抽象GydF4y2Ba
骨髓间充质干细胞(MSCs)可减轻博莱霉素或细菌脂多糖所致的急性肺损伤。然而,目前尚不清楚MSCs对呼吸机所致肺损伤(VILI)的保护作用。GydF4y2Ba
这项研究调查的MSCs是否具有预防或承受高容通气健康大鼠调节VILI的潜在作用。GydF4y2Ba
24只Sprague-Dawley大鼠(250-300克)进行大批量的机械通气(25毫升·千克GydF4y2Ba-1GydF4y2Ba)。的MSC(5×10GydF4y2Ba6GydF4y2Ba)静脉内或气管内给药(每组n = 8)开始过度通气前30分钟,并只大鼠MSC-未处理。自发呼吸作为对照麻醉的大鼠(n = 8)。过度通气的3小时后或控制动物处死,肺组织和支气管肺泡灌洗液(BALF)取样用于进一步分析。GydF4y2Ba
当与对照组相比,MSC-未处理过通风大鼠表现出典型VILI特征。肺水肿,组织学肺损伤指数,总蛋白浓度,白细胞介素1β,巨噬细胞炎性蛋白-2和在BALF嗜中性粒细胞和肺组织中的血管细胞粘附蛋白-1的数目的过通风大鼠显著增加。所有这些VILI的指标朝着利用MSC治疗,无论是静脉注射或气管内大鼠正常化显著移动。与MSC局部和全身治疗前在大鼠模型降低VILI。GydF4y2Ba
急性肺损伤(ALI)和其最严重的演变,急性呼吸窘迫综合征(ARDS),是毁灭性的非心脏临床疾病为特征的急性呼吸衰竭及双侧肺浸润与肺部的破坏导致水肿一致肺泡 - 毛细血管膜屏障 [GydF4y2Ba1GydF4y2Ba]. 尽管对ALI和ARDS的发病机制和治疗进行了广泛的研究,但死亡率仍然很高,约为40%[GydF4y2Ba2GydF4y2Ba]。GydF4y2Ba
ALI / ARDS患者的状态可以通过机械通气,这是这些患者的基本生命支持的显著副作用加重。事实上,实验和临床证据表明,机械通气可能会加剧患者的预先存在的条件或甚至损害健康肺,通过诱导的炎症反应,有助于肺外器官功能障碍[GydF4y2Ba3GydF4y2Ba]。事实上,呼吸机诱导的肺损伤(VILI)的一些特点类似于那些ALI / ARDS的,并因此与它们协同作用。VILI从机械力对肺结构的操作所导致。肺泡壁的过度伸展导致内皮细胞和上皮破裂和间质水肿。特别地,环状过度膨胀和崩溃/气道单位每次呼吸重新开口是导致VILI [两个关键病理生理学机制GydF4y2Ba3GydF4y2Ba]. 为了减少机械通气的潜在危害,在临床指南中建立并推荐了保护性呼吸机策略[GydF4y2Ba4GydF4y2Ba]。GydF4y2Ba
考虑到与ALI有关的相当大的健康负担/ ARDS,对这种综合征新的治疗策略研究十分活跃。最近提出的作为ALI的潜在治疗的细胞治疗方法/ ARDS是基于使用骨髓的间充质干细胞(MSC)[GydF4y2Ba五GydF4y2Ba-GydF4y2Ba7GydF4y2Ba]. 应用这种类型的成体干细胞的基本原理来自于它们的免疫抑制和抗炎特性,以及它们不受宿主排斥的特性,使得它们可以用于同种异体移植[GydF4y2Ba8GydF4y2Ba,GydF4y2Ba9GydF4y2Ba]。大部分的试验研究进行了迄今为止在ALI MSCs的潜在治疗功能/ ARDS一直专注于肺损伤的主要原因。具体而言,在不同的研究中获得的数据上的细胞培养物,啮齿动物模型,并进行了GydF4y2Ba离体GydF4y2Ba人体肺部已经表明的MSCs减轻由博莱霉素急性肺损伤的严重程度[GydF4y2Ba10GydF4y2Ba]或细菌脂多糖(LPS)[GydF4y2Ba11GydF4y2Ba,GydF4y2Ba12GydF4y2Ba]和作为有效的抗微生物处理[GydF4y2Ba13GydF4y2Ba]。而一些学者注射的MSCs静脉,别人灌输的细胞直接进入气管[GydF4y2Ba10GydF4y2Ba,GydF4y2Ba11GydF4y2Ba,GydF4y2Ba14GydF4y2Ba]两种方法均取得了明显的效果。GydF4y2Ba
然而,无论是间充质干可有效降低或调节VILI仍有待澄清。由于VILI的特点是肺部炎症和MSCS具有抗发炎的特性,这项工作的假设是这些成体干细胞可显着减轻VILI是前处理。因此,该实验研究的目的是研究在由高潮气量通气导致VILI的急性动物模型MSCs的潜在的治疗效果。鉴于对于MSCS应用的最佳途径治疗肺损伤是未知的,我们评估了这些干细胞静脉或气管内给药是否会导致VILI同样可能减少。GydF4y2Ba
方法GydF4y2Ba
动物GydF4y2Ba
这项研究是在38无病原体的雄性Sprague-Dawley大鼠进行的(250-300克; Criffa,法国里昂)被安置在光 - 暗周期调节的空调(23℃)和空气湿润该(60%)动物房和标准食物颗粒自由获得(A04; Panlab,巴塞罗那,西班牙)和自来水。此实验工作是经伦理委员会为巴塞罗那大学的动物研究。GydF4y2Ba
间充质干GydF4y2Ba
由杜兰中心基因治疗(Tulane大学,LA,USA)友情提供Lewis大鼠骨髓基质细胞中使用了这项研究。这些细胞被很好地表征[GydF4y2Ba15GydF4y2Ba]并在一些已发表的报告中使用,对相关的MSC表面标记物呈阳性/阴性,并且能够发展成骨、软骨和脂肪分化。细胞(第6-11代)在添加20%胎牛血清(FBS;Hyclone细胞培养,Logan,UT,USA)的MEM-α(Gibco;Gaithersburg,MD)中培养,1%抗生素-抗真菌(10000 U·mLGydF4y2Ba-1GydF4y2Ba青霉素G钠,万微克·毫升GydF4y2Ba-1GydF4y2Ba硫酸链霉素,25微克·毫升GydF4y2Ba-1GydF4y2Ba两性霉素B;Gibco)和2%的GydF4y2Ba升GydF4y2Ba谷氨酰胺(氯化钠200mM的在0.85%; Gibco)中。细胞在培养箱中生长(37℃,5%COGydF4y2Ba2GydF4y2Ba,100%湿度)。亚汇合的细胞用0.25%胰蛋白酶和1mM EDTA在Hanks'平衡盐溶液(Gibco)的解离,并在新的培养瓶中低密度传代培养。GydF4y2Ba
MSCs给药与VILI诱导GydF4y2Ba
动物用皮下注射生理盐水溶液水合,并用10%的氨基甲酸乙酯(每300克体重5毫升; Sigma公司,圣路易斯,MO,USA)腹膜内麻醉的。大鼠的直肠温度的36.5-37.5℃,在整个过程的范围内保持。将动物随机分为4组(每组n = 8)。一个对照组保持在用于实验的整个持续时间自主呼吸,而其他三组大鼠分别tracheostomised和插管(套管16GA BD Adsyte临,Becton Dickinson公司;马德里,西班牙)。随后,一组保持下自主呼吸和来自另一两组动物接受以下的干预:1)的5×10喷射GydF4y2Ba6GydF4y2Ba骨髓间充质干细胞经阴茎静脉用0.3ml无菌的Dulbecco磷酸盐缓冲液(DPBS)稀释;2)气管内滴注含5×10的0.3ml DPBSGydF4y2Ba6GydF4y2Ba通过插管插管的MSC。在气管内滴入实验中,大鼠保持在抬头倾斜位置,以防止MSC溢出。自主呼吸的30分钟后,将三组插管的大鼠进行高容量通风以诱导VILI。为此,将大鼠通过泮库溴铵(0.4毫克输注·千克瘫痪GydF4y2Ba-1GydF4y2Ba体重;P1918,Sigma)的入阴茎静脉和迅速地连接到动物呼吸机(哈佛仪器,型号683;南内蒂克,MA,USA)。将动物在80次呼吸·min的速率通入室内空气GydF4y2Ba-1GydF4y2Ba用25毫升的高潮气量·公斤GydF4y2Ba-1GydF4y2Ba。高容量通气(或对照组中的自主呼吸)的3个小时后,将大鼠通过放血处死。GydF4y2Ba
获取和处理支气管肺泡灌洗液GydF4y2Ba
放血后,左主支气管与左侧肺门串绑。通过连接一个注射器放入气管插管,然后通过它的冲洗3毫升无菌磷酸盐缓冲盐水四次从右肺得到支气管肺泡灌洗液(BALF)。BALF回收率始终大于85%。在BALF细胞计数上的血球(纽鲍尔,Marienfeld的,劳达 - 柯尼希斯霍芬,德国)从通过细胞离心制得载玻片(的Shandon细胞离心涂片器4,热电公司,玛丽埃塔,OH,USA)和DIFF-快速染色(Pancreac QUIMICA SAU;巴列斯堡,西班牙)。对于每只大鼠,大约500个细胞进行计数。此外,BALF在1300×离心GydF4y2BaGGydF4y2Ba10分钟并储存在-80℃下用于随后的分析上清液。GydF4y2Ba
肺湿/干重比GydF4y2Ba
左侧肺部被解剖,放血后,水肿评估和记录湿重。然后将肺放置在培养箱中在55℃下24小时,并测定干重。GydF4y2Ba
组织学检查GydF4y2Ba
右取出肺,一个肺叶固定在10%多聚甲醛。切除的肺组织的组织学分析由两个独立的专家知道治疗进行,使用用苏木精和曙红(H&E)染色4微米的部分。(;韦茨拉尔,德国的Leitz微)的计算机化的分析通过用Leica DMD108数字显微成像设备的每个整H&E染色的部分的图像数字式捕获进行。全肺切片,手动排除非实质结构的阈值分析(GydF4y2Ba例如GydF4y2Ba由不知情的研究者桑尼维尔,CA,USA);大血管,气道结构元件和连接结构),通过使用的Metamorph图像分析软件(Molecular Devices公司进行。为此,红 - 绿 - 蓝的彩色图像分割成各个颜色通道和分析使用的绿色通道执行者。然后,将阈值调整为将突出实质的所有区域,同时排除背景的最高点。测量并记录总实质的阈值区域。然后该阈值是复位以突出显示仅高像素密度的区域与肺损伤(损伤阈值)相关联,如通过显微区域的图像分析来确定。等于阈值应用到所有在所有组分析的图像。甲肺损伤指数计算为相对于总面积实质受损区域的比率,并且这被报告为相对于对照肺倍的增加(不通风的大鼠)[GydF4y2Ba16GydF4y2Ba]. 此外,一位病理学家对大鼠的实验条件视而不见,根据以下量表对右肺组织制剂进行评分:0:正常肺;1:间隔充血;2:间隔炎性浸润;3:肺泡出血和/或透明膜。GydF4y2Ba
MSC染色GydF4y2Ba
的MSC(5×10GydF4y2Ba6GydF4y2Ba)为荧光标记与Vybrant细胞-DiI(1,1'-双十八烷基-3,3,3' ,3'- tetramethylindocarbocyanine高氯酸盐)细胞标记溶液(Molecular Probes公司,卡尔斯巴德,CA,USA)处理20分钟,在37℃下然后洗涤并重悬于用DPBS。标记后,间充质干气管内或静脉内的额外六只大鼠如前所述施加。从MSC右肺预处理经受高体积通风的大鼠在Tissue-Tek的(樱Finetechnical,东京,日本)光切断温度(OCT)化合物通过浸没在液氮中冷冻。冷冻切片(10μm厚)附着于玻璃载片上预先涂有聚GydF4y2Ba升GydF4y2Ba赖氨酸,在福尔马林中固定10分钟,并通过荧光显微镜分析(Eclipse中的Ti;尼康仪器公司,NY,USA)GydF4y2Ba
免疫组化GydF4y2Ba
血管细胞粘附蛋白(VCAM)-1在肺组织中的表达是通过使用单克隆抗体进行评估(H-276:SC-8304; Santa Cruz Biotechnology公司公司,CA,USA)按照制造商的对石蜡包埋的组织的协议。免疫反应性是由标记的链霉生物素碱性磷酸酶技术(DAKO Cytomation公司,Glostrup的,丹麦)显露。肺切片用苏木精复染,并通过研究者盲到组中的样本的读出。VCAM-1定量通过使用计算机化的分析,如先前所报道的进行,并作为相对于总面积实质VCAM-1表达面积的比例来计算。GydF4y2Ba
RNA提取和实时PCRGydF4y2Ba
从肺组织的总RNA与总理脚本RT试剂盒(TAKARA BIO INC,大津,日本)分离。然后将总RNA定量和质量通过使用分光光度计进行评估(BioPhotometer生物分光光度计;艾本德,汉堡,德国)。总共100纳克·μLGydF4y2Ba-1GydF4y2Ba的RNA,根据制造商的说明书,使用的Taqman主混合物(Applied Biosystems公司,福斯特城,CA,USA)用于逆转录酶PCR。定量实时PCR(Applied Biosystems)上进行使用利用基因特异性引物来分析组织分布(IDT;集成DNA技术,德国),白细胞介素(IL)-1受体拮抗剂(IL-1RA)引物1:5'-AGCGGATGAAGGTAAAGCG-3',引物2:5'-CTGTGCCTGTCTTGTGTCA-3';角质细胞生长因子(KGF)引物1:5'-CACAATTCCAACTGCCACAG-3'引物2:5'GGATTGACAAACGAGGCAAAG-3';肝细胞生长因子(HGF)引物1:5'-CAAACTAACCATCCACCCTACT-3',引物2:5'-ATTGCCCTATTTCCCGTTGT-3'。甘油醛-3-磷酸脱氢酶的表达水平被用作内部对照;引物1:5'-GTAACCAGGCGTCCGATAC-3',引物2:5'-GTTCTAGAGACAGCCGCATC-3'。GydF4y2Ba
细胞因子和蛋白质测量GydF4y2Ba
BALF中的总蛋白浓度使用微型BCA蛋白检测试剂盒(皮尔斯,洛克福德,IL,美国)进行定量。采用ELISA法测定BALF中IL-1β和巨噬细胞炎性蛋白-2(MIP-2)的含量。GydF4y2Ba
统计分析GydF4y2Ba
结果以平均值±GydF4y2BaSEMGydF4y2Ba。ANOVA与费舍尔的保护至少显著差异为GydF4y2Ba事后GydF4y2Ba用于多组比较(STATVIEW 5.0.1;算盘概念,伯克利,CA,USA)分析。统计学显着性确定为p <0.05。GydF4y2Ba
结果GydF4y2Ba
采用湿/干重比法评估的过度通气动物肺水肿明显大于对照组。在过度通气的动物中,骨髓间充质干细胞预处理可将水肿降低到与对照组非常接近的数值。MSCs气管内和静脉给药途径也有类似的改善(GydF4y2Ba图。1AGydF4y2Ba)。从肺组织的两个组织学分析获得的结果,计算机化肺损伤指数和视觉评分提供一致的结果(GydF4y2Ba图1BGydF4y2Ba和c)。而肺损伤是在过度通气MSC-未经处理的动物显著检测(GydF4y2Ba图1BGydF4y2Ba,c和2b)中,在大鼠与MSC预处理,无论给药途径,肺损伤显着减少(GydF4y2Ba图1BGydF4y2Ba,c、2c和d)。GydF4y2Ba图2c-克GydF4y2Ba表明MSCs仅在静脉注射的情况下定位于组织切片。GydF4y2Ba
图3GydF4y2Ba示出了BALF细胞计数的结果:嗜中性粒细胞显著增加和在过通风动物的巨噬细胞显著降低,而与MSC,静脉内或气管内的前处理,降低的嗜中性粒细胞和巨噬细胞增加(GydF4y2Ba图3aGydF4y2Ba和B分别)。数据GydF4y2Ba图4GydF4y2Ba提示骨髓间充质干细胞仅在气管内应用的情况下定位于BALF。在过度通气的动物中,经MSCs静脉或气管内预处理的BALF中细胞总数几乎正常(1.70±0.14×10GydF4y2Ba4GydF4y2Ba细胞·mLGydF4y2Ba-1GydF4y2Ba和1.72±0.27×10GydF4y2Ba4GydF4y2Ba细胞·mLGydF4y2Ba-1GydF4y2Ba,分别地),同时它们在过通风大鼠的BALF减少与对照(1.28±0.22×10相比GydF4y2Ba4GydF4y2Ba细胞·mLGydF4y2Ba-1GydF4y2Ba和1.94±0.19×10GydF4y2Ba4GydF4y2Ba细胞·mLGydF4y2Ba-1GydF4y2Ba, 分别;P <0.05)。GydF4y2Ba
图5a-CGydF4y2Ba显示,总蛋白的浓度,在BALF促炎症细胞因子IL-1β和MIP-2在经受高量通气比对照MSC-未处理的动物分别为显著高。的MSC,静脉内或气管内,在过度通气大鼠的应用显着地降低在BALF总蛋白质的量,IL-1β和MIP-2(GydF4y2Ba图。5A - ÇGydF4y2Ba)。GydF4y2Ba图5dGydF4y2Ba还示出了实时PCR结果显示在MSC的肺中IL-1RA的mRNA水平增加显著预治疗组与对照组相比,并经受高量通气动物。在肺组织中HGF和KGF的mRNA分析没有揭示各组之间的任何差异显著(未示出数据)。GydF4y2Ba
VCAM-1的表达,通过肺组织的免疫组化检查评价,被认为是更大的过通风组(GydF4y2Ba图。6BGydF4y2Ba),而与MSC前处理,静脉内或气管内,VCAM-1降低到水平接近对照值(GydF4y2Ba图。图6a,C,d和eGydF4y2Ba)。GydF4y2Ba
讨论GydF4y2Ba
在这个实验性的量通气模型证实了所得结果的假设,干细胞防止高振幅机械通气引起的肺损伤。有人还发现,MSCs的早期潜在的治疗效果为本地(气管内)相似,全身(静脉)输液。的MSC在肺组织中只在壳体局部这些细胞静脉内注射,而施加的MSC气管内只在BALF中发现。GydF4y2Ba
该研究用VILI的共同大鼠模型进行的,过度扩张的典型大小(25毫升·千克GydF4y2Ba-1GydF4y2Ba)和有害机械刺激的持续时间(3小时)[GydF4y2Ba17GydF4y2Ba]. 肺过度膨胀动物表现出预期的VILI模式,即肺屏障完整性丧失和肺部炎症。肺泡毛细血管屏障通透性增加引起的肺水肿,从肺湿/干重比的正常值增加到过度通气动物的典型值[GydF4y2Ba17GydF4y2Ba]。因此,病理组织学组织分析显示在接受高体积通风的相当大的动物的肺损伤。此外,细胞和BALF的蛋白质分析表明VILI在经受过度扩张动物图案清晰:1)嗜中性粒细胞的数量增加,引起增强内皮细胞和上皮通透性[GydF4y2Ba1GydF4y2Ba,GydF4y2Ba18GydF4y2Ba]。2)降低肺泡巨噬细胞,与在巨噬细胞中BALF的迅速下降是一致的计数在其他作品中响应于高容量通风[GydF4y2Ba19GydF4y2Ba]和归因于他们的快速激活炎症[GydF4y2Ba20GydF4y2Ba]。3)在肺屏障增加的总蛋白质浓度,泄漏的标志[GydF4y2Ba1GydF4y2Ba,GydF4y2Ba17GydF4y2Ba]。4)增强细胞因子MIP-2和IL-1β的浓度,患者肺中的最具有生物活性的细胞因子与ALI [间GydF4y2Ba21GydF4y2Ba,GydF4y2Ba22GydF4y2Ba]。5)在肺组织,提高VCAM-1的表达,其在VILI [嗜中性粒细胞和淋巴细胞隔离重要的作用GydF4y2Ba23GydF4y2Ba]. 综上所述,这些常见的肺损伤生物标记物表明,接受大容量通气和未经MSCs治疗的动物出现了VILI。GydF4y2Ba
而在成体干细胞在肺损伤的保护作用的一些研究已经进行了使用骨髓来源的单核细胞,包括间充质细胞和造血干细胞[GydF4y2Ba4GydF4y2Ba-GydF4y2Ba6GydF4y2Ba],在这项工作中,我们专门关注MSCs。我们使用了特性良好的MSCs[GydF4y2Ba15GydF4y2Ba]和在与不同剂量保持施加多个小区在文献中报道,当这些干细胞被施加,静脉内或气管内,在大鼠和小鼠[GydF4y2Ba10GydF4y2Ba,GydF4y2Ba24GydF4y2Ba]。GydF4y2Ba
与MSC前处理是有效显著减少VILI中受到过度换气大鼠的发展。我们的研究结果清楚地表明,在所有动物评估与MSC预处理变量表现出对恢复控制值的趋势,GydF4y2Ba即GydF4y2Ba水肿和肺损伤的组织学指标;嗜中性粒细胞和巨噬细胞的细胞计数和生物分子在BALF和肺组织浓度增加的mRNA IL-1RA的表达。总之,这些数据提供了坚实的证据是,局部炎症过程和由高容量通风诱导肺微血管膜完整性的损失相关联的被显着减小。MSC的最小化VILI的表现的效力是在协议与博来霉素或LPS诱导的肺损伤[观察结果GydF4y2Ba10GydF4y2Ba,GydF4y2Ba11GydF4y2Ba]。GydF4y2Ba
从在ALI模型bleomicyn或LPS的数据还表明,干细胞的保护作用可能是注射途径不管类似,[GydF4y2Ba10GydF4y2Ba,GydF4y2Ba11GydF4y2Ba,GydF4y2Ba14GydF4y2Ba]。我们集团展示的证据第一,在一个研究中,MSC的静脉内或气管内给药可能导致VILI的减少同样的潜在效益。我们观察到,干细胞注入GydF4y2Ba通过GydF4y2Ba肺泡内途径在BALF中得到恢复,强调这种注射方法可以最大限度地促进肺泡内细胞的输送并直接到达损伤部位。当给药MSCs时GydF4y2Ba通过GydF4y2Ba然而,全身路径却局限于肺泡区,证实了MSCs首先到达肺微循环的发现。它们在肺中的滞留可能是由于它们的毛细血管直径较大,以及粘附分子如VCAM-1和P-选择素的表达[GydF4y2Ba25GydF4y2Ba]。然而,事实上,干细胞的全身应用可以像在防止肺损伤可能具有一定的实际临床相关性静脉内给药局部应用有效的患者,即使是那些谁是插管和机械通气比气管内给药简单得多。GydF4y2Ba
由于一些研究表明,在肺的间充质干肺移植不会很容易出现,MSCs对减少不同型号ALI肺损伤的能力,目前归因于旁分泌作用[GydF4y2Ba26GydF4y2Ba,GydF4y2Ba27GydF4y2Ba]。不论递送途径的,MSC可以减少肺损伤,并通过与受伤居民肺泡上皮或肺的内皮细胞相互作用促进修复,或通过用若干分泌的因子,如释放调节的中性粒细胞,单核细胞,活化的巨噬细胞,淋巴细胞的响应血管生成素(ANG)-1,前列腺素EGydF4y2Ba2GydF4y2Ba(PGEGydF4y2Ba2GydF4y2Ba),IL-1RA,转化生长因子-β(TGF-β)。此外,MSCs可分泌具有细胞保护和修复功能的生长因子,如血管内皮生长因子(VEGF)、KGF和HGF[GydF4y2Ba五GydF4y2Ba,GydF4y2Ba26GydF4y2Ba,GydF4y2Ba27GydF4y2Ba]。在我们的急性研究中,我们观察到增加的IL-1RA mRNA的表达肺组织中当过通风动物与MSC预处理,不论给药途径,而其中被检测KGF或HGF的表达没有发生重大变化所有群体伤害通风的3小时后。在一个LPS诱导的ALI模型,在促炎细胞因子一显著降低(肿瘤坏死因子(TNF)-α,MIP-2),并增加了抗炎性细胞因子,包括IL-10和IL-13,观察到当给予的MSCGydF4y2Ba通过GydF4y2Ba气管内途径[GydF4y2Ba11GydF4y2Ba]。当MSC的培养基用于治疗LPS诱导的ALI的在施用均达到相似的结果GydF4y2Ba离体GydF4y2Ba灌注人肺[GydF4y2Ba14GydF4y2Ba]。进一步的证据表明,MSC或调理媒介发布的旁分泌因子在ALI的逆转起到有益的作用来源于研究肺损伤的围产期高氧模型[GydF4y2Ba28GydF4y2Ba]。GydF4y2Ba
我们的研究设想测试的假设,干细胞可减少VILI。虽然实验设计是接近使用啮齿动物模型VILI和MSCS输液传统的研究,目前的工作显示,因为变量不是所有的可能的范围一定的局限性进行了调查。为了诱导VILI我们没有研究不同的呼吸机参数(潮气量,正呼气末正压(PEEP)或压力 - 而不是容量控制通气效果的幅度)。先前的研究,但是,表明这些变量可以调节VILI的幅度而不是它的机制和后果(肺膜渗漏和炎症)GydF4y2Ba29GydF4y2Ba]。另一个限制,共同与大多数研究的研究与治疗的MSCs大约是间充质干灌输的关于有害刺激的开始时间,在我们的研究中,机械通气。无论MSCs的保护作用可以依据这些参数仍有待澄清。的影响可能会有所不同,事实上,如果的MSCs作为预防性治疗和不同浓度的方面,我们使用,或一旦肺损伤已经确立的那些应用。最后,我们专注于VILI(3小时)的早期影响。扩展实验的时间将允许评估更详细的研究,特别是在中期不同的生物标志物和长期发挥的表达和作用。因此,在VILI的慢性模型MSC的潜在治疗效果还需要进一步调查。具体而言,今后的实验评估的MSCs对已经确立VILI的作用是主要感兴趣的更好的方法的临床问题。不管它的局限性,这是第一次,就我们所知,它提供的证据的概念,利用MSC局部和全身治疗前可以在保护免受由高振幅的机械通气伤害肺部发挥作用。GydF4y2Ba
骨髓间充质干细胞正在成为一种潜在的治疗手段。事实上,使用这种细胞的大量临床试验最近已经完成,或正在进行中,用于各种疾病,包括急性心肌梗死、缺血性心力衰竭、肾衰竭、多发性硬化、髋关节无菌性坏死、炎症性肠病,成骨不全和呼吸系统疾病,如特发性肺纤维化和慢性阻塞性肺疾病[GydF4y2Ba五GydF4y2Ba]。迄今为止,大多数的MSCs的研究已经从骨髓中获得的细胞进行。据预计,不过,从更容易获得的壁龛,干细胞,例如脐带血,特别是脂肪组织,可以促进MSCs的异源和自体输液两种。虽然来自不同的壁龛的MSC也表现出一定的差异,它们的主要生物学特性是相似的。事实上,一些研究表明,从脂肪组织和骨来源的MSC的骨髓类似地执行,例如缺血性中风的治疗[GydF4y2Ba三十GydF4y2Ba]。因此,这两种类型的成体干细胞的临床试验[目前使用GydF4y2Ba31GydF4y2Ba]。因此,很可能是未来的研究能够证明从除骨髓等网站获得的MSCs也可以减轻VILI,更普遍,ALI / ARDS有帮助。GydF4y2Ba
致谢GydF4y2Ba
作者感谢I.Almendros、R.Nieto和M.A.Rodríguez(西班牙巴塞罗那大学医学院生物物理和生物工程系)提供了宝贵的技术帮助。这项工作中使用的间充质干细胞由美国新奥尔良杜兰基因治疗中心提供。GydF4y2Ba
脚注GydF4y2Ba
支持声明GydF4y2Ba
这项研究得到了Innovación科学部(SAF2008-02991和PI081908)的部分支持。五十、 奇门蒂是欧洲呼吸学会和玛丽·居里联合研究奖学金(MC1636-2010)的获得者。导致这些结果的研究得到了欧洲呼吸学会和欧洲共同体第七个框架计划FP7/2007-2013——M188bet官网地址arie Curie根据RESPIRE赠款协议采取的行动,PCOFUND-GA-2008-229571的资助。GydF4y2Ba
利益声明GydF4y2Ba
无声明。GydF4y2Ba
- 收到GydF4y2Ba2011年9月6日。GydF4y2Ba
- 公认GydF4y2Ba2012年2月14日。GydF4y2Ba
- ©ERS 2012GydF4y2Ba
参考GydF4y2Ba
- ↵GydF4y2Ba
- ↵GydF4y2Ba
- ↵GydF4y2Ba
- ↵GydF4y2Ba
- ↵GydF4y2Ba
- ↵GydF4y2Ba
- ↵GydF4y2Ba
- ↵GydF4y2Ba
- ↵GydF4y2Ba
- ↵GydF4y2Ba
- ↵GydF4y2Ba
- ↵GydF4y2Ba
- ↵GydF4y2Ba
- ↵GydF4y2Ba
- ↵GydF4y2Ba
- ↵GydF4y2Ba
- ↵GydF4y2Ba
- ↵GydF4y2Ba
- ↵GydF4y2Ba
- ↵GydF4y2Ba
- ↵GydF4y2Ba
- ↵GydF4y2Ba
- ↵GydF4y2Ba
- ↵GydF4y2Ba
- ↵GydF4y2Ba
- ↵GydF4y2Ba
- ↵GydF4y2Ba
- ↵GydF4y2Ba
- ↵GydF4y2Ba
- ↵GydF4y2Ba
- ↵GydF4y2Ba