文摘
Aspirin-sensitive鼻炎的表现是上呼吸道的阿斯匹林不耐受。相关的疾病代表了对阿司匹林的pseudoallergy或非甾体类抗炎药物。作为主要的免疫调节作用提出了气道神经支配的气道炎症性疾病,目前的研究评估的变化人类鼻粘膜神经支配aspirin-sensitive鼻炎患者与对照组相比。
9.5蛋白基因产物的免疫组织化学,速激肽,降钙素相关基因肽,——血管活性肠肽(VIP)和神经肽酪氨酸进行低温恒温器的部分鼻粘膜和神经肽包含神经检查独立使用一个评分等级。
控制相比,aspirin-sensitive鼻炎组有显著增加的VIP的类在黏膜免疫反应性神经纤维。与肥大细胞的数量不变,高度显著的嗜酸性粒细胞的数量被发现在群aspirin-sensitive鼻炎患者。
总之,目前neuropeptide-immunoreactivity粘膜神经显示差异的量化人类鼻粘膜神经支配nonrhinitic与aspirin-sensitive rhinitic个人。这些差异可能反映了病理生理学作用pseudoallergic上呼吸道神经支配的反应。
这项研究是由德国研究社区和联邦教育和研究(0002年01 GC)资助。
阿司匹林(乙酰水杨酸)仍然是最常用的药物之一。除了作为一种止痛的药物,阿司匹林也越来越多地用于血管疾病的预防。阿斯匹林不耐受的患病率从5 - 6%不等1和鼻息肉病的一个协会,哮喘和敏感对阿司匹林一直以∼80年[2]。协会的哮喘、鼻息肉病和阿司匹林敏感被称为阿司匹林三联征[3]。
Aspirin-induced哮喘(AIA)代表的发展在一秒钟用力呼气量严重下降(FEV1)管理后患者阿司匹林。友邦保险,患者急性症状往往叠加在慢性严重的哮喘。攻击可能沉淀后摄入少量的阿司匹林或其他非甾体类抗炎药(非甾体抗炎药)。海德曼等等。[4]显示整个阿斯匹林不耐受的5.7%,友邦保险的患病率是1.2%。在过去的几年里,增加对发病机制的理解,友邦保险的管理。Aspirin-induced支气管收缩被认为是由花生四烯酸代谢的分流远离环氧酶途径对脂氧合酶途径。这将导致增加生产白细胞三烯(LT)与合成支气管狭窄[2]。符合这一发现,FEV严重下降1友邦保险可以抑制患者的肝移植受体拮抗剂[5]和发现异常释放LTs aspirin-sensitive哮喘病人,导致鼻和支气管不良反应[6]。
众所周知,鼻窦炎在aspirin-sensitive哮喘病人比aspirin-tolerant更严重的病人[7]。同时,粘膜炎症的程度和严重性aspirin-sensitive患者被认为是高于aspirin-tolerant病人。使用计算机断层扫描评估窦介入的程度和测量鼻旁窦的粘膜增厚,半定量的评分系统,显示增生性鼻窦炎的程度比aspirin-tolerant哮喘受试者在阿司匹林敏感与鼻窦炎的类似临床严重程度[3]。
目前还不清楚如果aspirin-sensitive患者的慢性气道炎症的基本机制是不同的,在aspirin-tolerant慢性鼻窦炎、鼻息肉患者。作为自主气道神经系统据报道中发挥重要作用的发展上、下呼吸道的炎症气道疾病(8、9),是目前提出aspirin-sensitive患者neuropeptide-immunoreactive模式的改变相比,他们的鼻粘膜如果神经纤维与norhinitis科目。因此,本项目研究的复合neuropeptide-containing鼻粘膜神经一群aspirin-sensitive鼻炎患者和nonrhinitic评估个人和嗜酸性粒细胞和肥大细胞的数量。
材料和方法
主题
伦理委员会批准后,从每个单独的知情同意,共有24个男性和女性的个人与阿司匹林敏感(12和12控制)包含在本研究(表1所示⇓)。识别aspirin-sensitive鼻炎,积极病史aspirin-sensitivity鼻挑衅和积极的反应是必须的,这是与前面描述的特定执行lysine-aspirin挑衅测试[10]。所有患者(n = 12)包括aspirin-sensitivity组也有aspirin-sensitive轻度哮喘和鼻炎旁边的鼻息肉病。特应性皮炎患者没有表现出任何的迹象或其他类型的过敏所揭示的病史和血清免疫球蛋白E (IgE)通过无线电测量immunosorbens。患者接受鼻减充血剂,但所有鼻或口服类固醇和鼻cromoglycate撤回手术前2周。
排除其他类型的鼻炎,皮试,鼻腔检查,rhinomanometric测试,鼻涂片,糖精测试和鼻挑衅或血清IgE计数byradio immunosorbens试验进行。这些测试也与控件执行排除阿司匹林敏感,过敏性鼻炎、血管神经鼻炎或有毒的鼻炎。
组织抽样
鼻手术活检的贝壳状结构中获得rhinosurgical干预由于气流限制与偏差等原因鼻中隔增生或因素纳入考虑范围后不难得出的对照组。同时,在对照组,正常细胞学和组织学是专性排除可能干扰炎症过程,如细菌或病毒炎症,而在aspirin-sensitive鼻炎组,炎症变化被发现,如前所述(3、7、11)。活检被加工使用常规低温恒温器的部分协议[12]。Immersion-fixation在Zamboni-solution [13] 4 h随后磷酸盐溶液中洗涤的组织(PBS)。Cryoprotection与18%蔗糖(1604;Seelze Riedel-de Haen AG),德国)进行活检前一夜之间被冻结在液体nitrogen-cooled异戊烷。存储后−80°C的组织被减少到8 - 10µm部分使用低温恒温器。
嗜酸性粒细胞和肥大细胞量化
Histomorphological执行检查的组织部分使用haematoxylin-eosin染色[14]。肥大细胞和嗜酸性粒细胞的分化进行了使用传统的组织化学或免疫组织化学。结构完整,肥大细胞和嗜酸性粒细胞与甲苯胺或染色染色检测。免疫组织化学检测的两个细胞类型,特定的标记了。嗜伊红的检测,部分受到孵化与人类嗜酸性粒细胞阳离子蛋白抗体(或克隆EG1 EG2)。肥大细胞染色,反人类的肥大细胞类胰蛋白酶和ige抗体(表2⇓)。检测的主要抗体反应,生物素化的二次抗体和streptavidin-bioton-peroxydase复杂。不具体的反应引起的内源性组织过氧化物酶被通过阻断H为0.5%2O2氨基-。消极的控制包括省略主要或次要的抗体。量化,随机部分是由两个独立的调查人员检查了使用250倍放大和光栅(035025年,奥林巴斯光学,汉堡,德国)。marker-positive细胞的数量是每1000固有层数相关的有核,nonorgan相关的细胞。正态分布证实了Kolmogorov-Smirnov测试和测试组显著差异(p < 0.05)使用配对t检验。结果证实使用Bonferroni-Holm过程,证实了显著差异。
免疫组织化学的神经肽
免疫组织化学进行了描述[15],[16]使用修改后的免疫组织化学方法。总之,8µm低温恒温器部分被安装到chromalaun预镀玻璃幻灯片,风干1 h和洗几次在PBS。排除非特定的背景标签,幻灯片被preincubated 1 h与0.1在室温下磷酸盐缓冲剂(PBS)含1%牛血清白蛋白和10%正常猪血清。部分被冲洗在PBS和受到隔夜孵化与标记蛋白基因产物(PGP) 9.5和不同神经肽(表2所示⇑)。这些神经肽标记,P物质抗血清可能出现大到其他速激肽(SP),如神经激肽a的检测主要抗体,不同二次抗体(表3⇓)。为控制,孵化项目进行不添加一级或二级抗体。部分终于安装在carbonate-buffered甘油(pH值8.6)和荧光显微镜检查。neuropeptide-immunoreactivity的半定量评价,两个独立的调查人员得分染色强度使用90倍放大和先前建立评分系统。神经支配密度分级在从0 - 4步骤。等级0表示没有检测到染色,1级表示偶尔(焦)染色,二年级代表一些神经纤维配置文件(扩散弱)检测,三年级代表许多神经纤维配置文件,和4级,人口控制的粘膜。类似染色协议发表之前[17]。两组样本在同一天检查排除日常变化影响群体间的差异。
结果
炎症细胞的分布
常规组织学证实炎症变化在aspirin-sensitive鼻炎组与对照组相比。除了嗜酸性粒细胞炎性细胞涌入高度的杯状细胞增生也发现。Giemsa-staining表明,嗜酸性粒细胞主要是出现在牙龈层,周围腺体和小血管周围。免疫组织化学和eosinophil-specific EG1 EG2抗体证实Giemsa-staining的结果。
Toluidine-staining显示肥大细胞的存在。他们也主要存在腺体和小血管周围和牙龈层。类胰蛋白酶/ IgE-immunohistochemistry串行部分导致了相似的结果(图1所示⇓)。嗜酸性粒细胞和肥大细胞不仅是局部的血管周围,表明近期的血球渗出,但也发现表面和深层的活检。
量化的肥大细胞和嗜酸性粒细胞数量
使用甲苯胺和定量组织化学染色和免疫组织化学与不同的柱状细胞和eosinophil-specific标记是用来评估细胞的变化涌入aspirin-sensitive鼻炎与对照组相比。aspirin-sensitive鼻炎组、高嗜酸性粒细胞计数被发现显著差异,一个值为18.7±4.9%(对照组:2.6±1.3%,p < 0.001)的烤箱后染色。EG2必经染色(21.1±6.9%,对照组:2.7±1.2%,p < 0.001)证实了这一发现。肥大细胞并没有显著增加aspirin-sensitive组与对照组相比(toluidin: 6.6±0.9%与6.5±0.7%,p = 0.921;类胰蛋白酶:6.8±1.0%与7.9±1.0%,p = 0.309)。
细胞神经肽的表达
的鼻甲粘膜活检nonrhinitic和aspirin-sensitive rhinitic病人含有丰富的神经纤维。使用一般的神经免疫组织化学标记PGP 9.5导致粘膜神经纤维的染色。发现了一个密集的神经支配下呼吸道上皮细胞。PGP 9.5类免疫反应性还发现在下面表面上皮腺结构。使用神经肽酪氨酸(NPY)免疫组织化学检测抗体导致染色的神经纤维主要分布在血管。孵化项目的部分降钙素相关基因肽(CGRP怎样)类免疫反应性导致染色CGRP怎样类阳性纤维,主要是分布接近血管、腺体和正弦曲线。同时,tachykinin-like免疫反应性被发现在一个分组人口呈现以下的神经纤维上皮和腺体周围结构。免疫染色的神经肽——血管活性肠肽(VIP)显示一个族群的VIP类阳性神经纤维周围发现血管和粘膜下腺体(图2所示⇓)。表达在神经纤维,神经内分泌细胞还透露neuropeptide-like免疫反应性。
量化neuropeptide-containing神经纤维
之前使用一个标准化得分协议人类鼻粘膜神经纤维的存在,不同的分数neuropeptide-like免疫反应性(图3中被发现⇓)。nonrhinitis对照组的受试者,比分是SP 1.83±0.39, 1.58±0.36 CGRP怎样,VIP 1.42±0.45,分别和NPY 0.83±0.34(图4所示⇓)。
在群aspirin-sensitive鼻炎neuropeptide-like为VIP免疫反应性明显提高(2.50±0.26,p < 0.05),而其他值没有显著差异(CGRP怎样:0.67±0.31,p = 0.066;SP: 1.58±0.26, p = 0.596;NPY: 1.50±0.31, p = 0.167;图3⇑)。此外,免疫反应性对PGP 9.5没有显著变化(鼻炎:2.91±0.21与控制:2.30±0.56,p = 0.303)。
讨论
Aspirin-sensitive鼻炎显示鼻腔表现ofaspirin-intolerance, pseudoallergy对阿司匹林和/或相关的非甾体抗炎药,如消炎痛、双氯芬酸、布洛芬[18]。临床上,aspirin-sensitive鼻炎通常与清晰的分泌,增生性鼻窦炎有关鼻塞、打喷嚏和瘙痒。Rhinoscopy经常显示turbinal粘膜肿胀,一个巨大的黄色分泌物,可以由于高嗜酸性粒细胞的内容,和一个息肉病米饭[11]。类似的特性也发现在目前的人口ofaspirin-sensitive鼻炎患者。目前的病例诊断根据公认的诊断标准包括鼻挑衅测试与阿司匹林(19、20)。所有研究对象包括消极radioallergosorbent测试和皮肤测试。大多数哮喘患者特异反应性和积极的测试结果,目前的结果显然不是可以普遍过敏性哮喘或过敏性鼻炎。
的pathomechanisms aspirin-sensitive鼻炎迄今尚未完全阐明。有一种理论认为,阿司匹林直接导致一个未指明的,IgE-independent激活肥大细胞和嗜酸性粒细胞(研讨会)。研究报告增加血液中的组胺和类胰蛋白酶[24],增加组胺和白三烯C4在鼻腔灌洗后[25]aspirin-provocation支持这一理论。第二个理论是基于行动的方式抑制环氧酶的非甾体抗炎药,导致花生四烯酸的降解增加,5脂氧合酶和增加生产的LTs(26、27)和大量研究对应于这个理论[28-31]。除了这些致病的机制,调节作用可能是由于气道神经系统。
当前的研究评估神经支配的变化上aspirin-sensitive鼻炎患者。之前使用一个标准化得分协议神经纤维存在在人类鼻粘膜,显著增加的神经肽VIP类免疫反应性。和可能遇到的困难方面的量化和semiquantification神经纤维概要文件,染色过程和显微镜设置必须非常严格的和可再生的。在这方面,本研究进行了谨慎地达到最高标准的再现性和说服力。
28日检测氨基酸肽VIP首次分离出小肠和肺血管扩张性肽[32],是最丰富的神经肽在人类发现鼻粘膜(33、34)。虽然并没有报告活性的VIP在人类身上的影响,人们普遍认为VIP上呼吸道中起着重要作用,影响气道功能的许多方面[35]由于其作用的神经调节物质抑制nonadrenergic noncholinergic神经系统[36]。增加和upregulation VIP表达在神经纤维产生的血管舒张可能反映在血流量增加和扩张血管炎症环境中观察到aspirin-sensitive鼻炎患者的鼻粘膜中找到。
VIP类免疫反应性的神经是广泛分布在整个呼吸道在人类和动物[37]和增加VIP据报道在血管舒缩性鼻炎的情况下比正常对照组(38、39)。一些报告已经证实VIP的老年病过敏性鼻炎(17日40)。
旁边他们在神经纤维的表达,一些研究报道,免疫系统的细胞也可能产生神经肽,如贵宾[41]。因此,炎症细胞衍生的生物学意义[42]讨论神经肽。本研究只集中在神经肽的表达在神经纤维,可以观想通过与panneuronal标记染色,如PGP 9.5,一个参与neuropeptide-derived non-neuronal来源,如炎症细胞,不能排除。在这方面,neuropeptide-like免疫反应性神经内分泌细胞也发现了早些时候报道的过敏性鼻炎(40,43岁)。
作者曾表明,neuropeptide-like免疫反应性也hyperreflectoric活检的变化rhinitic科目。在目前的研究中,这些变化不仅限于VIP类SP免疫反应性也,表明这两个之间有不同的神经支配鼻炎类型[39]。
在目前的研究中,对CGRP怎样被发现并没有显著变化。无意义的趋势,研究组织和更高的统计数字较高的权力可能会揭示这种神经肽的显著差异,而据报道,参与许多呼吸道功能[44]的规定。因此,未来人口大的多中心研究应该进行,也可以指向一个角色CGRP怎样aspirin-sensitive鼻炎。
除了众所周知的组合aspirin-intolerance症状,哮喘和息肉病米饭,先前的研究报道中嗜酸性粒细胞水平升高的aspirin-sensitive鼻炎。当前研究的结果使用三种方法来评估这些研究嗜酸性粒细胞是一致的证明一个高度重要的海拔嗜酸性粒细胞浓度。在这方面,嗜酸性粒细胞的数量是20%的固有层细胞aspirin-sensitive集团相比,只有2%的板propria-associated细胞nonrhinitic参考人口。
肥大细胞的直接参与并没有证明aspirin-sensitive鼻炎的发病机制和唯一的研究表明贡献肥大细胞类胰蛋白酶和组胺水平升高的报道aspirin-sensitive鼻炎患者的鼻液灌洗。没有显著差异在肥大细胞在当下研究的水平。然而,这些细胞的直接参与不能排除,因为他们可能参与通过改变他们的中介配置文件而总数保持不变。
大量的证据表明之间的直接交互气道嗜酸性粒细胞和肥大细胞和神经,正如前面展示的众多报道[45]。目前的研究没有包括双染色程序同时肥大细胞、嗜酸性粒细胞和气道神经检测,这些发现并不重复。然而,由于大量的嗜酸性粒细胞aspirin-sensitive组中观察到,嗜酸性粒细胞和神经纤维之间的通信是可能的。
总之,本研究的结果表明改变neuropeptide-like aspirin-rhinitis患者粘膜神经的免疫反应性。在一起,目前的数据表明自主的调节作用在aspirin-sensitive鼻炎粘膜神经支配。
确认
作者想感谢b . Kloft有益的讨论。
- 收到了2002年9月17日。
- 接受2003年6月22日。
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