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结核病仍然是发展中国家的一个主要公共卫生问题(gydF4y2Ba1gydF4y2Ba]。减少结核病传播的障碍之一是缺乏准确laboratory-free诊断测试使用的护理。如果肺结核被淘汰,我们需要一个健壮的、低成本、安全的即时诊断测试,进而需要识别适当的生物标记物(gydF4y2Ba2gydF4y2Ba]。基于微流体快速测试(横向流测试)对结核病诊断蕴含着巨大的希望。它们容易使用,便宜,几分钟内提供答案,不需要专门的设备和在室温下是稳定的,使它们适合用于结核病高负担,资源匮乏的地区。然而,到目前为止,没有这样的测试了肺结核由于缺乏敏感性相关的标记和/或样本类型。开发测试基于宿主生物标记需要评估不同的样本类型(gydF4y2Ba3gydF4y2Ba]- [gydF4y2Ba5gydF4y2Ba)和标记除了干扰素(IFN) -γ[gydF4y2Ba5gydF4y2Ba提供鉴别诊断活动性结核病,潜伏性感染和其他呼吸系统疾病。我们先前已经表明,结合三个宿主因素在胸膜液体导致96%肺结核等呼吸道疾病的正确分类(奥德)(包括细菌性肺炎)无论艾滋病毒状况(gydF4y2Ba6gydF4y2Ba]。然而,这个样例类型并不容易获得,因此,我们想确定我们可以使用gydF4y2Ba体外gydF4y2Ba痰,无创和容易获得成人肺结核病人。gydF4y2Ba
受试者连续招募门诊和病房的医学研究理事会单位,Fajara,冈比亚。所有受试者成人(≥18岁)与暗示的肺结核症状。随后受试者分为两组:那些culture-confirmed结核病和那些ORD。75%的肺结核和奥德组积极的50% IFN-γQuantiFERON测试(试剂盒、希尔登,德国)。样本收集与此同时从同一个病人。血清血清收集使用真空采血管(BD,富兰克林湖,新泽西,美国)离心后使用被动的口水和唾液收集技术。1毫升新鲜痰消化了在室温下15分钟二硫苏糖醇为0.1%。同等体积的PBS是补充道,样本离心机(600×gydF4y2BaggydF4y2Ba5分钟)和上层的收集和储存在−20°C。未稀释的heparinised血(450每口井的μL)是刺激与纯蛋白衍生物(产后抑郁症)(staten血清研究所,哥本哈根,丹麦)或ESAT-6 (6-kDa早期分泌抗原)/ CFP-10 (10-kDa文化滤液蛋白质)最后μg·10毫升的浓度gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba。24 h后孵化(37°C和5%二氧化碳),上层清液被多路复用收获和分析细胞因子数组。样本分析使用一个自定义13-plex(刺激血液)或27-plex Bio-Plex用预混料(血清、唾液和痰)细胞因子/趋化因子板根据制造商的指示(Bio-Rad, Nazareth-Eke,比利时)。结核病和非结核患者的细胞因子水平分析使用Mann-Whitney紫外线测试。逻辑回归和接收机操作曲线分析,并根据年龄和性别进行调整。图生成使用GraphPad棱镜版本6.0(美国软件MacKiev,波士顿,MA)和SPSS统计分析版本20(美国、IBM、纽约Armonk)。假定值≤0.035被认为是重大的错误发现率。gydF4y2Ba
一夜之间遗传损伤刺激后,10-kDa IFN-γ-inducible蛋白质(IP10)和单核细胞化学引诱物蛋白(MCP) 1水平高两组所有的刺激后,虽然转化生长因子(TGF) -α,表皮生长因子和血管内皮生长因子(VEGF)水平低(gydF4y2Ba图1一个gydF4y2Ba)。IP10 CD40配体(CD40L)、TGF-α、肿瘤坏死因子(TNF) -α和IFN-γ都明显高于在受试者确诊肺结核与奥德如果样品(p = 0.0005, p = 0.0089, p = 0.0020, p = 0.0016, p = 0.0313)。背景减法后,主要差异观察PPD-stimulated样本,与更高水平的CD40L、IL - 10和TGF-α结核与非结核受试者相比(p = 0.0089, p = 0.0034, p < 0.0001,分别),但低水平的IFN-γ,白介素IL) 2和巨噬细胞炎性蛋白质(MIP) 1β(p = 0.0313, p = 0.0040, p = 0.035)。使用逻辑回归分析,最好的分类是实现与CD40L、产后抑郁症刺激后TGF-α和il - 10,给89%正确分类的肺结核或ord。消化痰显示惊人的高水平的细胞因子gydF4y2Ba体外gydF4y2Ba相比之下,唾液和血清(gydF4y2Ba图1 bgydF4y2Ba)。水平的il - 4、IL-5 il - 10、IL-13 IL-7,引发,il - 12gydF4y2Bap70gydF4y2Ba和MIP-1β都显著高于痰而唾液和血清(见gydF4y2Ba图1 bgydF4y2BaIL-7和引发),而IL-1βIL-17,粒细胞集落刺激因子(g - csf)、集落刺激因子、MCP-1和TNF-α唾液和痰要明显高于血清(见gydF4y2Ba图1 bgydF4y2Ba通过g - csf和MCP-1)。细胞因子il - 6是唯一在唾液相比低血清(p < 0.01)和痰液(p < 0.0001),无血清和唾液的区别(数据未显示),和没有区别IFN-γ水平之间的三个示例类型(gydF4y2Ba图1 bgydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
我们下一个细胞因子的水平相比gydF4y2Ba体外gydF4y2Ba从结核病和非结核痰(奥德)科目(gydF4y2Ba图1 cgydF4y2Ba)。有趣的是,我们发现没有区别在促炎细胞因子(gydF4y2Ba即。gydF4y2BaTNF-αIFN-γ和IP10),但明显降低il - 10的水平(p = 0.004), IL-13 (p = 0.003)和IL-15 (p = 0.022)被发现在痰结核与非结核主题(gydF4y2Ba图1 cgydF4y2Ba)。此外,天生的细胞因子il - 1受体拮抗剂,g - csf和VEGF均显著降低(p = 0.005, p = 0.004, p = 0.030),而纤维母细胞生长因子(FGF)明显高于肺结核与非结核科目(中位数(四分位范围)287 (40 - 764)pg·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba和2.2 (0 - 325)pg·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba分别;p = 0.007) (gydF4y2Ba图1 cgydF4y2Ba)。水平的FGF单独给74%正确分类肺结核(灵敏度(95% CI) 78%(56 - 93%)和特异性(47 - 83%)67%)。逻辑回归(调整年龄和性别)透露IL-13、FGF IFN-γ导致96%的正确分类肺结核(敏感性85%,特异性96%)。gydF4y2Ba
与高敏感性和特异性的一个主要标准开发基于横向流的测试结果肺结核是时间(gydF4y2Ba7gydF4y2Ba]。我们发现的宿主生物标志物水平gydF4y2Ba体外gydF4y2Ba痰是明显高于水平测量gydF4y2Ba在体外gydF4y2Baantigen-stimulated血培养,从而减少诊断时间。痰液通常用于微生物检测gydF4y2BaMycobacteriun肺结核gydF4y2Ba可以很容易地获得,使它理想的样本类型肺结核的侧流试验的发展。有趣的是,没有区别Th1细胞因子水平观察结核病和非结核主题之间使用gydF4y2Ba体外gydF4y2Ba样本类型。这可能是由于潜在的水平gydF4y2Ba结核分枝杆菌gydF4y2Ba感染非结核组(50%被QuantiFERON积极测试)。相反,Th2细胞因子il - 10和IL-13都显著降低结核与非结核痰相比,表明偏向Th1反应对象和肺结核。在先前的研究在巴西,IFN-γ水平痰被证明等同于治疗反应(gydF4y2Ba8gydF4y2Ba但我们没有评估,在目前的研究中。g - csf需要中性粒细胞招募和被发现显著降低痰中结核与非结核在我们的研究主题。这很有趣,因为中性粒细胞是肺结核的保护性免疫反应的重要组成部分[gydF4y2Ba9gydF4y2Ba)和g - csf管理局已经被证明可以有效应对结核病治疗(gydF4y2Ba10gydF4y2Ba]。虽然大多数因素低结核与非结核样品相比,FGF显著更高。有趣的是,gydF4y2Ba结核分枝杆菌gydF4y2Ba来华的成纤维细胞失去抗原表达的能力,建议gydF4y2Ba结核分枝杆菌gydF4y2Ba可能逃避辅助免疫监视通过感染成纤维细胞,从而导致细菌持久性(gydF4y2Ba11gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba
我们只分析了受试者culture-confirmed结核病,其中只有三个是涂片阴性(14%),所以在这个阶段很难确定涂阴科目的敏感性。然而,96%肺结核使用FGF的组合的正确分类,IL-13和IFN-γ痰从目前进行的调查结果明显高于血,呼吸——或urine-based测试(gydF4y2Ba4gydF4y2Ba]、[gydF4y2Ba7gydF4y2Ba]。因此,我们的研究结果很有希望的未来发展快速横向流为基础为结核病诊断测试,适用于资源有限的环境中使用。消除肺结核永远不会达到在发展中国家没有协同方法包括开发更好的诊断,快速和负担得起的gydF4y2Ba2gydF4y2Ba]、[gydF4y2Ba7gydF4y2Ba]、[gydF4y2Ba12gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba
脚注gydF4y2Ba
支持声明:本研究是由欧洲和发展中国家临床试验伙伴关系(批准号09.32040.011)和英国医学研究理事会。投资者没有参与研究设计、数据收集和分析,决定发表,或准备的手稿。gydF4y2Ba
利益冲突:披露可以找到与本文的在线版本gydF4y2Bawww.www.qdcxjkg.comgydF4y2Ba
- 收到了gydF4y2Ba2013年11月7日。gydF4y2Ba
- 接受gydF4y2Ba2014年1月28日。gydF4y2Ba
- ©2014人队gydF4y2Ba