文摘gydF4y2Ba
Anti-neutrophil细胞质抗体(c-ANCA)针对蛋白酶3 (PR3)发病机制中涉及的韦格纳肉芽肿病(WG)。暴发性疾病可呈现急性肺损伤(ALI)。gydF4y2Ba
在这项研究中,阿里在WG开发使用孤立的模型大鼠肺。多形核白细胞(中性粒细胞)的被试孤立的人类肿瘤坏死因子(TNF)诱导表面PR3的表情。gydF4y2Ba
Co-perfusion TNF-primed中性粒细胞和单克隆抗体anti-PR3诱发大规模体重增加隔离肺。这种效应控制时没有被观察到免疫球蛋白G与TNF-primed co-perfused中性粒细胞。c-ANCA-induced水肿的形成不是一个增加毛细过滤系数作为肺内皮通透性增加的标志。相比之下,肺动脉压力没有影响。存在的氧自由基清除剂超氧化物歧化酶和NADPH氧化酶抑制剂,c-ANCA-induced肺部水肿可以预防。抑制中性粒细胞弹性蛋白酶也同样有效预防c-ANCA-induced肺损伤。gydF4y2Ba
总之,anti-PR3抗体诱导中性粒细胞介导,弹性蛋白酶-阿里和氧气radical-dependent孤立肺。这个实验模型支持假说的致病作用c-ANCA WG和提供可能的治疗策略的发展治疗暴发性WG的肺损伤。gydF4y2Ba
急性肺损伤(ALI)是一种罕见但致命的并发症的韦格纳肉芽肿病(WG)gydF4y2Ba1gydF4y2Ba。在WG阿里通常发生急性肾小球肾炎pulmonary-renal综合症,特点是弥漫性肺泡出血和水肿形成和外渗血组件,主要是红细胞和中性粒细胞,进入肺泡空间gydF4y2Ba2gydF4y2Ba。组织学检查在WG阿里被定义为肺毛细管炎破坏的肺内皮完整性作为公认的潜在的病理生理机制gydF4y2Ba3gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
中性粒细胞的激活和轮回被认为在阿里的发展发挥着重要作用gydF4y2Ba4gydF4y2Ba在某些实验模型的严重性阿里在中性粒细胞减少损耗gydF4y2Ba5gydF4y2Ba。Neutrophil-derived介质与阿里的发病机理是活性氧(ROS),蛋白酶和阳离子蛋白,以及促炎细胞因子,如肿瘤坏死因子(TNF)gydF4y2Ba6gydF4y2Ba,gydF4y2Ba7gydF4y2Ba。这些介质也发现循环和提升,在髓过氧化酶(MPO)和过氧化物酶的情况下,患者的支气管肺泡液体(BALF)活动的描写。这些neutrophil-derived产品被证明的水平与临床疾病活动gydF4y2Ba8gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba10gydF4y2Ba。此外,循环显示中性粒细胞的活化表型活跃的描写gydF4y2Ba11gydF4y2Ba和中性粒细胞损耗大大减少实验诱导的严重性anti-neutrophil细胞质自身抗体(ANCA)相关血管炎gydF4y2Ba12gydF4y2Ba。因此,激活中性粒细胞似乎发展的主要效应细胞炎性组织损伤与描写相关联。gydF4y2Ba
中性粒细胞激活机制的描写都进行了广泛的研究在过去的几十年中,,除了出色的角色作为诊断标记,循环“经典”anti-neutrophil细胞质自身抗体(c-ANCAs)针对中性粒细胞颗粒蛋白proteinase-3 (PR3)认为与致病的潜在在WG炎症性血管病变的发展,因为他们可以激活中性粒细胞gydF4y2Ba在体外gydF4y2Ba13gydF4y2Ba。在中性粒细胞,自动抗原PR3表达在细胞表面的反应与促炎细胞因子,如肿瘤坏死因子启动gydF4y2Ba14gydF4y2Ba。anti-PR3抗体绑定到中性粒细胞激活多种炎性细胞功能,如呼吸爆发,脱粒和脂质介质和细胞因子的释放gydF4y2Ba15gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba17gydF4y2Ba。在leukocyte-endothelial共培养,多形核白细胞(中性粒细胞)坚持和溶解ANCA-activated内皮细胞gydF4y2Ba18gydF4y2Ba,gydF4y2Ba19gydF4y2Ba。而面向MPO的ANCAs最近被证明导致血管炎,肾炎动物模型gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba,人们很少知道的致病作用anti-PR3抗体在活跃WG肺部病变的发展。在此背景下,本研究的目的是阐明是否PR3 ANCAs参与在WG肺功能障碍的发病机制。在本质上,发现PR3 ANCAs强有力地激活中性粒细胞分离大鼠肺导致肺循环的肺部水肿的发展。水肿的形成是由于中性粒细胞弹性蛋白酶、氧自由基释放anti-PR3抗体的反应。因此,致病作用PR3 ANCA在WG建议的肺损伤。gydF4y2Ba
材料和方法gydF4y2Ba
材料gydF4y2Ba
无菌Krebs-Henseleit-hydroxyethylamylopectin缓冲区(港口)获得Serag-Wiessner(指甲,德国)。缓冲区包含120毫米氯化钠,氯化钾4.3毫米,1.1毫米KHgydF4y2Ba2gydF4y2Ba阿宝gydF4y2Ba4gydF4y2Ba24毫米NaHCOgydF4y2Ba3gydF4y2Ba,2.4毫米CaClgydF4y2Ba2gydF4y2Ba,1.3毫米MgClgydF4y2Ba2gydF4y2Ba和2.4 g·LgydF4y2Ba−1gydF4y2Ba葡萄糖以及5%(重量/体积)hydroxyethylamylopectin(分子量2000.000)作为一个肿胀的代理。OgydF4y2Ba2gydF4y2Ba、有限公司gydF4y2Ba2gydF4y2Ba和NgydF4y2Ba2gydF4y2Ba梅塞尔集团获得Griesheim (Herborn,德国)。gydF4y2Ba
Ficoll-Paque购买从淀粉微球(Upsalla、瑞典)。超氧化物歧化酶(SOD)、AAPVKC和同形像控制老鼠的免疫球蛋白G (Ig)gydF4y2Ba1gydF4y2Ba(MOPC-21)从σ(Deisenhofen、德国),而重组人类TNF-α从研发系统(德国威斯巴登)。NADPH氧化酶抑制剂二苯基碘鎓(DPI)是来自默克(Schwalbach、德国),而5-lipoxygenase (5-LO)激活抑制剂mk - 886是从Biomol(德国汉堡)。gydF4y2Ba
PBS是来自Gibco实验室(美国纽约大岛)。所有其他生化产品来自默克(达姆施塔特,德国)。gydF4y2Ba
小鼠单克隆抗体4 anti-PR3 a5(鼠标免疫球蛋白)购买从Wieslab AG(瑞典Lund),而兔多克隆反MPO抗体(DAKO A398)用于组织学染色是DAKO(德国汉堡)。藻红蛋白(PE)共轭goat-anti-mouse免疫球蛋白来自Dako,并汇集人类免疫球蛋白(Octagam)从Octapharma (Langenfeld,德国)。gydF4y2Ba
孤立的人类中性粒细胞gydF4y2Ba
中性粒细胞被离心从健康的捐赠者静脉血分离Ficoll-Paque梯度如前所述gydF4y2Ba17gydF4y2Ba。总之,EDTA-anticoagulated血液分层Ficoll-Paque和离心机400×gydF4y2BaggydF4y2Ba35分钟。之后清除单核细胞,红细胞沉淀在1%聚乙烯醇。剩余红细胞被低渗的溶菌作用,细胞在Ca洗两次gydF4y2Ba2 +gydF4y2Ba/毫克gydF4y2Ba2 +gydF4y2Ba无PBS, resuspended包含CaCl PBSgydF4y2Ba2gydF4y2Ba(1毫米)和MgSOgydF4y2Ba4gydF4y2Ba(1毫米)10gydF4y2Ba7gydF4y2Ba中性粒细胞·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba。细胞纯度> 97%,量化,流式细胞术和细胞> 96%,可行性评估的台盼蓝染料排斥。之前除了肺灌流液,中性粒细胞治疗与肿瘤坏死因子(2 ng·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba)30分钟诱导表面PR3的表情。gydF4y2Ba
流式细胞术gydF4y2Ba
测定PR3的表面表达,流式细胞术。总之,孤立的中性粒细胞(5×10gydF4y2Ba6gydF4y2Ba毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba与肿瘤坏死因子(2)孵化ng·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba)或sham-incubated 30分钟。在4°C细胞颗粒状,并在PBS resuspended包含0.1%的牛血清白蛋白和0.02%的叠氮化钠。然后,2×10gydF4y2Ba5gydF4y2Ba细胞被分发给每一个圆底的灵活microtitre盘子和洗。之前的单克隆抗体,20μL汇集人类免疫球蛋白(100μg·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba)被添加到块Fcγ受体。鼠单克隆抗体anti-PR3(10μg·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba)或鼠标控制免疫球蛋白(10μg·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba接着说,在4°C和孵化为30分钟。三个洗后,二级抗体,PE-conjugated goat-anti-mouse免疫球蛋白(50μg·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba)添加了一次又一次孵化30分钟在4°C。三次最后洗,细胞resuspended在PBS和保存在冰流仪分析。流式细胞术进行FACScan(美国正欲,山景,CA)使用前进和正交光散射选择可行的细胞。研究软件CellQuest®软件(becton dickinson)被用来分析生成的数据。gydF4y2Ba
肺隔离和灌注gydF4y2Ba
孤立的模型大鼠肺已经详细描述gydF4y2Ba21gydF4y2Ba,gydF4y2Ba22gydF4y2Ba。总之,男性CD老鼠(体重350 - 450克)深感与戊巴比妥钠(100 mg·公斤犀牛gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba体重gydF4y2Bai.p。gydF4y2Ba)。与2%利多卡因局部麻醉后正中切口,气管被解剖,立即插入气管插管。中间进行剖腹手术,随后老鼠实际上有1000单位的肝素。机械通气是公司为5.3%gydF4y2Ba2gydF4y2Ba,21%的人啊gydF4y2Ba2gydF4y2Ba和73.7% NgydF4y2Ba2gydF4y2Ba(潮汐卷4毫升,频率65分钟gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba2而言不啻,最后呼气压力gydF4y2Ba2gydF4y2BaO)使用小动物呼吸器KTR-4(雨果(goldman Sachs)电子、March-Hugstetten、德国)。midsternal后开胸,右心室切入,套管固定在肺动脉,心脏的顶端被切断了,让肺部静脉流出。同时跳动的灌注与加工制造含有5%羟乙基淀粉进行仔细和肺切除和放置在一个仰卧位。一个套管固定在左心房左心室获得一个封闭的灌注电路没有泄漏。广泛的血管床的清洗后,灌注肺的悸动的流13毫升·分钟gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba(总量150毫升)循环模型。左心房压力设定在2毫米汞柱基线条件下(0门引用)和整个灌注系统平衡在37.5°C。肺部研究选择的是那些:1)有一个同质的白色外观没有止血或水肿形成的迹象;2)肺动脉和通风压力在正常范围内;和3)isogravimetric稳态期间30分钟。gydF4y2Ba
肺动脉压(gydF4y2BaPgydF4y2Ba巴勒斯坦权力机构gydF4y2Ba),肺部静脉压力(gydF4y2BaPgydF4y2Ba光伏gydF4y2Ba)和孤立的器官的重量不断注册,gydF4y2BaPgydF4y2Ba巴勒斯坦权力机构gydF4y2Ba作为一个直接测量肺血管阻力。gydF4y2Ba
静脉压力不断升高的顺序静压10而言不啻的挑战gydF4y2Ba2gydF4y2BaO 8分钟。在稳态期间,肺肺重量被设定为零,计算体重的重量差异之前和之后的每一个静压挑战策略。gydF4y2Ba
毛细过滤系数计算边坡的体重增加,如前所述gydF4y2Ba23gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
试验协议gydF4y2Ba
灌注肺没有任何药物应用后180分钟。控制在标准条件下静水挑战(30分钟后开始灌注)TNF-primed中性粒细胞被添加到灌流液的最终浓度10gydF4y2Ba6gydF4y2Ba毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba。当表示,anti-PR3抗体(4 a5,μg·10毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba)或等量的isotype-matched控制免疫球蛋白(MOPC-21) co-perfused与人类中性粒细胞。所有药理代理人(DPI、SOD、mk - 886和AAPVKC)被混在灌流液之前第一静水挑战,并重新领读前第三流体静力学的挑战。gydF4y2Ba
组织学检查gydF4y2Ba
灌注期结束时,每个大鼠肺部固定用甲醛溶液滴剂(4.5%,pH值7.0)gydF4y2Ba通过gydF4y2Ba主支气管。固定被允许继续在室温下过夜。随后,组织被切割,通常嵌入在石蜡和部分5μm与haematoxylin-eosin染色。其他肺snap-frozen液氮与10月滴剂后(组织Tek,樱花,日本)gydF4y2Ba通过gydF4y2Ba主支气管。冷冻组织存储在-80°C。几分钟前的准备使用cryomicrotome cryosections (Bensheim徕卡荣格厘米3000年,德国)肺组织被切割成较小的组织块和5μm cryosections准备。在室温下干燥后一夜之间,这些部分存储在-20°C几天沾anti-MPO(1:6,000)用APAAP ChemMate工具包(K5000 DAKO)。苏木精是用来对比染色。蔡司Axioskop 40(卡尔蔡司,耶拿,德国)Plan-NEO Fluar 20×/ 0.5 NA客观的镜头,在连接JVC KY-S75U数码相机(JVC,弗里德伯格,德国)被用来获得显微图。图像处理Diskus采集软件,版本4.5 (hilger, Konigswinter,德国)。中性粒细胞聚集被定义为血管内中性粒细胞积聚达成的程度超过树木直径的肺泡隔至少在一个维度。定量是一式两份由两个盲评论者(m . Bohle和r·莫里茨)。gydF4y2Ba
统计数据gydF4y2Ba
进行统计比较,方差分析进行,其次是图基的诚实的显著差异在适当的时候进行测试。p < 0.05的水平被认为是重要的。gydF4y2Ba
结果gydF4y2Ba
Anti-PR3抗体诱导neutrophil-dependent水肿形成孤立的鼠肺gydF4y2Ba
为了确定中性粒细胞表面PR3的表达,特定ANCA-targeting先决条件,中性粒细胞受到流式细胞术在隔离程序。刚分离中性粒细胞表面表现出小的ANCA目标抗原的表达,而中性粒细胞与肿瘤坏死因子启动(2 ng·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba)诱导PR3的表面表达,评估通过流式细胞术(gydF4y2Ba图1gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
在基线条件下,180分钟和基线的隔离灌注大鼠肺肺重量在整个灌注期间保持稳定(控制)。灌注TNF-primed人类中性粒细胞(10gydF4y2Ba6gydF4y2Ba毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba没有引起任何体重增加,而同时灌注后TNF-primed人类中性粒细胞(10gydF4y2Ba6gydF4y2Ba毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba)和单克隆抗体anti-PR3(μg·10毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba)大规模肺部水肿形成,量化随着体重的增加,开发(gydF4y2Ba图2gydF4y2Ba)。重大发现体重增加后140分钟的灌注。有时候,由于大规模流体积累实验提前结束后180分钟。相比之下,co-perfusion的isotype-matched control-IgG TNF-primed人类中性粒细胞对肺生理没有施加任何影响。同样,灌注anti-PR3抗体在人类中性粒细胞的缺席或未灌注的中性粒细胞(数据未显示)的存在是无效的。gydF4y2Ba
孤立的肺组织学和免疫组织化学检查揭示了人类中性粒细胞的保留模型包括鼠肺。有时观察中性粒细胞轮回进入肺泡腔灌注肺与人类中性粒细胞(gydF4y2Ba图3gydF4y2Ba)。然而,没有差异anti-PR3之间的中性粒细胞浸润程度和控制免疫球蛋白灌注(gydF4y2Ba表1gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
肺部水肿形成anti-PR3-treated伴随着微血管渗漏的回应gydF4y2Ba
毛细过滤系数(gydF4y2BaKgydF4y2Baf、cgydF4y2Ba),之后从体重增加的斜率计算静脉压力的逐步提升,整个灌注期间保持稳定在治疗肺灌注与TNF-primed中性粒细胞(10gydF4y2Ba6gydF4y2Ba毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba)。然而,当anti-PR3抗体与人类中性粒细胞,co-perfused大幅增加gydF4y2BaKgydF4y2Baf、cgydF4y2Ba值平行水肿的形成(gydF4y2Ba图4gydF4y2Ba)。重要的海拔gydF4y2BaKgydF4y2Baf、cgydF4y2Ba值指出TNF-primed灌注后中性粒细胞和anti-PR3抗体。从肺重量数据,预期灌注anti-PR3抗体,以及co-perfusion TNF-primed中性粒细胞免疫球蛋白和鼠标控制,没有引起任何变化在孤立肺微血管屏障功能。gydF4y2Ba
PgydF4y2Ba巴勒斯坦权力机构gydF4y2Ba不受anti-PR3抗体的影响gydF4y2Ba
在控制实验中,gydF4y2BaPgydF4y2Ba巴勒斯坦权力机构gydF4y2Ba值是常数(6 - 7毫米汞柱)在整个实验周期。而gydF4y2BaPgydF4y2Ba巴勒斯坦权力机构gydF4y2Ba做了小幅升值后立即添加人类中性粒细胞,gydF4y2BaPgydF4y2Ba巴勒斯坦权力机构gydF4y2Ba3 - h灌注期间保持稳定,值得注意的是,co-perfusion anti-PR3抗体或控制免疫球蛋白g没有引起任何显著的变化gydF4y2BaPgydF4y2Ba巴勒斯坦权力机构gydF4y2Ba(gydF4y2Ba图5gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
氧自由基拾荒者对anti-PR3-induced肺部水肿形成的影响gydF4y2Ba
在SOD (300 U·mL的存在gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba从超氧化物(O)催化歧化作用gydF4y2Ba2gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba过氧化氢(H)gydF4y2Ba2gydF4y2BaOgydF4y2Ba2gydF4y2Ba),auto-antibody-induced体重增加是强烈减弱(gydF4y2Ba图6gydF4y2Ba)。NADPH氧化酶抑制剂DPI(5μg·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba与SOD)也同样有效,从而表明嗜中性粒细胞NADPH氧化酶是在我们的模型中过氧化物的来源。同样令人印象深刻的是这些氧自由基抑制干扰的影响微血管屏障功能:在草皮,海拔gydF4y2BaKgydF4y2Baf、cgydF4y2Ba值在治疗肺孤立anti-PR3抗体和TNF-primed中性粒细胞几乎正常化,和NADPH氧化酶抑制剂也同样保护(gydF4y2Ba图6 bgydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
中性粒细胞弹性蛋白酶的作用,但不是5-LO产品anti-PR3-induced肺部水肿的形成gydF4y2Ba
作为anti-PR3-induced肺部水肿的形成显然依赖于中性粒细胞的存在,其他中性粒细胞介质阿里被调查的贡献。抑制5-lipoxygenase激活mk - 886(7.5μM)并没有阻止肺部水肿的形成,以孤立肺的重量变化(gydF4y2Ba图7gydF4y2Ba)或增加gydF4y2BaKgydF4y2Baf、cgydF4y2Ba值(gydF4y2Ba图7 bgydF4y2Ba)。有趣的是,这两个反应强烈衰减,在的情况下gydF4y2BaKgydF4y2Baf、cgydF4y2Ba,正常控制的价值观,当特定的嗜中性粒细胞弹性蛋白酶抑制剂AAPVKC(5μM) co-perfused中性粒细胞和anti-PR3抗体(gydF4y2Ba图7gydF4y2Ba和b)。结合抑制ROS和SOD的中性粒细胞弹性蛋白酶AAPVKC没有添加剂或协同效应(数据没有显示)。gydF4y2Ba
讨论gydF4y2Ba
严重的临床表现工作组,如pulmonary-renal综合症或孤立的肺泡出血的特点是ALI的发生,需要立即治疗。anti-PR3抗体以来建议具有致病性WG的潜力,带来的问题是这些auto-antibodies能否诱导肺损伤。gydF4y2Ba
目前的研究提供了令人信服的证据记录ANCAs,针对中性粒细胞丝氨酸蛋白酶PR3,在一个孤立的致病性导致ALI大鼠肺模型。在灌注单克隆anti-PR3抗体和TNF-primed人类中性粒细胞在肺孤立的老鼠,发生肺血管通透性的增加,开始严重血管渗漏和水肿的形成。这种效应并不归因于增强毛细血管滤过压,作为gydF4y2BaPgydF4y2Ba巴勒斯坦权力机构gydF4y2Ba保持稳定,尽管anti-PR3挑战。Anti-PR3-induced肺损伤是严格依赖于靶抗原表达的存在,人类预先激活中性粒细胞,并引起中性粒细胞氧自由基的形成和弹性蛋白酶脱颗粒,而5-LO-metabolites没有涉及。gydF4y2Ba
孤立肺模型选择调查的致病作用anti-PR3抗体有几个原因。首先,尽管一个优雅的模型anti-MPO-associated肾血管炎gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba,没有有效的动物模型肺WG的存在。其次,肺部,除了肾脏、暴发性演示的器官系统最常受影响的描写,第三,孤立肺模型允许注册阿里急性病理生理变化的典型,如水肿形成和增加血管通透性gydF4y2BaPgydF4y2Ba巴勒斯坦权力机构gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
实验模型促进了孤立的灌注大鼠肺TNF-primed人类中性粒细胞和定义良好和广泛使用的鼠标反人类单克隆抗体4 anti-PR3 a5。人类中性粒细胞的co-perfusion靶细胞的小鼠单克隆anti-PR3-antibody 4 a5是必要的,当鼠标反PR3抗体与大鼠中性粒细胞在之前的研究没有交叉作用gydF4y2Ba24gydF4y2Ba,gydF4y2Ba25gydF4y2Ba和抗体鼠PR3,作为我们的知识的状态,而不是可用的。显然,孤立肺模型只反映急性anti-PR3抗体和致病性的影响不能替代anti-PR3-associated血管炎的动物模型。最近,成功的免疫啮齿动物与人类/鼠标PR3嵌合和随后的自体免疫反应的诱导老鼠和老鼠PR3被执行,从而提供新的视角研究anti-PR3-associated血管炎的发病机制gydF4y2Ba25gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
人类中性粒细胞被用于各种neutrophil-dependent器官损伤大鼠模型gydF4y2Ba22gydF4y2Ba,gydF4y2Ba26gydF4y2Ba目前,证明是有效的“困”在这些动物的肺泡毛细血管。然而,尽管只有anti-PR3抗体,而不是control-IgG-induced中性粒细胞介导的肺损伤在当前的模型中,我们不能观察到任何anti-PR3形态差异和control-IgG灌注肺。这种差异可能是由于中性粒细胞浸润的文档,没有不同的灌注量anti-PR3和免疫球蛋白的肺,并不一定反映中性粒细胞的激活状态的任何变化,也为其他肺损伤的模型描述gydF4y2Ba27gydF4y2Ba。的定量gydF4y2Ba原位gydF4y2Ba例如,中性粒细胞激活gydF4y2Ba原位gydF4y2Ba检测活性氧或弹性蛋白酶的脱粒,在这种情况下会很有帮助,但超出了当前的研究的范围。此外,严重损害肺的结构完整性不能指望发生在当前的短期实验,由于方法论上的限制(例如,使用无蛋白灌注液),水肿形成只能评估生理参数,如体重增加和增加毛细过滤系数,这的确是特定anti-PR3抗体。gydF4y2Ba
anti-PR3抗体诱导肺损伤的容量是严格依赖于PR3-expressing, TNF-primed人类中性粒细胞抗体gydF4y2Ba本身gydF4y2Ba没有引起任何孤立的鼠肺生理的变化在整个灌注。因此,任何非特定的中断当前使用的肺微血管完整性anti-PR3抗体可能被排除在外。此外,无论是灌注isotype-matched control-IgG和TNF-primed中性粒细胞肺血管通透性增加,也没有co-perfusion anti-PR3和未灌注的中性粒细胞,不表达表面PR3,目前执行流仪记录的研究。因此,针对特定的PR3,显示表达分离白细胞表面的肿瘤坏死因子启动后,与先前的研究一致gydF4y2Ba14gydF4y2Ba现在,随后启动多个特征明显的信号事件gydF4y2Ba28gydF4y2Ba,gydF4y2Ba29日gydF4y2Ba,似乎背后ANCA-mediated肺损伤。作为补充的实验没有来源,补体依赖机制,已涉及多种形式的锁定白细胞激活,包括摘要与阿里的模型gydF4y2Ba30.gydF4y2Baanti-PR3-associated肺损伤,没有手术。gydF4y2Ba
尽管anti-PR3-induced白细胞激活的确切分子机制并不完全清楚,anti-PR3-related肺损伤显然是由活性氧的形成,以及从anti-PR3-activated中性粒细胞弹性蛋白酶解放:存在的氧游离基清除剂SOD,降低催化过氧化物(OgydF4y2Ba2gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba过氧化氢(H)gydF4y2Ba2gydF4y2BaOgydF4y2Ba2gydF4y2Ba),ANCA-induced水肿形成完全逆转。显然,超氧化物和过氧化氢是主要的氧代谢物负责ANCA-mediated增加血管通透性。这一事实可以预防水肿形成的NADPH氧化酶抑制剂DPI表明NADPH氧化酶类过氧化物的主要来源是释放ANCA-induced肺损伤。尽管DPI干扰线粒体超氧化物生产gydF4y2Ba31日gydF4y2Ba微血管渗漏,明显的依赖关系的存在人类中性粒细胞嗜中性粒细胞NADPH氧化酶给出充分的理由作为源anti-PR3-induced肺损伤的过氧化物。符合这个推理的能力anti-PR3抗体诱导NADPH oxidase-dependent中性粒细胞过氧化物形成一再证明gydF4y2Ba在体外gydF4y2Ba15gydF4y2Ba,gydF4y2Ba16gydF4y2Ba和gydF4y2Ba在活的有机体内gydF4y2Ba组织损伤的程度,工作组与有毒代谢物激活中性粒细胞释放的氧的存在gydF4y2Ba32gydF4y2Ba。此外,增加水平的氧化应激的标记,例如喷气HgydF4y2Ba2gydF4y2BaOgydF4y2Ba2gydF4y2Ba和血液脂质过氧化水平,ALI患者被发现gydF4y2Ba7gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
除氧自由基,弹性蛋白酶显然是集中参与调停ANCA-induced肺损伤,表现的非常具体的弹性蛋白酶抑制剂AAPVCK的保护作用gydF4y2Ba33gydF4y2Ba。中性粒细胞弹性蛋白酶的一个关键的角色在肺损伤的模型假定由于其降解细胞外基质蛋白和蛋白酶抑制剂的能力gydF4y2Ba34gydF4y2Ba。弹性蛋白酶的作用在WG肺损伤的发病机制是完善:蛋白酶已经发现高架BALF和活动性疾病患者的循环gydF4y2Ba8gydF4y2Ba,gydF4y2Ba10gydF4y2Ba,解放从中性粒细胞刺激anti-PR3抗体gydF4y2Ba15gydF4y2Ba,gydF4y2Ba17gydF4y2Ba和最近发现ANCA-activated中性粒细胞调节内皮细胞损伤gydF4y2Ba在体外gydF4y2Ba34gydF4y2Ba,因此,非常符合目前的结果。gydF4y2Ba
有趣的是,抑制弹性蛋白酶或过氧化物形成完全逆转anti-PR3-induced肺损伤和联合应用两种抑制剂不能增强这种效果。这些发现可能与前面假设之间的协同氧化剂和嗜中性粒细胞弹性蛋白酶在肺损伤:在弹性蛋白酶在巨噬细胞增加氧自由基的形成gydF4y2Ba35gydF4y2Ba和肺上皮细胞gydF4y2Ba36gydF4y2Ba,氧自由基活性内生弹性蛋白酶抑制剂和增加弹性蛋白酶分离大鼠肺毒性gydF4y2Ba37gydF4y2Ba。因此,氧化剂,elastase-mediated组织破坏显然不是独立事件在这个模型的ANCA-induced肺损伤,并同时释放的介质是强制性的效果观察。gydF4y2Ba
之前它已经被证明中性粒细胞释放白细胞三烯与anti-PR3刺激抗体的反应gydF4y2Ba17gydF4y2Ba和5-LO产品已被证明参与leukocyte-mediated肺损伤gydF4y2Ba30.gydF4y2Ba。然而,一个高度的特定抑制剂5-LO激活没有施加任何anti-PR3-induced肺损伤的保护作用。因此,白细胞三烯在此模型不会导致组织损伤。这可能与白三烯代是非常依赖于衬底花生四烯酸的存在,这在目前的研究没有提供。虽然白细胞三烯的作用在调节ANCA-induced组织损伤的可能性不能排除gydF4y2Ba在活的有机体内gydF4y2Ba,这些介质不会导致阿里在实验条件下工作。gydF4y2Ba
总之,auto-antibodies针对中性粒细胞PR3可能参与肺损伤的发展至关重要的描写。协同效应anti-PR3-induced中性粒细胞氧自由基形成和弹性蛋白酶脱粒被确定为中央调节微血管损伤机制。药理干扰这些介质可能保护在WG的急性肺损伤。gydF4y2Ba
确认gydF4y2Ba
我们要感谢r·莫蒂(内科医学部门,UGLC吉森大学吉森,德国)仔细审查的手稿。gydF4y2Ba
脚注gydF4y2Ba
支持声明gydF4y2Ba
这项工作是支持的德意志Forschungsgemeinschaft (SFB 547 / B8 SFB 547 / Z1)和卓越集群心肺系统(DFG)。gydF4y2Ba
感兴趣的语句gydF4y2Ba
语句对n·韦斯曼R.T. Schermuly和f . Grimminger可以找到gydF4y2Bawww.www.qdcxjkg.com/misc/statement.dtlgydF4y2Ba
- 收到了gydF4y2Ba2008年9月18日。gydF4y2Ba
- 接受gydF4y2Ba2009年12月9日。gydF4y2Ba
- ©2010人队gydF4y2Ba
引用gydF4y2Ba
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