纤维蛋白的形成从单体聚合物30.。重组纤维蛋白原缺乏Cα领域也已被证明能够形成凝块在体外那么僵硬,更容易比血栓溶栓形成正常的纤维蛋白原的存在31日。进一步信息Cα域的作用也被获得的遗传dysfibrinogenaemias学习32。Dusart综合症引起的纤维蛋白原AαArg的替换为半胱氨酸在554内位置,α-α链链接增加有关,因此加强横向纤维蛋白原纤丝的聚合。纤维蛋白凝块从这种疾病患者往往是僵硬的,不透水,耐溶栓在体外33,34。临床上,患者会复发性血栓性并发症,尤其容易插子的现象35。相反,dysfibrinogen加拉加斯II,替换造成的丝氨酸在位置434天内纤维蛋白原Aα,与减少α-α链连杆与正常的纤维蛋白原。凝块是典型的松散结构,并显示正常的刚度,但增加渗透率36。的障碍患者通常无症状,不受任何血液学的并发症36。
Thr312Ala是一种常见Aα基因的多态性,并将Thr-to-Ala替换编码在312 Cα域的残渣37。虽然这种多态性的功能相关性尚不清楚,周围的地区立即这个网站是中央十三激活因素和因素XIII-dependentα-chain交联,α2-antiplasmin绑定38,39。临床上,阿拉巴马州的等位基因的纯合性与急性PE病但不深静脉血栓形成有关14。Ala等位基因的存在,在杂合子,比如也中风后更高的死亡率有关科目与心房纤维性颤动而不是窦性节律13。因此,有人认为,阿拉巴马州替换可能使栓塞现象,通过更脆弱的凝块的形成40。凝块等深静脉血栓形成的情况下,更有可能的片段和驱逐,因为它传播向近端斜流的影响下来自连接静脉。本研究的结果支持这一假设,并提供进一步的证据表明CTEPH栓子病因学。
的证据在体外研究表明,除了简单地诱发患者栓塞现象,AαThr312Ala多态性可能在CTEPH额外的病理生理作用。血栓形成从阿拉巴马州/ Ala主题展示了更广泛的α-chain交联,增加纤维厚度和血栓刚度比是在刺/刺控制40。这样的凝块也显示渗透率低流,这反过来,允许访问纤溶因子在活的有机体内41。这些属性表明,阿拉巴马州替换提高横向聚合纤维蛋白原纤丝和鼓励形成更紧密的纤维蛋白结构。虽然不是专门在这些研究中,测量这些参数通常与抗血栓溶解血栓。此外,最近的数据表明,来自CTEPH患者纤维蛋白溶解较慢,比来自控制10。这个证据意味着延迟纤维蛋白降解,可能介导的一些AαThr312Ala多态性,是一个关键的步骤,组织疤痕组织的发展从急性PE材料CTEPH患者的一个子集。
目前的研究也提出了一个不同的频率因子V莱顿CTEPH主题之间突变和控制,但这种差异没有达到显著性(p = 0.051)。因子V莱顿突变,以替换的精氨酸谷氨酸在506位置被活化蛋白C抵抗乳沟(APC),因此,灭活得更慢42。此外,这种突变的存在干扰因素V的代数余子式活动APC-catalysed VIIIa失活的因素43。这两个机制促进hypercoagulable状态与患深静脉血栓形成的风险显著相关44。之前的小型研究表明,这种CTEPH突变的患病率较低,没有什么不同的控制9,45。摘要本研究以更大的患者群,并建议一个可能的协会,虽然患病率仍远低于发现患者深静脉血栓形成。考虑到这些数据,作用因素V莱顿CTEPH不能完全忽略,尤其是VIII因子,V,基质因素已经涉及疾病8。
尽管目前的研究代表了CTEPH最大的,它也有一些局限性。使用的“便利”控制不一定来自相同的人口CTEPH病例可能有困惑的研究,尽管Kolmogorov-Smirnov测试的结果表明,人口分层并不是一个问题。此外,尽管有证据支持的病理生理作用纤维蛋白原AαThr312Ala和因子V莱顿突变在血栓性疾病,这些突变可能本身并不是因果关系,但相反,与其他因果LD位点。最后,所涉及的主题相对较小的数字意味着这项研究可能没有被充分的动力检测SNP频率疾病和对照组之间的差异。发现的差异可能是机会发现的个体研究,因此还需要进一步的研究来证实这些结果。如果这些未来的研究包括历史的第二对照组受试者完全解决急性PE,更好的理解机制CTEPH可能会上涨。
总之,目前的研究表明一个协会之间的纤维蛋白原Aα替代苏氨酸和丙氨酸在312和因子V莱顿突变位置和慢性血栓栓塞肺动脉高压,增加了对疾病的理解。这些多态性的存在不仅可以使患者栓塞现象也给予抗纤维蛋白溶解,随后为血栓组织奠定了基础。
感兴趣的语句
没有宣布。
- 收到了2007年5月7日。
- 接受2007年11月21日。
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