文摘gydF4y2Ba
端粒是复杂的dna蛋白质结构位于真核染色体的结束。端粒长度缩短在所有复制体细胞随着年龄的增长。它已经表明,吸烟增强端粒缩短循环淋巴细胞。本研究调查了这种效应是否进一步放大吸烟者慢性阻塞性肺疾病发展。gydF4y2Ba
端粒长度是由荧光gydF4y2Ba原位gydF4y2Ba杂交在循环淋巴细胞是从26不吸烟者,24吸烟者与正常肺功能和26个吸烟者是严重气流阻塞(在一秒钟用力呼气流量48±4%预测)。gydF4y2Ba
与不吸烟者相比,端粒长度显著减少吸烟者的年龄。也有量效关系累积寿命接触吸烟(pack-yrs)和端粒长度。的存在和/或严重慢性气流阻塞不修改这个关系。gydF4y2Ba
当前研究的结果证实,吸烟暴露提高端粒缩短循环淋巴细胞。它也演示了一个剂量暴露于吸烟和端粒长度之间的关系,但未能显示,这种效应放大在吸烟者慢性阻塞性肺疾病发展。gydF4y2Ba
吸烟是主要的风险因素对慢性阻塞性肺病(COPD)gydF4y2Ba1gydF4y2Ba。然而,仍然了解甚少的原因,只有一个百分比的烟民发展疾病gydF4y2Ba1gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
最近,巴尔德斯gydF4y2Ba等gydF4y2Ba。gydF4y2Ba2gydF4y2Ba已经证明,吸烟增强循环淋巴细胞端粒损失。端粒是复杂的dna蛋白质结构位于真核染色体,在所有复制体细胞随着年龄增长而缩短gydF4y2Ba3gydF4y2Ba,gydF4y2Ba4gydF4y2Ba。因此,端粒长度是细胞衰老和衰老的标志gydF4y2Ba5gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
加速肺功能下降率随着年龄的增长是中央慢性阻塞性肺病的病理生理特征之一gydF4y2Ba1gydF4y2Ba。在目前的研究中,作者们提出,吸烟在端粒长度缩短的影响将在吸烟者慢性阻塞性肺病开发,增强肺功能相比,那些被保留,尽管他们的习惯。为了验证这个假说,端粒缩短率与循环淋巴细胞收获从吸烟者的年龄和慢性阻塞性肺病。gydF4y2Ba
方法gydF4y2Ba
人口和道德gydF4y2Ba
这项研究包括50终生吸烟者,其中24正常肺功能和26与慢性阻塞性肺病根据国际准则的证据gydF4y2Ba1gydF4y2Ba,26不吸烟者。参与者与其他慢性疾病慢性阻塞性肺病比被排除在外。医院的伦理委员会Universitari儿子Dureta(西班牙马洛卡帕尔马)批准了研究和病人给他们的知情同意。gydF4y2Ba
肺功能测量gydF4y2Ba
迫使肺量测定法得到的所有参与者根据国际建议gydF4y2Ba6gydF4y2Ba。参考价值的地中海gydF4y2Ba7gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
淋巴细胞分离gydF4y2Ba
静脉穿刺获得的外周血样本。淋巴细胞分离的混合10毫升静脉血同等体积的PBS。其次是离心的2毫升层Ficoll-Paque研究级梯度(法玛西亚生物技术,乌普萨拉,瑞典)900×gydF4y2BaggydF4y2Ba30分钟22°C。淋巴细胞乐队了,洗了一次与PBS re-suspended端粒探针杂交的解决方案(端粒机构套件/ FITC流式细胞术;Dako斯特鲁普、丹麦)。gydF4y2Ba
测量端粒长度gydF4y2Ba
目前作者使用gydF4y2Ba原位gydF4y2Ba杂交的fluorescein-conjugated肽核酸(机构)端粒探针/异硫氰酸荧光素(FITC)gydF4y2Ba4gydF4y2Ba淋巴细胞在溶液中,制造商的方向(后端粒机构套件/ FITC流式细胞术;Dako)。端粒长度是确定相对端粒长度(RTL)与内部细胞系相比控制(1301细胞)gydF4y2Ba4gydF4y2Ba。该细胞系的特点是缺乏端粒缩短(因此,恒定的端粒长度)端粒酶在细胞分裂过程中由于过度gydF4y2Ba4gydF4y2Ba。简单地说,暂停包含2×10的混合物gydF4y2Ba6gydF4y2Ba淋巴细胞和2×10gydF4y2Ba6gydF4y2Ba在82°C的1301个细胞变性10分钟,和没有fluorescein-conjugated机构端粒探针杂交的解决方案。样本杂交一夜之间在室温和清洗在40°C清洗解决方案。他们然后用PBS re-suspended,包含dna染色溶液的缓冲。杂交、清洗和dna染色制造商所提供的解决方案(Dako)。证实了正确的杂交探针的荧光显微镜和印迹分析(图。1gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)。量化的RTL荧光是由流gydF4y2Ba原位gydF4y2Ba杂交(鱼)分析一个史诗XL流式细胞分析仪(美国贝克曼库尔特,富勒顿,CA),通过比较样本细胞端粒长度与1301个细胞。图2gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba显示了一个代表性的例子RTL决心在61年不吸烟的捐赠者和1301个细胞端粒长度(100%)。如图2所示gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba,细胞被封闭在区域1 (R1)的基础上propidium碘(PI)荧光和散射光。区域2(供体淋巴细胞)和3(1301细胞;R2和R3)选择R1内前进gydF4y2Ba与gydF4y2Ba一边散点图直方图(图2 bgydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)。图2 cgydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba和d显示前进gydF4y2Ba与gydF4y2BaR2和R3的散点图直方图(d)和(c)没有FITC-labelled机构端粒调查。端粒的荧光被减去均值计算背景荧光与端粒意味着获得的荧光探针,与(阴影直方图)或没有(打开直方图)FITC-labelled机构端粒探针(e和f)。gydF4y2Ba
一)荧光gydF4y2Ba原位gydF4y2Ba杂交后荧光显微镜的人类淋巴细胞(1301细胞株)执行相同的杂交条件用于探测器用于确定的相对端粒长度(见方法部分)。注意左边的间期核(箭头所示)和右侧metaphasic染色体显示杂交信号(绿色)的端粒DNA区域(蓝色)。b)代表印迹实验显示端粒DNA探针杂交从人类淋巴细胞提取大(A)、(b)低的端粒长度;H和L代表控制DNA标记与大型和较低的端粒长度,分别。gydF4y2Ba
模拟)流荧光gydF4y2Ba原位gydF4y2Ba杂交分析的外周淋巴细胞健康的61年的非吸烟者捐赠者和1301年人类淋巴细胞四倍体的细胞(内部参考价值:端粒长度100%)分析了杂交后(▒)和没有(□)isothiocyanate-labelled肽核酸端粒探针荧光素(e和f)。e)是指区域2 (R2)和f)是指地区3 (R3)。有关详细信息,请参阅部分的方法。在这个特殊的例子(e和f),相对端粒长度(RTL)计算(平均FL1样本细胞probe-mean FL1样本细胞没有探头)××100 / DNA指数控制细胞(平均FL1 1301细胞probe-mean FL1控制细胞没有探头)×DNA样本细胞指数。因此,RTL = (34.4 - -15.1)×2×100 / (384.8 - -29.3) = 19.3×1×2×100/355.5×1 = 10.85%。FL1:荧光检测器1;PI: propidium碘;R1: 1。*:19.3;gydF4y2Ba#gydF4y2Ba:355.5。gydF4y2Ba
统计分析gydF4y2Ba
结果表示为±gydF4y2Ba扫描电镜gydF4y2Ba。未配对t检验是用来比较组。皮尔森相关分析是用来调查潜在的利益变量之间的关系。gydF4y2Ba
结果gydF4y2Ba
表1gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba显示了人口的主要临床和功能特性进行了研究。所有与会者都类似年龄的男性。累积接触吸烟的吸烟者之间(pack-yrs)没有明显不同与正常肺功能和慢性阻塞性肺病患者。根据定义,肺量测定法是正常的在不吸烟者和吸烟者肺功能正常,而慢性阻塞性肺病患者显示严重气流阻塞gydF4y2Ba1gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
临床和功能特征的人口研究gydF4y2Ba
如图3所示gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba年龄范围内,研究了RTL在不吸烟者并没有随着年龄的增长而减少。相比之下,在同一年龄段,RTL与年龄显著降低吸烟者(图3 bgydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba),不管存在(关闭符号)或缺乏对慢性阻塞性肺病(打开符号)。累积的影响吸烟暴露在RTL进一步支持的明显的量效关系发现pack-yrs和RTL(图3 cgydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)。吸烟者之间的重叠与正常肺功能(开放的符号)和慢性阻塞性肺病(封闭的符号)表明,这种影响是独立于慢性气流梗阻的存在与否。gydF4y2Ba
![图3 -gydF4y2Ba](http://www.qdcxjkg.com/content/erj/27/3/525/F3.medium.gif)
相对端粒长度之间的关系(RTL)和年龄,在不吸烟者(假定值是无意义的)和b)吸烟者(p = 0.05, r =−0.27)。c)累积吸烟暴露(pack-yrs;p < 0.001, r =−0.45)。□:从未吸烟者;○:吸烟者肺功能正常;•:吸烟与慢性阻塞性肺疾病。gydF4y2Ba
讨论gydF4y2Ba
本研究证实了巴尔德斯发布的最新数据gydF4y2Ba等gydF4y2Ba。gydF4y2Ba2gydF4y2Ba和显示,吸烟会导致增强3缩短端粒长度(无花果gydF4y2Ba⇑gydF4y2Ba和b)。然而,它扩展了研究的结果,因为:1),它显示了一个累积暴露剂量反应关系吸烟和端粒长度缩短循环淋巴细胞(图3 cgydF4y2Ba⇑gydF4y2Ba);和2)第一次吸烟引起的端粒缩短的潜在作用被认为是COPD的发病机制。不幸的是,目前的研究不能证明吸烟对端粒长度的微分效应的存在与否慢性阻塞性肺病(无花果3 bgydF4y2Ba⇑gydF4y2Ba和c)。gydF4y2Ba
几个潜在的机制可以帮助解释这些观察。首先,众所周知,吸烟与低级的系统性炎症有关gydF4y2Ba8gydF4y2Ba,尤其是在慢性阻塞性肺病患者gydF4y2Ba9gydF4y2Ba。系统性炎症可能导致淋巴细胞增加营业额和从天真(CD45RA +)转移到内存(CD45RO +) t细胞。后者是已知较短的端粒gydF4y2Ba4gydF4y2Ba因此可能有助于解释本研究的观察。应对这种可能性,作者相比的百分比CD45RA +和CD45RO +在吸烟者和不吸烟者;没有发现显著差异(数据没有显示)。这反对增加淋巴细胞成熟由于慢性炎症的解释增强端粒长度在吸烟者的损失。然而,吸烟是一个著名的系统性氧化应激的原因gydF4y2Ba10gydF4y2Ba,先进的氧化损伤与衰老和与年龄相关的疾病gydF4y2Ba11gydF4y2Ba。因此,很可能加速损失本研究中观察到的端粒长度吸烟者是一个oxidant-induced衰老现象的一部分gydF4y2Ba2gydF4y2Ba。如果是这样的话,这可能有重要致病意义因为细胞衰老毁掉修复组织损伤的能力gydF4y2Ba12gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
目前的研究有一些局限性,值得评论。首先,没有减少染色体端粒的长度被认为与不吸烟者的年龄增加(图3gydF4y2Ba⇑gydF4y2Ba)。先前的研究在普通人群中报道,在循环淋巴细胞端粒长度缩短生理上(尽管适度)从0到90岁的年龄gydF4y2Ba4gydF4y2Ba。本研究的年龄范围相对狭窄(40 - 75岁)和规模较小的样本量(与之前的研究相比,在一般人口gydF4y2Ba4gydF4y2Ba)可能是有限的能力来检测端粒长度的微小变化不吸烟者。然而,以往的研究并没有排除吸烟者gydF4y2Ba4gydF4y2Ba,gydF4y2Ba13gydF4y2Ba,所以有可能观察到的端粒长度缩短的一部分这些先前的研究实际上可以归因于吸烟和不完全老化。无论如何,目前的结果证实,吸烟加速循环淋巴细胞端粒长度缩短gydF4y2Ba2gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
其次,本研究的样本容量(50终生吸烟者和26个控件正常肺功能)是相对较小,在前一个工作的范围,研究了端粒长度和动脉粥样硬化之间的关系,另一个很常见的年龄和吸烟相关条件gydF4y2Ba13gydF4y2Ba。在这项研究中,萨马尼gydF4y2Ba等gydF4y2Ba。gydF4y2Ba13gydF4y2Ba较短的端粒长度在描述循环10动脉粥样硬化患者的淋巴细胞,而20适当的控制。考虑在吸烟者和非吸烟者平均RTL的观察值的值(以及观察到的标准偏差),假设一个α误差0.05和0.1β错误(双边),本研究将需要包括∼400人每组(1200),远远超出了本文的能力。未来的研究应该确认这个试点研究通过调查这些影响在较大的人口和肺组织,因为这些观察打开一个以前未知的致病性大道在慢性阻塞性肺病,尤其是在涉及到肺的容量来修复吸烟引起的组织损伤gydF4y2Ba12gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
总之,本研究论文证实了以前的研究结果gydF4y2Ba2gydF4y2Ba,这表明吸烟与循环淋巴细胞端粒损失显著相关。这已被证明发生在剂量反应的方式。然而,这项研究没有表明,这种现象是增强在吸烟者慢性阻塞性肺疾病发展。gydF4y2Ba
- 收到了gydF4y2Ba2005年7月25日。gydF4y2Ba
- 接受gydF4y2Ba2005年11月18日。gydF4y2Ba
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