抽象gydF4y2Ba
αgydF4y2Ba1gydF4y2Ba抗胰蛋白酶(αgydF4y2Ba1gydF4y2Ba-AT)缺乏症是慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者的一种未充分诊断的疾病。现在的作者进行了一项全国性的病例检出的αgydF4y2Ba1gydF4y2Ba-AT缺乏在未选择的患者使用COPD干血斑。gydF4y2Ba
第一阶段分析了971名患者的样本通过确定αgydF4y2Ba1gydF4y2Ba-AT浓度和识别通过使用快速实时PCR基因分型的缺陷Ž等位基因。第二阶段分析1166个样品用αgydF4y2Ba1gydF4y2Ba——浓度和确定年代和Z等位基因,但只有较低的样本中αgydF4y2Ba1gydF4y2Ba——浓度。gydF4y2Ba
共检测到8例严重缺乏PiZZ的患者(0.37%)。另外,3例患者在第二阶段被鉴定为PiSZ基因型(0.3%)。该方案的全球成本为41,512美元,这表示每个样本的成本为19.42美元,每个检测到的PiZZ成本为5189美元。敏感性分析表明,对所有样本进行Z基因型分析将导致每个样本增加费用8364;28和每个确定的PiZZ病例增加费用7479.5。gydF4y2Ba
总之,α的病例检出项目gydF4y2Ba1gydF4y2Ba每箱检测患者使用干血斑慢性阻塞性肺疾病抗胰蛋白酶缺乏是在合理的成本和可行。诊断率和成本很大程度上取决于纳入标准和样品的处理的协议。gydF4y2Ba
αgydF4y2Ba1gydF4y2Ba抗胰蛋白酶(αgydF4y2Ba1gydF4y2Ba-AT)缺乏症的特征在于异常降低αgydF4y2Ba1gydF4y2Ba-在纯合子形式的血清浓度下,有发生早期肺气肿的高风险gydF4y2Ba1gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
PIM的基因型是最常见的在那些被认为正常,奇峰基因型是最重要的,低α相关的那些gydF4y2Ba1gydF4y2Ba——血清浓度gydF4y2Ba2gydF4y2Ba,gydF4y2Ba3.gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
在西班牙最近的研究表明,在Z等位基因的基因频率是在普通人群1.5%gydF4y2Ba4gydF4y2Ba。因此,在一个约4000万居民的人口中,8000 - 12000名患者可能患有严重的PiZZ纯合子缺陷gydF4y2Ba5gydF4y2Ba。尽管如此,目前的西班牙注册α患者gydF4y2Ba1gydF4y2Ba抗胰蛋白酶缺乏症只包括接近400名病人gydF4y2Ba6gydF4y2Ba,gydF4y2Ba7gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
尽管这一缺陷的诊断相对简单,populational研究表明,αgydF4y2Ba1gydF4y2Ba-AT缺乏症诊断不足,经常延误诊断gydF4y2Ba8gydF4y2Ba。最近的一份报告由世界卫生组织(世卫组织)和最近的指导方针的美国胸科学会(ATS) /欧洲呼吸学会(人)α患者的管理188bet官网地址gydF4y2Ba1gydF4y2Ba抗胰蛋白酶缺乏症建议设立的检测程序,特别是患有慢性阻塞性肺疾病(COPD)gydF4y2Ba9gydF4y2Ba,gydF4y2Ba10gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
干血样已被用于多种疾病的筛选和遗传诊断gydF4y2Ba11gydF4y2Ba。使用这种方法可能促进α的识别的新病例gydF4y2Ba1gydF4y2Ba-在慢性阻塞性肺病患者中的缺陷,因为它允许样本以低成本快速送到参考实验室。gydF4y2Ba
目前的研究提出了α病例的检测程序的结果gydF4y2Ba1gydF4y2Ba-在全西班牙使用滤纸上的干血斑(DBS)治疗慢性阻塞性肺病患者的at缺乏症。gydF4y2Ba
方法gydF4y2Ba
目前的研究是一个检测项目的α病例gydF4y2Ba1gydF4y2Ba-慢性阻塞性肺病患者at缺乏症。根据ATS /人的建议,所有的病人被诊断为慢性阻塞性肺病不论他们的严重程度,与未知的αgydF4y2Ba1gydF4y2Ba-在各浓度时,为参加本方案的候选人gydF4y2Ba10gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
研究过程gydF4y2Ba
第一阶段gydF4y2Ba
最初进行了一项试验性研究,以核实传送电路和样品处理的正确运作。在中心实验室附近共有五个中心参加了这项研究。这些中心收集了在1个月内因任何原因就诊的所有被诊断为慢性阻塞性肺病的患者。总共发送了86个样品,在发送电路和处理过程中没有发现任何问题。这项初步研究的结果最近发表了gydF4y2Ba12gydF4y2Ba。此后,七肺病被邀请参加节目,每个患者采集150个样本与COPD。gydF4y2Ba
所有的样品都对α的量化处理gydF4y2Ba1gydF4y2Ba-在血清浓度,以及研究最常见的缺陷基因型,PiZ,根据方法学描述后。gydF4y2Ba
样品的分析之后,没有一例正常αgydF4y2Ba1gydF4y2Ba-AT浓度具有严重缺陷的PiZZ基因型,因此,以浓度为主要测量参数,未观察到假阴性。降低成本的决心,一个αgydF4y2Ba1gydF4y2Ba-AT值已定义,超过此值则排除了严重缺陷。该值是通过研究DBS中不同表型与浓度的相关性得到的;它被认为相当于100 mg·dL的血清浓度gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba13gydF4y2Ba。为了达到的患者的低浓度更精确的基因诊断,加入在S基因型的检测延长诊断以包括SZ和SS,以及所述ZZ基因型。在S变体的该扩展是由于在S缺失等位基因的高患病率gydF4y2Ba5gydF4y2Ba,gydF4y2Ba14gydF4y2Ba和一些国际注册的α患者的事实gydF4y2Ba1gydF4y2Ba-AT缺陷包括SZ缺陷基因型的个体,因为这些患者被认为有更高的发展成为肺气肿的风险gydF4y2Ba15gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
第二阶段gydF4y2Ba
该方案的第二阶段包括西班牙肺与胸外科学会(SEPAR)慢性阻塞性肺病工作组(IRTS)成员的参与。关于样品处理、π和这有缺陷的基因型只样品α的决心gydF4y2Ba1gydF4y2Ba-浓度低于以前建立的水平(100 mg·dLgydF4y2Ba−1gydF4y2Ba),如前所述。gydF4y2Ba
样品收集gydF4y2Ba
的毛细血管血液滴施加在纸张五个磁盘(号码903;&Schiecher Schuell公司,BioScience公司,基恩,NH,USA),并在室温下通过邮件被发送到中央研究实验室之前干燥。gydF4y2Ba
数据还收集了患者的症状和慢性呼吸系统疾病的诊断。在第二阶段中,吸烟史还加入(包-岁),因为是通过强制呼气容积第二测量肺疾病的严重程度(FEVgydF4y2Ba1gydF4y2Ba;预测的百分比)。收集的数据是保密的,不包含任何信息,允许病人身份由其他任何人,而不是主治医生。该项目获得了巴塞罗那(西班牙巴塞罗那)医院诊所伦理委员会的批准。gydF4y2Ba
来样加工gydF4y2Ba
α的血清浓度gydF4y2Ba1gydF4y2Ba-AT和S和Z缺陷等位基因变异是根据之前发表的方法确定的,简要描述如下。gydF4y2Ba
The blood sample contained in one of the disks was eluted directly in 200 µL of diluent (PBS pH 7.4) overnight at 4°C. The product obtained was centrifuged at 21,000 ggydF4y2Ba1分钟和αgydF4y2Ba1gydF4y2Ba-AT浓度测定采用免疫比浊法(图像免疫化学系统;贝克曼,富勒顿,加利福尼亚州,美国)。DBS比浊法检测范围为0.284-2.84 mg·dLgydF4y2Ba−1gydF4y2Ba对应13 - 160mg·dLgydF4y2Ba−1gydF4y2Baα的gydF4y2Ba1gydF4y2Ba-AT在血清中的回归曲线。回归线,可以估计αgydF4y2Ba1gydF4y2Ba-血清中at浓度由DBS浓度决定,使血清参考范围可作为两种方法的正常范围gydF4y2Ba13gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
αgydF4y2Ba1gydF4y2Ba-在LightCycler analyser (Roche Diagnostics, Mannheim, Germany)中进行基因分型,该仪器是热循环仪和荧光仪的组合,通过分析两种荧光杂交探针中的一种的熔点来实现突变检测的快速实时PCRgydF4y2Ba16gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
分析gydF4y2Ba
对收到的样品进行分析所产生的费用已经计算,同时考虑到方案两个阶段处理方案的差异。α的近似量化的成本gydF4y2Ba1gydF4y2Ba用免疫比浊法测定每个样品的at值为8364;利用LightCycler DNA分析仪对两个基因型(S和Z)的研究花费为每个研究等位基因花费8364;18英镑。这些费用包括材料和实验室试剂以及进行研究的人员,但不包括购置费用和实验室设备的维修和使用费用。gydF4y2Ba
还进行了敏感性分析,其方法是根据一种或另一种方案对样品处理的适用情况计算方案的费用,并将这些费用与根据公布的方案应用不同的选择标准所观察到的费用进行比较。gydF4y2Ba
结果gydF4y2Ba
总共收集了2137个样本。αgydF4y2Ba1gydF4y2Ba-在108例(5%)中不能正确测定血清浓度,因为样本没有可靠定量所需的最低剂量。在所有这些病例中,都进行了基因型测定,因为在本研究的所有样本中都可以提取足够数量的DNA。gydF4y2Ba
两期研究人群的临床特征见表1gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba。男性患者占较大比例,平均FEVgydF4y2Ba1gydF4y2Ba第二阶段是48%。gydF4y2Ba
的患者在这个程序的两个阶段的流程图显示于图1gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba和2gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
第一阶段gydF4y2Ba
在第一阶段中,971个样品的α的定量处理既gydF4y2Ba1gydF4y2Ba-AT和z缺陷基因型的测定。在841个样本中检测到高于正常值的浓度(86.6%);62个样本(6.4%)低浓度和α的样本量不足gydF4y2Ba1gydF4y2Ba在68(7%)-AT定量。gydF4y2Ba
在浓度正常的个体中,Z等位基因在833例(99%)中未检测到,在8例杂合子状态中检测到Z等位基因(0.95%)。未检测到PiZZ纯合子。gydF4y2Ba
在个人缺乏浓度,ZZ纯合体状态中检测出4个(6.4%),其中αgydF4y2Ba1gydF4y2Ba-浓度< 50mg·dL时gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba。杂合子状态下共检测到Z等位基因12个(19.3%),未检测到Z等位基因46个(74.2%)。46个样品没有证据的Z等位基因,95.4%有αgydF4y2Ba1gydF4y2Ba-AT concentrations greater than or equal to the equivalent of a serum concentration of 70 mg·dL−1gydF4y2Ba,从而排除了一个严重的缺陷并建议一个变体的存在,例如S,这是在西班牙非常频繁。为了验证这些结果小号等位基因的存在在程序的第二阶段进行了评价。本文作者没有对剩余的4.6%(两个人)与α任何进一步的信息gydF4y2Ba1gydF4y2Ba-浓度< 70mg·dL时gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba。主管医生通报了这些结果,并给出建议,以完成研究,虽然这超出了研究的范围。gydF4y2Ba
最后,在个人αgydF4y2Ba1gydF4y2Ba-AT无法定量,1例(1.5%)为PiZZ纯合子,3例(4.4%)为杂合子状态的Z等位基因,64例(94.1%)无Z等位基因。该人群中Z等位基因的基因频率为1.69%。gydF4y2Ba
第二阶段gydF4y2Ba
共有1166个样本的研究,严重缺乏是排除在1092年(93.6%),因为αgydF4y2Ba1gydF4y2Ba-在浓度被发现高于建立的分界点,研究停止了。S和Z基因型决定在剩下的74个样本,34α较低gydF4y2Ba1gydF4y2Baα——浓度和40gydF4y2Ba1gydF4y2Ba-在量化是不可能的。在34例低浓度的病例中,发现3例(0.3%)有严重的PiZZ缺陷,14例(1.2%)有杂合子状态的Z等位基因。S等位基因方面,纯合子状态下有3个个体(0.3%)出现S等位基因,杂合子状态下有11个个体(0.9%)出现S等位基因,SZ组合有3个个体(0.3%)出现S等位基因。gydF4y2Ba
在S和Z等位基因不以任何的在其中α剩余的40例(3.4%)呈现gydF4y2Ba1gydF4y2Ba-由于难以提取足够的蛋白质进行分析,无法进行定量。gydF4y2Ba
全球结果gydF4y2Ba
从整个样本研究样本(2137)1933例(90.5%)显示正常的αgydF4y2Ba1gydF4y2Ba——浓度,96名(4.5%)浓度都低于截止值,108年(5%)αgydF4y2Ba1gydF4y2Ba-无法进行量化。共有8例患者被发现有严重的ZZ缺乏(占总样本的0.37%)。gydF4y2Ba
成本的研究gydF4y2Ba
第一阶段的费用为27,188英镑。在第二阶段,S和Z基因型测定仅在浓度不足或无法定量的样品中进行,成本为8364;14324。因此,该方案的总费用为41 512英镑。因此,每个样本的平均成本是\#8364;19.4,检测到的每个ZZ情况的成本是\#8364;5189(表2)gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
敏感性分析gydF4y2Ba
如果在计算该方案的费用时,本研究按照该方案第1阶段所使用的方法分析了所有样本,则总费用将为59,836英镑,每发现一个病例的费用将高得多(8364英镑;7,479.5英镑)。gydF4y2Ba
尽管如此,如果接下来的方法已经在阶段2中,测定的年代和Z基因型只有在样品浓度不足,总成本将\ # 8364;28714年,平均每样成本\ # 8364;13.4和ZZ检测的成本每箱\ # 8364;3589年。gydF4y2Ba
使用最严格的选择标准,如在意大利后患者临床对α的怀疑gydF4y2Ba1gydF4y2Ba-在缺陷和家族研究中,而不是在所有慢性阻塞性肺病患者中,检出率为8.2%gydF4y2Ba17gydF4y2Ba。将这些标准应用于当前人群(n = 2137),将检测到175个浓度不足的个体,其中78%(136)是严重PiZZ缺乏的个体。gydF4y2Ba
上只有在与缺陷浓度的样品分析该假设的基因型的成本和确定,该程序的近似成本本来\#8364; 28030每PiZZ组情况下的成本仅检测被\#8364; 206。gydF4y2Ba
讨论gydF4y2Ba
虽然α的诊断gydF4y2Ba1gydF4y2Ba-AT缺乏症相对简单,人群研究表明,这种疾病诊断不足,诊断延迟是非常普遍的gydF4y2Ba8gydF4y2Ba。在西班牙最近的研究表明1.5%的基因频率在总人口中在Z等位基因gydF4y2Ba4gydF4y2Ba,表明8000 - 12000人可能有批萨缺陷症gydF4y2Ba5gydF4y2Ba。据估计,在40-70岁的受试者中,慢性阻塞性肺病在西班牙的患病率为9%,这意味着约有130万人患有这种疾病gydF4y2Ba17gydF4y2Ba。目前的项目从总共2137名COPD患者中确定了8名(0.37%)PiZZ患者。根据这些结果,可以推测近5000名COPD患者可能是PiZZ基因型携带者;因此,35-60%的PiZZ患者会患上慢性阻塞性肺病。在研究的第一阶段观察到的Z等位基因频率(1.69%)仅略高于西班牙普通人群。这个差异比预期的要小。一种可能的解释可能是种群的不同起源。一般人群样本来自单个城市,患者来自全国各地。gydF4y2Ba
西班牙的检出率较低,但与其他国家相似。在这方面,目前的病例发现方案是在世卫组织之后开始的gydF4y2Ba9gydF4y2Ba以及最近的ATS/ERS指南gydF4y2Ba10gydF4y2Ba对于慢性阻塞性肺病患者,强烈建议(A类建议)对有症状的成人肺气肿或慢性阻塞性肺病患者进行缺陷诊断检测。gydF4y2Ba
在该程序的发展,在样品处理的策略产生的变化。在第一阶段,无论是α的定量gydF4y2Ba1gydF4y2Ba-AT和Z基因型的确定在所有样品中进行,和严重的缺陷PiZZ组未在任何与正常浓度的受试者中发现。不存在假阴性的允许与正常浓度在第二相位样本是限定为nondeficient和研究终止。进一步的研究是保留给在其中观察到低浓度的基因型的样品中测定,或在那些在α的定量,其gydF4y2Ba1gydF4y2Ba-AT是不可能的,因此降低了成本,简化了样品加工。这种新方法不允许检测一些人的PiMZ显型。然而,本研究的目的不是建立Z等位基因的基因频率,而是识别严重纯合子PiZZ缺陷的患者,以防止肺功能的进行性损害。gydF4y2Ba
另一个变化是扩展S等位基因的基因型的研究,自46个人在第一阶段被发现有缺陷的浓度没有证据的Z等位基因,这可能可能解释为S等位基因的高患病率在西班牙人口gydF4y2Ba5gydF4y2Ba,gydF4y2Ba14gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
的注意的是,在第二阶段的计划,40个样本检测α蛋白材料不足gydF4y2Ba1gydF4y2Ba-在定量方面,可能是由于存储电路或传送程序的问题,使DBS中的蛋白质含量变性。因此,有必要确保参与的医生获得正确和广泛的信息,了解在检测方案中有关样本收集、储存和交付的方法。然而,通过基因分型在这组中没有发现S或Z等位基因。gydF4y2Ba
在第一阶段检测到的PiZZ病例比第二阶段多,可能是由于样本来源不同。对在参考中心工作的PiZZ患者的管理特别感兴趣的医生参与了第一阶段,这可能解释了为什么包括了更严重的肺部疾病患者。相反,在第二阶段,参与的医生在一些不是参考中心的中心为慢性阻塞性肺病患者工作,这些中心可能包括病情较轻的患者。招募轻度COPD患者将导致较低的诊断率,尽管ZZ基因型纯合子和轻度肺部疾病患者将是早期发现的最大受益者,因为可以采取早期措施避免肺部疾病的进展。目前的作者不能排除,不同的检出率在两个阶段的研究也由于地理上的差异,基因频率的Z和S等位基因。gydF4y2Ba
根据两阶段处理方法计算每个样本和每个检测到的PiZZ病例与该方案相关的费用。此外,还进行了一项敏感性研究,比较这些费用与按照第1阶段或第2阶段办法进行方案所能获得的费用(表2)gydF4y2Ba⇑gydF4y2Ba)。还比较了采用不同病人选择标准的可能方案的费用。目前的作者发现,方案的费用取决于几个因素。首先,包括病人的类型,因为一项旨在发现较轻肺部疾病病例的计划的检出率较低,因此费用较高。在只有高度怀疑有缺陷的病例才包括在内的方案中,执行情况会更好,发现的每个病例的费用也会更低。gydF4y2Ba
另一个影响成本的因素是样品处理的协议。当目标是检测严重的PiZZ缺陷患者时,仅在浓度不足的样本中确定表型可显著降低成本。尽管如此,如果在所有的情况下,研究基因型α的不管gydF4y2Ba1gydF4y2Ba-在浓度下,检测杂合子状态下的缺陷等位基因的可能性会增加,同时成本也会显著增加。gydF4y2Ba
在目前的研究中,作者使用DBS在滤纸上,因为它是在其他遗传疾病的筛选中使用的方法gydF4y2Ba11gydF4y2Ba及其在本研究发现使用简单,快速、合理成本的检测αgydF4y2Ba1gydF4y2Ba——缺乏。采用这种方法收集的样品具有最低限度的侵入性,而且样品可以很容易地储存和运送,因此便于从不同地理位置的中心收集样品进入中心实验室。immunophelometry在先前的研究中,一个方法是开发和验证的定量测定αgydF4y2Ba1gydF4y2Ba-AT在滤纸上的DBS中,与血清样品中使用的标准技术有极好的相关性,从而证明其在诊断这一缺陷中的实用性gydF4y2Ba13gydF4y2Ba。此外,在目前的研究与先前验证PCR和DNA测序方法,其中,尽管其疗效,是费力且耗时的完全相关使用的PI和PIZ基因型的快速分析技术gydF4y2Ba16gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
所呈现的结果不同于其他国家的报道有所不同,其中αgydF4y2Ba1gydF4y2Ba-已开展了具有类似特点的缺陷检测方案。一个计划在意大利进行研究共有1841名患者,确定151年严重的αgydF4y2Ba1gydF4y2Ba-AT缺乏(8.2%),其中118都是PiZZ组gydF4y2Ba18gydF4y2Ba。本研究的检出率低于意大利研究,因为LuisettigydF4y2Ba等gydF4y2Ba。gydF4y2Ba18gydF4y2Ba包括患者的临床怀疑或α家族研究gydF4y2Ba1gydF4y2Ba-AT缺乏症,并没有包括所有慢性阻塞性肺病患者,不像在目前的研究方案中所跟踪的。gydF4y2Ba
相反,在德国执行的另一个方案中gydF4y2Ba19gydF4y2Ba,观察到比这里呈现低得多的检出率,与正在研究的1060例患者,并没有显示ZZ纯合子基因型。这可能是由于研究正在取得不同类型的慢性呼吸系统疾病,由普通医生和专家包括个人组成的群体。在美国进行的另一项研究中确诊为肺气肿,哮喘或慢性支气管炎患者969应用检测由DBS在滤纸上,检出率分别为一个ZZ情况下每31个样品的,每九个样本中有MZ杂合子gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
综上所述,目前的病例检测方案的检出率,与那些包括临床怀疑有缺陷的患者和那些包括不同类型的慢性呼吸道疾病患者的检出率相比,处于中间水平。在设计病例检测方案时,应同时考虑样本处理方案和候选人的入选标准,因为这两个因素对方案的执行及其费用都有决定性的影响。gydF4y2Ba
致谢gydF4y2Ba
笔者想感谢西班牙注册的指导委员会成员谁该研究的第一阶段提供的样品:J.C.巴罗斯 - Tizon(医院Xeral连锁商店,维哥);一,布兰科(医院山谷纳隆河,阿斯图里亚斯);·布斯塔曼特(医院去Sierrallana,坎塔布里亚);F.卡萨斯马尔多纳多(临床医院圣塞西,格拉纳达);C.埃斯库德罗(医院德科瓦东,奥维多);P.P.西班牙(医院去加尔达考比斯开);和M.T.马丁内斯马丁内斯(医院12日OCTUBRE,马德里)。gydF4y2Ba
作者也要感谢M. Schaper在样品处理方面的合作,以及C. Esquinas在数据管理方面的合作。gydF4y2Ba
此外,作者感谢参与该计划的其他调查:J.L.阿尔瓦雷斯 - 萨拉,M.卡莱,J.L罗德里格斯赫莫萨(临床医院圣卡洛斯,马德里);J. Ancochea,O. Rajas(医院德拉公主,马德里);兆焦耳阿维莱斯(医院洛杉矶阿科斯,圣地亚哥拉里韦拉,穆尔西亚);R.阿耶韦(医院乌纳穆诺,希梅内斯,韦尔瓦);E.博雷利,M. Freixas(ABS桑特大鹏,巴达洛纳);J.Cifrián(医院Universitario马克斯德拉Valdecilla,坎塔布里亚);G.迪亚兹冈萨雷斯(C.S埃尔克里斯托,奥维多);C.多明戈里巴斯(Corporació帝·托利,萨瓦德尔);J.费尔南德斯 - Bujarrabal(医院格雷戈里奥·马拉尼翁,马德里)。J.B. Galdiz(医院去塞斯,毕尔巴鄂); F. García Río, C. Villasante (Hospital U. La Paz, Madrid). M.P. Girón, J.A. Lopez Muñoz (Hospital del Sagrat Cor, Barcelona). A. González Castro (C.E. Dr Fleming, Sevilla); N. Gonzalez Mangado (Fundación Jimenez Díaz, Madrid); A. Herrejon (Hospital Universitario Dr Peset, Valencia); E. Hidalgo (Hospital Valle de los Pedroches, Pozoblanco, Córdoba); J. Hueto Perez de Heredia (Hospital Virgen del Camino, Pamplona); J.L. Izquierdo Alonso (Hospital Universitario Guadalajara, Guadalajara); L. Lázaro (Hospital General Yague, Burgos); A. Leon Jiménez (Hospital Puerta del Mar, Cadiz); A. Marin Arquedas (CAP Sant Feliu de Llobregat II); F.L. Marquez Perez (Hospital Universitario Infanta Cristina, Badajoz); E. Marquilles, E. Martín (Hospital General de Manresa); J.J. Martín Villasclaras (Hospital Carlos Haya, Málaga); M. Martinez Frances (Hospital Universitario La Fe, Valencia); R. Monteserín (CAP Sardenya, Barcelona); L. Muñoz Cabrera (Hospital Universitario Reina Sofía, Córdoba); F. Payo (Hospital Central de Asturias, Oviedo); C. Pellicer (Hospital Francesc de Borja, Gandía, Valencia); J.A. Quintano (Centro de Salud de Lucena, Lucena, Córdoba); J.R. Donado (Hospital Virgen de Altagracia, Ciudad Real); N. Sánchez (CAP Rosello, Barcelona); C. Santiveri (Hospital Dos de Maig, Barcelona); J.J. Soler Cataluña (Hospital General de Requena, Valencia); M. Sorribes (ABS 4 Riu Nord-Riu Sud, Barcelona); C. Tarancon (Hospital Clínico Universitario, Zaragoza);
I.瓜迪奥拉医院,C. Bayona Faro (ABS Valls Urba, Tarragona);还有C.A.的s·埃尔南德斯P Jaume I, C. Llor Vila (CAP Tarraco, Tarragona)。gydF4y2Ba
- 收到了gydF4y2Ba2005年1月20日。gydF4y2Ba
- 接受gydF4y2Ba2005年7月1日。gydF4y2Ba
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