摘要
CD8+细胞在慢性支气管炎(CB)吸烟者肺内支气管内周长周围的变化已经被确定,并且已经计算出准确估计真实平均值所需的组织数量。
从10名吸烟者获得肺标本。将颅内支气管的石蜡部分在上皮细胞和脑上计数在每个气道的内部周长周围的上皮细胞和亚脑上的CD8 +细胞。
下降±20%的计数百分比为上皮的43.0%,脑膜炎的40.9%。在90%的受试者中,累积平均在与5mm网状基底膜相关的耻骨上的组织后稳定。
在慢性支气管炎患者中,相邻1‐mm气道粘膜段之间的CD8+细胞计数存在相当大的差异。为了获得有代表性的计数和最大的统计能力来检测研究人群之间的差异,应检查上皮下组织,包括至少5mm的网状基底膜长度。
慢性支气管炎(CB)和慢性阻塞性肺疾病(COPD)与大小气道的炎症浸润有关1- - - - - -4.通过免疫组织化学染色证明了活化的T淋巴细胞和巨噬细胞的数量增加5.在气流限制(即。强迫呼气量一秒钟(FEV1)<80%预测)CD8 + T淋巴细胞子集显着增加6和FEV1% pred已被证明与CD8+细胞计数呈负相关7.
很少有研究对CB吸烟者的活检变异性进行检查。在计划任何活检研究时,必须考虑到足够的气道粘膜取样,以考虑受试者体内的变异性。考虑到实践中活检取样的广泛差异,作者认为有进一步的数据有助于做出明智的决定。这些数据在以支气管壁组织参数为主要终点的研究规划中具有重要意义。本研究检测了肺内支气管内周CB中CD8+ T淋巴细胞计数的可变性。这里描述的结果给出了需要检查的组织的最小数量,以获得整个气道切片的代表性细胞计数。
方法
主题
从当前吸烟者和一个exsmoker获得肺切除标本,并用CB接受切除切除肺肿瘤。Cb被定义为咳嗽的咳嗽,在该研究前2年每月大部分时间发生≥3个月8.受试者在研究前一个月没有病情加重;病情加重被定义为呼吸困难增加,与痰质或痰量的变化有关,导致患者寻求额外的医疗关注。2名患者符合全球阻塞性肺疾病倡议(Global Initiative for Obstructive Lung Disease)的轻度COPD标准,2名患者符合中度COPD标准9.平均fev.1% pred为89%(范围69 ~ 119%)。平均fev.1/强迫肺活量比为75%(范围65-96%)。人口学和肺功能数据如表1所示⇓.从组织档案中选择合适的组织切片。这些已经获得,并在先前发表的研究中使用10.选择来自10名患者的十个组织切片,包括横截面条切割横截面,≥7mm完整的网状基底膜(RBM)和相关的上皮和亚脑皮。所有航空公司都包括软骨和腺体。Figure 1⇓是其中一个气道的显微照片。石蜡包埋的切片在免疫组织处理前脱蜡到自来水中。如前所述,使用亲和素生物素化过氧化物酶复合物技术鉴定CD8+细胞10.
量化
从每个组织切片中选择一个肺内支气管横切面,RBM≥7mm,相关的上皮和上皮下。CD8+ T淋巴细胞在上皮细胞和上皮下细胞中计数,计数深度为100µm,计数深度为10个连续的片段,每个片段由1‐mm长度的RBM组成。对于一个受试者,从两个独立的组织切片中分别计算一个气道,以确定气道之间的差异。成像和定量使用蔡司光学显微镜(Thornwood, NY, USA)和×40物镜,由单个观测者完成。使用计算机图像分析测量气道内部周长。观察者内变异系数(CV)分别为4%的上皮下细胞和9%的上皮CD8+细胞。观察者间CV分别为5%的上皮下细胞和18%的上皮CD8+细胞。
统计分析
计算CV作为表示为百分比的SD /平均值。描述数据也分析。通过将所有段中的总细胞计数除以所检查的总RBM长度来计算每个受试者的最终平均细胞计数。计算累积手段作为添加每个附加段的计数结果。确定了每个单独的最终平均值的单段计数的比例。在累积平均值之前计算的部分数量在最终平均值的20%内剩下,此时累积平均值被认为是稳定的。
结果
检查来自10个受试者中的每一个的支气管,并从这93×1mm的粘膜中分析质量足够的质量。平均气道内周长为12.49毫米(范围为7.57-19.55 mm)。图2⇓显示10名受试者每段气道上皮下细胞计数。在93×1‐mm粘膜段中,43.0%上皮段和40.9%上皮下段的CD8+细胞计数低于最终平均值的20%。在24%的1‐mm节段中,上皮细胞计数与最终平均值相差>50%。对于上皮下细胞,在18%的1‐mm片段中,计数与最终平均值相差50%。图3⇓显示单段中皮细胞计数/最终平均值作为所研究的10个受试者的百分比。虽然大多数值围绕平均值,但有一个少量的值,从平均值显着。在检查5mm的耻骨上的上皮组织和90%受试者后,平均计数稳定为80%的受试者。检查组织后的所有计数均稳定,其中包括长度为9mm RBM。对于来自同一受试者的两个不同气道的CV(来自10个段)的CV(来自10个不同的气道为4.6%,上皮细胞分别为22.6%。来自同一受试者的10个单独的1-mm段计数的CV分别为上皮的14.4%,耻骨上皮数分别为80.8%。
讨论
在取样气道粘膜时,假定获得的活检将代表整个气道的横截面。然而,这还没有得到证实,必须考虑气道组织内炎症细胞分布的内在变异性,以便进行充分的采样。对更多组织的检查可能提供更有代表性的气道细胞计数。然而,可取样和检查的组织数量受到实际考虑的限制。
很少有研究涉及应该检查多少支气管活检组织以获得具有代表性的细胞计数,从而最大限度地提高统计能力以检测研究人群之间的差异这一问题。目前缺乏相关数据,尚不清楚这类哮喘研究的结果是否可以推断为一组患有慢性阻塞性肺病或慢性阻塞性肺病的吸烟者。沙利文等等。11研究了来自哮喘,COPD和健康对照的受试者的支气管活检的步进部分之间炎性细胞数的变化。炎症细胞未遵循正常频率分布,因此不能线性地预测所需的组织量。通过描述性分析,他们建议检查≥7mm长度的RBM区域,深度为60μm(即。0.42毫米2).十Hacken等等。12使用来自健康对照的支气管活组织检查和具有哮喘的储备,尺寸的组织尺寸为1.0×0.1mm(0.1毫米)2),沿1‐mm RBM即可获得恒定的细胞数。是等等。13在哮喘患者中,检查了单节区域和不同气道部位之间的变异性。他们发现两个平均尺寸为0.035毫米的区域之间存在令人满意的相关性2.
而在COPD中单个活检组织切片之间的细胞计数变化已经被研究11, 1‐mm段(相当于活检样本)在气道内周长的变化没有被检查。据作者所知,这项研究首次报告了气道内周CD8+细胞数量的变化,并使用这些数据来估计应检查的组织数量,以提供准确的炎症细胞数量估计。这些知识应使研究人员能够改进研究设计,并提高检测研究人群之间差异的能力。
从本研究的结果,检查单个1mm的粘膜组织段的粘膜组织仅在41%的场合上给上皮细胞CD8 +计数可接受的准确度。最大的少数1毫米段落下(>±50%)最终平均值。这些结果表明,应检查与≥5mm的RBM相关的耻骨细胞,以获得代表性的耻骨上CD8 +细胞计数。沙利文的研究结果等等。11证明炎症细胞并非随机分布于大气道上皮下组织,而是倾向于聚集。这可以解释在本研究中观察到的1‐mm组织样本之间的很大一部分差异。增加评估的组织数量将提供更有代表性的结果和Sullivan的研究等等。11表明应计数至少三个支气管活组织检查,每个尺寸为2毫米。对脑内支气管的目前的研究将支持瞄准该量的组织的需要。观察到的可变性大于血管内易变化的变化。有趣的是,来自相同气道的1毫米片段之间的CV基本上高于来自同一主题的两个气道之间的CV,表明从每个气道充分地采样的重要性。
慢性支气管炎吸烟者黏膜相邻1‐mm节段之间的CD8+细胞计数存在相当大的差异。这些结果表明,应检查与≥5mm网状基底膜相关的上皮下组织,以获得具有代表性的气道细胞计数,并最大限度地提高统计能力,以检测组间差异。
- 已收到2002年12月12日。
- 接受2003年8月8日。
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