摘要gydF4y2Ba
PGDM是前列腺素D的尿代谢物gydF4y2Ba2gydF4y2Ba在学龄前哮喘患儿中增加gydF4y2Bahttp://ow.ly/Ynjy305ZY9LgydF4y2Ba
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学龄前儿童的急性喘息发作通常是由病毒性上呼吸道感染引起的,并对卫生服务造成重大负担[gydF4y2Ba1gydF4y2Ba].然而,到目前为止,学龄前哮喘的炎症机制仍不清楚。在学龄前哮喘中还没有被研究过的介质,但与成人哮喘哮喘的发病机制有关,包括促炎前列腺素DgydF4y2Ba2gydF4y2Ba(PGDgydF4y2Ba2gydF4y2Ba) [gydF4y2Ba2gydF4y2Ba]和抗炎前列腺素PGEgydF4y2Ba2gydF4y2Ba[gydF4y2Ba3.gydF4y2Ba,gydF4y2Ba4gydF4y2Ba].在这项研究中,我们寻找PGD增加的证据gydF4y2Ba2gydF4y2Ba生物合成或还原PGEgydF4y2Ba2gydF4y2Ba生物合成,或两者的结合,学龄前喘息的儿童。为此,我们测量了PGD的主要代谢物gydF4y2Ba2gydF4y2Ba和铂族元素gydF4y2Ba2gydF4y2Ba尿液中:9α-羟基-11,15-二氧-2,3,4,5-四碳-前列腺-1,20-二酸(tetranor-PGDM)和9,15-二氧-11α-羟基-13,14-二氢-2,3,4,5-四碳-前列腺-1,20-二酸(tetranor-PGEM) [gydF4y2Ba5gydF4y2Ba,gydF4y2Ba6gydF4y2Ba].gydF4y2Ba
从喘息和间歇治疗试验中招募有持续喘息病史的学龄前儿童。用于前列腺素分析的尿液样本来自无症状儿童,在父母知情同意后,并在试验药物发布之前(英国国家卫生服务多中心研究伦理委员会参考文献09/H1102/110)。患儿年龄在10个月至5岁之间,有两次或两次以上喘息病史,其中至少一次经医生确认,且至少一次发生在前3个月内[gydF4y2Ba7gydF4y2Ba].在09:00 - 16:00小时取尿。健康对照是在皇家伦敦医院(London, UK)门诊就诊的学龄前儿童的兄弟姐妹,而患有特应性疾病的学龄前儿童是从儿科过敏诊所招募的,临床诊断为食物过敏,但没有哮鸣史(特应性疾病对照)。gydF4y2Ba
收集尿液并在收集后1小时内保存在−80°C。采用高效液相色谱(HPLC)分离和质谱分析尿四价- pgdm和四价- pgem。冰融后,10 000×离心10 mingydF4y2BaggydF4y2Ba在4°C和0.5 mL上清液中提取和分析四价- pgdm和四价- pgem。在每个样品中加入化学相同的内氘化标准品:10 ng四价前列腺素E代谢物dgydF4y2Ba6gydF4y2Ba(tetranor-PGEM-dgydF4y2Ba6gydF4y2Ba或11 r-hydroxy-9 15-dioxo-13 14-dihydro-2 3, 4, 5-tetranor-prostan-17, 17, 18岁,18岁,19岁,19 - dgydF4y2Ba6gydF4y2Ba-1,20-二酸)和10 ng四醇前列腺素D代谢物DgydF4y2Ba6gydF4y2Ba(tetranor-PGDM-dgydF4y2Ba6gydF4y2Ba或9 r-hydroxy-11 15-dioxo-13 14-dihydro-2 3, 4, 5-tetranor-prostan-17, 17, 18岁,18岁,19岁,19 - dgydF4y2Ba6gydF4y2Ba-1,20-二酸)(开曼化学公司,Ann Arbor, MI,美国)。然后用乙酸酸化(pH 3.5),并与0.5 mL叔丁基醚:甲醇(80:20 v/v)混合。将所得混合物的有机相通过短时间离心分离,然后在37°C的氮气下干燥。固体浸出物干燥后用甲醇(60 μL)重新溶解。10 μL HPLC分离、质谱测定(Shimadzu Sil-2-AC;岛津科学仪器,哥伦比亚,MD,美国)配备了Phenomenex Synergy Fusion RP-100A 100×2 mm柱(Phenomenex International, Torance, CA, USA)。四醇- pgem和四醇- pgdm的保留时间分别为13.2和13.4 min。分析物采用多反应监测模式(MRM)串联质谱(Qtrap 4000;AB Sciex, Concord, ON, Canada),配备电喷雾离子源,在负离子模式下工作。四价pgem和四价pgdm具有相同的伪分子离子327 Mz和监测离子309 Mz(氘化标准分别为333和315 Mz)。 Quantification was performed using a stable isotope dilution method from the area under the peak. Urinary creatinine was assessed using a standard analytical assay and Vitros 350 (Ortho Diagnostics, Raritan, NJ, USA) and prostanoids were indexed to urinary creatinine (pg·mg−1gydF4y2Ba肌酐)。尿液可替宁的测定采用商品化的酶免法(Cozart法医酶免法;如果肌酐校正可替宁浓度为>30 ng·mg,则被归类为暴露于环境烟草烟雾gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba[gydF4y2Ba8gydF4y2Ba,gydF4y2Ba9gydF4y2Ba].gydF4y2Ba
为了进行分析,我们将学龄前喘息儿童分为两组;在同一地点招募的与健康对照组(组1)和在其他地点招募的(组2)。尿液前列腺素浓度为对数gydF4y2Ba10gydF4y2Ba改变了之前的分析。组间比较采用方差分析gydF4y2Ba事后gydF4y2BaTukey的多重比较检验或t检验使用GraphPad Prism(版本6.00;GraphPad Software, La Jolla, California, USA)。相关性(Pearson相关系数(r))和多元回归分析使用r(版本3.2;R核心团队,维也纳,奥地利)。数据被总结为平均值±gydF4y2Ba扫描电镜gydF4y2Ba.p值<0.05被认为是显著的。gydF4y2Ba
我们招募了24个健康对照组,五nonwheezy儿童过敏性疾病,149学前儿童喘息招募在同一网站作为控制(组1)和810学前儿童喘息招募从其他网站(组2)。不让一个孩子得到了非甾体类抗炎治疗前2周尿液采样。学龄前喘息组(健康对照组3.0±0.27岁,特应性疾病组2.9±0.81岁,1组3.0±0.08岁,2组2.6±0.04岁)与对照组年龄无显著性差异。gydF4y2Ba
在健康对照组和有特应性疾病且无哮鸣史的儿童之间,四氮平- pgdm无差异(3.8±0.09 pg·mg)gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba肌酐,n = 24gydF4y2Ba与gydF4y2Ba3.8±0.06 pg·毫克gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba肌酐,n = 5)。与健康对照组相比,四氮平- pgdm在两个学龄前喘息组中均增加(组1 4.3±0.04 pg·mg)gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba2组肌酐4.3±0.01 pg·mggydF4y2Ba−1gydF4y2Ba健康对照组肌酐3.8±0.09 pg·mggydF4y2Ba−1gydF4y2Ba肌酐,n = 24;p < 0.0001) (gydF4y2Ba图1一个gydF4y2Ba).在PGDM的多元回归中,包括年龄和学龄前喘息状态(组1和组2联合和对照组),年龄和学龄前喘息状态仍然具有统计学意义(RgydF4y2Ba2gydF4y2Ba0.13)(±系数gydF4y2BasegydF4y2Ba年龄−0.096±0.01,p<0.0001;系数±gydF4y2BasegydF4y2Ba无喘息(喘息设置为参考水平)−0.37±0.75,p<0.0001)。gydF4y2Ba
959名学龄前喘息儿童(gydF4y2Ba即。gydF4y2Ba四氮平-PGDM与年龄呈负相关(r - 0.30, p<0.0001),吸入糖皮质激素(ICS)组PGDM降低(p<0.05)。性别、哮鸣的临床类型(单纯病毒性哮鸣)gydF4y2Ba与gydF4y2Ba多重触发性哮鸣)、环境烟草烟雾暴露(父母报告或尿可替宁测量)和湿疹与四氮平- pgdm无关。在一项针对学龄前喘息儿童的多元回归分析中,包括年龄和ICS,只有年龄具有统计学意义(RgydF4y2Ba2gydF4y2Ba0.11)(±系数gydF4y2BasegydF4y2Ba年龄−0.049±0.005,p<0.0001;系数±gydF4y2BasegydF4y2BaICS为0.020±0.025,p=0.42)。gydF4y2Ba
四肽- pgem在健康对照和特应性疾病儿童之间没有差异(4.4±0.07 pg·mg)gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba肌酐,n = 24gydF4y2Ba与gydF4y2Ba4.1±0.12 pg·毫克gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba肌酐,n = 5)。四价糖- pgem在对照组之间没有差异(4.4±0.07 pg·mg)gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba学龄前喘息组1(4.4±0.03 pg·mggydF4y2Ba−1gydF4y2Ba2(4±0.01 pg·mggydF4y2Ba−1gydF4y2Ba肌酐)(gydF4y2Ba图1 bgydF4y2Ba).在959名学龄前哮喘患儿中,四酮糖- pgem与年龄呈负相关(r - 0.33, p<0.0001)。gydF4y2Ba
这些结果表明,在有严重的学龄前喘息史但在抽样当天没有主动喘息的儿童,PGDgydF4y2Ba2gydF4y2Ba生物合成,但不是PGEgydF4y2Ba2gydF4y2Ba生物合成,增加。气道PGD的机制gydF4y2Ba2gydF4y2Ba学龄前哮喘的发病机制尚不清楚。其中一个可能的机制是气道PGD的增加gydF4y2Ba2gydF4y2Ba,而不是直接导致支气管收缩,在病毒性感冒期间为气道过度炎症反应做好准备,这是在动物模型中观察到的相互作用[gydF4y2Ba10gydF4y2Ba].gydF4y2Ba
这项研究有重要的局限性。首先,尽管学龄前哮鸣患者尿前列腺素的模式与成人轻度间歇性哮鸣相似[gydF4y2Ba11gydF4y2Ba],尿液中四酮糖- pgdm的增加是否反映了PGD水平的增加gydF4y2Ba2gydF4y2Ba在气道中,或在其他器官中增加生物合成尚不清楚。其次,我们没有评估学龄前哮鸣儿童PGDM的几个重要的潜在混杂因素。例如,特应性状态(通过皮肤点刺试验或特异性血清IgE测量)没有被评估。虽然健康对照和特应性疾病对照在PGDM方面的无显著差异与特应性效应的缺乏相一致,但特应性疾病儿童的数量非常少意味着特应性效应的混杂效应仍然是可能的。然而,我们能够排除尿液采样处理差异的影响,因为在同一地点招募的学龄前喘息儿童与对照组(组1)和其他地点招募的儿童(组2)的尿液前列腺素水平没有差异。gydF4y2Ba
我们的结论是,PGDM是学前喘息潜在兴趣的标志,但需要在更明确的人群中进行进一步研究。如果气道PGDgydF4y2Ba2gydF4y2Ba对于这种常见的疾病,我们建议进行新的治疗方案的试验,例如新的口服CHTR2拮抗剂,它可以阻止PGD的作用gydF4y2Ba2gydF4y2Ba对气道细胞[gydF4y2Ba12gydF4y2Ba].gydF4y2Ba
披露的信息gydF4y2Ba
补充材料gydF4y2Ba
r . BrughagydF4y2Baerj - 01390 - 2016 - _brughagydF4y2Ba
C.J.格里菲斯gydF4y2Baerj - 01390 - 2016 - _griffithsgydF4y2Ba
a·怀特豪斯gydF4y2Baerj - 01390 - 2016 - _whitehousegydF4y2Ba
c . NwokorogydF4y2Baerj - 01390 - 2016 - _nwokorogydF4y2Ba
j .感谢gydF4y2Baerj - 01390 - 2016 - _grigggydF4y2Ba
l . NoimarkgydF4y2Baerj - 01390 - 2016 - _noimarkgydF4y2Ba
h·迪亚gydF4y2Baerj - 01390 - 2016 - _pandyagydF4y2Ba
t . VulliamygydF4y2Baerj - 01390 - 2016 - _vulliamygydF4y2Ba
R.T.沃尔顿gydF4y2Baerj - 01390 - 2016 - _waltongydF4y2Ba
D.B. cooper价格gydF4y2Baerj - 01390 - 2016 - _pricegydF4y2Ba
l . KohgydF4y2Baerj - 01390 - 2016 - _kohgydF4y2Ba
确认gydF4y2Ba
作者的贡献如下。j·格里格(J. Grigg)是首席研究员,计划并全面监督这项研究,为这些数据撰写手稿并提供担保。A. Whitehouse进行了数据分析,并对最终手稿做出了贡献。M. Lesosky进行了多元回归分析,并对最终的手稿做出了贡献。C. Nwokoro和R. Brugha监督了这项研究,并对最终手稿做出了贡献。H. Pandya, S. Turner, R. Walton和D. Price对研究计划和最终手稿的起草做出了贡献。T. Vulliamy, J.W. Holloway和C.J. Griffiths对研究规划和最终手稿作出了贡献。M. Sanak进行了尿前列腺素分析,并对最终手稿做出了贡献。L. Noimark从对照中获得数据,并对最终的手稿做出了贡献。L. Koh监督控制数据,整理数据,并对最终手稿作出贡献。gydF4y2Ba
脚注gydF4y2Ba
临床试验:本研究注册于gydF4y2BaClinicalTrials.govgydF4y2Ba标识号gydF4y2BaNCT01142505gydF4y2Ba.gydF4y2Ba
支持声明:已从英国国家卫生保健研究、功效和机制评估研究所(NIHR-EME)项目获得资金(参考文献08/43/03)。J. Grigg部分由NIHR北泰晤士应用健康研究和护理领导协作组织资助。本文的资金信息已存入gydF4y2Ba资助者打开注册表gydF4y2Ba.gydF4y2Ba
利益冲突:可以在本文旁边找到披露gydF4y2Bawww.qdcxjkg.comgydF4y2Ba
- 收到了gydF4y2Ba2016年7月12日。gydF4y2Ba
- 接受gydF4y2Ba2016年10月31日。gydF4y2Ba
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